Cistanche Deserticola fenüületanoidide antioksüdatiivne toime

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

Quanbo Xiong/ Shigetoshi Kadota," Tadato Tani,6 ja Tsuneo Namba"

Atsetoon-H2O (9:1) ekstrakt Cistanche deserticola varrest näitas tugevat vabu radikaale püüdvat toimet. Sellest ekstraktist eraldati üheksa peamist fenüületanoidühendit. TMR identifitseeriti need kui akteosiidi, isoakteosiidi, l^atsetüüllakteosiid, tubulosiid B, ehhinakosiid, tubulosiid A, syringaliid A 3z-a-ramnopüranosiidi, tsistanosiid A ja tsistanosiidi F. Kõik need ühendid näitasid tugevamat vabade radikaalide püüdmise aktiivsust kui -tokoferool 1,1 -difenüülI-2-pikrüülhüdraasi 1 (DPPH) radikaalil ja ksantiini/ksantiini oksüdaasi (XOD) tekitatud superoksiidi anioonradikaal (Oj). Üheksa ühendi hulgas näitasid isoakteosiid ja tubulosiid B, mille kofeoüülrühm on glükoosi d'-asendis, XOD-d pärssivat toimet. Lisaks uurisime nende fenüületanoidide mõju lipiidide peroksüdatsioonile roti maksa mikrosoomides, mis on indutseeritud ensümaatiliste ja mitteensümaatiliste meetoditega. Nagu oodatud, inhibeeris igaüks neist oluliselt nii askorbiinhappe / Fe2 pluss kui ka ADP / NADPH / Fe3 pluss indutseeritud lipiidide peroksüdatsiooni roti maksa mikrosoomides, mis olid tugevamad kui a-tokoferool või kofeiinhape. Leiti, et antioksüdatiivset toimet võimendab fenoolsete hüdroksüülrühmade arvu suurenemine molekulis.

Märksõnad: Cistanche deserticola; fenüületanoidid;antioksüdant; DPPH (1,1 -difenüül-2-pikrüülhüdrasüül) radikaal; superoksiidi aniooni radikaal; lipiidide peroksüdatsioon

Cistanche deserticola vars

Cistanche spp. (Cistanche Herba, perekond Orobanchaceae) on Hiina traditsioonilises meditsiinis toonik, mida kasutatakse neerupuudulikkuse korral, mida iseloomustavad impotentsus, külmatunne nimme- ja põlvedes, naiste steriilsus ja soolestiku kuivusest tingitud kõhukinnisus seniilses eas.Nendest taimedest on eraldatud mitmeid koostisosi, sealhulgas fenüületmoide (mida mõnikord nimetatakse fenüülpropanoidideks),2) iridoide3* ja polüsahhariide4). Sato et al5} teatasid, et mõned selle toorravimi fenüületanoidid avaldasid rippuvate stressiga hiirte seksuaal- ja õppimiskäitumise vähenemise eest kaitsvat toimet. Fenüületanoidid on nende taimede peamised koostisosad ja arvatakse, et need aitavad kaasa selle ravimi erinevatele toimetele.6)

Fenüületanoidid on taimeriigis laialt levinud ja mõnel neist on leitud anoksiavastane toime, 7) kasvajavastane toime, 8) ensüümide inhibeerimine, 9* põletikuvastane toime, 10) antinefriit, 1 n antimikrootikum ja immunomodulatsioon.12) Teatati ka mõnede Pedicularis'e fenüületanoidide antioksüdatiivse aktiivsuse uuringutest,13 -15), kuid ei leitud ühtegi aruannet, mis käsitleks Cistanche'i liikide fenüületanoidide antioksüdatiivset toimet.

On hästi teada, et vabad radikaalid on kriitiliselt seotud mitmesuguste patogeneesidega, nagu vähk, südame-veresoonkonna häired, artriit, põletik, samuti vananemisega seotud degeneratiivsed protsessid.16™18) Meie sõeluuringus loodusvaradest pärit vananemisvastaste ainete leidmiseks. , leidsime, et Cistanche deserticola varre CHC13 (C), EtOAc (E), atsetoon (A), atsetoon-H2O (9:1) (AH) ja vesi (H) ekstraktid näitasid tugevat DPPH-d radikaali eemaldav aktiivsus (joonis 1), millest tugevaim oli atsetooni-H2.(9:1) ekstrakt (AH). Atsetoon-H2O (9:1) ekstrakt sisaldas suures koguses fenüületanoide, mis olid tõenäoliselt vabade radikaalide eemaldamise mõju aktiivsed koostisosad. Eraldasime sellest ekstraktist peamised fenüületanoidid ja uurisime nende antioksüdatiivset toimet DPPH-radikaali ja ksantiini/XOD-i tekitatud superoksiidi anioonradikaali ning nende askorbiinhappe/Fe2 plusi ja ADP/NADPH/Fe3 plusi indutseeritud lipiidide peroksüdatsiooni pärssimise kaudu roti maksas. mikrosoomid.

Cistanche deserticola

MATERJALID JA MEETODID

Reaktiivid polüamiid C-200 (75 μ150/zm) ja silikageel (Wakogel C-200, 75–150^m) pulber kolonnkromatograafia jaoks, DPPH (1,1 -difenüül{{ 8}}pikrüülhüdrasüül), ksantiin, XOD (ksantiinoksidaas), NBT (nitroblue tetrasoolium), ADP, g-NADPH, kohvhape ja a-tokoferool osteti firmalt Wako Pure Chemicals, Osaka, Jaapan. Malonaldehüüdbis(dimetüülatsetaal) pärines Tokyo Kaseist, Tokyost, Jaapanist. BSA (veise seerumi albumiin) ja allopurinool olid pärit sigmast, St. Louis, USA Teised kemikaalid olid analüütilise kvaliteediga.

Instrumentide UV-neelduvust mõõdeti aShimadzu UV{0}} salvestusspektrofotomeeter, NMR spektrid viidi läbi JEOL GX-400 või JEOL JNM-LA 400WB FT NMR süsteemiga.

Taimsed materjalid Kaubanduslik toorravim (toodetud Nei Monggolis, ostetud Bozhou toorravimiturult, Anhui provintsis, Hiinas, 1995; vautšeri näidised, TMPW nr 15479, deponeeritud Materia Medica muuseumis, etnomeditsiini analüütilise uurimiskeskuse uurimiskeskuses Toyama meditsiini- ja farmaatsiaülikooli Wakan-Yaku instituut) tuvastati Cistanche deserticola YC Ma tüvedena, võrreldes selle morfoloogilisi ja anatoomilisi tunnuseid Hiina Shanghai Meditsiiniülikooli farmakognoosia osakonna professor Dawen Shi esitatud autentse prooviga.

Ekstraheerimine ja eraldamine Pulbriline toorravim (5,87 kg) ekstraheeriti toatemperatuuril järjestikku CHC13-ga (12, 9 1x2) ja EtOAc-ga (9 1 x 3) ning keedeti tagasijooksul atsetooniga (9 1). x 3), atsetoon-玦0 (9:1,91 x 3) ja H2O (7,{18}}x4), et saada CHC13 (C) (28,7 g), EtOAc (E) ( 13,4 g), atsetoon (A) (95 g), atsetoon-H2O (9:1) (AH) (175 g) ja H2O (H) (2,51 kg). Osa lOOg atsetooni-H2O (9:1) ekstraktist viidi polüamiidi C-200 (4{{50}}0 g) kolonni ja elueeriti H2O-ga ({{41). }}) ja seejärel MeOH (5 1). MeOH eluent (20 g) viidi silikageeli (600 g) kolonni ja elueeriti CHCl3-MeOH-H2O-ga (8:3:0,3) (5 1), saades 10 fraktsiooni. Iga fraktsioon allutati Sephadex LH{54}} kolonnile ja elueeriti erinevate MeOH-H2O suhetega (0-50 protsenti); üheksa peamist fenüületanoidi 1 (607 mg), 2 (286 mg), 3 (43 mg), 4 (187 mg), 5 (1,1 g), 6 (100 mg), 7 (208 mg), 8 (168 mg) Saadi ühend 9 (75 mg).

Loomad Isased Std: Kasutati Wistari rotte (8 nädala vanused, 230 ± 250 g). Loomad osteti Shizuoka Laboratory Animal Centerist ja neid toideti laboratoorse toidugraanuliga (Clea Japan) ja neile anti ad libitum vett.

Roti maksa mikrosomaalse suspensiooni valmistamine Roti maksa mikrosomaalne fraktsioon valmistati Kiso et al.19) meetodil, kuid ilma fenobarbitaali eeltöötluseta. Pärast loomade 24-tunnist paastumist perfundeeriti maksad in situ jääkülma 0,9% NaCl lahusega, lõigati seejärel õhukesteks tükkideks ja homogeniseeriti külmas 1,15% KC1 lahuses (1.{{9}). } ml/g maksa märja massi kohta). Homogenaati lahjendati neli korda 1,15% KC1 lahusega ja tsentrifuugiti 8000 g juures 20 minutit 4 kraadi juures. Seejärel koguti supernatandi fraktsioon ja ultratsentrifuugiti 105 000 g juures 60 minutit. Saadud pellet resuspendeeriti samas mahus 1,15% KC1 lahuses. Valgusisaldus määrati Lowry et meetodil, kasutades standardina albumiini.

Proovi ettevalmistamine Testitud proovid lahustati vees või etanoolis ja lahjendati veega erinevate kontsentratsioonideni. Etanooli lõppkontsentratsioonid olid alla 1 protsendi kõigis testisüsteemides, välja arvatud DPPH radikaali püüdmise test. Etanool lõppkontsentratsioonil alla 1 protsendi ei näidanud nendele analüüsisüsteemidele mingit mõju.

DPPH radikaali eemaldav efekt Pühkimisefekt vastas DPPH radikaali kustutamise intensiivsusele, nagu on kirjeldanud Hatano jt.21) Viissada /A 60 µm DPPH-d EtOH-s lisati 500 /zl proovilahusele ja lasti reageerida. 30 minutit toatemperatuuril, seejärel mõõdeti optilist tihedust 520 nm juures. Pimekatse puhul kasutati DPPH lahuse asemel EtOH-d ja kontrolliks proovilahuse asemel H2O. IC50 väärtused arvutati regressioonijoontelt, kus abstsisstell tähistas testitava ühendi kontsentratsiooni ja ordinaat DPPH radikaali keskmist vähenemise protsenti neljast erinevast testist.

Mõju superoksiidi anioonide radikaalide tekkele Superoksiidi anioonide tootmine ksantiini/XOD süsteemis määrati, kasutades Imanari jt meetodit.22) Segu, mis koosnes 900/zl. 0,05 ui Na2CO3 (pH 10,2), 50 µl kumbki 3 mM ksantiini, 3 mM EDTA, 1,5 mg/ml BSA, 0,75 mM NBT ja testitud proovile lisati 50 ui 0,1 mg/ml XOD. reaktsioon. Pärast 30-minutilist inkubeerimist peatati reaktsioon 50 µl 6 mM CuCl2-ga ja neeldumist mõõdeti lainepikkusel 560 nm. Kontrolllahus valmistati samal viisil, kuid proovilahuse asemel kasutati 50 /il H2O. Pimelahuses kasutati XOD lahuse asemel 50 µl H2O. IC50 väärtused arvutati regressioonijoonte põhjal, kus abstsisstell tähistas testitava ühendi logaritmilist kontsentratsiooni ja ordinaat NBT vähenemise inhibeerimise keskmist protsenti neljast sõltuvatest testidest.

Inhibeeriv toime XOD aktiivsusele Inhibeerivaid mõjusid XOD aktiivsusele hinnati Hatano et al.* meetodil koos mõningate muudatustega. Segu, mis koosneb 600/11 puhvrist (0,1 m fosfaadilahus, pH 7,5), 50 以 XOD lahusest (0,068 U/ml puhvris) ja 50 卩 1 proovilahust eelinkubeeriti 10 minutit 25 kraadi juures. Seejärel lisati segule 300 µl ksantiini lahust (0,1 mM puhvris) ja saadud lahust inkubeeriti 30 minutit 25 °C juures. Ensüümireaktsioon lõpetati 1 n HCl (100 /zl) lisamisega ja reaktsioonisegu neeldumist mõõdeti 295 nm juures. Segus moodustunud kusihappe kontsentratsioon arvutati neeldumisest pärast ülalkirjeldatud viisil valmistatud pimelahuse neeldumise lahutamist, välja arvatud see, et XOD lahus asendati 50 ug/zl puhvriga. Inhibeerivat mõju XOD-le väljendati kusihappe moodustumise inhibeerimise protsendina (protsent) võrreldes kontrolliga, kus proovilahuse asemel kasutati vett. Positiivse kontrollina kasutati tuntud XOD inhibiitorit allopurinooli.

Inhibeeriv toime lipiidide peroksüdatsioonile roti maksa mikrosoomides Lipiidide peroksüdatsiooni roti maksa mikrosoomides, mida ei indutseerinud ensümaatiliselt askorbiin/Fe2 plus ja ensümaatiliselt indutseeritud ADP/NADPH/Fe3 plus, mõõdeti Kiso et al.19) meetodil koos mõningate muudatustega. .

a) Askorbiinhape/Fe2 pluss indutseeritud lipiidide peroksüdatsioon roti maksa mikrosoomides: reaktsioonisegu koosnes 390/11 100 mM KC1/45 mM Tris-HCl-st (pH 8,0), 50 pl mikrosomaalne fraktsioon 1,15% KC1-s (20 mg valku/ml) ja 50 µl proovilahuses. Pärast 10/11 10 mM askorbiinhappe/0,5 mM FeSO4 lisamist ja seejärel 37 kraadi juures 20 minutit inkubeerimist jahutati reaktsioonisegu reaktsiooni peatamiseks jääga. Lipiidide peroksüdatsiooni mõõdeti tiobarbituurhappe meetodil24 ja väljendati MDA (malondialdehüüdi) produktsioonina. See

b) ADP/NADPH/Fe3 pluss indutseeritud lipiidide peroksüdatsioon roti maksa mikrosoomides: reaktsioonisegu sisaldas 29 0° 100 mM KC1/45him Tris-HCl (pH 8,0), 50/il mikrosomaalset suspensiooni 1,15% KC1-s. (20 mg valku/ml) ja 50 µl proovi vees. Lisati viiskümmend värskelt valmistatud 20 mM ADP-d, 50 ui 1 mM NADPH-d ja 10 ui 2 mM FeCl3 ning inkubeeriti seejärel 37 kraadi juures 30 minutit. Mõõdeti lipiidide peroksüdatsioon ja IC50 arvutati ülaltoodud meetodil.

cistanche eelised: kaitsta maksa

TULEMUSED

Struktuuri määramine Nende ^H-NMR ja 13C-NMR andmete otsesel võrdlemisel kirjandusega2* identifitseeriti üheksa fenüületanoidi kui 2-atsetüüllakteosiid (1), tsistanosiid A (2), tubulosiid A (3), ehhinakosiid ( 4), akteosiid (5), süringaliid A 3'-a-ramnopüranosiid (6), tubulosiid B (7), isoakteosiid (8) ja tsistanosiid F (9) (joonis 2). Kuid akteosiidi, fenüületanoide tüüpilise ühendi, C-3 ja C-4 13C-NMR signaalide määramine aglükooni fragmendis, C-3, C-4 , C-5 ja C-6 kohviosas varasemates aruannetes25) tekitasid segadust. 2D-NMR meetodil, nagu HMBC ja HMQC, määrasime üheselt akteosiidi kui aglükooni fragmendi 13C-NMR andmed Cl: 131,49, C-2: 117,14, C-3: 146,07, C{ {41}}: 144,62, C-5: 116,34, C-6: 121,29, Ca: 72,33, C# 36,54; kofeoüülrühm Cl: 127,63, C-2: 115,26, C-3: 146,79, C-4: 149,78, C-5: 116,55, C-6: 123,24 , Ca: 168,33, Cg: 114,68, Cy: 148,04; glükoosiosa C-l': 104,16, C-2': 75,97, C-3': 81,66, C4: 70,39, C-5': 76,16, C-6' : 62,35; ja ramnoosi osa: Cl: 102,99, C-2: 72,22, C-3: 72,05, C-4: 73,79, C-5: 70,58, C-6 : 18.46.

Nende üheksa fenüületanoidi struktuuri ja aktiivsuse suhteid uuriti nende DPPH radikaali ja ksantiini / XOD tekitatud superoksiidi anioonide radikaalide eemaldamise aktiivsuse, askorbiinhappe / Fe2 pluss ja ADP / NADPH / Fe3 pluss indutseeritud lipiidide peroksüdatsiooni järgi roti maksa mikrosoomides. Positiivse kontrollainena kasutati kofeiinhapet ja a-tokoferooli, mis on hästi tuntud vabade radikaalide püüdjad ja antioksüdandid.

DPPH Radical Scavenging Activity All of the nine phenylethanoids showed stronger DPPH radical scav-enging activity than either a-tocopherol or caffeic acid, except that cistanoside A (2), syringalide A 3'-a-rhamno- pyranoside (6) and cistanoside F (9) showed weaker activity than caffeic acid (Fig. 3). The activity order was tubuloside B ⑺(IC50 = 2.99 ^m) > echinacoside ⑷ (IC50 = 3.29 fiM)M 2z-acetylacteoside ⑴(IC50 = 3.30 /im) M tubuloside A (3) (IC50 = 3.34/im) acteoside (5) (IC50 = 3.36 〃m)> isoacteoside (8) (IC50 = 3.49 ^m) >caffeic acid (IC50 = 4.79 /2M)> cistanoside A (2) (IC5O = 4.87 /im)>süringaliid A S'-a-ramnopüranosiid (6) (IC5O=5,52 /zm) > tsistanosiid F (9) (IC50=6,29 /im) > a-tokoferool (IC{{10) }}.2//m). Tubulosiid B ⑺, ehhinakosiid (4), 2/-atsetüülatsetosiid (1), tubulosiid A (3), akteosiid (5) ja isoakteosiid (8) (IC5O=2.99 一3,49 /im), millest igaüks mille molekulis on neli fenoolset hüdroksüülrühma, mis näitasid sarnaselt tugevamat aktiivsust kui tsistanosiid A (2), mille aglükooni fragmendi 3-OH oli metüülitud. Süringaliid A 3z-a-ramnopüranosiid (6), millel on aglükooniosas ainult üks OH-rühm, näitas suhteliselt nõrka aktiivsust. Tsistanosiidil F (9), millel on ainult kaks hüdroksüülrühma, mis paiknevad kofeoüülrühma juures, kuid millel ei ole fenüületanooli aglükooni, oli kõige nõrgem aktiivsus.

Effects on Superoxide Anion Radical Generation All the tested compounds exhibited a stronger inhibitory activity than a-tocopherol but weaker than caffeic acid on the generation of superoxide anion radical (Fig. 4). The activity order was caffeic acid (IC5()= 1.82jUM)>2'- acetylacteoside (1) (IC50 = 2.25 /im) tubuloside B ⑺ (IC50 = 2.34jUM) >echinacoside (4) (IC50 = 2.74juM)^ isoacteoside (8) (IC50 = 2.88 /zm) acteoside (5) (IC50 = 2.89 f/M) >cistanoside F (9) (IC5o = 3.13 rm) tubuloside A (3) (IC50 = 3.17 jUM)syringalide A 3'-a-rhamnopyrano- side (6) (IC50 = 3.20^m)>tsistanosiid A (2) (IC5O=3,69 jUm) > a-tokoferool (IC50 > 10 µm).

XOD aktiivsust pärssiv toime Ainult isoakteosiid (8) ja tubulosiid B (7), mille kofeoüülrühm on glükoosi positsioonis 6z, avaldasid pärssivat mõju XOD ja teiste fenüületanoidide aktiivsusele, millel on kofeoüülrühm ^-. glükoosi asendis, ei näidanud testitud kontsentratsioonidel (25 ± 200 m) mõju (tabel 1). eraldas sellest ekstraktist üheksa peamist fenüületanoidühendit ja määras nende struktuurid NMR abil. süsteem kui tubulosiid B (7)M2'-atsetüüllakteosiid (1) isoakteosiid (8) ehhinakosiid (4) tubulosiid A (3) M akteo pool (5) > süringaliid A 3'-a-ramnopüranosiid (6) > tsistanosiid A (2) > tsistanosiid F (9); ADP/NADPH/Fe3 plus süsteemis tubulosiid B (7)2,-atsetüüllakteosiid (^^iso akteosiid (8) akteosiid (5) > tubulosiid A (3) > ehhinako pool (4) > syringaliid A 3z-a-ramnopüranosiid (6) > tsistanosiid A (2) > tsistanosiid F (9). Mõlemad järjestused olid sarnased ülaltoodud vabade radikaalide püüdmise testiga, eriti DPPH radikaali püüdmise testiga. Siiski fenoolsete hüdroksüülrühmade arv molekulis mängis kõige olulisemat rolli lipiidide peroksüdatsiooni pärssimisel roti maksa mikrosoomides.

cistanche mõju

ARUTELU

Testisime Cistanche deserticola varre erinevate lahustiekstraktide vabade radikaalide eemaldamise aktiivsust DPPH-radikaalil ja leidsime, et atsetooni-H2O (9:1) ekstraktil oli kõige tugevam aktiivsus. Vabade radikaalide eemaldamise aktiivsuse aktiivsete koostisosade leidmiseks eraldasime sellest ekstraktist üheksa peamist fenüületanoidühendit ja määrasime nende struktuurid NMR abil.

Nende fenüületanoidide antioksüdatiivset toimet hinnati nende vabade radikaalide eemaldamise ja lipiidide peroksüdatsioonivastase aktiivsuse järgi. Positiivse kontrollainena kasutati laialt tuntud a-tokoferooli. Nagua-tokoferooli lipofiilsus võib mõjutada selle aktiivsust käesolevates testisüsteemides, välja arvatud DPPH radikaali eemaldamise testis, võtsime teise positiivse kontrollainena kofeiinhappe.

Esiteks viisime läbi vabade radikaalide püüdmise testid. Kõigil 9 testitud fenüületanoidil oli kahtlemata tugevam DPPH radikaali ja superoksiidi aniooni radikaale eemaldav toime kui a-tokoferool, kuid mõned olid tugevamad ja teised nõrgemad kui kofeiinhape. Radikaalide eemaldamise aktiivsus suurenes fenoolsete hüdroksüülrühmade arvu suurenemisega. Arvatakse, et DPPH-radikaali ja superoksiidi aniooni eemaldamise tegevuse mittetäielik paralleelsus on tingitud radikaaliliikide erinevatest omadustest ja mõnest muust nendes kahes reaktsioonisüsteemis osalevatest teguritest,21,26) sest DPPH-radikaal on keemiliselt indutseeritud radikaal, mis reageerib. radikaali püüdjatega lihtsal keemilisel viisil, samas kui superoksiidi anioonradikaal tekib ksantiini/XOD, ensüümi reaktsiooniga.

Kui fenüületanoidid inhibeerivad ksantiini/XOD tekitatud superoksiidi aniooni radikaali, võib inhibeerimist pidada nende superoksiidi anioonide radikaale püüdva aktiivsuse või (ja) ensüümi XOD,23 inhibeerimise tulemuseks, seega viisime läbi nende testimise. ksantiinoksüdaasi pärssiv toime. Huvitav on see, et selektiivselt inhibeerisid ainult isoakteosiid (8) ja tubulosiid B (7), mille kofeoüülrühm on glükoosi positsioonis 6. Need avaldasid mõju kontsentratsioonis 25–200 jtiM 3,4xlO^3U/ml (10 kannu/ml) XOD-le, kuigi aktiivsus oli nõrgem kui allopurinool; teised ühendid, mille kofeoüülrühm on glükoosi asendis, ei näidanud inhibeerivat toimet. See tulemus andis esimese aruande fenüületanoidide inhibeerivast toimest XOD ensüümile. Chan et al21) teatasid, et kofeiinhappel ja mõnel selle analoogil oli XOD aktiivsust pärssiv toime, kuid me ei leidnud praegustes reaktsioonitingimustes sellist kofeiinhappe toimet. Selles testis oli XOD kontsentratsioon sarnane superoksiidi anioonide radikaalide tekkele avalduva mõju testiga (4,3 /zg/ml), kuid ühendite kontsentratsioon oli palju kõrgem kui viimases. Seetõttu on nende fenüületanoidide Oj põlvkonna pärssimine tingitud nende radikaali eemaldavast aktiivsusest, kuid mitte nende XOD ensüümi inhibeerivast aktiivsusest.

See, et vabade radikaalide ahelreaktsioon viib lõpuks lipiidide peroksüdatsioonini, on hästi teada.28,29) Seetõttu uurisime nende fenüületanoidühendite mõju lipiidide peroksüdatsioonile roti maksa mikrosoomides, mis on indutseeritud ensümaatilise süsteemi ADP/NADPH/Fe3 plus poolt ja mis on indutseeritud mitteensümaatiline süsteem askorbiinhape/Fe2 plus . Kõik need ühendid näitasid mõlemas süsteemis tugevamat lipiidide peroksüdatsioonivastast toimet kui kohvhape ja a-tokoferool. On üldtunnustatud, et mõlemat süsteemi katalüüsivad raua ioonid, kas Fe2 pluss või Fe3 pluss, mis on seotud lipiidperoksüülradikaalidega,30,31) ja et hüdroksüülradikaal OH mängib lipiidide peroksüdatsioonis kõige olulisemat rolli,32 _34) kuigi OH initsiatsioon on mõnes aruandes kahtluse alla seatud.35祁6) Teisest küljest on superoksiidi anioonradikaal OJ, mis on radikaaliahelas O2 vastu suunatud e_ rünnaku põhiprodukt, üsna halvasti reaktiivne radikaal ja ei põhjusta ise lipiidide peroksüdatsiooni. Kuigi need fenüületanoidid näitasid superoksiidi aniooni radikaali nõrgemat puhastavat toimet kui kofeiinhape, näitasid nad palju tugevamat lipiidide peroksüdatsioonivastast toimet kui viimasel. Seetõttu usume, et need, nagu ka mõned teised aromaatsed, ahelat lõhkuvad polüfenoolid, võivad inhibeerida ülaltoodud lipiidide peroksüdatsiooni roti maksa mikrosoomides, kelaadides Fe2 pluss või Fe3 pluss ioone ning eemaldades ka superoksiidi radikaali Oj, et lõhustada radikaalset ahelreaktsiooni. .37,38) Peale selle võivad nad eemaldada ka mürgisemaid radikaale, nagu hüdroksüülradikaalid ja lipiidperoksüülradikaalid, et katkestada vahetult lipiidide peroksüdatsioon suurema tõhususega kui kohvhape.38,39)

Li et al. uuris mõningaid fenüületanoidglükosiide, sealhulgas akteosiidi (verbaskosiid) (5), isoakteosiidi (isoverbaskosiid) (1) ja ehhinakosiidi (4) Pedicularisest, et inhibeerida linoolhappe autooksüdatsiooni mitsellides, mis on mittebioloogiline süsteem,13 nende kaitse eest oksüdatiivse hemolüüsi eest in vitro,14''1 ja ka nende eemaldava toime eest NBT/PMS/NADH tekitatud superoksiidile ning askorbiinhappe/Fe2 pluss indutseeritud lipiidide peroksüdatsiooni pärssimise eest hiire maksa mikrosoomides.15) Sarnane toime. -struktuuri seost täheldati Li jt aruannetes. ja meie tulemused. See tähendab, et fenüületanoidide aktiivsus lipiidide peroksüdatsiooni pärssimisel sõltub peamiselt fenoolsete hüdroksüülrühmade arvust ja steerilisest asendist.15) Stereokeemia põhjal on kofeoüülrühma fenoolsed hüdroksüülrühmad akteosiidil (5), tubulosiidil A ( 3) ja ehhinakosiid (4), mille kofeoüülrühm on glükoosi asendis 4z, moodustab ramnosüüli hüdroksüülrühmadega kergemini vesiniksideme kui isoakteosiidil (8) ja tubulosiidil B (7) kofeoüül on glükoosi 6'-asendis. Seega säilitas viimane rohkem vabu fenoolseid hüdroksüülrühmi kui esimene ja näitas seetõttu tugevamat lipiidide peroksüdatsioonivastast aktiivsust. Samuti märkasime, et nende fenüületanoidide 2z-atsetüülimine, kuigi veidi, suurendas nende antioksüdatiivset toimet. Näiteks akteosiid (5) ja isoakteosiid (8), kui 2'-atsetüüliti vastavalt 2/-atsetüüllakteosiidiks (1) ja tubulosiidiks B (7), näitasid tugevamat aktiivsust kõigis neljas testisüsteemis. Stereokeemia ja 2'-atsetüülimise paremuse tõttu oli tubulosiid B (7) testitud proovide seas tugevaim antioksüdatiivne toime. Võib-olla kolmanda suhkruosa asendamise tõttu asendis 6'~ ei sobinud see korrelatsioon hästi tubulosiidi A (3) või ehhinakosiidi (4) puhul; kuid süsteemis ADP/NADPH/Fe3 plus oli tubulosiid A ⑶ siiski tugevam lipiidide peroksüdatsioonivastane toime kui ehhinakosiidil (4).

Lisaks näitas DPPH radikaalide eemaldamise aktiivsuse järjekord paremat paralleelsust lipiidide vastase peroksüdatsiooni omaga kui superoksiidi anioonide radikaalide eemaldamise aktiivsuse järjekord. See tõestas taas, et DPPH radikaali eemaldamise test on mugav ja usaldusväärne meetod antioksüdantide analüüsiks, 26) kuigi DPPH radikaal on keemiliselt indutseeritud radikaal, samas kui superoksiidi anioonradikaal võib olla bioloogiliselt endogeenne radikaal.

Kokkuvõtteks võib öelda, et kõigil üheksal fenüületanoidil oli käesolevas uuringus märkimisväärne vabade radikaalide eemaldamise aktiivsus ja lipiidide peroksüdatsioonivastane toime. Antioksüdatiivset toimet võimendas fenoolsete hüdroksüülrühmade arvu suurenemine molekulis. Nagu võib arvata, võib nende fenüületanoidide siin tõestatud antioksüdatiivne toime mängida olulist rolli ravimi Cistanchis Herba toimes ja võib osaliselt selgitada mõnede fenüületanoidide toimemehhanisme kasvajate,8* põletiku10) ja nefriidi vastu, 1 n, milles vabad radikaalid on tõsiselt seotud.

Cistsanche ehhinakosiid: oksüdatsioonivastane

VIITED

1) Namba T., "The Encyclopedia of Wakan-Yaku (Traditional Sino-Japanese Medicines) with Color Pictures", 5, Vol. II, Hoikusha, Tokyo, 1994, lk 16–17.

2) a) Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pham. Bull, 32, 3009-3014 (1984); b) Idem, ibid., 32, 3880-3885 (1984); c) Idem, ibid., 33, 1452-1457 (1985); d) Karasawa H., Kobayashi H., Takizawa N., Miyase T., Fukushima S., Yakugaku Zasshi, 106, 562-566 (1986); e) Idem, ibid., 106, 721-724 (1986); /) Kobayashi H., Oguchi H., Takizawa N., Miyase T., Ueno A., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Pharm. Bull., 35, 3309-3314 (1987); g) Yoshizawa F., Deyama T., Takizawa N., Usmanghani K., Ahmad M., ibid., 38, 1927-1930 (1990).

3) a) Kobayashi H, Komatsu J., Yakugaku Zasshi, 103, 508, 511 (1983); b): Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pharm. Bull., 32, 1729-1734 (1984); c) Idem, ibid., 33, 3645-3650 (1985).

4) Naran R., Ebringerova A., Hromadkova Z., Patoprsty V., Phytochemistry, 40, 709-715 (1995).

5) Sato T., Kozima S., Kobayashi K., Kobayashi H., Yakugaku Zasshi. 105, 1131-1144 (1985).

6) Jin XL, Zhang QR, Hiina J. Chinese Materia Medica, 19, 695-697 (1994).

7) Yamahara J., Kitani T., Kobayashi H., Kawahara Y., Yakugaku Zasshi, 110, 932-935 (1990).

8) a) Pettit G. R・, Numata A., Takemura T., Ode RH, Narula A, S., Schmidt JM, Cragg GM, Pase CP, J. Nat. Prod., 53, 456-58 (1990); b) Saracoglu I., Inoue M., Calis I., Ogihara Y., Biol. Pharm, Bull., 18, 1396-1400 (1995).

9) Andary C., '4Caffeic Acid Glycoside Esters and Pharmacology/ toim. Scalbert A., Polyphenolic Phenomena, INRA väljaanded, Pariis, 1993, lk 237–245.

10) Murai M., Tamayama Y., Nishibe S., Planta Med.. 61, 479-80 (1995).

11) Hayashi K., Nagamatsu T., Ito M., Hattori T., Suzuki Y., Jpn. J. Pharmacol., 66, 47, pp. 52 (1994).

12) a) Molnar J., Gunics G., Mucsi I., Koltai M., Petri L, Shoyama Y., Matsumoto M., Nishioka L, Acta Microbiol. Hung.. 36, 425-32 (1989); b) Sasaki H., Nishimura T., Morota T., Chin M., Mitsuhashi H" Komatsu Y., Maruyama H., Tu GR, He W., Xiong YL, Planta Med., 55, 4582462 (1989).

13) Li J., Wang PF, Zheng RL, Liu ZM, Jia 乙 J., Planta Med., 59, 315-317 (1993).

14) Zheng RL, Wang PF, Li J., Liu Z. M,, Jia ZJ, Chem. Phys. Lipiidid. 65, 151-154 (1993).

15) Li J., Zheng RL, Liu 乙 M., Jia 乙 J., Acta Pharmacol. Sinica, 13, 427T30 (1992).

16) Barber DA, Harris SR, American Pharmacy. 34, 26, 35 (1993).

17) Elstner EF, Klin Wochenschr, 69, 949-956 (1991).

18) Martin GR, Danner DB, Holbrook NJ, Ann. Rev. Med., 44, 419-29 (1993).

19) Kiso Y., Tohkino H., Hattori M., Sakamoto T., Namba T., Planta Med.. 50, 298-302 (1984).

20) Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall RJ, J. Biol. Chem.. 193, 265-275 (1951).

21) Hatano T., Edamatsu R., Hiramatsu M., Mori A., Fujita Y., Yasuhara T" Okuda T., Chem. Pharm. Bull., 37, 2016-2021 (1989).

22) Imanari T., Hirota M., Miyazaki M., Igaku No Ayumi, 101, 496-497 (1977).

23) Hatano T., Yasuhara T., Yoshihara R., Agata L, Noro T., Okuda T., Chem. Pharm. Bull., 38, 1224-1229 (1990).

24) Ohkawa H., Ohishi N., Yagi K., anal. Biochem., 95, 351-358 (1979).

25) a) Lahloub M, F., Zaghloul AM, El-Khayat SA, Afifi MS, Sticher O., Planta Med.. 57, 481-85 (1991); b) Nishimura H., Sasaki H., Inagaki N., Chin M. (Zhen 乙 X.), Mitsuhashi H., Phytochemistry. 30, 965-969 (1991); c) Budzianowski J., Skrzypczak L., ibid, 38, 997-1001 (1995),

26) Marsden SB, Nature (London), 181, 1199-1200 (1958).

27) Chan WS, Wen PC, Chiang HC, Anticancer Res., 15, 703, 708, (1995).

28) Janero DR, Burghardt B., Biochem, Pharmacol.. 37, 3335-3342 (1988).

29) Buettner GR, Arch. Biochem. Biophys., 300, 535-543 (1993).

30) Herbert V., Shaw S., Jayatilleke E., Stopler-Kasdan T., Stem Cells, 12, 289-303 (1994).

31) Aust SD, Miller DM, Samokyszyn VM, Methods Enzymol., 186, 457-463 (1990).

32) Kubota S., Ikegami Y., Kurokawa T., Sasaki R., Sugioka K., Nakano M., Biochem. Biophys. Res, Commun., 108, 1025-1031 (1982).

33) Yagi K., Ishida N., Komura S., Ohishi N., Kusai M., Kohno M., Biochem. Biophys. Res. Commun., 183, 945, pp. 951 (1992).

34) Hockenbery DM, Oltvai ZN, Yin XM, Milliman CL, Korsmeyer SJ, Cell. 75, 241-251 (1993).

35) Bucher JR, Tien M., Aust AD, Biochem. Biophys. Res, Commun., Ill, 777-784 (1983).

36) Yoshida T., Otake H., Aramaki Y., Hara T., Tsuchiya S., Hamada A., Utsumi H., Biol. Pharm. Bull.. 19, 779-782 (1996).

37) Afanas5 EVIB, Dorozhko A. L, Brodskii AV, Kostjuk VA, Potapovitš L A., Biochem. Pharmacol., 38, 1763-1769 (1989).

38) Robak J., Gryglewski RJ, Biochem. Pharmacol.. 37, 837-841 (1988).

39) Chimi H., Morel I., Lescoat G., Pasdeloup N・, Cillard P., Cillard J., Toxicology in Vitro, 9, 695, 702 (1995)