Mitmekomponendilised esmase võimendusega Chlamydia Trachomatise vaktsineerimisrežiimid kutsuvad esile antikehade ja T-rakkude reaktsioonid ning kiirendavad infektsioonist vabanemist ahviliste mudelis

Sugulisel teel leviva vaktsiini väljatöötamine on rahvusvaheline prioriteetChlamydia trachomatis'e infektsioonidet võidelda nakkuse jätkuva ülemaailmse levikuga. Theoptimaalne immuniseeriminestrateegiat tuleb veel täielikult välja selgitada. Selle uuringu eesmärk oli hinnataimmuniseerimisstrateegiadahviliste (NHP) mudelis. Cynomolgus makaagid (Macaqua fascicularis) immuniseeriti pärast erinevat mitmekomponentsetesmane immuniseerimineskeemi ja seejärel nakatada C. trachomatis SvD-ga alumises genitaaltraktis. Immuniseerimisantigeenid hõlmasid rekombinantset valguantigeeni CTH522, millele oli lisatud CAF01 või alumiiniumhüdroksiidi, MOMP DNA antigeeni ja MOMP vektori antigeene (HuAd5 MOMP ja MVA MOMP).

Vajutage siin, et hankida taimne tsistanche ennetamiseksChlamydia trachomatis'e infektsioonid

Kõik antigeenikonstruktsioonid olid väga immunogeensed, suurendades olulisi süsteemseid C. trachomatis-spetsiifilisi IgG vastuseid. Täpsemalt, CTH522 valguga vaktsineeritud rühmad tõstsid seerumis kiiret ja tugevat spetsiifilist IgG-d. Spetsiifiliste B-raku epitoopide kaardistamine MOMP-s näitas, et kõik vaktsineeritud rühmad tundsid ära epitoobid MOMP varieeruvate domeenide (VD) lähedal või nende sees ning kõigil loomadel oli järjepidev VD4 vastus. Lisaks võib kõigi vaktsineeritud rühmade seerum in vitro neutraliseerida nii SvD, SvE kui ka SvF. Antikehade vastused kajastusid tupe ja silma limaskestal, mis näitas tuvastatavat IgG taset. Vaktsiinid kutsusid esile ka C. trachomatis-spetsiifilisi rakuvahendatud vastuseid, nagu näitas perifeerse vere mononukleaarsete rakkude (PBMC) in vitro stimulatsioon ja intratsellulaarne tsütokiiniga värvimine. Üldiselt tekitasid valguga (CTH522) vaktsineeritud rühmad multifunktsionaalse CD4 T-raku vastuse, samas kui DNA ja vektoriga vaktsineeritud rühmad tekitasid ka CD8 T-raku vastuse. Pärast vaginaalset nakatumist C. trachomatis SvD-ga näitasid mitmed vaktsineeritud rühmadkiirenenud infektsioonist vabanemine, kuid eriti DNA rühma, mida võimendati CAF01 adjuvandiga CTH522, et saavutadatasakaalustatud CD4/CD8T-raku vastus kombineerituna anIgG vastus, näitaskiirenenud infektsioonist vabanemine.

KEYWORDS vaktsiin, infektsioon,immunoloogia, bakterid, CD4/CD8 lümfotsüüdid,Klamüüdia trachomatis

Sissejuhatus

Genitaal Chlamydia trachomatis'e infektsioonid põhjustavad igal aastal hinnanguliselt 131 miljonit uut juhtumit kogu maailmas (1) ja kujutavad endast suurt ülemaailmset terviseprobleemi, mis võib põhjustadarasked tüsistusednagu vaagnapõletikuline haigus, emakaväline rasedusjaviljatus(2, 3). Antibiootikumid pakuvad endiselt tõhusat C. trachomatis'e infektsioonide ravi. Kuna aga infektsioon on kuni 75 protsendil juhtudest asümptomaatiline, onenamik nakkusi jäetakse ravimataja edastamine ei katke (3). Üldiselt ollakse nõus, et kõige tõhusam relv klamüüdiainfektsioonide jätkuva leviku vastu on profülaktiline vaktsiin (4).

Vaatamata mitmeaastasele uurimistööle ei ole vaktsiini veel turule toodud. See on osaliselt tingitud C. trachomatise keerulisest kahefaasilisest elustiilist. C. trachomatise ainulaadne kahefaasiline elutsükkel, millel on nii intratsellulaarne kui ka rakuväline staadium, seab väljakutse immuunsüsteemile. Arvatakse, et kaitsev immuunsus peaks lisaks serotüübispetsiifilistele antikehadele koosnema rakuvahendatud immuunvastusest (CMI) (5–13). Veelgi enam, limaskesta immuunsuse tekitamine suguelundites on vaktsiini jaoks täiendav väljakutse.

Käesolevas uuringus testisime NHP klamüüdia nakkuse mudelis erinevaid vaktsiinistrateegiaid. Strateegiate eesmärk oli indutseerida antikehi, CD4 T-rakke ja/või CD8 T-raku vastust. Lisaks olid mõned vaktsiinid suunatud limaskesta vastuse tekitamisele. Selle uuringu jaoks valitud antigeenid põhinesid peamisel välismembraanivalgul. Esiteks loodi konsensuslik MOMP antigeen (Con E), mis põhineb ligikaudu 1500 serovari E ompA järjestusel, et tagada kõrge epitoobi katvus kõige levinumate C. trachomatise tüvede vastu (14). Teiseks kasutati sünteetilist liitvalku CTH522. CTH522 on MOMP rekombinantne konstrueeritud versioon, mis sisaldab VD4 piirkondade heteroloogseid immunokordusi neljast genitaal-Ct serovarist (D, E, F ja G) (11). Rekombinantse sulandvalgu taga olev strateegia on indutseerida võimendatud vastuseid kaitsvatele epitoopidele ja indutseerida serovaridevahelise kaitse (11).

Praeguse katse teine ​​​​oluline tunnus oli CTH522 paralleelne hindamine kahes märkimisväärselt erinevas adjuvandisüsteemis (AlOH ja CAF01), kombineerituna intranasaalse korduvaga. Seda kombinatsiooni on testitud hiirtel ja minisigadel, kus see osutus väga immunogeenseks, indutseerides kõrge tiitrite neutraliseerivaid antikehi, IFN-g-d tootvaid CD4 pluss T-rakke ja kiirendades genitaal-C. trachomatis'e infektsiooni kliirensit (11–13). , 15). Lisaks peegeldas see võrdlus hiljutist esimest kliinilist uuringut inimestel, kus mõlemad preparaadid osutusid immunogeenseteks ja kus CAF01 oli parem neutraliseerivate seerumi antikehade ja Th1-rakkude poolt vahendatud immuunvastuste esilekutsumisel (16). Tugevate rakuliste immuunvastuste esilekutsumiseks, eriti CD8 T-raku vastuste ja CD4 T-raku vastustega kombineerituna, manustati osadele loomadest pärast praimimist adenovektoriga pAL1112 (HuAd{19}}MOMP) immunogeeni CT522/CAF01. MVA pox vektor või plasmiidne DNA pcDNA3.1, mis edastab MOMP Con E antigeeni (14, 17). Kõik kolm vektorit on osutunud immunogeenseks NHP-de puhul ja hiljuti näidati, et immuniseerimisstrateegia, mis ühendab need kolm vaktsiini ja lõpliku revaktsineerimise adjuveeritud valgu antigeeniga indutseeritud parema immuunvastuse ja suurendas järjekindlalt intravaginaalse C. trachomatis'e kliirensit hiire C. trachomatise infektsiooni mudel (14).

Käesolevas uuringus demonstreerime, et mitmekomponendiliste immuniseerimisstrateegiate erinevad kombinatsioonid nii valguvaktsiinide, DNA vaktsiinide kui ka rekombinantsete viirusvektori vaktsiinidega mitteinimprimaadi (NHP) mudelis põhjustavad selgeid immuunvastuseid. Lisaks täheldame, et DNA praimimist ja valku (CTH522 / CAF01) kasutav režiim kiirendas bakterite kliirensit pärast Chlamydia trachomatisega nakatumist suguelunditesse.

Tulemused

Kõik vaktsineerimisrežiimid osutusid ohutuks ja kutsusid esile olulise süsteemse antikeha vastuse

Kokku vaktsineeriti 30 Cynomolgus makaaki erinevate esmase võimendusvaktsineerimise režiimide järgi, sealhulgas nii valgu-, DNA- kui ka vektorvaktsiine ning erinevaid manustamisviise, nagu on näidatud joonisel 1 ja lisajoonistel 6-10). Kõik loomad jäid uuringu ajal terveks ja neil ei tekkinud immuniseerimisel mõõdetavaid kahjulikke mõjusid. Lisaks ei täheldanud me loomade kaalu või temperatuuri olulisi kõikumisi (täiendavad joonised 1, 2).

Kindlaksmääratud ajahetkedel pärast immuniseerimist koguti seerum ja ELISA abil hinnati CTH522 spetsiifilise IgG taset seerumis. Kõik 5 vaktsineeritud rühma tekitasid märkimisväärse seerumi CTH522 IgG vastuse (joonis 2). Siiski oli kineetika 5 vaktsineeritud rühmas veidi erinev. Kõik CTH522/AlOH pluss IN, CTH522/CAF01 ja CTH522/CAF01 plus IN rühmade loomad tõstsid märkimisväärse IgG tiitri juba pärast 1 intramuskulaarset (IM) immuniseerimist ja IgG tiiter jäi oluliseks kuni viimase proovivõtupunktini (joonised 2A- C). Seerumi IgG tasemed tõusid veidi aeglasemalt DNA pluss CTH522 ja vektorite pluss CTH522 rühmades, kus kõik loomad serokonverteeriti vastavalt 8. ja 4. nädalal (joonised 2D, E).

CTH522/AlOH pluss IN, CTH522/CAF01 pluss IN ja CTH522/CAF01 rühmad suurendasid märkimisväärselt seerumi IgG taset pärast 3. IM revaktsineerimist 16. nädalal (joonised 2A C). DNA pluss CTH522 ja vektorid pluss CTH522 rühmad suurendasid märkimisväärselt seerumi IgG taset pärast valgu/CTH522/CAF01 IM revaktsineerimist 20. nädalal (joonised 2D, E). Pärast kolmekordset intramuskulaarset vaktsineerimist kas CAF01 või AlOH adjuvandiga koostatud CTH522-ga (joonised 2A, B) ja intranasaalset (IN) adjuvandita revaktsineerimist CTH522/AlOH pluss IN ja intranasaalsel (IN) ei täheldatud seerumi antikehavastustes olulisi erinevusi. CTH522/CAF01 pluss IN rühmad ei kutsunud esile seerumi IgG antikehade tiitrite olulist suurenemist (joonised 2A, 2B).

Seerumi IgG vastuse kineetika peegeldas tupevedelike kineetikat/tasemeid, mis näitab, et tupe pinnal tuvastatud antikehad pärinevad tõenäoliselt vereringest. Samamoodi järgisid silma IgG tasemed ka seerumi IgG taset ja, nagu seerumis täheldati, näitasid, et DNA / vektori rühmade IM-võimendi suurendas silma IgG tiitrit (täiendav joonis 3).

Seerumi antikeha vastused on suunatud MOMP järjestuse varieeruvate domeenide 1, 3 ja 4 vastu

Järgmisena hinnati spetsiifilise epitoobi äratundmise edasist selgitamist seerumi antikehade poolt, järgides erinevaid vaktsineerimisrežiime. Seerumit analüüsiti 24. nädalal, st pärast intranasaalseid revaktsineerimisvaktsiine rühmades 1 ja 2 ning pärast IM revaktsineerimist DNA ja vektorite rühmas (rühmad 4 ja 5). Need analüüsid viidi läbi peptiidimassiiviga, mis kattis CTH522, mis koosnes 15-meersest peptiidist 14 aminohappega kattuvusega.

JOONIS 1 Uuringu ülesehitus. Joonisel on näidatud kasutatud rühmad, vaktsiinid ja manustamisviisid (intramuskulaarne, IM või intranasaalne, IN)

JOONIS 2 (A–F) CTH522 IgG antikeha vastused seerumis. Cynomolgus makaagid immuniseeriti erinevate esmase võimendusrežiimide järgi (n=5 rühma kohta) ja seerumit koguti igal teisel nädalal. Spetsiifilisi CTH522 IgG antikehi seerumis hinnati ELISA abil ja väljendati siin tiitrina log10 skaalal. Hallid nooleotsad näitavad vaktsineerimist. Iga rida tähistab ühte looma. Statistiline olulisus on tähistatud tärnidega *p < 0,05 ja **p < 0,01.

Üldiselt paiknesid tuvastatud peptiidid MOMP varieeruvate domeenide (VD-d 1, 3, 4) läheduses ja sees. CTH522 / AlOH rühm näitas isegi VD2 piirkonna äratundmist. Kõik loomad andsid tugeva vastuse VD4 piirkonna vastu, mis sisaldab konserveerunud neutraliseerivat VD4 epitoopi (11). DNA rühm näitas VD-de sees kõige kitsamat äratundmist (joonis 3), samas kui vektorirühm näitas veidi laiemat äratundmismustrit. CTH522 / CAF01 ja CTH522 / AlOH rühmad näitasid kõige laiemat tunnustamist, eriti SvF ja SvG vastu.

Seerumi antikehad suutsid in vitro neutraliseerida SvD, SvE, SvF

Et hinnata vaktsiinist indutseeritud antikehade võimet inhibeerida C. trachomatis'e nakatumist selle sihtrakkudes, viidi läbi in vitro neutraliseerimisanalüüs. Seda testi kasutades uurisime nii SvD, SvE kui ka SvF neutraliseerimist. Analüüsis kasutati 24. nädala seerumit ja kontrollina kasutati naiivse rühma seerumit. Kõik viis vaktsineeritud rühma näitasid võimet neutraliseerida kõik kolm serovari (joonis 4). SvD vastu näitas CTH522/AlOH pluss IN rühm kõrgeimat 50-protsendilist neutraliseerimistiitrit, samas kui SvE vastu näitas kõrgeimaid neutraliseerivaid tiitreid DNA/CTH522 rühm, millele järgnes tihedalt CTH522/AlOH pluss IN rühm. Kuigi kõik rühmad suutsid SvF-i neutraliseerida, olid 50-protsendilised neutraliseerimistiitrid kõigis rühmades selle serovari vastu veidi madalamad, võrreldes SvD ja SvE-ga. Vektorid pluss CTH522 rühm näitasid kõigist vaktsineeritud rühmadest madalaimaid 50-protsendilisi neutralisatsioonitiitreid.

Erinevad vaktsineerimisrežiimid kutsusid esile erinevad T-rakkude profiilid

Vaktsineerimisest põhjustatud T-raku vastuste hindamiseks koguti uuringuperioodi jooksul PBMC-d ja säilitati külmsäilitamine. Nädala 0/alustase ja 22. nädala PBMC-sid stimuleeriti uuesti peptiidide kogumitega (MOMP) ja hinnati rakusiseste tsütokiinide suhtes intratsellulaarse tsütokiini värvimise (ICS) ja kaastsütomeetria abil. PBMC-d värviti järgmiste rakumarkerite suhtes: CD3, CD4, CD8, CD154, CD137 ja tsütokiinid: IFN-g, IL-2, TNF-a, IL-22, IL{{14} }A. Väramisstrateegia on näidatud täiendavatel joonistel 4, 5. PBMC-de stimuleerimine MOMP-peptiidide kogumiga kutsus esile olulise vastuse. Antigeenispetsiifiliste CD154 pluss CD4 pluss T-rakkude protsent, mis ekspresseerivad IL2, IFN-g ja TNF-a kombinatsioone, suurenes 2 nädalat pärast viimast immuniseerimist (W22) kõigis vaktsineeritud rühmades (joonis 5). Enamik neist T-rakkudest olid multifunktsionaalsed selles mõttes, et nad ekspresseerisid mitmeid tsütokiine. Tsütokiine tootvate antigeenispetsiifiliste CD137 pluss CD8 T-rakkude protsent suurenes ainult DNA ja vektorite rühmas (W22) (joonis 6, näitab CD137 pluss CD8 pluss T-rakkude multifunktsionaalsust). sisse

JOONIS 3 Seerumi epitoobi kaardistamine 24. nädalal. Cynomolguse makaagid immuniseeriti erinevate esmase võimendusrežiimide järgi (n=5 rühma kohta) ja seerum koguti 24. nädalal. Peptiidide massiivi IgG vastused CTH522 15mer kattumisele peptiidid on esitatud iga rühma keskmise signaalina, VD1 peptiidid (oranž), VD2 (roheline), VD3 (sinine) ja VD4 SvD-st, E, F ja G (punane) on esile tõstetud värvidega.

JOONIS 4 C. trachomatis SvD, SvE ja SvF in vitro seerumi neutraliseerimine. Cynomolguse makaagid immuniseeriti erinevate esmase võimendusrežiimide järgi (n=5 rühma kohta) ja seerum koguti pärast immuniseerimiskava lõpetamist (24. nädal). C. trachomatis SvD, SvE ja SvF inkubeeriti iga looma seerumiga ning seerumi antikehade võimet inhibeerida infektsiooni hinnati, inkubeerides antikeha-bakterite segu HaK rakkudel ja värvides inklusioonide jaoks. Must joon näitab SvD, hall joon SvE ja tumehall punktiirjoon SvF. Punane punktiirjoon näitab iga serovari vastastikust 50-protsendilist neutralisatsioonitiitrit.

Joonis 5 CD4 T-rakkude vastused. Multifunktsionaalsed analüüsid 22. nädal. Tsütokiinide tootmine CD4 pluss T-rakkude poolt, mida analüüsiti ICS-ga. Esitatud on multifunktsionaalsed vastused pärast MOMP kattuvate peptiidide kogumitega stimuleerimist. Iga piruka suurus on võrdeline CD154 pluss CD4 pluss T-rakkude protsendiga, mis ekspresseerivad vähemalt ühte tsütokiini, sealhulgas IFN-g, TNF-a ja IL-2, ning IFN-g ja IFN-g ja IL-d ekspresseerivate rakkude proportsioonidega. /või TNF-a ja/või IL-2 tsütokiinid kuvatakse igas pirukas.

Vaktsineerimisest põhjustatud kiirendatud kliirens vaginaalsest C. trachomatis SvD infektsioonist

Vaktsiinist põhjustatud immuunvastuste kaitsva efektiivsuse hindamiseks nakatati loomi vaginaalse infektsiooniga 5x107 IFU-ga C. trachomatis SvD. Pärast inokuleerimist määrati tupe klamüüdiakoormus klamüüdia DNA PCR-i abil tupe tampooniproovides (joonis 7). Nakkus eemaldati kõigil loomadel 5. nädalaks DNA pluss CTH522/CAF01 rühmas ja Vector pluss CTH522 rühmas, 6. nädalaks CAF01/CTH522 rühmas ja 8. nädalaks CTH522/Alum plus rühmas. IN rühm (joonis 7). Kontrollrühmas oli 8. nädalal nakkusest vabanenud 80 protsenti loomadest ja 1 loom jäi 9. nädalal PCR-positiivseks. IN-i korduva manustamine rühmas CTH522/CAF01 pluss IN ei suurendanud kaitset (joonis 7). Log-rank (Mantel-Cox) test, milles võrreldi kõiki rühmi, näitas P väärtust 0,0994 ja iga rühma eraldi võrdlemisel kontrollrühmadega näitas ainult DNA-CTH522 rühm P väärtust alla 0,05 (P väärtus =0.0257).

Arutelu

Käesolev uuring kavandati rakulise immuunsuse (CD4 ja CD8) esilekutsumiseks koos humoraalse immuunsusega ja adaptiivse immuunsuse fenotüübi kohandamiseks MOMP-põhiste Chlamydia vaktsiinidega. Hindame kombineeritud mitmekomponendiliste immuniseerimisstrateegiate immunogeensust ja kaitsvat efektiivsust nii valguvaktsiinide (CTH522, Con E), DNA vaktsiini ja rekombinantse viirusvektori (MVA MOMP) kui ka adenovektoril põhinevate vaktsiinidega ahviliste puhul ( NHP) mudel.

Andmed näitasid, et kõik immuniseerimisrežiimid olid immunogeensed ja kutsusid esile nii rakulise kui humoraalse vastuse, mis koosnes neutraliseerivatest antikehadest (joonised 2-4). Kas CAF01 või AlOH-ga formuleeritud valguvaktsiin CTH522 näitas süsteemse antigeenispetsiifilise IgG kiiret indutseerimist (joonis 2). Me ei täheldanud olulisi erinevusi AlOH ja CAF01 adjuvantidega vaktsiinide indutseeritud vastuste vahel, mis on kooskõlas vastustega, mida täheldati inimestel nende adjuvantide kasutamisel (16). DNA ja vektorvaktsineerimise režiimid kutsusid esile ka antigeenispetsiifiliste süsteemsete antikehade olulised tiitrid, mis suurenesid märkimisväärselt pärast valgu võimendusimmuniseerimist (joonis 2). Kooskõlas meie tulemustega näitas ka eelmine hiirtega tehtud uuring, et valguga vaktsineerimise režiimid kutsusid esile kõrgema antigeenispetsiifiliste antikehade taseme võrreldes DNA ja vektorvaktsiini antigeenidega ning suurendasid tõhusalt ka nende rühmade tiitreid (15).

MOMP sisaldab nelja VD-d, mis on eksponeeritud Ct nakkusliku vormi pinnal. Need piirkonnad on antikehast sõltuva immuunsuse peamised sihtmärgid nii neutraliseerivate antikehade kui ka Fc-retseptori poolt vahendatud immuunsuse kaudu (18). Varasemad uuringud on näidanud, et vaktsiinist indutseeritud neutraliseeriva seerumi kasutuselevõtt vähendas märkimisväärselt varajast bakterite levikut pärast C. trachomatis'e infektsiooni (6, 11, 19–21). Seega näib, et antikehad mängivad rolli esialgse inokulaadi neutraliseerimisel/kontrollimisel, tõenäoliselt koostöös rakulise immuunsusega. Üksikasjaliku B-raku epitoobi kaardistamise abil tuvastasime kõigis vaktsiinirühmades VD piirkonnad 1, 3, 4. DNA ja vektorrühmad tundsid ära ka VD1, 3 ja 4 piirkonnad. Kuid need rühmad näitasid nendes VD-des pisut kitsamat äratundmist võrreldes CAF01 ja AlOH rühmadega, mis peegeldab tõenäoliselt seda, et vektorirühmade Con E antigeen ei sisalda SvF ja G VD4 piirkonda (joonis 3). VD4 piirkonna äratundmine korreleerus kõigi vaktsiinistrateegiate võimega indutseerida neutraliseerivaid antikehi SvD, SvE ja SvF vastu.

Parenteraalne immuniseerimine CTH522-ga CAF01-s ja AlOH-s kutsus esile limaskestade antikehade (IgG) märkimisväärse taseme genitaaltraktis ja silmas ning tasemed korreleerusid seerumi tiitritega (täiendav joonis 3, nädal 18). DNA ja vektorvaktsiinid üksi ei indutseerinud limaskesta IgG-d, mis peegeldab madalamaid seerumi tiitreid, võrreldes ainult valguga. Kuid pärast CTH522/CAF01 IM revaktsineerimist suurenes nendes rühmades seerumi Ab märkimisväärselt. tase ja nii vaginaalne kui ka silma IgG, samaväärne ainult valguga (täiendav joonis 3, nädal 18). CTH522 paralleelne hindamine erinevates praimiva adjuvandi süsteemides (AlOH ja CAF01), millele järgnes kahekordne intranasaalne võimendamine antigeeniga, ei mõjutanud limaskesta antikehade taset (täiendav joonis 3, nädal 22). Seega peegeldub seerumi üldine IgG tase kõigi rühmade limaskestal. Hiljutises inimese I faasi uuringus hinnati ka CTH522 paralleelset hindamist AlOH-s ja CAF01-s, millele järgnes kahekordne intranasaalne võimendus. Siin korreleerusid limaskesta IgG tiitrid hästi ka seerumi IgG kontsentratsiooniga (16). Kuid erinevalt NHP mudeli leidudest näitas inimkatse IN võimendamise mõju CAF01 rühmas, mille tulemuseks oli nii IgG kui ka IgA taseme tõus. Kahjuks ei olnud IgA hindamine praeguses uuringus võimalik piiratud materjali ja valepositiivsete signaalide tõttu, mis tulenevad testis kasutatud ristreageerivast sekundaarsest antikehast. Mõlemas uuringus kasutati seadet VaxINator, mis on mõeldud nasaalsete ravimite pihustamiseks limaskesta adsorptsiooniks. Inimeste ninaõõs on aga palju avaram kui NHP-del ja võib oletada, et see võib mõjutada antigeeni ühtlast jaotumist ja omastamist.

Mitmed uuringud nii inimestel kui närilistel on näidanud Th1 T-rakulise immuunsuse ja efektortsütokiini IFN-g tähtsust (8, 22–27). Seevastu CD8 T-rakkude kaitsvast rollist on vähem teada (28–33). Kõik vaktsiinirühmad indutseerisid CD4 T-rakke, kuid ainult DNA ja vektorrühmad näitasid CD8 T-raku vastust (joonised 6 ja 7). Mõõdetud tsütokiinide põhjal koosnesid CD8 T-rakud CD4 T-rakkudega võrreldes piiratud arvust alamhulkadest, mida võis jagada kuueks või enamaks alamhulgaks, millest enamik tootis mitut tsütokiini (joonis 7). CD4 T-rakkudel oli rohkem IL-2-ekspresseerivaid alamhulka kui CD8 T-rakkudel, mis sisaldasid peamiselt ainult ühte IL-2-ekspresseerivat alamhulka, seda, mis ekspresseeris IL-2 koos IFN-g ja TNF-ga. a (joonis 6). CD8 T-rakkudes domineeris suur populatsioon, mis tootis ainult IFN-g, samas kui teine ​​domineeriv CD8 T-rakkude alamhulk tootis nii IFN-g kui ka TNF-a. See CD4 T-rakkude ja CD8 T-rakkude tsütokiinide muster ei erine hiirtel täheldatust, kui testitakse vaktsiinistrateegiaid, mis on võimelised indutseerima nii CD4 kui ka CD8 T-rakke (34).

Sarnane strateegia, mis hõlmas DNA vaktsineerimist, millele järgnes MOMP valgu (35) immuunsüsteemi stimuleerivate komplekside (ISCOM) võimendamine, kutsus esile tugeva kaitse Chlamydia muridarum kopsuinfektsiooni vastu. Selles uuringus kutsus DNA MOMP (või MOMP/ISCOMS) esile märkimisväärselt väiksema kaitse (35). Teine uuring näitas, et hiirte vaktsineerimine DNA MOMP plasmiididega ilma subühiku vaktsiinita ei suutnud kaitsta suguelundite C. trachomatis'e nakatumise eest (36), mis näitab, et DNA strateegiale tuleb kasuks, kui seda täiendatakse CD4 T-rakke ja antikehi indutseeriva subühiku vaktsiiniga. . Tuleb märkida, et DNA vaktsiinide immunogeensusprofiilid on inimeste kliinilistes uuringutes näidanud suhteliselt madalat immunogeensusprofiili, mida tuleb võib-olla tulevastes uuringutes käsitleda (37).

Kuigi selles uuringus kasutatud Ct-nakkuse doos on suurem kui inimestel esineva loomuliku nakkuse korral, valiti see nii, et kõik loomad oleksid nakatunud, mis on oluline, arvestades loomade väikest arvu igas rühmas. Annus on kooskõlas varasemates uuringutes kasutatud annusega, mis jäi vahemikku 106 kuni 108 (38, 39). Annuse vähendamine meie mudelis suurendas infektsioonide levikut (andmeid pole näidatud). Kasutatud on ka korduvalt manustatud väiksemaid annuseid (40, 41). See ei ole aga optimaalne protokoll, kui eesmärk on testida vaktsiinide kaitsetõhusust, eriti kui loomulik immuunsus vahendab kaitset enne nakkusprotokolli täitmist. Võib oletada, et suure annuse kasutamine võib nõuda immuunvastust, mis sisaldab kõiki immuunsüsteemi osi, nagu antigeenispetsiifilised CD4 T-rakud, CD8 T-rakud ja neutraliseerivad antikehad, et vähendada bakteriaalset tasemed. See selgitaks ka seda, miks kõigis rühmades indutseeritud neutraliseerivad antikehad ei andnud kõigis rühmades märkimisväärset kaitset [kuigi me märkasime enamikus rühmades varajase kaitse suundumust, kus arvatakse, et antikehad mängivad rolli (joonis 7)] . Praegu püüame välja töötada füüsiliselt asjakohasema mudeli.

Kokkuvõttes näitasid meie andmed, et adjuvandis CAF01 või AlOH valmistatud CTH522 antigeen võib indutseerida nii multifunktsionaalseid T-rakke kui ka neutraliseerivaid antikehi NHP-des. Veelgi enam, meie tulemused näitasid, et DNA vaktsiinist ja CTH522/CAF01 subühiku vaktsiinist koosnev heteroloogne vaktsiinistrateegia kujutab endast paljulubavat vaktsiinistrateegiat mitmetahulise immuunvastuse esilekutsumiseks kõrge neutraliseerivate Ab-de tasemega koos tugevate CD4 ja CD8 T-raku vastustega. võib märkimisväärselt kiirendada C. trachomatis'e infektsiooni kliirensit.

Küsi lisa:

E-post:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel: pluss 86 15292862950

Wecistanche'i pood

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop