2. osa: Cistanche Deserticola ekstraktid võivad kiirendada vananemisvõimelise hiire 8 (SAM-P8) hiirte immunosestsentsi antagoniseerida ja pikendada eluiga

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

3.5. Väljavõtted dfCistanche deserticola(ECD)Edendada.

Lümfotsüütide apoptoos ja nekroosi pärssimine SAM-P8 hiirtel. Vere lümfotsüütide populatsioonide nekroosi ja apoptoosi taset analüüsiti kahekordse värvimisega anneksiin V-FITC V/PI-ga. See näitas, et nekrootiliste lümfotsüütide osakaal SAM-P8micus oli oluliselt suurem kui SAM-R1 kontrollloomadel, samas kui apoptootiliste lümfotsüütide osakaal oli väiksem (joonis 7). SAM-P8 hiirte dieedi täiendamine kolme erineva ECD annusega suutis pärssida perifeersete lümfotsüütide populatsioonides täheldatud nekroosi taset, samas kui ainult kaks kõrgemat ECD täiendamise taset muutsid apoptootiliste lümfotsüütide taset olulisel määral (joonis 7).

3.6. VäljavõttedCistanche deserticola(ECD) Vähendage põletikueelset tsütokiini IL-6 SAM-P8 hiirtel.

Veel üks indikaator ECD võimest mõjutada vanusega seotud muutusi immuunsüsteemis on ECD toidulisandite mõju mitmete tsütokiinide (IFN-, TNF-, IL-2.IL{{4) tasemele. }}.IL-10, GM-CSF ja IL-3) analüüsiti tsütomeetrilise helmeste massiivi analüüsi (CBA) abil, mis hõlmab värvimist fluorestsentsvärviga märgistatud antikehadega, mis on ühendatud püüdmistsütomeetriliste helmestega. Tulemused (joonis 8) näitasid, et põletikulise tsütokiini IL-6 ei suurenenud 8-kuu vanustel SAM-P8 hiirtel võrreldes sama vanade SAM-R1 kontrollhiirtega, kuid see suurenes oluliselt, kui võrreldes 6-kuuste SAM-R1 hiirtega (tulemusi pole näidatud). Siiski suutis toidulisand suurte ja keskmiste ECD annustega põhjustada statistiliselt olulise plasma IL-6 taseme languse (joonised 8(a) ja 8(b),<>

(IFN-, TNF-, IL-2, IL-10, GM-CSF ja IL-3) ei näidanud olulisi erinevusi SAM-P8, SAM-R1 ja ECD-ga ravitud hiirerühmade vahel (andmed ei ole näidatud).

4. Arutelu

Immuunkaitse uute invasiivsete mikroorganismide või endogeensete kasvajarakkude vastu sõltub T-rakkude repertuaari mitmekesisusest, mis omakorda sõltub naiivsete T-rakkude loomisest ja säilitamisest[19]. Vananemisprotsessi ajal on näidatud, et T-rakkude repertuaari mitmekesisus väheneb dramaatiliselt naiivsete T-rakkude järkjärgulise ammendumise tõttu perifeerses reservikogumis. Arvatakse, et eakate inimeste vastuvõtlikkus nakkustele, vähile ja vaktsineerimisjärgsetele halbadele tulemustele on see reageerivate naiivsete T-rakkude puudus [20]. Erinevaid sekkumisi, sealhulgas kalorite piiramist [7], treeningut [21] ja E-vitamiini lisamist [8], on kasutatud naiivsete T-rakkude edukaks täiendamiseks ja seeläbi eluea pikendamiseks ning nakkuste ja vähi tekke vähendamiseks eakate seas. Selles uuringus näitasime, et ECD on võimeline suurendama naiivsete T-rakkude taset perifeerses kogumis ning sellega kaasnes eluea pikenemine ja kasvajate moodustumise sageduse vähenemine vananemisega kiirendatud hiirtel (ECD terapeutiline rühm versus SAM-P8 ,0 versus 1/6). Seetõttu tundub mõistlik järeldada, et ECD võime pöörata tagasi perifeersete naiivsete T-rakkude vanusest sõltuv ammendumine võib kaasa aidata selle teadaolevatele mõjudele vananemisega seotud haiguste vähendamisel, mis tuleneb pikaajalistest kliinilistest vaatlustest.

5. Materjalid ja meetodid

5.1.Materjalid.

Normaalses immuunreaktsioonis, pärast võõrantigeeni piiramist ja elimineerimist, läbib enamik klooniliselt laienenud T-rakke apoptoosi, kusjuures mälu T-rakkudena säilib vaid väike osa. Järelikult kogunevad immuunkompetentse organismi vananedes perifeerse mälu T-rakud eluaegse kokkupuute tulemusena võõraste antigeenidega, mis muudavad naiivsed T-rakud mälurakkudeks [22, 23]. Mitmed uuringud on näidanud, et vanemate loomade ja inimeste lümfotsüütide apoptoosi defektid aitavad kaasa ka mälu T-rakkude sektsiooni suurenemisele [24, 25]. Lisaks on hiljutine uuring näidanud, et perifeerse mälu T-rakkude üleküllus võib pärssida naiivsete T-rakkude homöostaatilist proliferatsiooni [26]. Need hiljutised uuringud on samuti näidanud, et mälu T-rakud võivad sekreteerida kõrgel tasemel põletikueelseid tsütokiine, mis võivad aidata kaasa püsivatele põletikele eakate inimeste erinevates kudedes. Järelikult peaks mälu T-rakkude taseme vähendamine olema kasulik nii naiivsete T-rakkude homöostaatilisele proliferatsioonile kui ka vanemate organismide liigse põletikulise seisundi leevendamisele. Selles uuringus näidati, et toidulisand ECD-ga suudab vähendada perifeerse mälu T-rakkude taset ja suurendada naiivsete T-rakkude taset. Lisaks suurendas ECD lisamine uute naiivsete lümfotsüütide apoptoosiruumi. Samuti pärssis perifeersete lümfotsüütide nekroos, mis on seniilsetel loomadel peamiselt põhjustatud oksüdatiivsest stressist.

On olemas ulatuslikud tõendid, mis näitavad, et organismi vananemist ei iseloomusta mitte ainult immuunpuudulikkus, vaid ka kroonilise põletiku sagenemine[27. Põletikuvastane seisund avaldub kõige selgemalt vereringes suurenenud IL-1-s koos vananemisega seotud krooniliste põletikuliste haiguste, nagu Alzheimeri tõbi, Parkinsoni tõbi ja ateroskleroos, sagenemises. Üks silmapaistvamaid põletikulisi tsütokineesi on IL-6 ja selle plasmakontsentratsioon suureneb koos vananemise ja vanusega seotud haigustega [18,28,29] ning epidemioloogilised uuringud näitavad, et IL-6 on hea pikaealisuse biomarker. kuna see on tihedalt seotud suremusega eakate patsientide rühmades [30,31]. Sellega kooskõlas on mitmed terapeutilised sekkumised, mis vähendavad IL{10}} kontsentratsiooni

Joonis 6: ECD-toidulisandite mõju tüvirakkude antigeenile -1 (Sca-1) SAM-P8 hiirte perifeerse vere lümfotsüütides. Kaheksakuused isased SAM-P8 ja kontroll SAM-RI hiired jagati 5 rühma. SAM-P8 loomade kolme ravirühma toideti nelja nädala jooksul dieediga, millele lisati ECD väikesed (100 mg/kg), keskmised 500 mg/kg ja suured 250 mg/kg doosid ning kahte kontrollrühma looma sama dieet ilma toidulisandita. Pärast 12-tunnist paastumist koguti anesteseeritud loomadelt perifeerne veri ja viidi läbi FACS-analüüs, nagu on kirjeldatud jaotises 5. (a) Erinevate hiirte rühmade tüüpilised FACS-plokid, mis saadi tüvirakkude antigeeni-1 (Sca{{) abil. 20}})positiivsed rakud.(b) Histogramm, mis näitab tüvirakkude antigeeni-1 (Sca-1) positiivsete rakkude protsenti erinevate loomarühmade perifeerses veres. Baarid tähistavad liha SD {23}}).w*<0.01 sam-p8="" versus="" sam-r1;**=""><0.01 each="" treated="" group="" versus="" sam-p8="" group="" (by="" one-way="" anova="" with="" post="" hoc="">

Joonis 7: ECD toidulisandi mõju lümfotsüütide apoptoosile ja nekroosile eakatel SAM-P8 hiirtel. Kaheksakuused isased SAM-P8 ja kontroll SAM-RI hiired jagati 5 rühma. SAM-P8 loomade kolme ravirühma toideti neli nädalat dieediga, millele lisati ECD madalad (100 mg/kg), keskmised (500 mg/kg) ja suured (2500 mg/kg) doosid ning kahte kontrollrühma toideti. sama dieet ilma toidulisandita. Pärast 12-tunnist paastumist koguti anesteseeritud loomadelt perifeerne veri ja viidi läbi FACS-analüüs, nagu on kirjeldatud jaotises 5. (a) Erinevate hiirerühmade tüüpilised FACS-plokid, mis saadi anneksiin V-FITC-ga topeltvärvitud vere lümfotsüütide väramisel. /PI. (b) Histogramm, mis näitab apoptootiliste lümfotsüütide (anneksiin V-FITC positiivsete rakkude) protsenti erinevate loomarühmade perifeerses veres. c ) Histogramm, mis näitab nekrootiliste lümfotsüütide (PI-positiivsete rakkude) protsenti erinevate loomarühmade perifeerses veres. Tulbad tähistavad keskmist SD-d (igas rühmas,=10)."<0.05 sam-p8=""><0.05each treated="" groupversussam-p8group(by="" one-way="" anova="" with="" post="" hoc="">

Joonis 8: ECD toidulisandi mõju SAM-P8 hiirte seerumi põletikueelsele tsütokiini L6 tasemele. Kaheksakuused isased SAM-P8 ja kontroll-SAM-RI hiired jagati 5 rühma. SAM-P8 loomade kolme ravirühma toideti neli nädalat dieediga, millele oli lisatud madalat (100 mg/kg), keskmist (500 mg/kg). kg) ja suurtes (2500 mg/kg) ECD annustes ning kahte kontroll-loomarühma toideti sama dieediga ilma täiendava toidulisandita. Pärast 12-tunnist paastumist koguti plasmad ja plasma tsütokiinid erinevates loomarühmades määrati tsütomeetrilise helmeste massiivi immunoanalüüsiga, nagu on kirjeldatud jaotises 5. (a) GatingonIL-i poolt genereeritud erinevate hiirerühmade tüüpilised EACS-plotid-6 tsütomeetriline helmeste massiiv. (b) Histogramm, mis näitab tsütokiini IL6 kontsentratsioone erinevate loomarühmade plasmas. Tulbad tähistavad keskmist ± SD (igas rühmas,=10).<0.001each treated="" group="" versus="" sam-p8="" group="" (by="" one-way="" anova="" with="" post="" hoc="">

leevendada vanusega seotud haigusi [18]. Selle taustal oli oluline, et selles uuringus suutis toidulisand ECD-ga vähendada perifeerse IL-6 kontsentratsiooni, mis tähendab, et see mõju võib kaasa aidata vanusega seotud haiguste esinemissageduse vähendamise aluseks olevatele mehhanismidele. on saadud ECD pikaajalisel kasutamisel kliinilises praktikas.

Lisaks vanusega kaasnevatele adaptiivse immuunvastuse muutustele toimuvad organismi vananedes suured muutused ka kaasasündinud immuunsuses. Nende hulgas on muutused looduslikes tapjarakkudes [18], mis on esimene rakukomponentide rida, mis tagab kasvajarakkude ja viirusega nakatunud rakkude otsese tsütotoksilise lüüsi, kuna eakad inimesed on vastuvõtlikumad nii kasvaja tekkele kui ka viirusnakkustele [32]. ]. See uuring näitas, et CD3 pluss Ly49 pluss NK-rakud esinesid seniilsetel SAM-P8 hiirtel oluliselt madalamal tasemel võrreldes SAM-R1 kontrollloomadega, mis võib olla veel üks aluseks olev tegur, mis põhjustab eakate hiirte suurenenud vastuvõtlikkust vähile ja viirusnakkustele. Selles uuringus täheldatud NK-rakkude taseme tõus pärast toidulisandit ECD-ga võib seetõttu olla kasulik eakatele organismidele, kuna see suurendab resistentsust kasvaja arengu ja viirusnakkuse suhtes. Siiski on vaja täiendavaid uuringuid, et selgitada ECD mõju rolli NK-rakkudele vananenud organismides.

Kokkuvõtteks võib öelda, et see uuring näitas, et vananemisele kiirenenud hiire kalduva alamtüve SAM-P8 töötlemine ECD-ga võib esile kutsuda vanusega seotud immunosestsentsi muutuste olulise pöördumise. Naiivsete T-rakkude ja NK-rakkude perifeersete ja põrnarakkude populatsiooni puudused vähenesid, samas kui vähenes ka üleliigsete mälurakkude tase. Lisaks suutis toidulisand ECD-ga pärssida nii perifeersete lümfotsüütide nekroosi kui ka põletikueelse tsütokiini IL-6 taset. Lõpuks, lisaks seniilse immuunsüsteemi muutuste esilekutsumisele, pikendas ECD toidulisand oluliselt seniilse SAM-P8 mikrofoni eluiga.

Viited

[1] Y.Jiang ja PF.Tu, "Keemiliste koostisosade analüüsCistancheliigid, "Journal of Chromatography A, vol.1216, nr 11, lk.{2}},2009.

[2] Q. Xiong K. Hase Y. Tezuka, T. Tani, T. Namba ja SKadota. "Fenüületanoidide hepatoprotektiivne aktiivsus alatesCistanche deserticola"PlartaMedica, vol.64, nr.2, lk.{2}},1998.

[3]"Immunology and aging in Europe. Proceeding of the 2nd Conference on Basic Biology and Clinical Impact of Immunosenescence March 22-26, 2001, Cordoba, Spain, "Experimental Gerontology, vol.37, no.{5} }, lk.{6}},2002.

[4] G.-D. Xuan ja C.-Q. Liu, "Uuringud teemalCistanche deserticola fenüületanoidglükosiidide (PEG) mõjupealVananemisvastaneD-galaktoosi poolt indutseeritud eakatel hiirtel "Journal of Chinese Medicinal Materials, vol31, nr 9, lk 1385-1388, 2008.

[5] D.Aw, ABSilva ja DBPalmer, "Immunosenescence emerging challenges for an aging elanikkonna", Immwmology, vol.120, no.4, lk.{3}},2007.