Osa 2: ehhinakosiid pärsib glutamaadi vabanemist, pärssides pingest sõltuvat Ca2 pluss sisenemist ja proteiinkinaas C roti tserebrokortikaalsetes närvilõpmedes

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

Cheng Wei Lu 1,2, Tzu Yu Lin 1,2, Shu Kuei Huang 1 ja Su Jane Wang 3,*

Palun klõpsake siin tagasi 1. osa juurde

3.2 Terapeutilised tagajärjed

Eksitotoksilisus, patoloogiline protsess, mis on põhjustatud liigsest glutamaadi vabanemisest ja glutamaadi retseptori aktiveerimisest, on neuronite surma peamine põhjus ägedate ja krooniliste ajuhäirete korral, nagu insult, traumaatiline ajukahjustus, Parkinsoni ja Alzheimeri tõbi [13,41] ning ravistrateegiad. glutamaadi vabanemise inhibeerimine võib olla paljulubav neuroprotektiivne strateegia selliste haiguste raviks. On kinnitatud, et ehhinakosiid tungib läbi hematoentsefaalbarjääri (BBB) ​​ja avaldab neuroprotektiivset toimet erinevates in vivo neurotoksilisuse mudelites [8, 10–12, 42]. Kuigi nende neuroprotektiivsete toimete mehhanism pole täielikult mõistetav, on teatatud mitmest võimalikust mehhanismist, sealhulgas põletikulise vastuse inhibeerimine, mitokondriaalse funktsiooni stabiliseerimine, antioksüdatsioon, vabade radikaalide eemaldamine ja neurotroofse funktsiooni jäljendamine [5, 9, 12, 42]. Käesolevas uuringus on võimeehhinakosiidglutamaadi vabanemise vähendamine närvilõpmetest võib osaliselt selgitada ka selle neuroprotektiivset mehhanismi. Siiski, kas see toime aitab kaasa näilisele ravipotentsiaalileehhinakosiidglutamaadi eksitotoksilisusega seotud ajuhäirete puhul nõuab edasisi uuringuid.

Neuroprotektiivne toimecistancta ehhinakosiid

4.Materjalid ja meetodid

4.1. Kemikaalid

Fura-2-atsetoksümetüülester (Fura-2-AM) ja 3',3',3'-dipropüültiadikarbotsüaniinjodiid [DiSC3(5)] osteti ettevõttest Invitrogen (Carlsbad, CA, USA). o-konotoksiin MVIIC, rottleriin, 2-[1-(3-dimetüülaminopropüül)indool-3-üül]-3-(indool-3-üül)maleimiid ( GF109203X), 5,6,7,13-tetrahüdro- 13-metüül-5-okso-12H-indolo[2,3-a]pürrolo[3,{ {27}}c]karbasool-12-propaannitriil (Go6976) ja N-[2-(p-bromotsinnamüülamino)etüül]-5-isokinoliinsulfoonamiid (H89) osteti ettevõttest Tocris Bioscience (Bristol, Ühendkuningriik) ).ehhinakosiid, dantroleen, DL-treo-beeta-bensüül-oksüaspartaat (DL-TBOA), 7-kloro-5- (2-klorofenüül)-1, 5-dihüdro{ {10}},1-bensotiasepiin-2(3H)-oon (CGP37157), 2-(2-amino-3- metoksüfenüül)-4H -1-bensopüraan-4-one) (PD98059), etüleenglükool-bis(-aminoetüüleeter)-N,N,N/,N/-tetraäädikhape (EGTA) ja kõik muud reaktiivid osteti firmalt Sigma- Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA).

4.2. Loomad

Kasutati kahekuuseid isaseid Sprague-Dawley rotte. Loomi hoiti standardsetes keskkonnatingimustes (22 ± 1 oC; suhteline õhuniiskus 50 protsenti; valguse/pimeduse tsükkel 12 tundi) ning neile võimaldati piiramatu juurdepääs toidule ja veele. Loomad tapeti dekapitatsiooni teel ja ajukoor eemaldati kiiresti 4 oC juures. Katseprotseduurid kiitis heaks Fu Jeni institutsionaalne loomade hooldamise ja kasutamise komitee (A10259) kooskõlas riiklike tervishoiuinstituutide laboriloomade hooldamise ja kasutamise juhendiga. Tehti kõik jõupingutused, et minimeerida loomade kannatusi ja kasutada usaldusväärsete tulemuste saamiseks minimaalset arvu loomi.

4.3. Sünaptosomaalsed preparaadid

Sünaptosoomid puhastati rottide ajukoorest katkendlike Percolli gradientidega, nagu eelnevalt kirjeldatud [43, 44]. Lühidalt, kude homogeniseeriti söötmes, mis sisaldas 0,32 M sahharoosi (pH 7,4), homogenaati tsentrifuugiti 10 min kiirusel 3000 × g (5{{25}). }00 pööret minutis JA 25.5 rootoris; Beckman Coulter, Inc., Miami, FL, USA) ja 4 oC ning supernatanti tsentrifuugiti uuesti 12 minutit kiirusel 14 500 × g (11, 000 p/min JA 25.5 rootoris). Pellet resuspendeeriti ettevaatlikult 0,32 M sahharoosis (pH 7,4) ja selle sünaptosomaalse suspensiooni alikvoot (2 ml) asetati 3 ml Percolli katkendlikule gradiendile, mis sisaldas 0,32 M sahharoosi, 1 mM EDTA-d, 0,25 milliliitrit ja 0,25 milliliitrit. 3 protsenti, 10 protsenti ja 23 protsenti Percolli (pH 7,4). Pärast tsentrifuugimist kiirusel 32 500 × g (16 500 pööret minutis JA 20.5 rootoris) 7 minutit temperatuuril 4 oC saadi sünaptosoomid 10–23 protsendi Percolli ribadest ja neid lahjendati 30 ml lõppmahus. HEPES puhverkeskkond (140 mM NaCl, 5 mM KCl, 5 mM NaHC03, 1 mM MgCl2-6H2O, 1,2 mM Na2HPO4, 10 mM glükoosi ja 10 mM HEPES (pH 7,4)). Pärast edasist tsentrifuugimist kiirusel 27,{66}} × g (15 000 pööret minutis JA 25.5-s) 10 minutit, sünaptosoomi pellet resuspendeeriti 3 ml HEPES puhverkeskkonnas ja valgusisaldus määrati Bradfordi testiga. Lõpuks lahjendati 0, 5 mg sünaptosoomide suspensiooni 10 ml HEPES puhverkeskkonnas ja tsentrifuugiti kiirusel 3000 × g (5000 p / min JA 20.1 rootoris) 10 minutit. Supernatant visati ära ja sünaptosoome sisaldavad graanulid hoiti jääl ja kasutati 4–6 tunni jooksul.

cistanche ürt

4.4. Glutamaadi vabanemine

Glutamaadi vabanemist testiti online-fluorimeetria abil, nagu eelnevalt kirjeldatud [45, 46]. Sünaptosoomi graanulid resuspendeeriti HEPES puhverkeskkonnas (0,5 mg/mL) ja eelinkubeeriti 37 oC juures 10 minutit 16 uM veise seerumi albumiini juuresolekul, et siduda kõik eelinkubatsiooni käigus sünaptosoomidest vabanenud vabad rasvhapped. 2- ml sünaptosoomide alikvoot kanti üle segatavasse küvetti, mis sisaldas 2 mM NADP pluss, 50 ühikut glutamaatdehüdrogenaasi ja 1,2 mM CaCl2, ning NADPH fluorestsentsi mõõdeti Perkin-Elmer LS{14. }} spektrofluorimeeter (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, USA) ergastuse ja emissiooni lainepikkustel vastavalt 340 ja 460 nm. Kuna sünaptosoomid ei allu elektrilisele stimulatsioonile, kasutati glutamaadi vabanemise stimuleerimiseks kaaliumikanali blokaatorit 4-aminopüridiini. 4-aminopüridiin destabiliseerib membraani potentsiaali ja arvatakse, et see põhjustab korduvat spontaanset Na pluss kanalist sõltuvat depolarisatsiooni, mis sarnaneb sünaptilise terminali in vivo depolarisatsiooniga, mis viib pingest sõltuvate Ca2 pluss kanalite aktiveerumiseni ja neurotransmitteri vabanemiseni [47 ]. Andmed saadi 2-sekundiliste intervallidega. Eksogeense glutamaadi standard (5 nmol) lisati iga katse lõpus. Standardse lisamisega tekitatud fluorestsentsi muutuse väärtust kasutati vabanenud glutamaadi arvutamiseks glutamaadi nanomoolidena sünaptosomaalse valgu milligrammi kohta (nmol/mg). Tekstis tsiteeritud vabanemisväärtused on tasemed, mis saavutati püsiseisundis pärast 5-minutilist depolarisatsiooni (nmol/mg/5 min). Kumulatiivseid andmeid analüüsiti, kasutades Lotus 1-2-3 arvutustabeleid (IBM, White Plains, NY, USA) ja MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA).

4.5. Plasmamembraani potentsiaal

Plasmamembraani potentsiaal määrati membraanipotentsiaalitundliku värvainega DiSC3(5) [48]. Sünaptosoomid resuspendeeriti HEPES puhverkeskkonnas ja 2 ml alikvoodid kanti 37 oC juures Perkin-Elmer LS{10}} spektrofluoromeetris (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, MA, Waltham) segatavasse küvetti, mis sisaldas 5 uM DiSC3(5). , USA). Pärast segu 3-minutilist tasakaalustamist määrati fluorestsents ergastuse ja emissiooni lainepikkustel vastavalt 646 ja 674 nm. Andmeid koguti 2-sekundiliste intervallidega. Kumulatiivseid andmeid analüüsiti kasutades MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA) ja väljendati fluorestsentsi ühikutes.

4.6. Tsütosoolne Ca2 pluss kontsentratsioon ([Ca2 pluss ]C)

[Ca2 pluss ]C mõõdeti Ca2 pluss indikaatori fura-2 abil. Sünaptosoome (0,5 mg/ml) eelinkubeeriti segatavas katseklaasis 30 minutit temperatuuril 37 oC HEPES puhverkeskkonnas, mis sisaldas 5 uM fura-2 ja 0,1 mM CaCl2. . Pärast fura{12}} laadimist tsentrifuugiti sünaptosoome mikrotsentrifuugis 30 sekundit kiirusel 3000 × g (5000 pööret minutis). Sünaptosomaalsed pelletid resuspendeeriti HEPES puhverkeskkonnas ja sünaptosoomi suspensiooni segati termostaadiga küvetis Perkin-Elmer LS-55 spektrofluoromeetris (PerkinElmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA, USA). CaCl2 (1 mM) lisati 3 minuti pärast ja täiendavad lisamised tehti veel 10 minuti pärast. Fluorestsentsi andmed koguti ergastuslainepikkustel 340 ja 380 nm (emissiooni lainepikkus 505 nm) 2-sekundiliste intervallidega. [Ca2 pluss]C (nM) arvutati kalibreerimisprotseduuride [49] ja eelnevalt kirjeldatud võrrandite [50] abil. Kumulatiivseid andmeid analüüsiti kasutades MicroCal Origin (OriginLab Corporation, Northampton, MA, USA).

4.7. Western Blotting

Sünaptosoomid homogeniseeriti lüüsipuhvris (10 mM HEPES puhver, pH 7,4), 1% Triton X-100 ja proteaasi inhibiitori segus. Lüsaadid selgitati tsentrifuugimisega ja valgu kontsentratsioon määrati valguanalüüsi komplekti (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA) abil. Võrdsed kogused valke eraldati naatriumdodetsüülsulfaat-polüakrüülamiidi geelelektroforeesiga (SDS-PAGE) ja kanti üle nitrotselluloosmembraanile. Membraanid blokeeriti Tris-puhverdatud soolalahusega, mis sisaldas 5% madala rasvasisaldusega piima, ja inkubeeriti sobiva primaarse antikehaga (fosfoproteiini kinaas C (pan), 1:3000, NOVUS Biologicals Inc., Beverly, MA, USA) üleöö kl. 4 oC. Pärast kolme pesu Tris-puhverdatud soolalahuses töödeldi membraani sekundaarse mädarõika peroksidaasiga konjugeeritud antikehaga (1:3000) 1 tund toatemperatuuril. Seejärel pesti membraane vähemalt kolm korda Tris-puhverdatud soolalahusega ja visualiseeriti täiustatud kemoluminestsentssüsteemi abil (Amersham, Buckinghamshire, UK). Proovide alikvoot laaditi ja sondeeriti PKC-vastase antikehaga, et tuvastada PKC laadimiskontrollina. Ekspressiooni või fosforüülimise taset hinnati ribatiheduse järgi, mis kvantifitseeriti densitomeetria abil. Ribade densitomeetrilist kvantifitseerimist analüüsiti Syngene tarkvara (Synoptics, Cambridge, UK) abil.

4.8. Statistiline analüüs

Andmed saadi ühest sünaptosomaalsest preparaadist ja need ei olnud üksteisest sõltumatud. Et testida ravimi ja kontrolli mõju olulisust, kasutati kahepoolset Studenti t-testi. Kui oli vaja täiendavat võrdlust (nt kas teine ​​​​ravi mõjutas ehhinakosiidi toimet), kasutati ühesuunalist ANOVA-d, millele järgnes Tukey testi. Analüüs viidi lõpule tarkvara SPSS (17.0; SPSS Inc., Chicago, IL, USA) kaudu. Andmed on väljendatud keskmisena ± SEM; olulisust hinnati p < 0,05="" kõigi="" statistiliste="" mõõtmiste="">

cistanche

5. Kokkuvõtted

See on esimene uuring, mis näitab, et ehhinakosiid inhibeerib glutamaadi vabanemist roti tserebrokortikaalsetest sünaptosoomidest, vähendades Ca2 ja Cav2.2 ja Cav2.1 kanalite kaudu sissevoolu, ning see vabanemise pärssimine sõltub tõenäoliselt proteiinkinaas C raja supressioonist, vähemalt osa. Käesolev leid on väärtuslik, kuna see annab uudse ülevaate ehhinakosiidi toimemehhanismidest ajus.

Tänuavaldused: seda tööd toetas teadus- ja tehnoloogiaministeeriumi toetus (MOST 103-2320-B-030-001 MY3).

Autori kaastööd: Tzu Yu Lin ja Su Jane Wang mõtlesid välja ja kavandasid katsed; Cheng Wei Lu tegi katsed; Cheng Wei Lu ja Shu Kuei Huang analüüsisid andmeid; Su Jane Wang kirjutas paberi.

Huvide konflikt: autorid ei deklareeri huvide konflikti.

cistanche ürdi ekstrakt

Viited

1. Tu, PF; Wang, B.; Deyama, T.; Zhang, ZG; Lou, ZC Herba cistanchis'e fenüületanoidglükosiidide analüüs RP-HPLC abil. Acta Pharm. Patt. 1997, 32, 294–300.

2. Dalby-Brown, L.; Barnett, H.; Landbo, AK; Meyer, AS; Molgaard, P. Echinacea purpurea alkamiidide, kofeiinhappe derivaatide ja polüsahhariidide fraktsioonide sünergistlik antioksüdatiivne toime inimese madala tihedusega lipoproteiinide in vitro oksüdatsioonile. J. Agric. Food Chem. 2005, 53, 9413–9423. [CrossRef] [PubMed]

3. Dapas, B.; Dall'Acqua, S.; Bulla, R.; Agostinis, C.; Perissutti, B.; Invernizzi, S.; Grassi, G.; Voinovich, D. Standardiseeritud ehhiaatsia juureekstrakti sisaldava taimesiirupi poolt vahendatud immunomodulatsioon: tsütokiini geeniekspressiooni katseuuring tervetel inimestel. Fütomeditsiin 2014, 21, 1406–1410. [CrossRef] [PubMed]

4. Tema, WJ; Fang, TH; Tu, PF Ehhinakosiidi farmakoloogilise toime uurimise edusammud. Hiina J. Chin. Mater. Med. 2009, 34, 476–479.

5. Deng, M.; Zhao, JY; Tu, PF; Jiang, Y.; Li, ZB; Wang, YH ehhinakosiid päästab SHSY5Y neuronaalsed rakud TNFalpha-indutseeritud apoptoosist. Eur. J. Pharmacol. 2004, 505, 11–18. [CrossRef] [PubMed]

6. Koo, KA; Sung, SH; Park, JH; Kim, SH; Lee, KY; Kim, YC Callicarpa dichotoomi fenüületanoidglükosiidide in vitro neuroprotektiivne toime. Planta Med. 2005, 71, 778–780. [CrossRef] [PubMed]

7. Wang, YH; Xuan, ZH; Tian, ​​S.; Du, GH ehhinakosiid kaitseb 6-hüdroksüdopamiinist põhjustatud mitokondriaalse düsfunktsiooni ja PC12 rakkude põletikuliste reaktsioonide eest, vähendades ROS-i tootmist. Evid. Põhinev komplement. Altern. Med. 2015, 2015, 189239. [CrossRef] [PubMed]

8. Zhu, M.; Lu, C.; Li, W. Ajutine kokkupuude ehhinakosiidiga on piisav, et aktiveerida Trk signaalimine ja kaitsta neuronaalseid rakke rotenooni eest. J. Neurochem. 2013, 124, 571–580. [CrossRef] [PubMed]

9. Geng, X.; Tian, ​​X.; Tu, P.; Pu, X. Ehhinakosiidi neuroprotektiivne toime Parkinsoni tõve hiire MPTP mudelis. Eur. J. Pharmacol. 2007, 564, 66–74. [CrossRef] [PubMed]

10. Wei, LL; Chen, H.; Jiang, Y.; Tu, PF; Zhong, M.; Du, J.; Liu, F.; Wang, L.; Liu, CY Ehhinakosiidi mõju aktiivse massi histio-tsentraalsele tasemele keskmise ajuarteri oklusiooni rottidel. Biomed. Keskkond. Sci. 2012, 25, 238–244. [PubMed]

11. Wu, CR; Lin, HC; Su, MH Cistanche tubulosa vesiekstraktide kõrvaldamine Alzheimeri tõvega sarnase roti mudeli käitumishäiretest: olulisus amüloidi ladestumise ja tsentraalse neurotransmitteri funktsiooni jaoks. BMC täiendus. Altern. Med. 2014, 14, 202. [CrossRef] [PubMed]

12. Zhao, Q.; Gao, J.; Li, W.; Cai, D. Ehhinakosiidi neurotroofsed ja neurorescue-efektid Parkinsoni tõve alaägedas MPTP hiiremudelis. Brain Res. 2010, 1346, 224–236. [CrossRef] [PubMed]

13. Meldrum, BS Glutamaat kui neurotransmitter ajus: füsioloogia ja patoloogia ülevaade. J. Nutr.2000, 130, 1007S–1015S. [PubMed]

14. Lee, D.; Shim, MS; Kim, KY; Ei, YH; Kim, H.; Kim, SY; Weinreb, RN; Ju, WK koensüüm Q10 inhibeerib glutamaadi eksitotoksilisust ja oksüdatiivse stressi poolt vahendatud mitokondriaalseid muutusi glaukoomi hiiremudelis. Uurige. Oftalmool. Vis. Sci. 2014, 55, 993–1005. [CrossRef] [PubMed]

15. Choi, DW Kaltsium ja eksitotoksilised neuronikahjustused. Ann. NY Acad. Sci. 1994, 747, 162–171. [CrossRef][PubMed]

16. Lau, A.; Tymianski, M. Glutamaadi retseptorid, neurotoksilisus ja neurodegeneratsioon. Pflugerid. Arch. 2010, 460, 525–542. [CrossRef] [PubMed]

17. Sattler, R.; Tymianski, M. Glutamaadi retseptori vahendatud eksitotoksilise neuronaalse rakusurma molekulaarsed mehhanismid. Mol. Neurobiol. 2001, 24, 107–129. [CrossRef]

18. Schauwecker, PE Neuroprotektsioon glutamaadi retseptori antagonistide poolt krambihoogudest põhjustatud eksitotoksilise rakusurma vastu vananevas ajus. Exp. Neurol. 2010, 224, 207–218. [CrossRef] [PubMed]

19. Yeganeh, F.; Nikbakht, F.; Bahmanpour, S.; Rastegar, K.; Namavar, R. NMDA ja I rühma metabotroopsete glutamaadi retseptori antagonistide neuroprotektiivne toime homotsüsteiini poolt indutseeritud neurodegeneratsiooni vastu roti hipokampuses: In vivo uuring. J. Mol. Neurosci. 2013, 50, 551–557. [CrossRef] [PubMed]

20. Doble, A. Eksitotoksilisuse roll neurodegeneratiivses haiguses: mõju ravile. Pharmacol. Ther.1999, 81, 163–221. [CrossRef]

21. Muir, KW Glutamaadipõhised ravimeetodid: kliinilised uuringud NMDA antagonistidega. Curr. Arvamus. Pharmacol. 2006, 6, 53–60. [CrossRef] [PubMed]

22. González, JC; Egea, J.; del Carmen Godino, M.; Fernandez-Gomez, FJ; Sánchez-Prieto, J.; Gandía, L.; García, AG; Jordán, J.; Hernández-Guijo, JM Neuroprotektant minotsükliin pärsib glutamatergilist neurotransmissiooni ja Ca2 pluss signaaliülekannet hipokampuse neuronites. Eur. J. Neurosci. 2007, 26, 2481–2495. [CrossRef] [PubMed]

23. Lu, CW; Lin, TY; Wang, SJ Memantiin pärsib glutamaadi vabanemist, inhibeerides pingest sõltuvat Ca2 pluss sisenemist ja proteiinkinaasi C roti ajukoore närvilõpmetes: NMDA retseptorist sõltumatu mehhanism. Neurochem. Int. 2010, 57, 168–176. [CrossRef] [PubMed]

24. Wang, SJ; Sihra, TS Mittekonkureeriv metabotroopne glutamaat 5 retseptori antagonist (E)-2-metüül-6- stürüülpüridiin (SIB1893) pärsib glutamaadi vabanemist, inhibeerides pingest sõltuvat Ca2 pluss sisenemist roti tserebrokortikaalsetesse närvilõpmetesse (sünaptosoomidesse). J. Pharmacol. Exp. Seal. 2004, 309, 951–958. [CrossRef] [PubMed]

25. Dunkley, PR; Jarvie, PE; Heath, JW; Kidd, GJ; Rostas, JA Kiire meetod sünaptosoomide eraldamiseks Percolli gradientidel. Brain Res. 1986, 372, 115–129. [CrossRef]

26. Araque, A.; Li, N.; Doyle, RT; Haydon, PG SNARE valgust sõltuv glutamaadi vabanemine astrotsüütidest.J. Neurosci. 2000, 20, 666–673. [PubMed]

27. Dunlop, J. Glutamaadipõhised terapeutilised lähenemisviisid: glutamaadi transpordisüsteemi sihtimine.

Curr. Arvamus. Pharmacol. 2006, 6, 103–107. [CrossRef] [PubMed]

28. Zucchi, R.; Ronca-Testoni, S. Sarkoplasmaatiline retikulum Ca2 pluss kanal/rüanodiini retseptor: endogeensete efektorite, ravimite ja haigusseisundite modulatsioon. Pharmacol. Rev. 1997, 49, 1–51. [PubMed]

29. Fan, Y.; Li, J.; Zhang, YQ; Jiang, LH; Zhang, YN; Yan, CQ Proteiini kinaasi C delta vahendatud 6-hüdroksüdopamiini tsütotoksilisus püsiva rakuvälise signaaliga reguleeritud kinaasi 1/2 aktivatsiooni kaudu PC12 rakkudes. Neurol. Res. 2014, 36, 53–64.[CrossRef] [PubMed]

30. Gschwendt, M.; Müller, HJ; Kielbassa, K.; Zang, R.; Kittstein, W.; Rinkke, G.; Marks, F. Rottlerin, uudne proteiinkinaasi inhibiitor. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1994, 199, 93–98. [CrossRef] [PubMed]

31. Nicholls, peadirektoraat; Sihra, TS; Sanchez-Prieto, J. Kaltsiumist sõltuv ja sõltumatu glutamaadi vabanemine sünaptosoomidest, mida jälgitakse pideva fluoromeetriaga. J. Neurochem. 1987, 49, 50–57. [CrossRef] [PubMed]

32. Nicoll, RA Neurotransmitterite retseptorite sidumine aju ioonikanalitega. Teadus 1988, 241 545–551. [CrossRef] [PubMed]

33. Wu, LG; Saggau, P. esilekutsutud neurotransmitteri vabanemise presünaptiline pärssimine. Trends Neurosci. 1997, 20, 204–212. [CrossRef]

34. Turner, TJ; Dunlap, K. Presünaptiliste kaltsiumikanalite farmakoloogiline iseloomustus sünaptosomaalse neurosekretsiooni subsekundiliste biokeemiliste mõõtmiste abil. Neuropharmacology 1995, 34, 1469–1478. [CrossRef]

35. Millan, C.; Sanchez-Prieto, J. N- ja P/Q-tüüpi kaltsiumikanalite diferentsiaalne sidumine glutamaadi eksotsütoosiga roti ajukoores. Neurosci. Lett. 2002, 330, 29–32. [CrossRef]

36. Vazquez, E.; Sanchez-Prieto, J. Glutamaadi vabanemise presünaptiline modulatsioon on suunatud erinevatele kaltsiumikanalitele roti tserebrokortikaalsetes närvilõpmetes. Eur. J. Neurosci. 1997, 9, 2009–2018. [CrossRef] [PubMed]

37. Pikk, P.; Mercer, A.; Begum, R.; Stephens, GJ; Sihra, TS; Jovanovic, JN närviterminali GABAA retseptorid aktiveerivad Ca2 pluss/kalmoduliinist sõltuva signaalimise, et pärssida pingega seotud Ca2 pluss sissevoolu ja glutamaadi vabanemist. J. Biol. Chem. 2009, 284, 8726–8737. [CrossRef] [PubMed]

38. Turner, JR; Nurk, JM; Must, ED; Joyal, JL; Sacks, DB; Madara, JL PKC-sõltuv transepiteliaalse resistentsuse regulatsioon: MLC ja MLC kinaasi rollid. Olen. J. Physiol. 1999, 277, C554–C562. [PubMed]

39. Vaughan, PF; Walker, JH; Peers, C. Neurotransmitterite sekretsiooni reguleerimine proteiinkinaasi poolt C.Mol. Neurobiol. 1998, 18, 125–155. [CrossRef] [PubMed]

40. Coffey, ET; Sihra, TS; Nicholls, peadirektoraat; Pocock, JM Sünapsiin I ja MARCKSi fosforüülimist närvilõpmetes vahendab Ca2 pluss sisenemine Aga-GI tundliku Ca2 pluss kanali kaudu, mis on seotud glutamaadi eksotsütoosiga. FEBS Lett. 1994, 353, 264–268. [CrossRef]

41. Obrenovitš, TP; Urenjak, J. Muutunud glutamatergiline ülekanne neuroloogiliste häirete korral: kõrgest ekstratsellulaarsest glutamaadist kuni liigse sünaptilise efektiivsuseni. Prog. Neurobiol. 1997, 51, 39–87. [CrossRef]

42. Zhang, D.; Li, H.; Wang, JB ehhinakosiid inhibeerib HEWL-i amüloidfibrillatsiooni ja kaitseb A-indutseeritud neurotoksilisuse eest. Int. J. Biol. Macromol. 2015, 72, 243–253. [CrossRef] [PubMed]

43. Lin, TY; Lu, CW; Wang, CC; Lu, JF; Wang, SJ Hispiduliin inhibeerib glutamaadi vabanemist roti tserebrokortikaalsetes närvilõpmedes. Toksikool. Rakendus Pharmacol. 2012, 263, 233–243. [CrossRef] [PubMed]

44. Chang, CY; Lin, TY; Lu, CW; Huang, SK; Wang, YC; Chou, SS; Wang, SJ Hesperidiin pärsib glutamaadi vabanemist ja avaldab neuroprotektsiooni kaiinhappe poolt põhjustatud eksitotoksilisuse vastu rottide hipokampuses. Neurotoksikoloogia 2015, 2015, 157–169. [CrossRef] [PubMed]

45. Nicholls, peadirektoraat; Sihra, TS Synaptosoomidel on glutamaadi eksotsütootiline kogum. Nature 1986, 321, 772–773.[CrossRef] [PubMed]

46. ​​Wang, CC; Kuo, JR; Wang, SJ Dimebon, antihistamiinravim, inhibeerib glutamaadi vabanemist roti tserebrokortikaalsetes närvilõpmetes. Eur. J. Pharmacol. 2014, 734, 67–76. [CrossRef] [PubMed]

47. Tibbs, GR; Barrie, AP; van Mieghem, FJ; Mc-Mahon, HT; Nicholls, DG Korduvad toimepotentsiaalid isoleeritud närvilõpmetes 4-aminopüridiini juuresolekul: mõju tsütosoolse vaba Ca2 pluss ja glutamaadi vabanemisele. J. Neurochem. 1989, 53, 1693–1699. [CrossRef] [PubMed]

48. Akerman, KE; Scott, LG; Heikkila, JE; Heinonen, E. Membraanipotentsiaali ja glutamaadi retseptoriga seotud vastuste iooniline sõltuvus sünaptoneurosoomides, mõõdetuna tsüaniinvärviga, DiSC2(5).J. Neurochem. 1987, 48, 552–559. [CrossRef] [PubMed]

49. Sihra, TS; Bogonez, E.; Nicholls, DG Localized Ca2 plus sisenemine mõjutab eelistatavalt valkude defosforüülimist, fosforüülimist ja glutamaadi vabanemist. J. Biol. Chem. 1992, 267, 1983–1989. [PubMed]

50. Grynkiewicz, G.; Poenie, M.; Tsien, RY Uue põlvkonna Ca2 pluss-indikaatorid, millel on oluliselt paranenud fluorestsentsi omadused. J. Biol. Chem. 1985, 260, 3440–3450. [PubMed]