Cistanche Tubulosa fenüületanoidglükosiidide häirimine MTT analüüsiga

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

Yu-Jie Wang, Si-Min Zhou, Gang Xu ja Yu-Qi Gao

Abstraktne:

MTT analüüsi kui sõelumismeetodit on laialdaselt kasutatud rakkude elujõulisuse ja proliferatsiooni mõõtmiseks. Siiski tuleb märkida, et MTT analüüs ei pruugi täpselt kajastada mõjuCistanche tubulosaetanooliekstrakt EA.hy926 rakkude elujõulisuse kohta. MTT testi vastuoluliste tähelepanekute eest vastutavate komponentide, ehhinakosiid ja akteosiidi uurimiseks ja tuvastamiseks eraldati C. tubulosa etanooliekstraktist kaks peamist fenüületanoidglükosiidi. CCK-8, Hoechst 33342 ja anneksiin V-FITC/PI analüüsidest saadud andmed viitavad sellele, et mõlemas eraldatud ühendis esinev kofeoüülrühm oli vastutav MTT testi vastuoluliste tulemuste eest. Need andmed rõhutavad vajadust kasutada erinevaid meetodeid, et määrata kindlaks ravimite mõju rakkude elujõulisusele, et vältida eksitavate tulemuste tekitamist.

Märksõnad: MTT analüüs;fenüületanoidglükosiid; kofeiinhape; rakkude elujõulisus; sekkumine

Sissejuhatus

Parasiitne taimCistanche tubulosa(Schrenk) R. Wight (perekond Orobanchaceae) on laialt levinud Põhja-Aafrika, Araabia ja Aasia riikides [1]. See tulenebCistanche tubulosajaCistanche deserticolaon traditsioonilises hiina meditsiinis olulised, kuna neid on kasutatud impotentsuse, steriilsuse, lumbago ja käärsoole inertsist tingitud kõhukinnisuse raviks [2]. Lisaks on näidatud, et Cistanche tubulosa etanooliekstraktil on hiirtel märkimisväärne kaitsev toime aju hüpoksia vastu [3].

Endoteelirakud mängivad hüpoksilise pulmonaalse hüpertensiooni patogeneesis otsustavat rolli. EA.hy926 endoteeli rakuliin on märkimisväärselt sarnane primaarsete endoteelirakkudega. Meie enda uuringu käigus antihüpoksilise toime kohtaCistanche tubulosaetanooliekstrakti EA.hy926 endoteelirakul märkasime, et 3-(4,5-dimetüültiasool-2-üül)-2,5-difenüültetrasooliumbromiid (MTT) test, mida tavaliselt kasutatakse rakkude elujõulisuse hindamiseks tsütotoksilisuse ja tsütostaatilise aktiivsuse uuringutes, andis vastuolulisi tulemusi, näidates pärast töötlemist suurenenud EA.hy926 rakkude elujõulisust.

Rakkude elujõulisuse täpne hindamine on ravimi potentsiaalse tsütotoksilise või tsütoprotektiivse toime tuvastamiseks hädavajalik. Seetõttu uurisime, millised C. tubulosa etanooliekstraktis sisalduvad komponendid võivad olla vastutavad MTT testiga täheldatud vastuoluliste tulemuste eest. Me eraldasime C. tubulosa etanooliekstraktist kaks peamist fenüületanoidglükosiidi (PhG), ehhinakosiidi (edaspidi ühend 1) ja akteosiidi (edaspidi ühend 2) ning määrasime nende mõju EA.hy926 rakkude elujõulisusele, kasutades erinevaid meetodeid. Lisaks sellele, et selgitada, milline ühendite 1 ja 2 asendaja võib olla vastuoluliste tulemuste põhjuseks, testisime nende aglükoone, kofeiinhapet (edaspidi ühend 3) ja 3, 4-dihüdroksülfenüületanooli (edaspidi ühend 4). EA.hy926 rakkude elujõulisuse kohta, kasutades samu meetodeid.

Tulemused ja arutlus

Ühendite identifitseerimine

Kahe C. tubulosa etanooliekstraktist eraldatud ühendi struktuurid identifitseeriti tuumamagnetresonantsi (NMR) ja massispektromeetria (MS) analüüsidega ning need on näidatud joonisel 1. Ühend 1 identifitseeriti ehhinakosiidina, võrreldes eelnevalt teatatud NMR-ga (tabel). 1) ja MS (m/z 785 [M−H]−) andmed [4]. Ühendi 2 NMR spektrid olid väga sarnased ühendi 1 omadega, välja arvatud -D-glükopüranosüülrühma puudumine (tabel 1). Ühend 2 (m/z 623 [M-H]-) tuvastati akteosiidina [5]. Oluline on see, et mõlemal ühendil on sama aglükoon, mis sisaldab kohvhapet (ühend 3) ja 3, 4-dihüdroksülfenüületanooli (ühend 4).

Rakkude elujõulisuse analüüsid

Ühendite 1–4 mõju analüüsimiseks EA.hy926 rakkude elujõulisusele kasutati MTT ja CCK{{0}} teste. MTT test näitas, et EA.hy926 rakkude elujõulisus suurenes oluliselt pärast töötlemist 25 ja 50 μM ühendiga 1, 2 või 3 (ühendi 1 puhul 166,3 protsenti ja 174,1 protsenti, ühendi puhul 205,8 protsenti ja 224,3 protsenti). 2 ja vastavalt 164,8 protsenti ja 189,6 protsenti ühendi 3 puhul; p < 0,05,="" võrreldes="" kontrollrakkudega="" (joonis="" 2a).="" veelgi="" enam,="" rakkude="" morfoloogiline="" kontroll="" näitas,="" et="" töötlemine="" 50="" μm="" ühendiga="" 1,="" 2="" või="" 3="" suurendas="" lillade="" formazaani="" kristallide="" moodustumist,="" mida="" peetakse="" elusrakkude="" osakaalu="" otseseks="" näitajaks="" (joonis="" 3).="" vastupidi,="" cck-8="" test="" näitas,="" et="" rakkude="" elujõulisus="" vähenes="" oluliselt="" pärast="" töötlemist="" 12,5,="" 25="" ja="" 50="" µm="" ühendiga="" 1,="" 2="" või="" 3="" (75,5="" protsenti,="" 45,1="" protsenti="" ja="" 43,7="" protsenti="" ühendi="" 1="" puhul,="" 85,5="" protsenti,="" 51,8="" protsenti="" ja="" 34,3="" protsenti="" ühendi="" 2="" puhul="" ning="" vastavalt="" 64,5="" protsenti,="" 48,2="" protsenti="" ja="" 36,4="" protsenti="" ühendil="" 3;="" p="">< 0,05,="" võrreldes="" kontrollrakkudega="" (joonis="" 2b).="" ühend="" 4="" ei="" mõjutanud="" rakkude="" elujõulisust="" ei="" mtt="" ega="" cck-8="" testis.="" kahe="" testiga="" saadud="" tulemuste="" lahknevus="" viitab="" sellele,="" et="" üks="" kahest="" analüüsist="" ei="" pruugi="" täpselt="" kajastada="" ühendite="" 1="" ja="" 2="" mõju="" ea.hy926="" rakkude="">

Apoptoosi hindamine Hoechsti värvimise abil

Hoechst 33342 on rakku läbilaskev DNA plekk, mida ergastab ultraviolettvalgus ja mis kiirgab sinist fluorestsentsi lainepikkusel 460–490 nm. Apoptootiliste rakkude kondenseerunud kromatiin värvub eredamalt kui normaalsete rakkude kromatiin [6]. Kui kontrollrakkudel oli ühtlaselt hajutatud kromatiin, normaalsed organellid ja terved rakumembraanid, siis 50 µM ühenditega 1, 2 või 3 48 tundi inkubeeritud rakud näitasid apoptootiliste rakkude tüüpilist värvumist (joonis 4A). Seevastu rakkude kokkupuude 50 μM ühendiga 4 ei suurendanud apoptootiliste tuumade arvu võrreldes kontrollraviga.

Apoptootiliste rakkude voolutsütomeetriline analüüs

Anneksiin V-FITC/PI topeltvärvimise test tuvastab apoptootilised rakud anneksiin V-FITC kõrge afiinsusega seondumise järgi fosfatidüülseriiniga, mis eritub apoptoosi läbivates rakkudes [7]. Selles testis ei seondu elujõulised rakud ei anneksiin V ega PI-ga ja seetõttu ei värvu (alumine vasak kvadrant), varajased apoptootilised rakud värvitakse roheliseks anneksiin V-FITC (alumine parem kvadrant) ja hilised apoptootilised rakud. värvuvad roheliseks ja punaseks anneksiin V-FITC seondumisel vastavalt fosfatidüülseriiniga ja PI nekrootiliste rakkudega (parem ülemine kvadrant). Nagu on näidatud joonisel 4B, inkubeeriti rakke 48 tundi 50 µM ühenditega 1, 2 või 3, apoptootiliste rakkude protsent suurenes 3,74 protsendilt (kontrollrakud) vastavalt 10,32 protsendini, 12,95 protsendini ja 11,30 protsendini. Võrreldes kontrollrakkudega ei suurendanud ühend 4 apoptootiliste EA.hy926 rakkude protsenti.

Kooskõlas CCK-8 testi ja Hoechst 33342 värvimisega saadud tulemustega näitas voolutsütomeetria test, et ühendid 1, 2 ja 3 kutsusid esile EA.hy926 rakkudes apoptoosi. Kokkuvõttes viitavad need tähelepanekud sellele, et MTT testiga täheldatud EA.hy926 rakkude elujõulisuse suurenemine pärast töötlemist ühenditega 1–3 oli valepositiivne tulemus.

Arutelu

1983. aastal töötas Mosmann välja kolorimeetrilise MTT mikroplaadi analüüsi rakkude proliferatsiooni ja tsütotoksilisuse mõõtmiseks [8]. Seda lihtsat analüüsi ja selle modifikatsioone kasutatakse nüüd laialdaselt rakubioloogia laborites üle kogu maailma. Imetajate rakkude fraktsioneerimisuuringud näitasid, et redutseeritud püridiini nukleotiidi kofaktor NADH vastutab enamiku MTT vähenemise eest. Seda toetasid uuringud, milles kasutati terveid rakke [9]. Seetõttu seostatakse MTT vähenemist metaboolselt aktiivsete rakkudega ja mitte ainult mitokondriaalse hingamisega, vaid ka tsütoplasma ja mittemitokondriaalsete membraanidega, sealhulgas endosoomi/lüsosoomi sektsiooni ja plasmamembraaniga [10]. MTT molekuli positiivne netolaeng on selle raku omastamise peamine tegur plasmamembraani potentsiaali kaudu.

Eelkõige ei pruugi MTT test mõnikord täpselt kajastada tegelikku mõju, mida testitav ühend avaldab konkreetsetele rakkudele. Siiski ei ole tuvastatud keemilisi struktuure või rühmi, mis võivad MTT testis vastuolulisi tulemusi põhjustada. Hiljutised uuringud on näidanud, et MTT test võib alahinnata (-)-epigallokatehhiin-3-gallaadi, rohelise tee kõige rikkalikuma polüfenooli [11], proliferatsioonivastast toimet. Uuringutes, milles kasutati kasvaja kemosensitiivsuse tuvastamiseks MTT testi, näitasid vähivastased kemoterapeutilised ained, nagu epirubitsiin, paklitakseel, dotsetakseel ja imatiniibmesülaat (Gleevec), rakkude elujõulisuse suurenemist [12,13]. Lisaks on mitmed uuringud teatanud, et teatud taimeekstraktid ja redoks-aktiivsed polüfenoolid võivad MTT testi häirida, kuna need vähendavad otseselt MTT tetrasooliumi soola rakkude puudumisel [14].

Vajadus solubiliseerida MTT formatsaani kristallid enne spektrofotomeetrilist analüüsi mikroplaadilugejas ja reaktsioonile omane lõpp-punkti iseloom piiravad MTT testi kasutamist teatud rakendustes. See viis tetrasooliumi analoogide väljatöötamiseni, milles fenüülrühmad olid kaunistatud negatiivselt laetud sulfonaatrühmadega, nagu 2,3-bis-(2-metoksü-4-nitro- 5- sulfofenüül)-2H-tetrasoolium-5-karboksamiid (XTT), negatiivse laenguga sisesool [15] ja 3-(4,5-dimetüültiasool-2-üül) -5-(3-karboksümetoksüfenüül)-2-(4-sulfofenüül)-2H-tetrasoolium (MTS), nõrgalt happeline sisesool, mis on tihedalt seotud MTT-ga [16] . Nende modifikatsioonide tulemusel saadi söötmes lahustuvad formazaantooted, mis välistasid enne kvantifitseerimist solubiliseerimisetapi nõude. Vastavalt sellele, kuna nende molekulide suurenenud negatiivne laeng vähendas nende võimet liikuda läbi rakumembraanide [17], vahepealsed elektronaktseptorid (IEA), näiteks 1-metoksü-5-metüülfenasiiniummetüülsulfaat ({{25) }}metoksü PMS) olid vajalikud tetrasoolvärvi redutseerimise hõlbustamiseks või redutseerimise kiiruse suurendamiseks.

Hiljuti töötati välja uue põlvkonna vees lahustuvad tetrasooliumisoolad, mille prototüüp on WST-1 [18]. WST-1, negatiivselt laetud disulfoonitud sisesool, mis sisaldab joodijääki, on stabiilsem kui XTT ja MTS 1-metoksü PMS, selle kohustusliku IEA juuresolekul. See viis WST{5}}/1-metoksü-PMS-i turustamiseni mugava ühe reagendi rakuproliferatsioonikomplektina. WST-seerias on välja töötatud mitmeid teisi tetrasooliumisooli, millest kõige kasulikum on võib-olla WST-8 [19]. Tundub, et WST-8-l on väga sarnased rakkude arvu vähendamise omadused WST{10}}-ga ja seda turustatakse iseseisvalt CCK-8-testina. WST-8 on raku läbitungimatu ja väheneb seetõttu ekstratsellulaarselt elektronide transpordi kaudu rakusisesest NADH-st WST-sse -8 läbi plasmamembraani, mida vahendab 1-metoksü-PMS. Kuigi nii MTT kui ka WST{15}}/1-metoksü-PMS-i vähendamist juhib rakusisene NADH, näib NADH allikas nende kahe meetodi puhul erinevat. WST-8/1-metoksü PMS-i vähendamine sõltub rohkem malaadi/aspartaadi süstikust, mis seob mitokondriaalse trikarboksüülhappe tsükli-NADH ekstramitokondriaalse ruumiga [20].

Esialgsetes katsetes kinnitasime, et ühendid 1, 2, 3 ja 4 ei suutnud MTT tetrasooliumisoola otseselt redutseerida (pole näidatud). Käesolevas uuringus kõrvaldati ühendite endi otsene mõju reagendile, pestes mikroplaate hoolikalt fosfaatpuhverdatud soolalahusega (PBS) enne MTT või CCK-8 lahuse lisamist, nagu on näidatud tootja protokollides. Sellegipoolest olid kahe meetodi abil saadud tulemused endiselt vastuolulised (joonis 2). Ootuspäraselt suurendas rakkude inkubeerimine ühenditega 1, 2 ja 3 tetrasooliumisoola redutseerumist purpurseks formasaaniks võrreldes kontrollrühmaga (joonis 3), mis viitab sellele, et tetrasooliumisoola redutseerimine konkreetse ühendi juuresolekul ei ole piisav, et hinnata ühendi võimet mõjutada MTT testi.

Et teha kindlaks, kas ühendid 1, 2, 3 ja 4 võivad indutseerida EA.hy926 rakkudes apoptoosi, hinnati raku morfoloogilisi muutusi ja fosfatidüülseriini eksternaliseerumist. Kooskõlas CCK-8 testiga täheldatud rakkude elujõulisuse vähenemisega näitasid Hoechsti värvimise ja voolutsütomeetria analüüsi tulemused anneksiin V-FITC/PI abil, et pärast töötlemist ühenditega 1, 2 ja 3 täheldatud kasvu pärssimine oli vähemalt osaliselt tingitud EA.hy926 raku apoptoosist. Meie tulemused toetasid ka ideed, et nii ühendites 1 kui ka 2 esinev kofeoüülrühm oli vastutav MTT testiga saadud vastuoluliste tulemuste eest.

Sarnaselt meie leidudele ei näidanud Rottlerin, võimas suure juhtivusega kaaliumikanali avaja, MTT suhtes in vitro reaktsiooni. Kuid see suurendas tugevalt formazaani kristallide moodustumist rakkudes, mis oli ilmselges vastuolus Rottlerini NF-κB inhibeerimise ja rakkude proliferatsiooniga, mida täheldati [3H]-tümidiini DNA-sse inkorporeerimise analüüsil [21]. Mehhanism, mille abil Rottlerin suurendas MTT vähenemist, omistati selle mitokondriaalsele lahtisidumise efektile [22]. Rottlerinil on kanemoüülhappe asendusrühm. Võrreldes kanemoüülhappega on ühendil 3 veel kaks hüdroksüüljääki, mis asuvad C-3 ja C-4. Seetõttu oletame, et mehhanism, mille abil ühendid 1 ja 2 põhjustavad MTT testis vastuolulisi tulemusi, võib olla seotud ka nende mitokondriaalse lahtisidumise mõjuga. Selle hüpoteesi kontrollimiseks on vaja võrdlevaid uuringuid ühendite 1, 2 ja keemilise lahtisiduri, näiteks trifluorokarbonüültsüaniidfenüülhüdrasooni (FCCP) vahel.

Eksperimentaalne osa

Reaktiivid ja kemikaalid

Ühend 3 (kohvhape-pulber, puhtus=98,6 protsenti) osteti ettevõttelt Chengdu Push Bio-Technology Co., Ltd. (Chengdu, Hiina). Ühend 4 (3, 4-dihüdroksülfenüületanool-õli, puhtus=98,5 protsenti) saadi ettevõttest Chengdu Must Bio-Technology Co., Ltd. (Chengdu, Hiina). MTT ja dimetüülsulfoksiid (DMSO) saadi firmast Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). CCK{11}} test osteti ettevõttest Dojin Laboratories (Kumamoto, Jaapan). Hoechst 33342 ja anneksiin V-FITC/PI apoptoosi tuvastamise komplektid osteti Beyotime'i biotehnoloogia instituudist (Haimen, Hiina)

Taimne materjal

C. tubulosa varred koguti Yutiani prefektuurist, Xinjiangi Uiguuri autonoomsest piirkonnast, Hiinast. Voucheri näidised deponeeriti Kolmanda sõjaväemeditsiini ülikooli (Chongqing, Hiina) kõrgmäestiku meditsiini võtmelaboratooriumi ja autentisid Yi Zhang Chengdu traditsioonilise hiina meditsiini ülikoolist (Chengdu, Hiina)

Taimse materjali ekstraheerimine ja eraldamine

Õhukuivatatud C. tubulosa (0,6 kg) varred pulbristati ja ekstraheeriti 50 protsendilise etanooliga 2 tundi 70 kraadi juures. Pärast lahusti eemaldamist alandatud rõhul lahustati etanooliekstrakt (212,5 g) ja suspendeeriti vees (2 I) ja ekstraheeriti n-butanooliga (2 L x 3). Butanoolne ekstrakt (110 g) kromatografeeriti polüamiidkolonnis ja elueeriti etanooli/veega (0:100, 5:95, 15:85, 30:70, 50:50), saades viis fraktsiooni (A-E) . Fraktsioon B (65 g) fraktsioneeriti ODS kolonnis; elueerides etanooli:vee seguga (1:9), eraldati ühend 1 (3 g). Fraktsioon D (10,5 g) fraktsioneeriti ODS kolonnis; elueerides etanooli/veega (1:4), eraldati ühend 2 (1 g).

NMR spektrid registreeriti Bruker Avance 600 spektromeetril CD3OD-s, kasutades sisestandardina tetrametüülsilaani (TMS). Massispektrid viidi läbi BioTOF-Q massispektromeetriga.

Rakukultuur

EA.hy926 rakuliinid saadi Ameerika tüübikultuuride kollektsioonist (Manassas, VA, USA). Rakke kultiveeriti RPMI 1640 söötmes, millele oli lisatud 10% (maht/maht) veiseloote seerumit ja 1% (maht/maht) penitsilliini-streptomütsiini, niisutatud keskkonnas 5% CO2 sisaldusega 37 kraadi juures.

Rakkude elujõulisus

Rakkude elujõulisust hinnati MTT ja CCK{{0}} testide abil. Ühendid 1 ja 2 ning nende aglükoonid, kohvhape (3) ja 3, 4-dihüdroksülfenüületanool (4) lahustati DMSO-s kuni DMSO lõppkontsentratsioonini < 0,1%="" (maht/maht)="">

EA.hy926 rakud külvati 96-süvendiga plaatidele tihedusega 4 × 103 rakku süvendi kohta. Pärast 24-tunnist inkubeerimist töödeldi rakke 24 tundi 6,25–50 μM ühendiga 1, 2, 3 või 4. Kultuurisööde eemaldati ja rakke pesti kaks korda fosfaatpuhverdatud soolalahusega (PBS). Igasse süvendisse, mis sisaldas 100 µl söödet, lisati alikvoodid (10 μL) MTT põhilahust (5 mg · ml-1) ja inkubeeriti rakkudega 4 tundi. Pärast inkubeerimist sööde eemaldati ja igasse süvendisse lisati 150 µl DMSO alikvoodid, et lahustada formasaani kristallid. Neeldumist mõõdeti 490 nm juures, kasutades mikroplaadilugejat (Bio-Tek Synergy HT, Winooski, VT, USA). Rakkude elujõulisust väljendati MTT vähenemise protsendina, määrates 100-protsendilise väärtuse kontrollrakkude neeldumisele. Kõik katsed viidi läbi kolm korda ja esitati kui keskmine ± standardhälve (SD).

CCK-8 test viidi läbi, järgides kirjandust väikeste muudatustega [23]. Täpsemalt töödeldi rakke 6,25–50 µM ühenditega 1, 2, 3 või 4 24 tundi ja pesti kaks korda PBS-iga, enne kui lisati 10 µL CCK-8 lahust ja 100 µL söötme. Pärast mikroplaadi 2-tunnist inkubeerimist 37 kraadi juures mõõdeti neeldumist lainepikkusel 450 nm, kasutades mikroplaadilugejat. Rakkude elujõulisust väljendati elujõuliste rakkude protsendina kontrollrakkude suhtes (100 protsenti). Kõik katsed viidi läbi kolm korda ja väljendati keskmisena ± SD.

Apoptoosi hindamine Hoechsti 33342 värvimisega

Apoptootilisi morfoloogilisi muutusi täheldati Hoechst 33342 värvimisega. Lühidalt öeldes külvati EA.hy926 rakud 48-süvendiga plaatidele (2 × 104 rakku süvendi kohta) ja töödeldi 50 µM ühendiga 1, 2, 3 või 4 48 tundi 37 kraadi juures, pesti kaks korda PBS-ga. ja fikseeriti 4 mahuprotsendilise (maht/maht) paraformaldehüüdiga 15 minutit toatemperatuuril. Pärast kahekordset loputamist PBS-ga värviti rakke Hoechst 33342-ga (10 ug·mL-1) 5 minutit toatemperatuuril ja pesti kaks korda PBS-iga. Hoechstiga värvitud tuumad visualiseeriti fluorestsentsmikroskoobi abil (Olympus, Tokyo, Jaapan).

Apoptoosi analüüs voolutsütomeetria abil

Apoptootilised rakud tuvastati anneksiin V-FITC/PI topeltvärvimise ja voolutsütomeetria analüüsiga. Lühidalt, pärast 48-tunnist töötlemist 50 µM ühendiga 1, 2, 3 või 4 rakud koguti ja resuspendeeriti PBS-is 1 × 105 rakku · ml-1. Pärast tsentrifuugimist 500 × g juures 5 minutit 25 kraadi juures lisati 195 μL anneksiin V-FITC sidumispuhvrit ja 5 μL anneksiin V-FITC. Pärast õrna keerisega segamist inkubeeriti segu 10 minutit toatemperatuuril pimedas. Pärast tsentrifuugimist 500 × g juures 5 minutit 25 kraadi juures lisati 190 μl FITC-konjugeeritud anneksiin V sidumispuhvrit ja 10 μL PI. Pärast õrna keerisega segamist analüüsiti proove FACSCaliburi voolutsütomeetriga (Becton Dickinson, San Jose, CA, USA) 30 minuti jooksul.

Statistiline analüüs

Kõik katseandmed väljendati keskmisena ± SD. Katseproovide ja vastava kontrolli vaheliste erinevuste olulisust hinnati ühesuunalise dispersioonanalüüsi (ANOVA) abil, kasutades SPSS tarkvara (versioon 11.5). Statistiline olulisus määrati p <>

Järeldused

Meie tulemused viitavad sellele, et MTT testis täheldatud elujõuliste rakkude arvu ülehindamine võib varjata teatud ühendite tsütotoksilisust. Seetõttu soovitame ravimite sõelumisprotsesside ajal kasutada erinevaid meetodeid, et määrata kindlaks konkreetse ühendi mõju rakkude elujõulisusele (nt CCK-8 ja 3 H-TdR testid), et vältida eksitavate tulemuste loomist.