Piima eksosoomist saadud mikroRNA-2478 pärsib melanogeneesi Akt-GSK3β raja kaudu

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Seon Bae ja Sang Hoon Kim

Abstraktne:Eksosoomid osalevad rakkudevahelises suhtluses, kandes molekulid doonorilt üle retsipientrakkudele. Eksosoomi leidub erinevates kehavedelikes, sealhulgas veres, uriinis, tserebrospinaalis. vedelik ja piim. Piima eksosoomid sisaldavad palju endogeenseid mikroRNA molekule. MikroRNA-d on väikesed mittekodeerivad RNA-d ja neil on oluline roll bioloogilistes protsessides. Spetsiifiline bioloogiline piima eksosoomide funktsioone ei mõisteta hästi. Selles uuringus uurisimepiim eksosoomidmelaniini tootmisel melanoomirakkudes ja melanotsüütides. Leidsime, etpiima eksosoomid vähenesidmelaniini sisaldus, türosinaasi aktiivsus ja melanogeneesiga seotud geenide ekspressioon melanoomirakud ja melanotsüüdid. Veiste spetsiifiline miR-2478 eksosoomides pärssis melaniini tootmist. Leidsime, et Rap1a on miR-2478 otsene sihtgeen melanoomirakkudes ja melanotsüütides. MiR-2478 üleekspressioon vähendas Rap1a ekspressiooni, mis viis melaniini tootmise ja melanogeneesiga seotud geenide ekspressioon. Rap1a ekspressiooni pärssimine vähenesmelanogeneesläbi Akt-GSK3β signaaliraja. Need tulemused toetavad piimast saadud miR-2478 rolli eksosoomid kuimelanogeneesRap1a otsene sihtimine. Need tulemused näitavad, et piima eksosoomid võivad olla kasulikud cosmeceutical koostisosad, et parandadaValgendamine.

Märksõnad: melanogenees;piim eksosoomne; miR-2478; Rap1a

herba cistancheson melaniini pärssiv koostisosa

1. Sissejuhatus

Kosmetseutiline on liitsõna, mis ühendab kosmeetikat ja farmaatsiat ning viitab kosmeetikatoodetele, millel on funktsionaalsed koostisosad, millel on meditsiiniline toime [1]. Minevikus on nahk paranes dermatoloogiliste protseduuride kaudu, kuid hiljuti huvi kosmeetikumide vastu seda on suurendanud tarbijate soov saada neid mõjusid kosmeetikatoodete kaudu. Kosmeetikatööstus on viimastel aastatel näidanud üles ka suuremat huvi uudsed kosmeetikulised koostisosad [2]. Funktsionaalne kosmeetika hõlmab tooteid, mis aitavad nahka valgendada, takistades melaniini ladestumist nahale.

Melaniin, oluline element, mis määrab naha ja juuste värvi, kaitseb nahk ultraviolettkiirgusest [3]. Kuid melaniini liigne moodustumine põhjustab ebaühtlast. nahatoon, nt laigud ja tedretähnid [4]. Mikroftalmia transkriptsioonifaktor (MITF) on suur melanotsüütide arendamise reguleerija. Türosinaasi (TYR) on kõige olulisem ensüüm melaniini süntees. Melaniini sünteesiprotsessi indutseerib TYR-i aktiveerimine MITF-i kaudu, mis on oluline ensüüm, mis osaleb melaniini sünteesiprotsessi algstaadiumis ja kasutab melaniini moodustamiseks substraadina türosiini või DOPA L-vormi [5].

MikroRNA-d (miR-id) on lühikesed mittekodeerivad RNA-d, mis osalevad paljudes bioloogilistes protsessides, kontrollides transkriptsioonijärgset geeniekspressiooni [6]. Uuringud on ka paljastanud melaniini biosünteesi kontroll mikroRNA-de abil. Näiteks on teatatud, et miR-143-5p sihib Tak1 geeni ja vähendab MITF ekspressiooni, inhibeerides seeläbi melaniini süntees [7]. MiR-125b, negatiivne regulaatormelanogenees, on tõestatud reguleerida pigmentatsioonigeeni SH3BP4 [8] ja miR-675 eksosoomides, mis on sekreteeritud keratinotsüüdid pärsivadmelanogeneesmitf-i sihtimisega [9].

Eksosoomid on 30–200 nm suurused membraaniga piirnevad vesiikulid ning sisaldavad DNA-d, RNA-d ja peptiide [10]. Eksosoomide sisemised komponendid võivad ohutult edastada teavet külgnevatele või kaugematele rakkudele, ilma et ensüümid bioloogilistes vedelikes laguneksid, seega mikrokeskkonna mõjutamine erinevate rakkude ümber [11].Piima eksosoomidon piimast saadud rakuvälised vesiikulid, mis on inimese seedeprotsessides stabiilsed [12]. Veiste piimast ekstraheeritud eksosoomid ei sisalda mitte ainult mitmeid valke, nagu kaseiin ja laktoglobuliin. aga ka mikroRNA-d, mis toimivad lastina [13–15]. Veisepiim sisaldab immuunsüsteemiga seotud mikroRNA-sid nagu miR-15b, miR-27b, miR-34a ja miR-10. Need mikroRNA-d on eriti rohkesti ternespiimas [16].

Mõned uuringud on näidanud, et piima komponendid pärsivadmelanogeneesmelanotsüütides; näiteks valgud nagu β-laktoglobuliin ja κ-kaseiin piimas reguleerivad melanogeneesi [17,18]. Lactobacillus helveticus NS8 kääritatud piima supernatant on leitud pärssida UV-kahjustusi ja hüperpigmentatsiooni nahas [19]. Siiski ei ole veel aruannet selle kohta, kas veiste piima mikroRNA-d on seotud nahaga.ValgendamineKuigi 79 mikroRNA-d on olemaspiima eksosoomid[13]. Seetõttu uurisime selles uuringus kas mikroRNA-sid sisaldavad piimaeksosoomid pärsivad melaniini sünteesi hiirel ja inimese melanoomirakud ja melanotsüüdid.

2. Materjalid ja meetodid

2.1. Rakukultuur

Hiire melanoom B16F10 rakke kasvatati Dulbecco modifitseeritud Eagle'i keskkonnas (DMEM, Hyclone, Logan, TÜ, USA). Inimese melanoomi MNT-1 rakke kasvatati minimaalses olulises keskkonnas (MEM, Hyclone). Kogu meediat täiendati 10% lootega veiste seerum (FBS, Hyclone, USA) ja 1% penitsilliini-streptomütsiini lahusest. Tavaline inimese epidermaalsed melanotsüüdid (NHEM, PromoCell, Heidelberg, Saksamaa) läbisõidul number 5 või 6 säilitati melanotsüütide kasvukeskkonnas (PromoCell). Need rakud inkubeeriti temperatuuril 37 ◦C niiskes atmosfääriseisundis, mis sisaldas 5% CO2.

2.2. Eksosoomide puhastamine

Kaubanduslik piim (1 ml) tsentrifuugeeriti 2000. aastal× g 10 minutit, seejärel supernatant tsentrifuugeeriti 10 000 × g juures 10 minutit. Piima supernatant läbis 0,45 μm filter ja seejärel 0,2 μm filter. Saadud lahus (300 μL) segati fosfaadipuhvriga soolalahus (PBS) ja 300 μL Exoquicki eksosoomi sademelahust (Systems Biosciences, Palo Alto, CA, USA) ja inkubeeritud 30 minutit. Segu oli tsentrifuugitud 10 000× g juures 30 minutit, et saada eksosoomi pellet, mis oli järgmine taaselustatud PBS-is. Eksosoomide suuruse jaotus määrati zetasisaatori Nano ZS 90-l (Malvern Instruments, Almelo, Prantsusmaa). Eksosoomid hoiti edasiseks kasutamiseks −80 ◦C juures.

2.3. Krüoelektronmikroskoopia

3 μL aliquot värske eksosoomide suspensiooni adsorbeeriti hõõguvaks, perforeeritud süsinikuga kaetud võrk (2/2-3 C-tasane; Protochips, Morrisville, NC, USA), mis seejärel blotted 3 s juures 4 ◦C ja sukelduda külmutatud kasutades Vitrobot Mark IV (Thermo Fisher Teaduslik, Lafayette, CO, USA). Võrke hoiti vedelas lämmastikus, seejärel kanti üle Gatan 626 krüoproovi hoidja (Gatan, Pleasanton, CA, USA). Proovid olid pildil nominaalse suurendusega 29 000× krüoelektronmikroskoobis (FEI Tecnai F20 TEM, FEI, Hillsboro, OR, USA), mis on varustatud standardse väljaheitepüstoliga (s-FEG) ja K2-ga Tippkaamera (Gatan) kiirenevas pinges 200 kV.

2.4. Rakkude elujõulisuse analüüs (WST analüüs)

Melanoomirakud (B16F10, MNT-1) ja inimese melanotsüüdid (NHEM) külvati 4 × 103 rakud/kaev 96-kaevulistel plaatidel ja töödeldudpiima eksosoomid(20 ja 50 μg/ml) või mikroRNA matkija (RNA kaheahelalised oligonukleotiidid) iga katse jaoks. Kell näidatud ajapunktid, mõõdeti rakkude elujõulisust, kasutades rakkude elujõulisuse suurendamise analüüsi komplekt EZ-CyTox (Daeil Lab Service, Seoul, Korea) vastavalt tootja juhistele. Neeldumist mõõdeti Vmax mikroplaadi spektrofotomeetril 450 nm juures (Molekulaarsed seadmed, San Jose, CA, USA).

2.5. Melaniinisisalduse mõõtmine

Melanoomirakke ja melanotsüüte ravitipiima eksosoomid(20 ja 50 μg/ml) 48 h. Pärast kaks korda pesemist jääkülma PBS-iga tsentrifuugeeriti rakud 2500× g juures 10 min. Rakugraanulid taaselustati 90 ◦C juures 30 minutiks 1 N NaOH-s, mis sisaldas 10% dimetüülsulfoksiidist. Kogu melaniinisisaldust mõõdeti Vmax mikroplaadil spektrofotomeeter (molekulaarsed seadmed) 405 nm juures.

2.6. Türosinaasi tegevuse analüüs

Melanoomirakud ja melanotsüüdid inkubeeritipiima eksosoomid48 h. Lahtrid pesti kaks korda PBS-iga ja lüstati PBS-iga, mis sisaldas 1% Triton X-100 ja 0,1 mM fenüülmetaanesulfonüülfluoriid. Pärast tsentrifuugimist koguti supernatant ja kantakse üle 96-kaevulisele plaadile. Pärast 0,1 M L-3,4-dihüdroksüfenüülalaniini lisamist, proovid inkubeeriti temperatuuril 37 ◦C 1 kuu jooksul. Türosinaasi aktiivsust mõõdeti alusel neeldumisest 475 nm juures, kasutades mikroplaadi spektrofotomeetrit (molekulaarseadmed).

herba cistanches

2.7. Inimese nahakuded

Melanotsüüte (MelanoDerm, MEL-300B) sisaldavad epidermaalsed ekvivalendid saadi MatTekilt (Ashland, MA, USA) ja neid hoiti EPI-100-NMM-113- Keskmine.Piima eksosoomidrakendati MelanoDermi kudedele 1., 3., 7., 9. ja 12. päeval. PBS-i kasutati negatiivse kontrollina. Kudesid pildistati 3., 7., 9., 12. ja 14. päeval. Pigmentatsiooni mõõdeti L-väärtuse muutuste võrdlemisel (Adobe Photoshop CC 2015). Melaniini sisaldust inimese nahakoes mõõdeti 14. päeval Solvable'iga melaniini analüüs. Lühidalt, MelanoDermi kuded olid lahustunud Solvable'i (Perkin) abil Elmer, Waltham, MA, USA) ja inkubeeritud üleöö kell 60 ◦C. Proovid olid keerised ja seejärel tsentrifuugeeritakse 16 500× g juures 5 minutit. Supernatant viidi üle kaevudesse 96-kaevuline plaat, mida loetakse 490 nm juures spektrofotomeetriga.

3. Tulemused

3.1. Piimast eraldatud eksosoomide iseloomustamine

Lehmapiimast ekstraheeritud eksosoomide omaduste uurimiseks kõigepealt mõõtis eksosoomide suurust dünaamilise valguse hajumise teel. Selle tulemusena eksosoomid Piimast ekstraheeritud läbimõõduga leiti olevat 80–190 nm (joonis 1A). Sestpiim eksoseerivpuhastamine, Exoquick-piima supernatant segu oli tsentrifuugitud, et saada piima eksosoomne pellet. CD9, TSG101 ja HSP70 ekspressioon eksosomaalsete markeritena avastati graanulites, kuid neid valke ei olnud supernatandis (joonis 1A). Lisaks kinnitas eksosoomide sfäärilist morfoloogiat ja suurust krüoelektronmikroskoopia (joonis 1B). Leiti, et eksosoomidel on ümmargune kuju kuni 200 nm läbimõõduga. Seejärel uurisime, kas piimast ekstraheeritud eksosoomid olid Rakkude poolt üles võetud. Hiire B16F10 rakud inkubeeritipiima eksosoomidmärgistatud lipofiilne fluorestsentsvärv PKH26. Selle tulemusena täheldasime, et märgistatud eksosoomid olid rakkude sees (joonis S1).

3.2. Türosinaasi aktiivsus ja melaniini tootmine, mida piima eksosoomid B16F10 rakkudes pärsivad

Seejärel uurisime ekstraheeritud eksosoomide mõju rakkude elujõulisusele. Nagu kujutatud joonisel 2A paljastasime, et rakkude elujõulisuse osas ei olnud olulist erinevust, olenemata Eksosoomi kontsentratsiooni.

Võimaliku naharaku uurimiseks...Valgendaminemõju mõjupiima eksosoomid, olid rakud töödeldud piima eksosoomidega. Leidsime, et türosinaasi aktiivsus piimaga kokkupuutuvates rakkudes eksosoomid kontsentratsioonides 20 või 50 μg/ml vähenesid vastavalt 43% ja 59% (Joonis 2B). Kuna türosinaasi ensüümi aktiivsuse vähenemine võib pärssida melaniini biosünteesi, mõõdeti melaniinisisaldust pärast töötlemist piima eksosoomidega. Me märkisime, et melaniini sünteesi pärssimine rakkudes, mis puutuvad kokkupiima eksosoomid(20 või 50 μg/ml) 45% ja vastavalt 55% (joonis 2C). Lisaks vähenes MITF mRNA ekspressioon kuna piima eksosoomide kontsentratsioon suurenes. MITF mRNA tase vähenes 59% rakkudes, mida raviti 20 μg/ml eksosoomidega ja 84% Vastavalt 50 μg/ml eksosoomi (joonis 2D). Türosinaasi (TYR) mRNA avaldis ka vähenes eksosoomide kontsentratsioonidega kokkupuutuvates rakkudes 49% ja 76% (Joonis 2D). MITF-i ja türosinaasi valgusisaldus vähenes ka piima kontsentratsiooninaeksosoomid(joonis 2E). Need tulemused näitavad, et piima eksosoomid pärsivad melanogeneesi hiire B16F10 rakkudes.

3.3. Veiste spetsiifiline miR-2478 piima eksosoomidest pärsib melanogeneesi

Selleks, et teha kindlaks, kas miR-2478 tuletatipiima eksosoomidotseselt melanogeneesi mõju, miR-2478 inhibiitor nakatus piimaga kokkupuutuvatesse rakkudesse eksosoomid (50 μg/ml). Piima eksosoomide juuresolekul nakatusid B16F10 rakud miR-2478 inhibiitor näitas oluliselt suuremat türosinaasi aktiivsust võrreldes kontroll (joonis 4A). Melaniini sisaldus oli suurem ka miR-2478 inhibiitoriga ravitud inhibiitoris kui kontrollrakkudes (joonis 4B). MITF mRNA ekspressioon oli miR2478 inhibiitoriga töödeldud rakkudes –2,5 korda kõrgem kui kontrollrakkudes ja TYR mRNA ekspressioon oli –2-kordne kõrgem, kui miR-2478 inhibeeriti (joonis 4C). MITF- ja TYR-valkude tase taastunud ka rakkudes, millega kokku puututipiima eksosoomidpärast seda, kui need rakud olid nakatunud miR-2478 inhibiitor (joonis 4D). Need tulemused näitasid, et miR-2478 tuletas piima eksosoomid pärssisid otseselt melanogeneesi hiire melanoomirakkudes.

3.4. Piimaeksosoomid pärsivad melanogeneesi läbi Akt-GSK3β Raja

Seejärel uurisime, kuidaspiima eksosoomidReguleeridamelanogeneesteha kindlaks asjakohased kahjustatud rada melanoomirakkudes. Kuigi ei ole teada, kas Rap1a otseselt kontrollib melanogeneesi, on teatatud, et Rap1a pärsib Akt fosforüülimist vähirakud [20]. Selle teabe põhjal uurisime, kas Rap1a moduleerib Akt rada edendada.

Akt-ga seotudmelanogeneesRada aktiveeritud Akt indutseerib Gsk3β fosforülatsiooni Ser9 juures ja inaktiveerib selle seega; see muutus pärsib MITF-i transkriptsioonilist aktiivsust ja reguleerib türosinaasi [21,22]. Käesolevas uuringus hindasime Akt ja GSK3β ekspressiooni rakkudes, mida raviti Rap1a siRNA. Nendes rakkudes suurenes Akt fosforüülimise aktiveerimine ja kogus samuti suurenes pGSK3β (joonis 7A). GSK3β inaktiveeriti Akt aktiveerimisega kontsentratsioonist sõltuv viis rakkudes, mida ravitakse 20 või 50 μg/mlpiima eksosoomid(Joonis 7B). Valkude Akt ja GSK3β sisaldus miR-2478-ga töödeldud rakkudes matkimine oli kooskõlas ülaltoodud tulemustega (joonis 7C). Järgmisena testisime, kas miR-2478 piima eksosoomidest mõjutab Akt-GSK3β rada. Piima eksosoomide juuresolekul, valkude Akt ja GSK3β fosforüülimine oli madalam rakkudes, mida raviti miR-2478 inhibiitor (joonis 7D). Lisaks ravi AKT inhibiitoriga GSK690693 suurenenud geenide ekspressioon, mis on seotudmelanogeneespiima eksosoomiga töödeldud piimas Lahtrid. (Joonis 7E). Need leiud tähendasid, et miR-2478piima eksosoomiddownregulates Rap1a ja pärsib melanogeneesi läbi Akt-GSK3β raja.

cistanche herbavalgendav toime nahale oksüdatsioonivastaseks

3.8. Piimaeksosoomid inhibeerisid melanogeneesi inimese melanoomirakkudes, melanotsüütides ja MelanoDermi kude

Arvestades, etpiima eksosoomidpärsitudmelanogeneeshiirerakkudes tegime järgmisena kindlaks, kas piima eksosoomid on inimese rakkudes võrdselt tõhusad. Esiteks, elujõulisuse 200000000000000 MNT-1 inimese melanoomi rakke ja NHEM inimese melanotsüüte uuriti pärast inkubeerimist 20 või 50 μg/ml piima eksosoomidega. Nagu joonisel 8A esitatud, ei olnud Elujõulisuse erinevus. Türosinaasi aktiivsus inhibeeriti vastavalt 43% ja 85% MNT-1 rakud, mis puutuvad kokku 20 μg/ml või 50 μg/ml piima eksosoomidega (joonis 8B). NHEM oli ka vastavalt 34% ja 66% võrra raviga 20 μg/ml või 50 μg/ml piima eksosoomid (joonis 8B). Lisaks mõõdeti melaniini sisaldust MNT-1 rakkudes ja NHEM puutub kokku piima eksosoomidega. Selle tulemusena melaniini süntees MNT-1 rakkudes, mis puutuvad kokku 20 μg/ml või 50 μg/mlpiima eksosoomidinhibeeriti vastavalt 37% ja 58% ning NHEM-rakkudes takistas piima eksosoomi ravi melaniini sünteesi vastavalt 36% ja 62% (joonis 8C). Lisaks sellele on naha kergendav toimepiima eksosoomidkinnitati ka inimese nahakudede abil. Pärast ravi piima eksosoomidega inimese kudedes, suhtelineValgendamine 3., 9., 12. ja 14. päeval täheldati toimet. Selle tulemusena leidsime, et nahavärv piima eksosoomiga kokkupuutuvates kudedes tundus olevat heledam kui kontrollkudedes (joonis 8D). Pigmentatsiooni aste arvutati L-väärtusena, mis on heledust esindav väärtus. Pigmentatsioon edenes piima eksosoomiga töödeldud nahakudedes aeglasemalt kui nahakudede kontrolli all (joonis 8D). Katserühm, keda ravitipiima eksosoomidnäitas väiksemat melaniiniosakest suurus ja väike kogus melaniini pigmenti võrreldes kontrollrühmaga (joonis 8E). Melaniinisisalduse mõõtmise tulemusena pärast 14-päevast piimaeksosoomi inhibeeris melaniinisünteesi inimese kudedes (joonis 8F). Seetõttu jõudsime järeldusele, et piim eksosoomid pärsivadmelanogeneesinimese rakkudes ja kudedes.

4. Arutelu

Uuringud eksosoomide kohta, mis reguleerivadmelanogeneeson teatanud, et eksosoomid on tuletatud keratinotsüütidel on valgendav toime. Melanotsüüdid ja ümbritsevad keratinotsüüdid on funktsionaalselt ühendatud melaniiniüksuste moodustamisega naha epidermis [23,24]. Keratinotsüütide saadud lahustuvad tegurid reguleerivad naabruses asuvate melanogentsüütide melanogeneesi. Eksosoomid tavalistest keratinotsüütidest eraldunud soodustavad melanogeneesi, reguleerides väljendit albaaniamelanogenees-seotud valgud [23–25]. Lisaks sellele, etValgendamineuuring, milles kasutati rakkudest ekstraheeritud eksosoomi, teatati hiljuti, et inimeselt ekstraheeritud eksosoomid rasvkoest saadud tüvi/stromaalsed rakud näitasid naha helendavat efektiivsust hiirel melanoomirakud [26]. Samuti teatati, et taimedest ekstraheeritud eksosoomidel on valgendav toime. D. morbifera taimelehtedest ekstraheeritud rakuvälised vesiikulid ja varred näitasid melanogeenset toimet hiire melanoomirakkudele ja tervetele inimestele nahk [27]. Meie uuringus uuriti piimast saadud eksosoomide valgendavat toimet.

Võrreldes vereplasmast või kultuurivedelikust ekstraheeritud eksosoomidega on piimast saadud eksosoomidel eeliseid mitte ainult suurtes kogustes eksosoomid, mis võivad ekstraheeritakse mahuühiku kohta, kuid ka madala hinnaga [26,27]. Kunapiima eksosoomidon keemiline koostis, mis sarnaneb rakumembraanide koostisega, on neil madalam immunogeensus ja tsütotoksilisust ning neil on suur biosobivus [28,29]. Hiljuti, kui piim eksosoomid söödeti DSS-ile (dekstraansulfaat naatriumsool)indutseeritud koliidi mudeli hiirtele, ekspressioonile proinflammatiivsed tsütokiinid IL-6 ja TNFα vähenesid kontrollrühmaga võrreldes, vähendades seeläbi põletikku ja parandades nekrotiseerivat enteriiti [30,31]. Lisaks sellele on piima eksosoomide allaneelamine osteoporoosihaiguse hiiremudelis parandas artriiti suurendades luutihedust ja vähendades põletikuvastaseid tsütokiine [32,33]. Seni on piimaeksosoomide mõju on keskendunud immunoloogilistele nähtustele, mis vähendavad proinflammatiivsed tsütokiinid ja luude areng, nagu enteriidi leevendamine ja osteoporoosi paranemine. Selles uuringus, lisaks meetodile, mille võtmise meetodpiima eksosoomidsee kinnitati, et nahale kandmisel oli see nahas efektiivneValgendamine. See näitab, et seda saab rakendada erinevate haiguste raviks, suurendades füsioloogilist tegevus, mis kasutab tulevikus piima eksosoomi.

Kuigi see uuring näitas, etpiima eksosoomidPärssidamelanogenees, see on juba teada, et vadakuvalgudel nagu kaseiin, β-laktoglobuliin ja α-laktaalnebuliin on valgendav toime. β-laktobabuliin vähendab türosinaasi aktiivsust inimese melanotsüütides [18], ja k-kaseiin pärsib melanogeneesi hiire B16 melanoomirakkudes [17]. Huvitav paljud neist komponentidest esinevad ka piima eksosoomides. Proteoomi järgi piimaeksosoomide, kaseiini, β-laktoglobuliini ja α-laktalbumini tulemused jaotuvad eksosoomid [15,34,35]. Piima eksosoomid sisaldavad nii mikroRNA-sid kui ka valke. Selle tulemusena, et miRNA mikroarray, mis kasutab Izumi ja tema kolleegide piimaeksosoomi, miR-2478, miR-1777b, miR-1777a, let-7b ja miR-1224 olid piima eksosoomides väga jaotunud [13]. Selles uuring, välja arvatud miR-2478, nende mikroRNA-de hulgas, miR-1777b, miR-1777a, let-7b ja miR-1224 ei näidanud kontrollrühma türosinaasi aktiivsuse erinevust (Joonis S2). miR-2478 oli kõige rikkalikumpiima eksosoomidja vähenenud türosinaasi aktiivsus. Valgendamisega seotud MITF- ja TYR-geenide ekspressioon vähenes siiski rohkem rakkudes, millega ravitaksepiima eksosoomidkui miR-2478-ga ravitud rakkudes Matkima üksi. Need tulemused näitavad, et mitmed komponendid, sealhulgas mikroRNA-d piimas eksosoomid, on seotudValgendamineTegevus.

Enamik piima eksosoomide mikroRNA-sid avaldavad bioloogilisi funktsioone, pärssides sihtgeenide ekspressioon retsipientrakkudes. Selles uuringus inhibeeriti ka miR-2478 melaniini süntees, suunates Rap1a sihtgeeniks. Kuigi need ei olnud piimast saadud mikroRNA-d, mikroRNA-d, mis kontrollivad valgendamisega seotud geenide ekspressiooni. On juba teatatud. Kui hiirele rakendati inimese miR-27a-3p matkimist melanotsüüdid, see inhibeeris Wnt3a ekspressiooni ja inhibeeris seeläbi melaniini sünteesi [36], ja ektoopiline miR-218 inhibeeris TYR aktiivsust, vähendades MITF ekspressiooni muriini melanoomi melanotsüütides [37]. miR-203 reklaamibmelanogeneesCREB1/MITF/Rab27a kaudu rada, suunates Kif5bi melanoomis [38]. Piima eksosoomides on 79 mikroRNA-d

mikroRNA-dpiima eksosoomidLehmadest saadud [13]. Seetõttu on edasised uuringud piima eksosoomide füsioloogiline aktiivsus on vajalik.

5. Järeldused

Meie tulemused näitavad, etpiima eksosoomidon melanogeensete ainete kandidaadid mis vähendavad pigmentatsiooni, pärssides melaniiniga seotud geenide ekspressiooni (joonis 10). Melanoomirakkudes ja melanotsüütides näitasid piima eksosoomid TYR-i inhibeerimist ja melaniinisisalduse vähenemist võrreldes negatiivse kontrolliga. Lisaks olid need mõjud vahendas miR-2478 alatespiima eksosoomid. Seetõttu võivad piima eksosoomid olla kasulikud funktsionaalseteValgendaminemadala tsütotoksilisusega kosmeetika.

cistanchevalgendav toime nahale oksüdatsioonivastaseks