Cistanche Deserticola polüsahhariidide ekstraheerimise protsessi optimeerimine, parandades atseetaldehüüdiga mürgitatud drosophila ellujäämismäära

Abstraktne: Eesmärk Võtta atseetaldehüüdiga mürgitatud drosophila mudeliks Cistanche deserticola polüsahhariidide skriinimiseks ja ekstraheerimisprotsessi optimeerimiseks, et optimaalne polüsahhariid saaks oluliselt parandada atseetaldehüüdiga mürgitatud drosophila ellujäämise määra.

meetodidCistanche deserticola toorpulbrit ekstraheeriti järjestikku etüülatsetaadi ja etanooliga. Papaiin, tsellulaas ja pektinaas lisati rasvatustatud Cistanche deserticola pulbrile ning polüsahhariidid ekstraheeriti L9 (34 ) ortogonaalse meetodi ja ensümolüüsi abil koos ultrahelimeetodiga. Cistanche deserticola ma polüsahhariidide ekstraheerimisprotsessi skriiniti parima farmakodünaamilise aktiivsusega Drosophila atseetaldehüüdiga mürgitatud režiimis.

Cistanche deserticola eksperiment

TulemusedCistanche deserticola polüsahhariidi optimaalsed ekstraheerimistingimused olid papaiin (200 protsenti), tsellulaas (200 protsenti), pektinaas (0,40 protsenti), tahke ja vedeliku suhe 1∶25, temperatuur 54,1 kraadi, pH 5,2, ensümaatiline hüdrolüüs 2 tundi, ühekordne ekstraheerimisaeg 45 minutit ja ekstraheerimisaeg 3.

JäreldusTraditsiooniliste meetoditega polüsahhariidide ekstraheerimisprotsessis olulist erinevust ei täheldatud. Polüsahhariidi ekstraheerimiseks teadusliku ja mõistliku teoreetilise aluse andmiseks kasutati indeksina atseetaldehüüdiga mürgitatud drosophila ellujäämismäära.

Märksõnad: Cistanche deserticola polüsahhariid; drosophila; atseetaldehüüdi mürgitatud; ekstraheerimisprotsess

Alkohol tekitab etanooldehüdrogenaasi toimel atseetaldehüüdi, mis on oluline alkoholismi riskitegur [1-2]. Kui atseetaldehüüdi toksilisust saab vähendada, võib see aeglustada mitmeid alkoholismist põhjustatud kõrvaltoimeid.

Cistanche deserticola peamised keemilised koostisosad

Cistanche toodete vaatamiseks klõpsake siin

【Küsi lisa】 E-post:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

MADrosophila on laialdaselt uuritud ja väga kodustatud geneetiline mudelorganism, millel on tugev geneetika, väga konservatiivne molekulaarne mehhanism, lühike paljunemistsükkel, väga madal söötmiskulu ja muud omadused, mida saab laialdaselt kasutada suure läbilaskevõimega ravimite sõeluuringuks. [4].

Cistanche deserticola polüsahhariidide ekstraheerimisprotsessi valikul kasutatakse sageli ortogonaalset meetodit ja vastuse pinnaanalüüsi, mille indikaatoriteks on glükoosisisaldus ja ekstraheerimiskiirus [5-7], ilma oluliste rühmadevaheliste erinevusteta [8-9] . Selles uuringus sõeluti polüsahhariidide ekstraheerimisprotsessi Cistanche deserticolast, kasutades farmakodünaamikat indikaatorina, et saada parema bioloogilise aktiivsusega taimseid polüsahhariide; Kasutades atsetaldehüüdiga mürgitatud Drosophila mudelit [10-11], sõeluge ja optimeerige Cistanche deserticola polüsahhariidide ekstraheerimisprotsess, mis võib oluliselt parandada atseetaldehüüdiga mürgitatud Drosophila ellujäämismäära.

Cistanche pulber

1 Materjalid ja meetodid

1.1 Materjalid

1.1.1 Katseloomad

Drosophila pärineb USA-s Indianas asuvast FlyBase'i aktsiakeskusest. Pärast ostmist on kultiveerimistingimusteks temperatuur 25 kraadi C, õhuniiskus 60–70 protsenti ning valguse ja pimeduse tsükkel 12-tund/12-tund.

1.1.2 Reaktiivid ja instrumendid

Tsellulaas 1 × 104 U/g (Shanghai McLean Biochemical Technology Co., Ltd., partii number: C11894650), papaiin (8,0 × 105 U/g) ja pektinaas (4,0 × 105 U/mg) osteti ettevõttelt Beijing Solaybao Biotechnology Co., Ltd. tootmispartiidega vastavalt 810079005 ja 329C0210. Cistanche deserticola pärineb Gansu Huiqin Biotechnology Co., Ltd.-st (partii number: 20200101) ja dotsent Yang Zhigang Lanzhou ülikooli farmaatsiakoolist on selle tuvastanud kui Cistanche deserticola YC Ma kuiva, ketendavat ja mahlakat vart. orobaceae perekonda kuuluv taim. Arvjuhtimisega ultrahelipuhasti (Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.), CR22G tsentrifuug (Hitachi, Jaapan), külmkuivati ​​(LABCONCO, USA), UV-1700 ultraviolettkiirguse spektrofotomeeter (Shimadzu, Jaapan), elektrooniline analüütiline kaal (Sartorius) Scientific Instrument Co., Ltd.), GL-88B keerismikser (Qilinbel Instrument Manufacturing Co., Ltd., Haimen City) Xk-3 stereomikroskoop (Phoenix Optics Co., Ltd.), SHP{ {17}} biokeemiline inkubaator (Shanghai Jinghong Experimental Equipment Co., Ltd.).

1.2 Cistanche deserticola ürdi eeltöötlemine [12]

Purustage Cistanche deserticola ravimtaimed läbi 10-mešši sõela, rasvatage neid kolm korda 8-kordse koguse etüülatsetaadi ja 95-protsendilise etanooliga, iga kord 2 tundi, ning kuivatage hilisemaks kasutamiseks.

Cistanche pulber

1.3 Cistanche deserticola polüsahhariidide massiosa määramise meetod

Cistanche deserticola polüsahhariidide massiosa määramiseks kasutati fenoolväävelhappe meetodit [12]. Joonistage standardkõver, mille x-teljeks on glükoosi kontsentratsioon ja y-teljeks neeldumine. Saadud regressioonivõrrand: Y=6.4719X pluss 0.006 4, R2=0.9991. Cistanche deserticola polüsahhariidil oli hea lineaarne seos neeldumisega massikontsentratsioonil 1.{10}}.800 mg/l. Polüsahhariidi massifraktsioon=(C1V1/1000M1) × 100 protsenti , kus C1 on regressioonivõrrandist saadud polüsahhariidi lahuse massikontsentratsioon, V1 on külmkuivatatud polüsahhariidi proovi maht konstantsel ruumalal ja M1 on külmkuivatatud polüsahhariidi proovivõtu kogus.

1.4 Cistanche deserticola polüsahhariidide valmistamine

Kasutades komposiit-ensümaatilist hüdrolüüsi kombineerituna ultrahelimeetodiga [12], lisati 10 g rasvatustatud Cistanche deserticola pulbrit koos vastava ensüümiga, nii et m (materjal): m (vesi)=1:25. Kogu m (materjal): m (vesi) ekstraheeriti 10-, 8- ja 7-kordse lahustiga ning kogu m (materjal): m (vesi) oli 25-kordne. Ravimaterjali veeimavuse tõttu olid kolm ekstraheerimislahustit erinevad. Temperatuur 54,1 kraadi C, pH 5,2, ensümaatiline hüdrolüüs 2 tundi, ultraheli ekstraheerimine 3 korda, iga ekstraheerimine 31,5 minutit, filtreerida marli abil, filtraat sulatada, tsentrifuugida kiirusel 5000 p/min 10 minutit, et saada ülemine selge vedelik ja kontsentraat 1/10 esialgsest mahust. Tilgutage kontsentreeritud lahusesse 95% etanooli ja segage, kuni etanooli kontsentratsioon jõuab 80%ni. Laske toatemperatuuril seista üle 8 tunni. Tsentrifuugige, sadestage ja külmutage, et saada Cistanche deserticola polüsahhariidid.

1,5 Cistanche deserticola polüsahhariidide valmistamise protsessi optimeerimine

Cistanche deserticola polüsahhariidide kõrge saagise ja puhtuse saamiseks kasutati ortogonaalset eksperimentaalset meetodit, et optimeerida polüsahhariidide ekstraheerimisprotsessi Cistanche deserticolast. Papaiin (2.00 protsenti ), tsellulaas (2.00 protsenti ), pektinaas (0,40 protsenti ), temperatuur 54,1 kraadi C, pH 5,2, ensümolüüs 2 tundi. Tabelis 1 toodud ortogonaalse eksperimentaalse ülesehituse põhimõtte L (934) kohaselt valiti polüsahhariidide ekstraheerimisprotsess Cistanche deserticolast m (materjal) ja m (vesi), ekstraheerimisaja ja ekstraheerimissageduse alusel. Suhkrusisaldust ja ekstraheerimiskiirust kasutati hindamisindikaatoritena Cistanche deserticola polüsahhariidide ekstraheerimisprotsessi skriinimiseks.

Tabel 1 Cistanche deserticola polüsahhariidide ekstraheerimist mõjutavad tegurid, kasutades komposiitensüümi kombineerituna ultrahelimeetodiga

1.6 Farmakodünaamilised katsed äädikakärbestega

Polüsahhariidi lahus on ennetav ravim ja seda uuringut tuleks korrata vähemalt 3 korda. 5-protsendiline sahharoosilahus on äädikakärbeste toitainelahus ja mudeli loomiseks kasutatakse 4-protsendilist atseetaldehüüdi lahust.

Isaste puuviljakärbeste katsed viidi läbi 20 hiirega igas rühmas. Asetage puuviljakärbes äädikakärbse pudelisse ja lisage 150 μ. Asetage äädikakärbse tuubi filterpaberitükk L polüsahhariidi lahust või destilleeritud vett, sulgege see vatiga ja inkubeerige 24-kraadises inkubaatoris 24 tundi. Eemaldage puuviljakärbes; Üle kantud 150 μ Inkubeerige 2 tundi äädikakärbse tuubis, mis sisaldab 5% sahharoosilahuse filterpaberit; Eemaldage äädikakärbse torust filterpaber ja asendage see 150 μ-ga. Jätkake L-atsetaldehüüdi lahuse uue filterpaberi kasvatamist ja jälgige tulemusi; Loendage Drosophila surmajuhtumite arv igas katsutis üks kord iga 12 tunni järel, kuni 5-protsendilise sahharoosilahuse rühma ellujäämismäär modelleerimisrühmas läheneb 50 protsendile, ja arvutage Drosophila ellujäämismäär igas rühmas.

Iga polüsahhariidi proov jaotati annustamis- ja doseerimisrühmaks. Annustamisrühmale ja annustamisrühmale anti {{0}},001 protsenti polüsahhariidi lahust pluss 5 protsenti sahharoosilahust pluss 4 protsenti atseetaldehüüdi lahust, samas kui annustamisrühmale anti 0,001 protsenti polüsahhariidi lahust pluss 5 protsenti sahharoosi lahust. Polüsahhariidi proovi toksilisust seletati äädikakärbeste ellujäämismääraga annustamisrühmas. Seadistage 5-protsendilise sahharoosilahuse rühm, mis on jagatud modelleerimisrühmaks ja tühjaks rühmaks. Modelleerimisrühmale anti 5-protsendilist sahharoosi toitelahust ja 4-protsendilist atseetaldehüüdi lahust, tühja rühmale aga 5-protsendilist sahharoosi toitelahust. Polüsahhariidiproovidega töödeldud äädikakärbeste ellujäämisnäitajaid võrreldes selgus, et polüsahhariidiproov parandas atseetaldehüüdiga mürgitatud äädikakärbeste ellujäämisvõimet.

2 tulemust

2.1 Komposiitensüümide tüüpide ja annuste sõelumistulemused

2.1.1 Komposiitensüümitüüpide valik

Varem kasutati tsellulaasi ja pektinaasi [3, 5] Cistanche deserticola polüsahhariidide ekstraheerimisprotsessi sõelumisel, samas kui Yang Xiuyan et al. [12] uskus, et papaiinil on hea seina lõhkuv toime. Seetõttu keskenduti selles uuringus tsellulaasi, papaiini ja pektinaasi ning ekstraheeritud polüsahhariidide kombineeritud sõelumisele vastavalt ülaltoodud meetoditele, et sõeluda, millisel komplekssete ensüümide kombinatsioonil on Cistanche deserticolast ekstraheeritud polüsahhariidid parem suhkrusisaldus ja ekstraktsioonikiirus. Nagu on näidatud tabelis 2, kui kompleksne ensüüm on tsellulaasi, papaiini ja pektinaasi kombinatsioon, on Cistanche deserticolast ekstraheeritud polüsahhariidide ekstraktsioonikiirus ja suhkrusisaldus suurim, seega on tsellulaasist, papaiinist ja pektinaasist koosnev kompleksne ensüüm kõrgeim. on valitud.

2.1.2 Ühendi ensüümi annuse valimine

Polüsahhariidide ekstraheerimisprotsess varieerub sõltuvalt kasutatud komplekssete ensüümide arvust. Seadke kokku 5 komposiitensüümide annuste skriinimise komplekti ja ekstraheerige polüsahhariidid Cistanche deserticolast, kasutades ülalnimetatud meetodit.

Nagu on näidatud tabelis 3, näitasid liitensüümide annuste skriinimistulemused, et papaiini (2.00 protsenti), tsellulaasi (2.00 protsenti) ja pektinaasi (00 protsenti) ekstraheerimiskiirus ja suhkrusisaldus {5}},40 protsenti) olid suurimad, seega kasutati 2. rühma ühendensüümi annust.

Tabel 2 Komposiitensüümide tüüpide sõelumistulemused

Tabel 3 Ühendi ensüümiannuse sõelumistulemused

2.1.3 Ekstraheerimismeetodi sõelumine

Cistanche deserticola polüsahhariidide ekstraheerimismeetodid ei kasuta mitte ainult komposiitensüümi koos ultraheliga, vaid hõlmavad ka sooja leotamist, vee keetmist ja ultraheli ilma komposiitensüümita [3,5-7]. Selles uuringus võrreldi komposiitensüümi kombineerituna ultraheli, sooja leotamise, vee keetmise ja ultraheliga ilma komposiitensüümita.

Võtke samal meetodil 10 g rasvatustatud Cistanche deserticola pulbrit ja lisage optimaalne kogus liitensüüme vastavalt sooja kastmise ja vee keetmise teel. Ärge lisage komposiitensüüme ultraheli abil ilma komposiitensüüme lisamata. Muud tingimused on järgmised: pärast ensümaatilist hüdrolüüsi on sooja leotamise temperatuur 54,1 kraadi C ja vee keetmise meetod pannakse elektriahju vee keetmiseks. Ekstraheerimine viiakse läbi ultraheli tingimustes ilma keerulisi ensüüme lisamata.

Katsetulemused näitasid, et Cistanche deserticola polüsahhariidide ekstraheerimiskiirus (12,91 protsenti) ja suhkrusisaldus (70,81 protsenti) ilma komposiitensüümi ultrahelimeetodita olid oluliselt kõrgemad kui soojal leotusmeetodil (7,26 protsenti) ja suhkrusisaldus (44,79 protsenti). ), samuti vee keemismeetodi ekstraheerimiskiirust (10,74 protsenti) ja suhkrusisaldust (66,33 protsenti). See näitab, et komposiitensüümita ultrahelimeetodi ekstraheerimise efektiivsus on kõrgem kui sooja leotamise ja veekeetmise meetodil. Cistanche deserticola polüsahhariidide ekstraheerimiskiirus ja suhkrusisaldus (vastavalt 27,79 protsenti ja 99,26 protsenti), kasutades komposiitensüümi koos ultrahelimeetodiga, on kõrgemad kui ilma liitensüümita. Seetõttu on komposiitensüümi ja ultrahelimeetodi kombinatsioon kasulik polüsahhariidide ekstraheerimiseks Cistanche deserticolast.

Cistanche deserticola peamised keemilised koostisosad

2.2 Ortogonaalse testi tulemused

Cistanche deserticola polüsahhariidide ekstraheerimise ortogonaalse katse tulemused on toodud tabelis 4.

2.3 Dispersioontulemuste analüüs

According to the factors and levels in Table 1, the orthogonal experimental results and mathematical statistics were obtained by using the combined enzyme ultrasound method according to Table 4. From the variance analysis results of the sugar content and extract rate of the polysaccharides extracted from Cistanche deserticola in Table 5 and Table 6, it can be seen that the difference in m (material): m (water), extraction time, and extraction times were not statistically significant (P>0.05). Seetõttu on vaja Cistanche deserticola polüsahhariidide ekstraheerimisprotsessi farmakoloogiliste näitajate põhjal täiendavalt sõeluda.

2.4 Farmakodünaamilised katsetulemused

Eksperimentaalsete loomade, nagu rottide või hiirte kasutamisel farmakodünaamilistes katsetes on puuduseks kõrged söötmiskulud, samas kui Drosophila eelisteks on lühikesed tsüklid ja väga madalad söötmiskulud, mida saab tõhusalt kasutada suure läbilaskevõimega ravimite sõelumiseks ja sihtmärkide leidmiseks. Seetõttu kasutatakse selles uuringus alkoholismi simuleeriva Drosophila mudeli loomiseks etanooli metabolismi peamist toksilist produkti atseetaldehüüdi. Optimaalne ekstraheerimisprotsess atseetaldehüüdiga mürgitatud äädikakärbeste ellujäämise parandamiseks valiti ortogonaalsest katsest Cistanche deserticola polüsahhariidide ekstraheerimiseks. .

Tabel 4 Cistanche deserticola polüsahhariidide ekstraheerimise ortogonaalsed katsetulemused

Z1~Z9 vastavad proovidele, mis on saadud 9 ortogonaalsest protsessist. K1, K2, K3 ja R (1) on pasta saagise arvutatud väärtused, samas kui k1, K2, k3 ja R (2) on suhkrusisalduse arvutatud väärtused.

Tabel 5 Suhkrusisalduse dispersiooni analüüs ortogonaalses katses polüsahhariidide ekstraheerimiseks Cistanche deserticolast

Tabel 6 Cistanche deserticola polüsahhariidide ekstraheerimiskiiruse dispersiooni analüüs ortogonaalsetes katsetes

2.4.1 Erinevate atseetaldehüüdi kontsentratsioonide sõelumine

Pärast mitmeid eksperimentaalseid võrdlusi, võrreldes teiste rühmadega (2 protsenti , 3 protsenti ja 5 protsenti ), näitas 4 protsenti atseetaldehüüdi rühm kõige aeglasemat suundumust suremuse kasvus aja jooksul ja 5 päeva pärast jõudis suremus 100 protsendini. Seetõttu määrati selles atseetaldehüüdi kontsentratsiooni määramise katses atseetaldehüüdi optimaalseks kontsentratsiooniks 4 protsenti.

2.4.2 Erinevate annustamiskontsentratsioonide sõelumine

Erinevate polüsahhariidide kontsentratsioonide määramisega ({0}}.000 5 protsenti , 0.001 protsent , {{10 }},002 protsenti) eksperimentaalse polüsahhariidiekstrakti puhul suri kontrollrühma Drosophila melanogaster iga 0,002-protsendilise polüsahhariidi kontsentratsiooni korral kiiresti, tõenäoliselt liigse polüsahhariidi kontsentratsiooni tõttu. Seetõttu vähendati polüsahhariidide kontsentratsiooni 0001 0 protsendini ja Drosophila melanogaster kontrollrühmas ei surnud. Seejärel vähendati polüsahhariidide kontsentratsiooni 0000 5 protsendini ja ravirühmas hukkus drosophila kiiresti, mis näitab, et ravikontsentratsioon ei olnud piisav atseetaldehüüdi toksilisuse tõhusaks ärahoidmiseks. Polüsahhariidide optimaalseks kontsentratsiooniks määrati lõpuks 0,001 protsenti.

2.4.3 Farmakodünaamilised katsetulemused

10 polüsahhariidi manustatavate rühmade ellujäämismäär oli 100 protsenti, mis näitab, et iga protsessi Cistanche deserticola polüsahhariidi proovi toksilisus oli kontsentratsioonis 0,001 protsenti väga madal. Tabeli 7 rühma Z5 ja 5-protsendilise sahharoosilahuse 1. rühma ellujäämismäärade erinevus on kõige olulisem, mis näitab, et rühmas Z5 saadud polüsahhariididel on kõige tugevam võime parandada atseetaldehüüdi mürgistusest põhjustatud äädikakärbeste elulemust. . Rühma Z5 vastav ekstraheerimisprotsess on ultraheli aeg 45 minutit, m (materjal): m (vesi)=1:25 ja ekstraheerimine toimub 3 korda.

Tabelis 7 toodud äädikakärbeste ellujäämismäärad Z1 ja Z2 rühmades on veidi kõrgemad kui 5-protsendilise sahharoosilahuse rühmas 1, mis näitab, et nendest kahest ekstraheerimisprotsessist saadud polüsahhariididel on ka teatav võime parandada kärbeste ellujäämise määra. atseetaldehüüdiga mürgitatud puuviljakärbsed; Puuviljakärbeste ellujäämise määras ei olnud olulist erinevust Z3 ja Z8 rühmade ning kahe rühma vahel, keda raviti 5-protsendilise sahharoosilahusega; Muude ekstraheerimisprotsesside käigus saadud polüsahhariidid ei suuda parandada atseetaldehüüdist mürgitatud äädikakärbeste ellujäämist. Z10 lahuserühm on traditsioonilisest veest ekstraheeritud polüsahhariid ja sellel ei ole võimet parandada atseetaldehüüdist mürgitatud äädikakärbeste ellujäämist.

Tabel 7 10 polüsahhariidi ja modelleeriva rühmaga töödeldud Drosophila melanogasteri ellujäämismäär

Kombineerides traditsioonilist ortogonaalset katsemeetodit Drosophila melanogasteri farmakodünaamika katsega, valiti Cistanche deserticola polüsahhariidi optimaalseks ekstraheerimisprotsessiks papaiin (200 protsenti), tsellulaas (2.00 protsenti), pektinaas (0,40 protsenti ), m (materjal): m (vesi)=1 ∶ 25, temperatuur 54,1 kraadi C, pH 5,2, ensümolüüs 2 tundi, ühekordne ekstraheerimisaeg 45 minutit, ekstraheerimisajad 3 korda .

3 Arutelu

Kuna Drosophila on liikuv organism, ei saa iga 12 tunni järel loendamine täpselt kindlaks määrata aega, mil 1. rühma 5-protsendilise sahharoosilahuse ellujäämismäär jõuab 50 protsendini. See võib olla ainult väärtuse lähedal ega saa olla täiesti järjepidev. Tabelis 7 viidi 5-protsendilise sahharoosilahuse rühma 1 ja 5-protsendilise sahharoosilahuse rühma 2 lõpule kahes katses, mille ellujäämismäär oli 50 protsendi lähedal. Seda seetõttu, et katsetingimustele vastavate äädikakärbeste arv on piiratud ja läbipääsuks tuleb jätta piisavalt äädikakärbest. Seetõttu jagati 10 polüsahhariidühendit lõpuleviimiseks kaheks katseks. Analüüsides polüsahhariidide ortogonaalset protsessitaset ja tegureid, leiti, et määravat rolli mängib ultraheli ekstraktsiooniaeg 45 minutit. Kui ekstraheerimisaeg on liiga lühike, ei ekstraheerita tõhusaid aineid täielikult ja need ei ole tõhusad; Kui ekstraheerimisaeg on liiga pikk ja polüsahhariidide pikk ahel on liigselt katkenud, võivad need kergesti muutuda monosahhariidideks või oligosahhariidideks, kuid mitte lühikese ahelaga polüsahhariidideks, mis on samuti ebaefektiivne.

Kõrbe ženšenn

Atseetaldehüüdiga mürgitatud Drosophila kasutamine mudelina ja atseetaldehüüdiga mürgitatud Drosophila ellujäämise määra parandamine farmakodünaamilise indikaatorina võib oluliselt parandada traditsioonilise Hiina meditsiini polüsahhariidide ekstraheerimisprotsessi asjakohasust ja teostatavust.Cistanche deserticola polüsahhariidide sõelumine ja ekstraheerimisprotsessi optimeerimine, mis võib märkimisväärselt parandada atseetaldehüüdiga mürgitatud Drosophila ellujäämise määra, annab teatud võrdlusolulisuse taimsete polüsahhariidide ekstraheerimisprotsesside sõelumisel ning loob aluse Cistanche deserticola polüsahhariidide väljatöötamisele ja kasutamisele.

viide

[1] Shield K, Manthey J, Rylett M jt. Alkoholitarbimisega seotud riiklik, piirkondlik ja ülemaailmne haiguskoormus aastatel 2000–2016: võrdlev riskihindamise uuring [J]. Journal of Lancet Public Health, 2020, 5(1): e51-e61.

[2] Birková A, Hubková B, Čižmárová B jt. Praegune vaade alkoholi vahendatud toksilisuse mehhanismidele [J]. International Journal of Molecular Sciences, 2021, 22(18): 9686.

[3]Lian Le, Gao Mingbo, Yin Xinxin jt Ultraheli ekstraheerimise protsessi tingimuste optimeerimine Cistanche deserticola polüsahhariidide jaoks [J] Guangzhou Chemical Industry, 2018, 46 (19): 61-62, 77

[4] Duan Dandan, Gao Li, Qin Xuemei jne Drosophila rakendamine farmakoloogilistes uuringutes [J]. Chinese Journal of Pharmacy, 2016, 51 (19): 1638-1642

[5] Gao Jiande, Liu Xiong, Zhu Xiaoyu jt Cistanche deserticola polüsahhariidide ekstraheerimisprotsessi ja kineetilise analüüsi optimeerimine komposiitensüümide abil [J] Journal of Gansu University of Traditional Chinese Medicine, 2017, 34 (5): { {4}}

[6] Wang Jia, Yang Wen, Wang Dong jt Cistanche perekonnast [J] Zhongnan Pharmacy pärit polüsahhariidide ekstraheerimise ja sisalduse määramise meetodite uurimise edenemine, 2019, 17 (7): 1055-1059

[7] Xiao Xinghui, Gao Haixia, Li Honghui jt. Desert Cistanche deserticola polüsahhariidide ekstraheerimise ja puhastamise protsessi optimeerimine [J]. Chinese Journal of Traditional Chinese Medicine, 2019, 44 (3): 475-481

[8] Liang Yongfeng, Li Jiahui, Cao Jiangping Uuring aprikoosiõitest polüsahhariidide ekstraheerimisprotsessi ja antioksüdantse toime kohta [J] Jiangsu Agricultural Science, 2018, 46 (7): 208-210

[9] Zhang Tao, Chen Qihang, Wei Haiqiu jt Solidago Canadiana polüsahhariidide ekstraheerimisprotsessi ja antioksüdantse aktiivsuse optimeerimine [J] Zhejiangi ookeaniülikooli ajakiri: loodusteaduste väljaanne, 2022, 41 (3): {{4} }

10] Tatum NS, Rebecca AM, Trudy FC jt. Suure läbilaskevõimega meetod individuaalse drosophila melanogasteri alkoholisedatsiooniaja mõõtmiseks [J]. Journal Visualized Experiments, 2020, 158(e61108): 1-8.

[11] Peter D, van Kerckvoorde V, Tim B jt. Muraka (rubus fruticosus) lenduvate ainete identifitseerimine drosophila su zukii atraktantidena[J]. Putukad, 2021, 12(5): 417.

[12] Yang Xiuyan, Xue Zhiyuan, Yang Yafei jt Uuring Astragalus membranaceuse polüsahhariidide ekstraheerimisprotsessi, füüsikalis-keemiliste omaduste ja antioksüdantse aktiivsuse kohta, kasutades komposiitensüüme kombineerituna ultraheliga [J] Chinese Journal of Traditional Chinese Medicine, 2018, 43 (11): 2261-2268