Bakuchioli mitmesuunaline toime näo vananemise rakuliste mehhanismide vastu – eksperimentaalsed tõendid tervikliku ravimeetodi kohta, 1. osa

Abstraktne

Eesmärk: Naha vananemine on mitmefaktoriline protsess, mis hõlmab reaktiivsete hapnikuühendite moodustumist, järjestikust põletikku koos epidermise ja dermaalsete rakkude elujõulisuse vähenemisega ning sellest tuleneva rakuvälise maatriksi kahjustusega. Tõhusad dermokosmeetilised raviviisid peaksid ideaaljuhul käsitlema neid tunnuseid tervikliku lähenemisviisi abil. Siin määrasime bakuchioli, taimse päritoluga meroterpeeni, vastava aktiivsusprofiili paljudes in vitro, ex vivo ja in vivo uuringutes ning võrdlesime seda retinooliga, mida peetakse praegu paikse vananemisvastase kosmeetika kuldstandardiks.

Tistanche glükosiid võib samuti suurendada SOD aktiivsust südame- ja maksakudedes ning oluliselt vähendada lipofustsiini ja MDA sisaldust igas koes, eemaldades tõhusalt erinevaid reaktiivseid hapnikuradikaale (OH-, H2O₂ jne) ja kaitstes tekitatud DNA kahjustuste eest. OH-radikaalide poolt. Tsistanche fenüületanoidglükosiididel on tugev vabade radikaalide eemaldamisvõime, suurem redutseerimisvõime kui C-vitamiinil, nad parandavad SOD aktiivsust sperma suspensioonis, vähendavad MDA sisaldust ja omavad teatud kaitset sperma membraani funktsioonile. Tsistanche polüsahhariidid võivad suurendada SOD ja GSH-Px aktiivsust D-galaktoosi poolt põhjustatud eksperimentaalselt vananevate hiirte erütrotsüütides ja kopsukudedes, samuti vähendada MDA ja kollageeni sisaldust kopsudes ja plasmas ning suurendada elastiini sisaldust. hea puhastav toime DPPH-le, pikendab hüpoksia aega vananevatel hiirtel, parandab SOD aktiivsust seerumis ja aeglustab eksperimentaalselt vananevatel hiirtel kopsude füsioloogilist degeneratsiooni Raku morfoloogilise degeneratsiooniga on katsed näidanud, et Cistanche'il on hea antioksüdantne võime ja sellel on potentsiaal olla ravim naha vananemishaiguste ennetamiseks ja raviks. Samal ajal on Cistanche ehhinakosiidil märkimisväärne võime eemaldada DPPH vabu radikaale ja eemaldada reaktiivseid hapniku liike, takistada vabade radikaalide poolt indutseeritud kollageeni lagunemist ning samuti on sellel hea parandav toime tümiini vabade radikaalide anioonide kahjustustele.

Klõpsake valikul Antioksüdant Cistanche Tubulosa

【Lisateabe saamiseks:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

meetodid: Bakuchiooli ja retinooli antioksüdatiivset võimet ja võimsust analüüsiti, mõõtes vastavalt 2,2'-difenüül-1-pikrüülhüdrasüüli (DPPH) redutseerimist selle neeldumislagunemise ja elektronide spin-resonantsspektroskoopia abil. Mõju prostaglandiin E2 (PGE2), makrofaagide migratsiooni inhibeerivale faktorile (MIF), fibroblastide kasvufaktorile 7 (FGF7), I ja VII tüüpi kollageenile (COL1A1, COL7A1), fibronektiini (FN) tasemele ning vees lahustuva tetrasooliumi metabolismile 1 (WST-1) määrati inimese dermaalsetes fibroblastides. Epidermise regeneratsiooni hinnati in vitro haavade paranemise mudeli abil. FN valgu taset analüüsiti ex vivo pärast töötlemist bakuchiooli, retinooli või vehiikulit sisaldava preparaadiga, kasutades imemismullvedelikku. Naha seisundi paranemine määrati in vivo lõhestatud näo võrdlusuuringus pärast bakuchioli või kandja manustamist.

Tulemused: Erinevalt retinoolist näitas bakuchiol kõrget antioksüdatiivset efektiivsust. PGE2 ja MIF taset vähendasid oluliselt nii bakuchiol kui ka retinool. Bakuchiol, kuid mitte retinool, suurendas oluliselt FGF7 valgu taset. WST-1 metabolismi taset suurendasid oluliselt bakuchiol ja retinool. Bakuchiooli ja retinooli kasutamine tõi kaasa COL1A1, COL7A1 ja FN valgu taseme olulise suurenemise. Bakuchiooliga, kuid mitte retinooliga täiendatud haavad suurendasid oluliselt epidermise taastumist. Kliiniliselt näitasid bakuchiooli sisaldava preparaadiga töödeldud alad FN valgu väärtuste statistiliselt olulist suurenemist pärast 4-nädalast manustamist võrreldes töötlemata alade ja kandjaga töödeldud aladega.

Järeldus: Need andmed tõendavad bakuchiooli mitmesuunalist efektiivsust naha vananemise rakuliste tunnuste vastu. Selle aktiivsusprofiilil on mõned ühised tunnused retinooliga, kuid see näitab meie uuringutes mitmeid seni teadmata positiivseid mõjusid, nimelt kriitilise rakuvälise maatriksi komponendi FN stimuleerimist ning epidermise kiirendatud regeneratsiooni ja haavade paranemist.

MÄRKSÕNAD

vananemisvastane, bakuchiol, väite põhjendus in vivo/ex vivo/in vitro, retinool, naha füsioloogia/struktuurid

SISSEJUHATUS

Vananenud nahka iseloomustavad kortsud, ebaühtlane pigmentatsioon, naha karedus ja lõtvus. Need kliinilised nähud on sisemise ja välise vananemise protsesside põhjustatud struktuursete ja metaboolsete muutuste tulemus. Sisemist vananemist on seostatud selliste teguritega nagu telomeeride lühenemine, krooniline põletik, mitokondriaalse DNA üksikud mutatsioonid ja vabad radikaalid [1]. Vananenud nahk hõlmab ka selle antioksüdatiivsete süsteemide vähenemist[2]. Samuti väheneb rakkude proliferatsiooni kiirus bioloogilise vananemisprotsessi tõttu, mis viib naha struktuuri ja funktsioonide kadumiseni. Väline vananemine on peamiselt tingitud UV-kiirgusest ja keskkonnamõjudest. Need solvangud põhjustavad nahakahjustusi, mis tugevdavad kronoloogilist langust ja kiirendavad naha vananemist. Inimese nahk kaotab vananemise ajal veelgi võime toime tulla põletikuliste seisunditega, mille tulemuseks on krooniline põletikuvastane seisund.

Retinoidide, nagu retinoehape, võrkkesta või retinool, paikset manustamist peetakse tõhusa vananemisvastase ravi kliiniliseks kuldstandardiks [3, 4]. Retinoidide molekulaarseid mehhanisme on põhjalikult kirjeldatud [5–10]. Paikselt manustatavad retinoidid vähendavad tõhusalt nähtavaid vananemise märke, nagu kortsud, lõtvus või karedus [4, 11] ja vähendavad fotokahjustatud naha depigmentatsiooni, sealhulgas livedo reticularis ja aktiinilised lentigines [12]. Paikne ravi retinoididega võib aga põhjustada kontsentratsioonist sõltuvat naha kuivust ja ärritust [13]. Kuna retinooli kasutamine põhjustab väiksemaid kõrvaltoimeid võrreldes teiste retinoididega, nagu retinoehape [6, 14], on seda laialdaselt kasutatav toimeaine näo vananemise kosmeetilises ravis.

Erinevalt retinoolist, mida on nahahooldustoodetes kasutatud alates 1984. aastast [15], on bakuchiol alles hiljuti pälvinud tähelepanu paikse vananemisvastase ühendina. Bakuchiol on meroterpeen (joonis 1), mis on saadud Psoralea corylifolia seemnetest. Seda on traditsioonilises India ja Hiina meditsiinis kasutatud sajandeid [16, 17] ja see on hästi talutav [18]. Arvati, et Bakuchiolil on retinoolisarnased funktsioonid, kuna nahaasendusmudelis on mõlemal ainel sarnased geeniekspressioonimustrid in vitro [19] ja naha fotokahjustuste paranemine in vivo [20]. Seetõttu on seda nimetatud ka taimse päritoluga funktsionaalseks retinoidi analoogiks [21]. Edasised uuringud näitasid bakuchiooli antioksüdantset [19, 22–24], põletikuvastast [19, 25–27], antibakteriaalset [28], samuti antiproliferatiivset ja kasvajavastast toimet [29, 30].

Mitmefaktoriliste naha vananemisprotsesside tõhusaks leevendamiseks ja edasilükkamiseks tuleb integreeritud lähenemisviisis käsitleda erinevaid rakulisi mehhanisme. Bakuchiol moduleerib samaaegselt erinevaid sihtmärke, muutes selle selles osas paljutõotavaks ühendiks. Kuna oksüdatiivsed ja põletikulised stressid on tihedalt seotud naha vananemisega, võib nende vältimine bakuchiooliga soodustada üldist naha seisundit. Praeguste teaduslike tõendite kvaliteeti on aga hiljuti kriitiliselt hinnatud [31]. Selles kontekstis määrasime bakuchiooli ja retinooli (i) antioksüdatiivse ja (ii) põletikuvastase toime ning uurisime nende võimet parandada raku metabolismi ja kasvufaktori 7 sünteesi, mis on kokku võetud kui (iii) raku aktiivsus. Lisaks analüüsisime, kas bakuchiol ja retinool mõjutavad teatud (iv) ECM-i komponentide ekspressiooni ja parandavad (v) epidermise regeneratsiooni ja uuesti epiteliseerimist. Lõpuks viidi läbi in vivo uuring, et kontrollida bakuchiooli kliinilist vananemisvastast võimet inimese nahas.

MATERJALID JA MEETODID

Katsematerjalid

Bakuchiol saadi ettevõttelt Sytheon Ltd (Boonton, New Jersey, Ameerika Ühendriigid). Retinool osteti firmalt Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, Ameerika Ühendriigid). Rakukultuuri katsete jaoks lahjendati mõlemad testitavad ained värskelt DMSO-s (Merck, Darmstadt, Saksamaa). DMSO põhilahuste puhul oli uuritavate ainete kontsentratsioon 1000- korda kõrgem kõrgeimast rakukultuuris kasutatud kontsentratsioonist, andes söötmes või puhvris 0,1 protsenti DMSO-d. Edasised lahjendused viidi läbi söötme või puhvriga 0,1 protsendi DMSO-ga. Seega viidi kõik rakukultuuri katsed läbi 0,1 protsendi DMSO juuresolekul. In vivo uuringute jaoks valmistati paikselt manustatav retinool samas vehiikulis nagu bakuchiol.

In vitro uuringud

Antioksüdatiivse võime määramine

Bakuchiol, retinool (mõlemat kasutati lõppkontsentratsiooniga 100 μM) või kõrge standardne trolox (Merck, lõppkontsentratsioon 25 μM) lahjendati DMSO-s. Lühidalt, 30 μL neid ühendeid (10- korda kõrgem kontsentratsioon kui lõplik testimiskontsentratsioon) lisati 96-kaevu tasasele põhjaplaadile. Seejärel lisati igasse süvendisse kiiresti 270 µl 39 ug/ml DPPH-d (Merck, lahjendatud 1:1 vee/etanooli segus), saades lõppkontsentratsiooniks 10 protsenti DMSO-d. Kontrollina inkubeeriti DPPH lahust DMSO-ga, mis ei sisaldanud testaineid. Lisaks viidi läbi pimekatsed, inkubeerides bakuchiooli või retinooli vee/etanooliga (1:1) või ainult vee/etanooli (1:1) seguga, mis sisaldas 10 protsenti DMSO-d DPPH puudumisel. 10, 30 ja 60 minuti pärast mõõdeti neeldumist lainepikkusel 524 nm, kasutades Spark multimode mikroplaadilugejat (Tecan, Männedorf, Šveits). Tühjade kontrollide signaalid lahutati.

Antioksüdatiivse toime määramine

HDF-id külvati {{0}}süvendiplaatidele koos 150 000 rakuga süvendi kohta 2 ml söötmes, mis sisaldas 10 protsenti vasikaseerumit, ja inkubeeriti 24 tundi. Seejärel visati vana sööde ära ja rakke töödeldi söötmega, mis sisaldas 2 protsenti vasika seerumit ja bakuchiooli või retinooli lõppkontsentratsioonis 10 µM. Kontroll-HDF-idele lisati 0,1 protsenti DMSO-d, millel puudus bakuchiol või retinool. Tühjad kontrollid viidi läbi rakkudeta söötme inkubeerimisega. 24 tunni pärast viidi konditsioneeritud sööde Vivaspin valgu kontsentraatori tsentrifuugimiskolonnidesse (5000 MWCO; Sartorius, Göttingen, Saksamaa) ja kontsentreeriti ligikaudu 10- korda. Kõigi söötme supernatantide mahud võrdsustati läbivoolu uuesti lisamisega. Kontsentreeritud konditsioneeritud söötme FGF7 valgu tasemeid analüüsiti, kasutades kaubanduslikult saadavat ELISA komplekti, järgides tootja juhiseid (Bio-Techne GmbH). Mõõtmised viidi läbi Spark multimode mikroplaadilugeja (Tecan) abil. Tühikontrollidest saadud signaalid lahutati ja FGF7 valgu tasemed normaliseeriti rakkude koguarvule, mis määrati rakuloenduriga (Scepter, Merck).

WST{0}} metabolisatsiooni määramine

HDF-id külvati {{0}}süvendiga plaatidele 3000 rakuga süvendi kohta 100 µl söötmes, mis sisaldas 10 protsenti vasikaseerumit, ja inkubeeriti 24 tundi. Tühjendatud sööde visati ära ja rakke töödeldi 100 μl söötmega, mis sisaldas retinooli või bakuchiooli lõppkontsentratsioonis vastavalt 1 μM või 10 μM. Kontroll-HDF-idele lisati 0,1 protsenti DMSO-d, millel puudus bakuchiol või retinool. Täiendava kontrollina töödeldi rakke 10% triton-X-ga (Merck). Tühjad kontrollid viidi läbi rakkudeta söötme inkubeerimisega. 72 tunni pärast värviti rakud, kasutades kaubanduslikult saadavat rakuproliferatsioonireagenti WST-1 vastavalt tootja juhistele (Merck). Neeldumist mõõdeti 450 ja 620 nm juures, kasutades mikroplaadilugejat Tecan Infinity M200 (Tecan). Analüüsiks kasutati nende mõõtmiste erinevust. Tühjade kontrollide signaalid lahutati.

COL1A1 ja COL7A1 valgu taseme määramine

HDF-id külvati {{0}}süvendiplaatidele, kus oli 10  000 rakku süvendi kohta 100 µl söötmes, mis sisaldas 10 protsenti vasikaseerumit, ja inkubeeriti 24 tundi. Bakuchiol või retinool lahjendati 100 μL söötmes ilma vasika seerumita ja lisati käesolevale söötmele lõppkontsentratsioonis vastavalt 1 μM või 10 μM. Kontrolli täiendati 100 µl seerumivaba söötmega, mille kontsentratsioon oli 0,1 protsenti DMSO-st, mis vastab retinooli ja bakuchiooli töötlemisele. Kõrge standardina kasutati 10 ng/ml transformeerivat kasvufaktorit (TGF-) ja 11 ug/ml naatriumaskorbaati (mõlemad Merck). Tühjad kontrollid viidi läbi rakkudeta söötme inkubeerimisega. 4 tunni pärast analüüsiti konditsioneeritud söötme COL1A1 ja COL7A1 valgu tasemeid, kasutades kaubanduslikult saadavaid ELISA komplekte, järgides tootja juhiseid (Novus Biologicals, Littleton, Colorado, Ameerika Ühendriigid). Mõõtmised viidi läbi Spark multimode mikroplaadilugeja (Tecan) abil. Tühjade kontrollide signaalid lahutati. COL1A1 ja COL7A1 valgu tasemed normaliseeriti rakulüsaadi valgu koguhulgale, mis määrati vastavalt tootja juhistele kaubanduslikult saadava bitsinhoniinhappe analüüsikomplekti (Thermo Fisher Scientific) abil. Tulemuste kasutamise eelduseks oli rakkude positiivne reaktsioon kõrgetasemelisele TGF- ja naatriumaskorbaadile.

COL7A1 valgu taseme analüüsimiseks pärast pikemat inkubatsiooniaega külvati HDF-id 96-süvendiga plaatidele 3000 rakuga süvendi kohta 100 µl söötmes, mis sisaldas 10 protsenti vasika seerumit. Kõik töötlused, kontrollid ja analüüs viidi läbi ülalkirjeldatud viisil, välja arvatud see, et bakuchiooli ja retinooli kasutati ainult lõppkontsentratsioonis 10 μM. Rakud koguti subkonfluentsi saavutamisel, eriti 72 või 96 tunni pärast.

FN valgu taseme määramine

HDF-id külvati {{0}}süvendiga plaatidele 10 000 rakuga süvendi kohta 100 µl söötmes, mis sisaldas 10 protsenti vasikaseerumit, ja inkubeeriti 24 tundi. Vana sööde asendati söötmega, mis sisaldas 2 protsenti vasika seerumit ja bakuchiooli või retinooli lõppkontsentratsioonis 10 μM. Kontrollile lisati 0,1 protsenti DMSO-d, millel puudus bakuchiol või retinool. Tühjad kontrollid viidi läbi rakkudeta söötme inkubeerimisega. 24 tunni pärast analüüsiti konditsioneeritud söötme FN-valgu tasemeid, kasutades kaubanduslikult saadavat ELISA komplekti, järgides tootja juhiseid (R&D Systems, Minneapolis, Minnesota, Ameerika Ühendriigid). Mõõtmised viidi läbi Spark multimode mikroplaadilugeja (Tecan) abil. Tühjade kontrollide signaalid lahutati. FN-valgu tasemed normaliseeriti rakulüsaadi valgu koguhulgaga, mis määrati ülalmainitud viisil.

Epidermise regeneratsiooni määramine in vitro haavade paranemise mudelis

Katsed viidi läbi nagu eelnevalt kirjeldatud [34]. Haavaparanemismudelite raviks lahjendati bakuchiool või retinool DPBS-is ja lisati haavapiirkonda lõppkontsentratsioonis 100 μM (5 μL haava kohta). Võrdlushaavadele lisati sama kogus DPBS-i, mis sisaldas 0,1 protsenti DMSO-d ilma bakuchiooli või retinoolita. Täiendavad haavad jäeti täiendava kontrollina ravimata. Haava paranemise mudeleid inkubeeriti 43 tundi 95% niiskuse, 5% CO2 ja 37 kraadi juures. Seejärel külmutati proovid isopentaanis, mis oli eeljahutatud vedela lämmastikuga, ja säilitati temperatuuril -80 kraadi. Re-epiteliseerumist hinnati hematoksüliini ja eosiiniga värvitud krüostaadi sektsioonides, mõõtes regenereeritud epidermise pikkust, kasutades Leica DMLS mikroskoopi (10×), Leica MC 170 HD CCD kaamerat ja Leica LAS V4.9 tarkvara (Leica Microsystems, Wetzlar, Saksamaa). Kvantifitseerimine viidi läbi pimesi.

In vivo uuringud I ja II

Mõlema in vivo uuringute puhul peeti kosmeetilise uuringu puhul kohaldatavaks Helsingi deklaratsiooni praeguse versiooni soovitusi ja hea kliinilise tava harmoniseerimise rahvusvahelise konverentsi suuniseid. Uuringu I protokolli kiitis heaks Freiburgi sõltumatu eetikakomitee (feki kood 08/2610). Mõlemas uuringus andsid kõik vabatahtlikud kirjaliku ja teadliku nõusoleku. Katsealustel oli terve nahk, nad kuulusid Fitzpatricku nahatüüpi I kuni III ja hormonaalsete ravimite alustamine või muutmine oli välistamiskriteeriumiks.

10-päevase eelkonditsioneerimisperioodi jooksul ja kogu uuringuperioodi vältel pidid katsealused hoiduma katsepiirkondades UV-kiirgusega kokkupuutest. Higistamist soodustavad tegevused olid 24 tundi enne plaanitud hindamist keelatud.

Uurija näitas ravimvormide õiget kasutamist, kasutades kogust, mis vastas katsealuste tavapärasele nahahooldusrežiimile.

Uuring I: FN-valgu tasemete ex vivo määramine

Sellesse vehiikuliga kontrollitud uuringusse kaasatud 52 naissoost isikust lõpetas uuringu 33 isikut ja 31 isiku (30–64 aastat, keskmine vanus: 50,9 aastat) andmed kaasati andmete analüüsi. Väljalangemised toimusid SARS-CoV-2 pandeemia ja isiklike põhjuste tõttu (13 isikut), samuti kokkusobimatuse reaktsioonide tõttu (viis isikut, põhjustatud retinoolravist). Retinooli poolt vahendatud kokkusobimatuse reaktsioonid ja proovivõtuprobleemid põhjustasid iga seisundi puhul erineva arvu katsealuste (üksikasju vt tulemuste kohta).

Seitse päeva enne planeeritud hindamist keelati nahahooldustoodete, puhastusvahendite ja seepide kasutamine käsivartel. Esimesel õppepäeval rajati küünarvarre sisekülgedele neli katseala. Kahel katsepiirkonnal kasutati kahte verumpreparaati, mis sisaldasid vastavalt {{0}},5 protsenti bakuchiooli või 0,15 protsenti retinooli. Tarbijaohutuse teaduskomitee 2016. aastal avaldatud arvamuses peeti kasutatavat retinooli kontsentratsiooni kosmeetiliseks raviks [35]. Ülejäänud kahes katsepiirkonnas kasutati vastavat vehiiklit või jäeti ala töötlemata. Ravikohtade asetust muudeti. Pärast 4-nädalast katsepreparaatide kasutamist kaks korda päevas pöördusid vabatahtlikud tagasi katseinstituuti. Igas katsepiirkonnas tekkis kolm imemisblistrit (läbimõõt 7 mm), nagu eelnevalt kirjeldatud [36, 37]. Lühidalt, testitavatele aladele pandi eritellimusel valmistatud imemisega blistertopsid ja rakendati 550–850 mbar vaakumit. Umbes 90–150 minuti pärast, kui imemisvillid olid tekkinud, vabastati vaakum ja vedelik aspireeriti blistrist 24-mõõturnõelaga. Vedelikud külmutati kohe -80 kraadi juures kuival jääl kuni analüüsimiseni. FN valgu tasemed kvantifitseeriti imemise blistervedeliku proovides, kasutades kaubanduslikult saadavat ELISA komplekti (R&D Systems). Mõõtmised viidi läbi Spark multimode mikroplaadilugeja (Tecan) abil. FN tasemed normaliseeriti imemismullide vedeliku proovide valgu kogusisaldusele, mis määrati ülalmainitud viisil.

Uuring II: Naha seisundi paranemise in vivo määramine

Kokku osales selles sõidukiga kontrollitud näo jagamise võrdlusuuringus 43 naissoost vabatahtlikku. Meditsiiniliste hinnangute kohaselt olid katsealustel seganahatüübid (kuiv, normaalne, rasune ja kombineeritud nahk). 34 katsealust (39–66 aastat, keskmine vanus 56,2 aastat) lõpetas uuringu ja kaasati analüüsi. Väljalangemised olid tingitud tehnilistest probleemidest ja nõuetele mittevastavusest (kaheksa katsealust), aga ka sobimatuse reaktsioonidest (üks uuritav, põhjustatud vehiikli ja bakuchiooli ravist).

Kaks nädalat enne uuringu algust ja kogu uuringuperioodi vältel pidid vabatahtlikud hoiduma isepruunistavate toodete või intensiivsete näokosmeetiliste hoolduste (nt pindmiste nahakihtide eemaldamine) kasutamisest. 10-Päevase eelkonditsioneerimise perioodil ja kogu uuringu vältel paluti katsealustel hoiduda püsimeigi, ripsmete ja kulmude hoolduste, silmamaskide ja plaastrite tegemisest. Kolm päeva enne esimest hindamist paluti katsealustel hoiduda näohooldustoodete kasutamisest. Õhtul enne plaanitud hindamist pidid katsealused lõpetama dekoratiivkosmeetika kasutamise.

10-Päevase eelkonditsioneerimise faasi esimese 7 päeva jooksul said katsealused kreemipurgi, mis sisaldas uuringuvahendi kreemi (sisu kohta puudus igasugune teave) ja kanti seda kaks korda päevas kogu näole. Algtasemel viisid vabatahtlikud läbi enesehinnangu. Eelkõige hindasid nad visuaalselt oma näonaha üldist välimust, jälgides selle värskust ja sära ning naha vananemise märke. Seejuures rakendati visuaalset analoogskaalat vahemikus 1 (väga väsinud, vananenud) kuni 1 0 (väga värske, naha vananemise märke ei esine). Seejärel said katsealused kaks pimendatud kreemipurki, mis sisaldasid vastavalt kas verumit (0,5 protsenti bakuchiooli sisaldav vehiikul) või vehiiklit, ilma sisu täpsustamata. 12-nädalase uuringuperioodi jooksul töödeldi üht näopoolt kaks korda päevas verumiga, samal ajal kui teist näopoolt töödeldi kaks korda päevas kandjaga. Ravi määramine katsekohtadele muudeti. Pärast 12-nädalast regulaarset kasutamist viisid vabatahtlikud uuesti läbi, nagu eespool mainitud.

Statistiline analüüs

Statistilised analüüsid viidi läbi Microsoft Excel for Office 365 (Microsoft Corporation, Redmond, Washington, Ameerika Ühendriigid), SAS Software Package for Windows V9.4 (SAS Institute GmbH, Heidelberg, Saksamaa) ja GraphPad Prism V8 (GraphPad Software, San Diego) abil. , California, Ameerika Ühendriigid).

Andmete normaalset jaotust hinnati Shapiro-Wilki testi abil. Kui normaaljaotus leidis kinnitust, viidi läbi korduv dispersioonanalüüs (RM-ANOVA) koos post hoc paaripõhise võrdlusega. Kui normaalsuse hüpotees lükati tagasi, hinnati algandmete Blomi teisendatud järjestusi RM-ANOVA abil koos post-hoc paaripõhise võrdlusega või esialgseid andmeid hinnati Wilcoxoni märgi järgu testi abil. Kõik statistilised testid olid kahepoolsed olulisuse tasemel alfa=0,05.

TULEMUSED

In vitro uuringud

Antioksüdatiivse toime määramine

Bakuchiooli ja retinooli (i) antioksüdatiivse toime analüüsimiseks viisime läbi kaks erinevat testi, kasutades detektormolekulina DPPH-d.

Antioksüdatiivne võime

Antioksüdatiivne võime määrati DPPH vähenemise mõõtmisega selle absorptsiooni vähenemise kaudu. Kõrgetasemeline Trolox näitas kontrolliga võrreldes märkimisväärselt kõrgemat antioksüdatiivset võimet (p=0.0000 kõigi näidatud ajapunktide puhul), mis kinnitas õiget mõõtmist (joonis 2a). Kontrolli kohta võib öelda, et bakuchiooliga töödeldud proovide neeldumine oli samuti oluliselt vähenenud kõigil uuritud ajahetkedel (10 min: p=0,0003, 30 ja 60 min: p=0.0000 ), mis näitab suurenenud antioksüdatiivset võimet. Seevastu retinool ei näidanud kontrolliga võrreldes olulist antioksüdatiivset võimet.

【Lisateabe saamiseks:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】