Võrgufarmakoloogia ja Tistanche-põhise ühendi eksperimentaalne valideerimine eesnäärme healoomulise hüperplaasia ravis PI3K/AKT raja modulatsiooni kaudu

Abstraktne

Eesmärk:
Et uuridaCistanche-põhiste ühendigraanulite ennetav ja terapeutiline toimesissehealoomuline eesnäärme hüperplaasia (BPH)ja selgitage läbi selle aluseks olevad mehhanismidvõrgu farmakoloogilised ennustusedkoosin vivo loomkatsed.

 

 

 

Cistanche-põhised taimsed pillid, mis sisaldavad kõrgeid toimeaineid

Ava tooteloend Hankige rohkem üksikasju

---

 

 

 

Meetodid:
(1) Aktiivsed koostisosadkohtaCistanche deserticolaja teisi toetavaid ravimtaimi sõeluti läbiTCMSP andmebaas, mida täiendab kirjanduse kaevandamine. Nende fütokemikaalide sihtmärgid ennustati kasutadesPubChem, Šveitsi sihtmärgi ennustusjaVõrdlev toksikogenoomika andmebaas (CTD). BPH-ga seotud sihtmärgid kogutiGeneCards, CTD, DrugBankjaDisGeNET. Ristmike analüüs tuvastatud125 potentsiaalset terapeutilist sihtmärkiCistanche ravis BPH. Avalgu-valgu interaktsiooni (PPI) võrgustikehitati kasutadesSTRINGjaGO ja KEGG raja rikastamise analüüsidviidi läbiMetamaastik. Põhjalik"ürdiühendite sihtmärk-rada" võrgustikvisualiseeriti kasutadesCytoscapeja peamised eesmärgid kinnitati läbimolekulaarne dokkiminekasutadesAutoDock Vina.

(2) Kuuskümmend isasrotti jagati juhuslikult kuue rühma: kontroll, mudel, positiivne kontroll (Qianlie ShutongKapslid, 0,324 g/kg) ja kolm annustamisrühmaCistanche ühendi graanulid(kõrge: 3,24 g/kg, keskmine: 1,62 g/kg, madal: 0,81 g/kg). BPH indutseeritikastreerimine ja testosterooni propionaadi süstimine. Rotid said suukaudset ravi iga päev 30 päeva jooksul. Arvutati eesnäärme märgkaal ja indeks. Seerumi tasemedCOX-2, VEGFjaPGE2mõõdeti ELISA abil.Histopatoloogilised muutusedtäheldati HE värvimisega javalgu ekspressioonkohtaAKT1, p-AKT1, PI3K, p-PI3K, COX-2jaVEGFhinnati Western blot abil.

 

Tulemused:
(1) Kokku260 liitsihtmärki, 1584 BPH-ga seotud sihtmärkija125 kattuvat terapeutilist sihtmärkituvastati. Kaasatud peamised eesmärgidAKT1, TNF, TP53, IL1, EGFR, CASP3jaPTGS2. Rikastamise analüüsid näitasid, etIL-17, HIF-1, TNFjaPI3K-AKT signalisatsiooniteedmängida kriitilisi rolle. Põhilised toimeained naguluteoliin, apigeniin, jahubanaani glükosiidid, mangiferiinjaisoviteksiininäitasid tugevat sidumisafiinsust sihtmärkidega naguAKT1, PTGS2, CASP3jaIL6, sidumisenergiaga Vähem kui –6 kcal/mol või sellega võrdne.

(2) In vivo tulemused näitasid sedaCistanche graanulid vähendasid oluliselt eesnäärme kaalu ja indeksit(P < 0,05 või P < 0,01), täiustatudnäärmete struktuurja leevendatudepiteeli hüperplaasia. Seerumi tasemedCOX-2, PGE2jaVEGFolid oluliselt langetatud. Väljendp-AKT1, p-PI3K, COX-2jaVEGFeesnäärmekoes oli oluliselt allareguleeritud (P <0,05 või P <0,01).

Järeldus:
See uuring annab esialgseid tõendeid selle kohtaCistanche-põhine taimne ravipingutabBPH ennetav ja terapeutiline toime, peamiselt modulatsiooni kauduPI3K/AKT signaalirada, pärssimineCOX-2 ja PGE2, ja allasurumineVEGF-vahendatud eesnäärme rakkude proliferatsioon. Peamised bioaktiivsed komponendid nagujahubanaani glükosiidid, mangiferiinjaluteoliinvõivad olla peamised farmakoloogilised ained. Need leiud toetavad potentsiaaliCistanche ekstraktkui alooduslik vahend eesnäärme tervise jaoks.

 

 

Märksõnad:

Cistanche deserticola; Cistanche ekstrakt; eesnäärme healoomuline hüperplaasia (BPH); võrgufarmakoloogia; PI3K/AKT rada; VEGF; COX-2; PGE2; eesnäärme põletik; looduslik eesnäärme ravim; taimne ravi BPH jaoks; traditsiooniline hiina meditsiin; fütoteraapia; molekulaarne dokkimine; roti mudel

Taust

Healoomuline eesnäärme hüperplaasia (BPH)on keskealiste ja eakate meeste tavaline uroloogiline häire. Varajases staadiumis iseloomustab BPH-d urineerimissagedus, kiireloomulisus, kõhklus ja mittetäielik urineerimine. Haiguse progresseerumisel võivad tekkida raskemad sümptomid, nagu hematuria, valulik urineerimine, põiekivid ja isegi neerufunktsiooni häired [1–2]. Uuringud [3] on näidanud, et BPH esinemissagedus suureneb koos vanusega, mõjutades üle 50% üle 50-aastastest meestest, halvendades seega oluliselt elukvaliteeti.

Praegused BPH-ravid hõlmavad peamiseltravimid ja kirurgilised sekkumised, mis võib viiakõrvaltoimed, tüsistused ja pikaajalised tagajärjed[4–7]. SeetõttuTraditsiooniline hiina meditsiin (TCM)ravimvormid, mis onkliiniliselt efektiivne vähemate kõrvaltoimetegaon pälvinud üha suuremat tähelepanu BPH alternatiivsete ravimeetoditena.

Cistanche-põhised taimsed graanulidon näidanud põletikuvastast, diureetilist ja kudesid kaitsvat toimet kuseteede haiguste korral. Varasemad uuringud [9–10] on näidanud, et ravimtaimede retseptid põhinevad peamiseltCistanche deserticolapingutamakaitsev toimeBPH vastu loommudelites. Meie rühma esialgsed uuringud [11] näitavad, et see valem võib vähendada eesnäärme põletikkupõletikuliste vahendajate pärssiminenagu näiteksCOX-2, PGE2, IL-6jaTNF-. Alatesprostatiit on sageli kaasuv haigus, mis süvendab BPH-d, selle uuringu eesmärk on hinnatatoimemehhanism ja terapeutiline potentsiaalaCistanche-põhine ühendkasutadesvõrgufarmakoloogia ja in vivo valideerimineBPH rotimudelis.

Wecistanche'i tugiteenus – hulgihinna saamiseks võtke meiega ühendust
E-post:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel:+86 15292862950

 

1. Materjalid ja meetodid

1.1 Katseloomad

Guangxi meditsiiniülikooli laboriloomade keskus (litsents: SCXK [Gui] 2020-0003) andis kokku 70 SPF-klassi isast SD-rotti (180–220 g). Loomade protokollid kiitis heaks institutsionaalne loomade eetikakomitee (kinnitusnumber: GXBGMP20220602). Rotte hoiti standardtingimustes kontrollitud temperatuuri (23 ± 2 kraadi), niiskuse (60 ± 5%) ja 12-tunnise valguse/pimeduse tsükliga.

1.2 Ravimid ja reaktiivid

Cistanche ühendi graanulid (proovivorm)

Positiivne kontroll: Qianlie Shutongi kapslid (0,324 g/kg)

Testosterooni propionaadi süstimine (15 mg/kg)

ELISA komplektid COX-2, PGE2, VEGF jaoks

Antikehad: anti-AKT1, p-AKT1, PI3K, p-PI3K, COX-2, VEGF, GAPDH

Western blot reaktiivid, SDS-PAGE geelid ja pildisüsteemid

Kõik reaktiivid osteti usaldusväärsetelt kodumaistelt ja rahvusvahelistelt tarnijatelt

1.3 Varustus

Analüütiline kaal (0,0001 g täpsusega)

Pööratud bioloogiline mikroskoop (Olympus IX73)

Mikroplaadi lugeja (Tecan M200)

Western blot süsteem (Bio-Rad)

Pildindusjaam (GE Imager 680)

1.4 Cistanche aktiivsete ühendite sihtmärgi ennustus

Aktiivsed koostisosadCistanche deserticolaja muud täiendavad maitsetaimed saadi allaTCMSP andmebaas, filtreeritudsuukaudne biosaadavus (OB suurem või võrdne 30%)jaravimisarnasus (DL suurem kui 0,18 või sellega võrdne). Kaasati ka kirjanduses kinnitatud bioaktiivsed ühendid, mis ei vastanud nendele künnistele. Oletatavad sihtmärgid ennustati läbiPubChem, SwissTargetPredictionjaCTD, kasutades filtreid kõrge GI neeldumise ja soodsate ADME omaduste saavutamiseks.

1.5 BPH-ga seotud sihtmärkide tuvastamine

"BPH" otsiti mitmest andmebaasist, sealhulgasDisGeNET, CTD, GeneCardsjaDrugBankhaigustega seotud sihtmärkide kogumiseks. Säilitati ainult need sihtmärgid, mille asjakohasuse skoor ületas mediaani, ja duplikaadid eemaldati, et saada kõrge usaldusväärsusega BPH sihtmärk.

1.6 Võimalike terapeutiliste sihtmärkide ristumise analüüs

Ristumise teelCistanche ühendi sihtmärgidkoos tuntudBPH-ga seotud geenid, tuvastasime potentsiaaliBPH-vastased terapeutilised sihtmärgid, visualiseeritud kauduVenni diagrammidkasutades R-tarkvara.

1.7 Protein-Protein Interaction (PPI) võrgu loomine

Potentsiaalsed sihtmärgid laaditi ülesSTRING v11.5andmebaasi PPI võrgu loomiseks. Visualiseerimine ja topoloogiline analüüs (kraadikesksus) viidi läbi kasutadesCytoscape 3.9.1.

1.8 GO ja KEGG rikastamise analüüs

Rikastamise analüüsid jaoksGeeniontoloogia (GO)funktsioonid jaKEGG rajadviidi läbi kasutadesMetamaastik, mille tähendus on määratud aadressilP < 0,01.

1.9 "Maitsetaime-ühendi-sihttee" võrgu ehitamine

BPH jaoks olulised võtmeteed valiti KEGG rikastamise tulemuste hulgast. Amitmekihiline võrkCytoscape'is konstrueeriti ürte, aktiivseid ühendeid, sihtmärke ja radu ühendav materjal ning võtmesõlmi analüüsitiVõrguanalüsaatorplugin.

1.10 Molekulaarse dokkimise kontrollimine

Kuus põhilist sihtvalku (PTGS2, AR, CASP3, IL6, PTGS1, AKT1) ja tipptasemel ühendid (luteoliin, apigeniin, isoviteksiin, mangiferiin, jahubanaani glükosiidid) valitimolekulaarne dokkimine. Valgu kristallstruktuurid laaditi alla saidiltRCSB valgu andmepank(https://www.rcsb.org) ja dokkimine viidi läbi kasutadesAutoDock Vina. Sidumisenergiad visualiseeriti ja analüüsiti kasutadesPyMOL.

1.11 Loomade mudel ja rühmitamine

Pärast 7-päevast aklimatiseerumist jagati 60 isasrotti juhuslikult 6 rühma (n=10): kontroll-, mudel-, positiivne kontroll- ja madala, keskmise ja suure annusega rotti.Tsistanche liitrühmad(0,81, 1,62, 3,24 g/kg). BPH indutseeriti kauduorhiektoomiajärgnebtestosterooni propionaadi süstid(15 mg/kg) 28 päeva jooksul. Ravimi manustamine algas 29. päeval ja jätkus 30 päeva.

1.12 Näidiste kogumine

Pärast viimast ravi rotid tuimastati ja kõhuaordist koguti veri. Eesnäärmed lõigati lahti, kaaluti jaeesnäärme indeks (mg/g)arvutati. Proove säilitati analüüsiks –80 kraadi juures.

1.13 ELISA seerumi põletikumarkerite jaoks

Seerumi tasemedCOX-2, PGE2jaVEGFmäärati ELISA komplektide abil vastavalt tootja juhistele.

1.14 Histoloogiline analüüs (H&E värvimine)

Eesnäärme kuded fikseeriti, manustati parafiiniga, lõigati ja värvitihematoksüliin ja eosiin (H&E). Patoloogilisi muutusi täheldati valgusmikroskoopia all.

1.15 Western Blotting

Valgu ekspressioonitasemedAKT1, p-AKT1, PI3K, p-PI3K, COX-2jaVEGFanalüüsisidWestern blot. Riba intensiivsus kvantifitseeriti kasutadesPiltJ, koosGAPDHsisekontrollina.

1.16 Statistiline analüüs

Andmeid analüüsiti kasutadesSPSS 22.0. Tulemused on esitatud kujulkeskmine ± SD. Ühesuunaline ANOVA jaLSD-t testkasutati rühmade võrdlemiseks koosP < 0,05peetakse statistiliselt oluliseks.