Ⅱ osa: Cistanche Tubulosa fenüületanoidglükosiidid kutsuvad esile hepatotsellulaarsete kartsinoomirakkude apoptoosi mitokondritest sõltuvate ja MAPK radade kaudu ning suurendavad kasvajavastast toimet tsisplatiiniga kombineerimisel

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

Lisaks hindasime CTPG immunostimuleerivat toimet (Cistanche Tubulosa fenüületanoidglükosiidid) hiirtel. Pärast ip süstimist, sc süstimist ja CTPG (200 ja 400 mg/kg) ig manustamist ei toimunud hiirte seisundis olulisi muutusi võrreldes ravimata rühmaga. Ka hiirte kehamassil ei olnud olulist erinevust CTPG-ga ravitud rühmade ja ravimata rühmade vahel (joonis 7A). Hiirte südame-, maksa-, põrna-, kopsu-, neeru- ja harknääre indeksid olid kõigis rühmades sarnased, välja arvatud hiirte põrnaindeksid 400 mg/kg CTPG ip süstimise rühmas (tabel 1). Tulemused näitasid, et valitud CTPG annustel ei olnud hiirtel kõrvaltoimeid. Põrn on imetajatel oluline immuunkaitseorgan ning selle areng mõjutab otseselt isendi immuunfunktsiooni ja haigustele vastupanuvõimet. Immuunorgani indeks peegeldab immuunorganite arengut ja immuunfunktsiooni. Põrn sisaldab mitmesuguseid immuunrakke, sealhulgas T-rakke, B-rakke, looduslikke tapjarakke (NK-rakke), makrofaage, dendriitrakke (DC-d) ja teisi, mis mängivad immuunsüsteemis olulist rolli.30 ​​On teatatud. et polüsahhariidid võivad suurendada immuunrakkude arvu, et tugevdada kehapuutumatus.31 Kuna CTPG ip süstimine suurendas oluliselt põrnaindeksit (suurenes 0,55 korda), analüüsisime täiendavalt erinevate immuunrakkude arvu põrnas. Tulemused näitasid, et CTPG ip süstimine suurendas oluliselt T-rakkude (CD3 pluss CD19− rakud) (kasv 0,49 korda), B-rakkude (CD3−CD19 pluss rakud) arvu (kasv 0 0,49 korda) ja NK-rakud (CD3-CD19-CD49b pluss rakud) (kasv 1,63 korda) võrreldes ravimata rühmaga. CD4 pluss ja CD8 pluss T-rakud, kui T-rakkude peamised alatüübid, mängivad olulist rolli antigeenispetsiifilises rakulises immuunvastuses.32 Seetõttu analüüsisime täiendavalt CD4 pluss ja CD8 pluss T-rakkude arvu ja aktivatsiooni olekut. põrn. Tulemused näitasid, et CTPG ip süstimine mitte ainult ei suurendanud oluliselt CD4 pluss ja CD8 pluss T-rakkude arvu (suurenesid vastavalt 0,55 ja 0,34 korda), vaid suurendas ka rakkude aktiveerimisolekut. CD4 pluss T-rakud (CD4 pluss CD44 pluss rakud) (suurenenud 0,84 korda) (joonis 7B), need tulemused viitavad sellele, et CTPG-l oli immuunsüsteemi tugevdamise funktsioon.

CTPG kombinatsioon(Cistanche Tubulosa fenüületanoidglükosiidid) ja tsisplatiinil oli H22 kasvaja hiiremudelil tugev kasvajavastane toime

On üldtunnustatud, et keemia- või kiiritusravi võib viia halva prognoosini ja esile kutsuda mitmeid kõrvaltoimeid, mis võivad olla tingitud immuunsüsteemi pärssimisest ning normaalsete kudede ja elundite kahjustusest. TCM-i polüsahhariididel on immuunsüsteemi tugevdav toime ja need leevendavad keemiaravist põhjustatud immuunorganite ja immuunrakkude kahjustusi, näiteks kitosaan33 ja Lycium barbarum polüsahhariidid.34 Ülaltoodud tulemus näitas, et CTPG(Cistanche Tubulosa fenüületanoidglükosiidid) võib leevendada tsisplatiini kõrvaltoimeid immuunsüsteemile. Seetõttu hinnati tsisplatiiniga kombineeritud CTPG kasvajavastast toimet H22 kasvaja hiiremudelis. Nagu on näidatud joonisel 8A, pärssisid CTPG üksi, tsisplatiin üksi ning CTPG ja tsisplatiini kombinatsioon (CTPG pluss tsisplatiin) oluliselt H22 kasvaja kasvu võrreldes kontrollrühmaga. CTPG pluss tsisplatiin näitas tugevamat inhibeerivat toimet kui CTPG ja tsisplatiin üksi. 20. päeval olid kasvaja mahud kontrollrühmas, ainult tsisplatiini, ainult CTPG ja CTPG pluss cis-plaatina rühmas, vastavalt ligikaudu 1707,8, 722,5, 1033,8 ja 367,5 mm3. Samal päeval koguti kasvajad visuaalseks vaatluseks (joonis 8B) ja kaalu võrdlemiseks (joonis 8C). CTPG pluss tsisplatiin näitas H22 kasvaja hiiremudelile paremat terapeutilist toimet kui CTPG või tsisplatiin üksi. Kasvaja kaal CTPG pluss tsisplatiini rühmas oli madalam kui teistes rühmades. Need tulemused viitavad sellele, et CTPG ja tsisplatiini kasvajavastane toime põhjustab sünergistlikke toimeid.

Hiirte kehamassi mõõdeti, et kajastada hiirte tervislikku seisundit. Kehakaal vähenes pärast tsisplatiinravi märkimisväärselt, mis viitab tsisplatiini põhjustatud raskele süsteemsele toksilisusele.35 Võrdluseks, CTPG koos tsisplatiiniga leevendas oluliselt tsisplatiinist põhjustatud kehakaalu langust, samas kui CTPG(Cistanche Tubulosa fenüületanoidglükosiidid) üksi ei avaldanud olulist mõju hiirte kehakaalule (joonis 8D). Elundite indeksite arvutamiseks eraldati ka elundid, sealhulgas põrn, süda, maks, kops, neer ja harknääre. Võrreldes ravimata rühmaga vähenesid põrna indeksid oluliselt ja suurenesid vastavalt tsisplatiin ja CTPG. CTPG pluss tsisplatiin taastas põrna indeksid võrreldes ainult tsisplatiiniga. Muud elundiindeksid ei näidanud olulist erinevust kõigi rühmade vahel (tabel 2).CTPG(Cistanche Tubulosa fenüületanoidglükosiidid) Kombineerituna tsisplatiiniga TugevdabImmuunsuskasvajahiirtest.

Ülaltoodud tulemused näitasid, et CTPG(Cistanche Tubulosa fenüületanoidglükosiidid) suurendas immuunsusthiirtel ja inhibeeris tsisplatiini poolt indutseeritud splenotsüütide apoptoosi. Lisaks uurisime, kas CTPG ja tsisplatiini kasvajavastane toime oli korrelatsioonis suurenenud immuunsusega. Kasvajate tekke ja arengu protsessis mängib organismi immuunsüsteem olulist immuunseirefunktsiooni ning võtmerolli mängib T-rakkude poolt vahendatud rakuline immuunsus. CD4 pluss T-rakkude funktsioon on aidata kaasa rakulisele immuunsusele ja humoraalsele immuunreaktsioonile ning CD8 pluss T-rakud on immuunvastuse peamised efektorrakud, mis võivad sihtrakke spetsiifiliselt tappa ja mängida olulist rolli kasvaja immuunsuses ja viirusevastases immuunsuses.32 T-rakkude ja B-rakkude arvu tuvastamiseks voolutsütomeetria abil koguti kasvajat kandvate hiirte põrnad. T-rakkude, sealhulgas CD4 pluss ja CD8 pluss T-rakkude sagedus ja arv CTPG pluss tsisplatiini rühmas olid oluliselt kõrgemad kui kontrollrühmas (suurenesid vastavalt 0,55 ja 0,7 korda). ja tsisplatiini rühmad (suurenenud vastavalt 0,92 ja 1,16 korda) (joonis 9A ja B). Võrreldes kontrollrühmaga suurendas CTPG üksi osaliselt ka CD4 pluss ja CD8 pluss T-rakkude arvu, kuigi olulist erinevust ei olnud. B-rakkude sagedustel ja arvudel ei olnud kõigi rühmade vahel olulist erinevust.

Müeloidist pärinevad supressorrakud (MDSC-d) ja regulatoorsed T-rakud (Treg-rakud) laienevad kasvajates ja inhibeerivad kasvajavastaseid immuunvastuseid; nad pärsivad CD4 pluss T-rakkude aktivatsiooni ja ekspansiooni, efektor-T-rakkude funktsiooni, CD4 pluss ja CD8 pluss T-rakkude aktivatsiooni ja/või proliferatsiooni ning tsütokiinide moodustumist, B-rakkude proliferatsiooni ja immunoglobuliinide tootmist ning klassivahetust, NK ja looduslike tapja-T-rakkude (NKT) tsütotoksilised funktsioonid ning DC-de funktsioonid ja küpsemine.36-38 MDSC-de (CD11b pluss Gr-1 pluss), makrofaagide (CD11b pluss Gr) sagedus ja arv -1−) ja Tregesid (looduslikud Tregid: CD4 pluss CD25 pluss Foxp3 pluss; indutseeritud Tregid: CD4 pluss CD25−Foxp3 pluss) kasvajahiirte põrnades analüüsiti voolutsütomeetria abil. Võrreldes kontrollrühmaga vähenes MDSC-de sagedus ja arv oluliselt pärast süstimist ainult tsisplatiiniga (vähenes 1,56 korda) või kombinatsioonis CTPG-ga(Cistanche Tubulosa fenüületanoidglükosiidid) (vähenenud 0,62 korda). CD11b pluss Gr{3}}− makrofaagide arv vähenes samuti oluliselt, kuigi nende sageduses ei toimunud olulisi muutusi (joonis 9C). Lisaks CTPG(Cistanche Tubulosa fenüületanoidglükosiidid) üksi ja CTPG pluss tsisplatiini ravi vähendasid oluliselt indutseeritud Tregide esinemissagedust (vähenesid vastavalt {{0}},33 ja 0,37 korda) (joonis 9D). Need tulemused näitasid, et CTPG ja tsisplatiini kasvajavastane toime võib olla korrelatsioonis suurenenud immuunsusega, mida iseloomustab suurenenud T-rakkude arv ning MDSC-de ja Tregide arvu vähenemine.