Riisivalgu hüdrolüsaatide antioksüdantide, valgendavate ja vananemisvastaste omaduste hindamine

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Hui-Ju Chen 1,2, Fan-Jhen Dai 2, Cheng-You Chen 3, Siao-Ling Fan 2, Ji-Hong Zheng 4, Yu-Chun Huang 2, Chi-Fai Chau 1, Yung-Sheng Lin 3, 4,5* ja Chin-Shuh Chen 1,*

Abstraktne:Taimse päritoluga valgu hüdrolüsaatidel on potentsiaalseid rakendusi toitumises. Riisivalgu hüdrolüsaadid (RPH-d), mis on suurepärane valguallikas, on äratanud tähelepanu kosmeetikatoodete väljatöötamisel. Kuid vähesed uuringud on teatanud RPH analüüsi võimalikust rakendamisest ja selles uuringus uuriti neidantioksüdantnahka vanandavate ensüümide aktiivsust ja inhibeerivat toimet. Tulemused näitasid, et fenooli ja flavonoidide üldkontsentratsioon oli 2.06 ± 0,13 mg gallushappe ekvivalenti grammi RPH kohta ja 25,96 ± 0,52 µg kvertsetiini ekvivalenti grammi RPH kohta, vastavalt. RPH-d näitasid annusest sõltuvat aktiivsust vabade radikaalide eemaldamisel 1,1-difenüül-2-pikrüülhüdrasüülist [pool maksimaalsest inhibeerivast kontsentratsioonist (IC50)=42.58 ± 2,1 mg/g RPH-d]ja 2-st. ,20-asino-bis (3-etüülbensotiasoliin-6-sulfoonhape) (IC50=2.11 ± 0,88 mg/g RPHs), annusest sõltuv redutseerimisvõime (6,95 ± 1,40) mg C-vitamiini ekvivalenti/g RPH) ja hapnikuradikaali neeldumisvõimet (473 µmol Troloxi ekvivalenti/g RPHs). RPH lahuse kontsentratsioonid, mis on vajalikud hüaluronidaasi 50 protsendilise inhibeerimise saavutamiseks jatürosinaasaktiivsuseks määrati vastavalt 8,91 ja 107,6 mg/ml. See uuring näitas, et RPH-d onantioksüdantantihüaluronidaasi ja türosinaasi aktiivsust tulevaste kosmeetiliste rakenduste jaoks.

Märksõnad:riisivalgu hüdrolüsaat;antioksüdant; hüaluronidaas;türosinaas; kosmeetiline

cistanchevalgendaminemõjunahaleantioksüdatsioon

1. Sissejuhatus

Ultraviolettkiirgusega kokkupuude põhjustab fotovananemist (või välist vananemist); Vastupidised, raku metabolismis tekkivad reaktiivsed hapniku liigid ja bioloogiliste funktsioonide halvenemine põhjustavad sisemist vananemist [1, 2]. Töödeldud toidud sisaldavad sageli looduslikkeantioksüdandidnagu katehhiinid, askorbiinhape, tokoferoolid, rosmariinhape ja erinevate taimede fenoolsed ekstraktid. Looduslike antioksüdantide uurimine käsitleb nüüd ebatraditsioonilisi päritolu. Loodusliku päritolugaantioksüdandidon soovitavamad kui keemiliselt toodetudantioksüdandidkuna on teatatud, et mõned sünteetilised antioksüdandid on kantserogeensed [3]. Riis (Oryza sativa) on kogu maailmas, eriti Aasias elavate inimeste jaoks peamine toidutoit. Maakera aastane riisitoodang on ligikaudu 741 miljonit tonni [4]. Aasia riikides annab riis väidetavalt 75 protsenti enam kui 2 miljardi inimese energiatarbimisest [5]. Laialdane riisi tootmine toob kaasa vastava koguse kõrvalsaaduste tootmist. Riisi tootmisprotsessi jääkprodukt sisaldab suurema osa teravilja proteiinist (~60–85 protsenti), kuid visatakse ära või kasutatakse loomade toitmiseks [6–8]. Erinevatest valguhüdrolüsaatidest saadud peptiidid toimivad väidetavalt potentsiaalsetenaantioksüdandid[9]. Seetõttu saab toiduvalgu hüdrolüsaatidest ekstraheerida looduslikke ja mittetoksilisi antioksüdante. Paljud teadlased on kasutanud lipiididerikkaid mudeleid ja teatanud valgu hüdrolüsaatidest, aga ka piimast, zeiinist ja sojavalgu peptidest, millel on olulised antioksüdantsed omadused, sealhulgas vabade radikaalide eemaldamine, toidu ja in vitro lipiidide peroksüdatsiooni pärssimine ning siirdemetallide kelaatimine [10– 12].

Hüaluroonhape (HA) aitab nahka noorendada, kuna see suurendab viskoossust, sisaldab niiskust ja muudab rakuvälised vedelikud vähem läbilaskvaks. Tänu oma suurepärasele vettpidavale võimele tõstab HA naha nooruslikkust, niisutamist ja siledust ning vähendab kortsude astet [13,14]. Kahjuks väheneb naha HAin tase vanusega loomulikult. Hüaluronidaas on ensüüm, mis hävitab HA, põhjustades naha tugevuse, painduvuse ja niiskuse kadu, mis omakorda viib naha vananemiseni. Seetõttu saab kortse ravida hüaluronidaasi pärssimisega ja naha HA-sisalduse säilitamisega [15,16]. Melaniini tootv ensüümtürosinaasaitab eluliselt kaasa melaniini tootmisprotsessi kiirust piiravale etapile. Seetõttu ravitakse pigmentatsioonihäireid tavaliselt ja naha heledamaks muutmine saavutatakse pärssimise või alareguleerimisegatürosinaastegevus [17,18].

Mitmetes uuringutes on teraviljavalgu hüdrolüsaatidel ja nendest saadavatel peptiididel avastatud antioksüdantne, antihüpertensiivne ja kasvajavastane toime [19,20]. Järk-järgult tunnistatakse toidust pärinevate peptiidide ja valkude positiivset panust inimeste tervisesse [21]. Tarbijad nõuavad üha enam, et kosmeetika- ja tervishoiutööstus kasutaks looduslikke bioaktiivseid ühendeid. Riisivalgu hüdrolüsaadid (RPH-d) on pälvinud tähelepanu suurepärase valguallikana. Kuid vähesed uuringud on teatanud RPH-de iseloomustamisest ja funktsionaalsest analüüsist. Seetõttu hinnati selles uuringus antioksüdantset aktiivsust ja hüaluronidaasi ningtürosinaas- RPH-de inhibeeriv toime.

2. Tulemused ja arutelu

2.1. Fenooli üldkontsentratsioon (TPC) ja flavonoidide kogusisaldus (TFC)

TPC testi standard oli mitme kontsentratsiooniga gallushape. Suurem neeldumine näitas kõrgemat TPC-d. RPH proovide TPC saadi RPH proovide optilise neeldumise väärtuste sisestamisega gallushappe kalibreerimiskõverale. Joonistades RPH kontsentratsiooni ja fenooli kontsentratsiooni (joonis 1a), saadi keskmine TPC 2.06 ± 0,13 mg GAE/g RPHs. TFC 25,96 ± 0,52 µg QE/gRPHs saadi järgides sarnast protseduuri (joonis 1b). Joonisel 1c on täiendavalt seotud RPH-proovide TPC ja TFC. See näitab, et TPC ja TFC vahelist suhet saab väljendada kujul y=0.0121x pluss 0,0659, kus x ja y on vastavalt TPC ja TFC.

RPH-de TPC hõlmas peptiidide fenoolsete aminohapete ja fenoolühendite kontsentratsioone. Valkude ja fenoolsete ühendite interaktsioon hõlmab üldiselt kovalentset ja mittekovalentset sidet. Ensümaatilise hüdrolüüsi käigus vabanevad fenoolsed ühendid. Spetsiifilised ensüümid võivad kõige paremini hävitada valgu-polüfenooli komplekse; selle tulemusena vabaneb suurem arv fenoolsete rühmadega fenoolseid ühendeid ja peptiide, nagu türosiin [22]. Terade polüfenoolide kogusisalduse ja nende bioloogilise aktiivsuse vahel on teatatud tugevast korrelatsioonist. Polüfenoolidel on hästi teada tugev antioksüdantne toime [23]. Kuigi riisis leiduvad terpeenid [24] või seskviterpeenid [25] neid leidub väiksemas koguses, võivad need samuti kaasa aidata antioksüdantsele toimele.

2.2. Antioksüdantide aktiivsus

2.2.1. DPPH vabade radikaalide radikaali eemaldamise aktiivsus

Joonisel 2 on kujutatud DPPH vabade radikaalide püüdmise aktiivsus RPH lahuses. Avastati, et lahuse suurem kontsentratsioon põhjustab suuremat aktiivsust. Poolmaksimaalne inhibeeriv kontsentratsioon (IC50), mis on ekstrakti kontsentratsioon, mille puhul saab eemaldada pooled kõigist DPPH vabadest radikaalidest, oli riisi peptiidide 42,58 ± 2,1 mg/ml.

2.2.2. ABTS-i vabade radikaalide eemaldamistegevus

Joonisel 3 näidatud RPH-de vabade radikaalide eemaldamise aktiivsus ABTS-i oli suurem, kui kasutati suuremat ekstraktikontsentratsiooni. Riisi peptiidide IC50 oli 2,11 ± 0,88 mg/ml. See tulemus näitas, et RPH-del oli tugev ABTS-i vabade radikaalide eemaldamise aktiivsus. Väävlit sisaldavad aminohapped, sealhulgas Met ja Cys, ning hüdrofoobsed aminohapped, sealhulgas Ala, Val, Ile, Leu, Met, Cys, Tyr, Phe, Try ja Pro, võivad olla olulised tegurid seoses ABTS-i vabade radikaalidega. puhastav tegevus.

Selles uuringus oli ABTS-i vabade radikaalide eemaldamise aktiivsuse IC50 väärtus madalam kui DPPH vabade radikaalide eemaldamise aktiivsus, nõustudes Jatropha curcas L. seemne kesta ja tuuma [28] ning jujube viljade seemnete ja koore viljaliha [29] tulemustega. See leid vastab ka aruandele riisikliivalgu hüdrolüsaatide kohta vastavalt 43,98–66,25 µmoL Troloxi ekvivalenti grammi proovi kohta ja 403,28–430,12 µmoL Troloxi ekvivalenti grammi proovi kohta vastavalt DPPH vabade radikaalide eemaldamise aktiivsuse ja ABTS vabade radikaalide eemaldamise aktiivsuse kohta [27].

Üks võimalik põhjus on DPPH vaba radikaali (õlis lahustuv) ja ABTS vaba radikaali (õlis/vees lahustuv) lahustuvuse erinevus [30,31]. Riisikliivalgu hüdrolüsaatide antioksüdantset potentsiaali mõjutasid selle molekulmassi profiil, aminohapete koostis ja hüdrofoobsus [32].

2.2.3. Vähendamisvõimsus

RPH-de redutseerimisvõime analüüsi tulemused on esitatud joonisel 4. Redutseerimisvõime suurenes koos RPH-de kontsentratsiooniga. Redutseerimisvõime oli 6, 95 ± 1, 40 mg VCE / g RPHs, mis näitab, et RPH-d on tõhus antioksüdant.

2.2.4. Hapnikuradikaalide neeldumisvõime (ORAC)

ORAC-analüüsil on eelised teiste antioksüdantse aktiivsuse määramise meetodite ees, sealhulgas kasutatavad reagendid on peroksüradikaalid, millel on sarnane reaktsioonimehhanism ja redokspotentsiaal füsioloogiliste oksüdeerijate suhtes; üldine laeng ja protoneerimise olek, millegaantioksüdandidreaktsioonid sarnanevad inimkeha reaktsioonidega [33]. ORAC-meetodil on ka bioloogiline tähtsus antioksüdantide tõhususe seisukohalt inimkehas. Joonisel 5 on kujutatud RPH-de ja Troloxi standardi ORAC-analüüsi tulemused erinevates kontsentratsioonides. ORAC tuletati neto-AUC ja Troloxi kontsentratsiooni seostava kalibreerimiskõvera regressioonivõrrandist. Tulemused näitasid, et RPH-ks oli ORAC 473 µmol TE/g RPH-sid.

Antioksüdantseid peptiide või aminohappeid saab saada valkude ensümaatilise hüdrolüüsi teel, mille tulemuseks on väga aktiivne oksüdeerija [34]. Metalliioonide kelaatimine, lipiidide peroksüdatsiooni pärssimine ja bioloogiliselt aktiivsete peptiidide vabade radikaalide eemaldamine vastutavad nende antioksüdantse aktiivsuse eest. Antioksüdantsete peptiidide abil saab vabu radikaale summutada ning oksüdatiivset stressi vähendavate valkude ja ensüümide ekspressiooni ülesreguleerida. Valgu hüdrolüsaatide ja peptiidide antioksüdantne efektiivsus sõltub väidetavalt aminohapete järjestusest ja peptiidi suurusest, mida mõjutavad hüdrolüüsitingimused, valguallikas ja proteaasi tüüp [35]. Vastavalt Adebiyi jt. [36], saab subtilisiiniga purustada suurimat seeditavat riisikliivalku väiksemateks tükkideks, mille tulemuseks on suurem valgu saagikus ja sisaldus. Ensüümide spetsiifilisus võib mõjutada hüdrolüsaadi TPC-d ja antioksüdantset aktiivsust. Seetõttu võivad peptiidi antioksüdantset aktiivsust mõjutada valguallika omadused, ensüümi spetsiifilisus ja hüdrolüüsi tase [37].

On palju teateid, mis kasutavad proteaase (nagu Alcalase, Bacilluse liikidest pärit istülisiin A kaubanduslik nimetus) taimsete valkude hüdrolüüsimiseks antioksüdantpeptiidide saamiseks. Sellega seoses on sojavalk üks levinumaid valke [38]. Lisaks leitakse ka riisikliivalgu hüdrolüüs Alkalaas. Optimaalsetes tingimustes tekitas liimjas riisikliide alkalaashüdrolüüs DPPH vabade radikaalide eemaldamisel valguhüdrolüsaate, mille IC50 väärtus oli 0,87 ± 0,02 mg/ml [39]. Meie uuringus oli RPH-de IC50 väärtus 42,58 ± 2,1 mg/ml. Kuigi selles uuringus ei olnud DPPH vabade radikaalide eemaldamise IC50 väärtus nii efektiivne kui riisikliivalgu oma, oli ABTS vabade radikaalide eemaldamine (IC50=2.11 mg/mL) tõhusam kui alkalaashüdrolüüsi teel saadud sojavalgu hüdrolüsaadid ( IC50=2,93 mg/ml) [40].

2.3. Hüaluronidaasi inhibeeriv aktiivsus

Dermis leidub proteolüütilist ensüümi hüaluronidaas, mis katalüüsib HA lagunemist rakuvälises maatriksis [41]. Selles uuringus kasutati võrdlemiseks positiivse kontrollina tanniinhapet. Joonis fig 6 näitab, et tanniinhappel oli kõrgem hüaluronidaasi aktiivsuse inhibeerimine; IC50 oli 0,14 mg/ml, mis on sarnane Nishida et al. (0,121 mg/ml; 71,1 mM) [42]. Seevastu RPH lahuse IC50-ks arvutati 8,91 mg/ml. See RPH lahuse tulemus vastas meie eelmisele IC50 väärtusele 7,61 mg/ml [43]. Valgud, polüsahhariidid ning taimse päritoluga ja sünteetilised ühendid kuuluvad hüaluronidaasi inhibiitorite hulka kuuluvate ühendite hulka. Need inhibiitorid aitavad säilitada HA sünteesi ja lagunemise tasakaalu [44]. Madal HA kontsentratsioon nahas põhjustab kuivust ja kortsude teket. Seetõttu on hüaluronidaasi aktiivsuse pärssimine viis, mille kaudu saab naha morfoloogiat parandada ja selle vananemist edasi lükata.

2.4. Türosinaasi inhibeeriv aktiivsus

Looduslikest allikatest pärit valguhüdrolüsaadid võivad pärssidatürosinaasi aktiivsus. In vitro türosinaasi inhibeerimise testi kasutatakse tavaliselt selleks, et hinnata, kuidas nahka valgendavad ained mõjutavad otseselt türosinaasi aktiivsust [45]. Osaledes melaniini sünteesi kiirust piiravas etapis, katalüüsib türosinaas L-türosiini hüdroksüülimist L-DOPA-ks ja seejärel viimase oksüdeerumist o-dopakinooniks. Kui on soovitav vältida melaniini biosünteesi, võib L-türosinaasi aktiivsuse pärssimine olla ülioluline. Siintürosinaaskasutati RPH antitürosinaasi aktiivsuse mõõtmiseks. Nagu on kujutatud joonisel 7, saavutas kontsentratsioon 107,6 mg/ml türosinaasi aktiivsuse 50% pärssimise. Askorbiinhappel oli kõrge türosinaasi inhibeeriv toime (IC50=0.098 mg/ml), mis oli sarnane 0,102 mg/ml, mille Seo et al. teatatud [46].

Riisikliivalgu hüdrolüsaatide sisaldus oli märkimisväärselt kõrgetürosinaas-inhibeeriv toime [47,48]. RPH lahuse türosinaasi inhibeeriv toime võib tuleneda peptiidide aminohappeprofiilidest. Schurink jt. kirjeldas, et tõhustürosinaas-inhibeerivad peptiidid koosnevad arginiini jääkidest ja fenüülalaniinist [49]. Türosinaasi inhibeerivat aktiivsust saab parandada hüdrofoobsete aminohappejääkide (nt alaniin) abil ja melaniini tootmist võib alaniin häirida [50]. Pealegi, Zhang et al. teatas ka, et riisivalgu hüdrolüsaat võib UVB-indutseeritud rakumudelis vähendada melaniini sisaldust ja türosinaasi aktiivsust [51].

cistanche kulturism

2.5. Aminohapete profiilid ja RPH-de molekulmassid

Käesolevas uuringus oli riisi valgusisaldus pärast tärklise eemaldamist 23,56 massiprotsenti ja proteaasiga hüdrolüüsitud proovi hüdrolüüsiaste oli 9,36 protsenti. Tabelis 1 on üksikasjalikult kirjeldatud aminohapete koostist RPH-des. Proovi iga 100 g sisaldas 5,18 g aminohappeid. Aminohappekomponentide osas olid RPH-d richiini alaniin, leutsiin, arginiin, glutamiinhape ja asparagiinhape. Iga 100 g proovi sisaldas kokku 1,73 g hüdrofoobseid aminohappeid (alaniin, valiin, leutsiin, isoleutsiin, proliin, fenüülalaniin ja tsüsteiin). See tulemus erines täielikult meie eelmisest aruandest [43] amülaasi lahuse ja selle tärklise eemaldamise töötlustemperatuuri kohta. Hüdrofoobsete aminohapete sisaldus oli 1,90 korda suurem kui meie eelmises aruandes. Selle uuringu madalam töötlemistemperatuur (60 ◦C) võib takistada valkude denatureerimist suurtes kogustes, nii et aminohapete aktiivsus säilib paremini. Lisaks saadakse sarnane järeldus ka teiste seente amülaasi ja glükoamülaasi tosahharifitseerimise kohta valgetes riisikliides [52].

Uuringud on leidnud, et hüdrofoobsed aminohapped sarnanevadantioksüdandidtõstes lipiididel põhinevat lahustuvust erinevatest valguallikatest pärinevates valguhüdrolüsaatides ja peptiidides, soodustades seeläbi koostoimet vabade radikaalidega [38,53]. Mõned aminohapped on teatanud Chen et al. [54] üldiselt olemaantioksüdandid; mainitud hapete hulka kuulusid trüptofaan, tsüsteiin, metioniin, türosiin ja histidiin. Käesolevas uuringus sisaldasid aromaatsed aminohapped (fenüülalaniin, türosiin ja trüptofaan) 0,53 g/100 g RPH-sid. Seetõttu olid need peptiidist pärinevad aminohapped tõenäoliselt vastutavad RPH-de antioksüdantse aktiivsuse eest.

Lisaks on valkudel, mis on hüdrolüüsitud lühemateks peptiidideks, erinev MW jaotus ja mõned hüdrofoobsed rühmad, mis on volditud terviklike looduslike valgu molekulide sisemusse, puutuvad tavaliselt kokku vesifaasiga. See on seotud valgu molekulide struktuurse ümberkorraldamisega ja seega ka valgu funktsionaalsete omadustega [55,56]. Tritsiin-SDS-PAGE andmed näitasid, et RPH-de MW oli vahemikus 5–35 kDa (joonis 8a).

Joonisel 8b on kujutatud erinevate MWde suhteline sisaldus RPH-des. Üldiselt oli 45,24 protsenti kogu valgust põhiribas (MW ≈ 2,4 kDa). Sarnased tulemused saadi ka riisikliivalgu hüdrolüsaatide peptiidiga. Suurim antioksüdantne aktiivsus, mille on saavutanud Thamnarathip et al. [37] oli peptiidide MW=6–50 kDa. Lisaks on seos valgu hüdrolüsaatide funktsiooni ning MW jaotuse ja aminohapete koostise vahel [57]. See selgitab käesolevas uuringus täheldatud RPH-de antioksüdantset aktiivsust.

2.6. Rakkude toksilisuse test

Tulevaste rakenduste jaoks on vajalik madal raku toksilisus. RPH-de tsütotoksilisuse ja biosobivuse hindamiseks mõõdeti toores 264.7 rakkude elujõulisust RPH lahuses MTT meetodil. Nagu on näidatud joonisel 9, oli rakkude elujõulisus üle 100 protsendi, kui seda töödeldi 25–2000 µg/ml RPH-ga 24 ja 48 tunni jooksul. Tulemused näitavad RPHde märkimisväärselt madalat tsütotoksilisust. Seetõttu saab RPH-sid potentsiaalselt kasutada väga madala tsütotoksilisusega kosmeetiliste rakendustena.

3. Materjalid ja meetodid

3.1. Reaktiivid

Raud(III)kloriid, 2,20-asinobis(3-etüülbensotiasoliin-6-sulfoonhape) (ABTS), troloks(6-hüdroksü-2,5 ,7,8-tetrametüülkromaan-2-karboksüülhape), l-3,4-dihüdroksüfenüülalaniin (L-DOPA), 1,1-difenüül-2- pikrüülhüdrasüül (DPPH) ja trikloroäädikhape saadi firmalt Alfa Aesar (Tewksbury, MA, USA). 2,20-asobis(2-metüülpropaanamidiin)divesinikkloriid (AAPH), Folin-Ciocalteu fenoolreaktiiv, gallushape, askorbiinhape, seenedtürosinaas, ja naatriumfluorestseiin saadi firmalt Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Naatriumkarbonaat saadi firmast Riedel-de Haën (Seelze, Saksamaa). Lõpuks saadi kaaliumferritsüaniid, naatriumvesinikfosfaat ja naatriumdivesinikfosfaat ettevõttest Showa Chemical (Tokyo, Jaapan).

3.2. RPH-de valmistamine

RPH-d valmistati eelnevalt kirjeldatud viisil, välja arvatud see, et riisijahu tärklise suhkrustamiseks võeti kasutusele seente amülaas, vältides aminohapete kahjustamist, mis on põhjustatud bakterilamülaasi hüdrolüüsist kõrgel temperatuuril [43, 58]. Sada grammi riisijahu leotati 1000 ml destilleeritud vees, mis sisaldas 0,5 protsenti seente amülaasi (Genencor, NY, USA); seejärel kuumutati segu 24 tundi temperatuurini 60 ◦ ( pH 4,2), misjärel lasti jahtuda toatemperatuurini. Ülejäänud supernatandi eemaldamiseks tsentrifuugiti 10 minutit kiirusel 1968 × g. Pärast 20-kordse vee ja 2 ml 0,1-protsendilise hüdrolüütilise proteaasi (Healthmate, Changhua, Taiwan) lisamist lahustumatule osale loksutati lahust ja inkubeeriti 4 tundi 55 °C juures. Lahuse pH optimaalsel tasemel hoidmiseks kasutati pH-statistika meetodit ja seejärel kuumutati 85 ◦C juures 10-minutilise forensüümi inaktiveerimiseks. Ülejäänud lahustumatu fraktsioon eemaldati tsentrifuugimisega 15 minutit 3075 × g juures. Lüofiliseerimine viidi läbi supernatandiga, mida hoiti seejärel enne kasutamist temperatuuril –20 ◦C.

3.3. RPH-de antioksüdantne toime

3.3.1. Fenooli kogukontsentratsioon (TPC)

RPH-de TPC avastamiseks kasutati Folin-Ciocalteu meetodit [59]. Esiteks segati 200 µL Folin-Ciocalteu fenoolreaktiivi (0,3 M) ühtlaselt läbi 5-minutise loksutamise 200 ui. µl RPH lahust ja sellele segule lisati 400 µl deioniseeritud (DI) vett ja 200 µl 10% (mass/maht) naatriumkarbonaadi lahust. Segatud lahust inkubeeriti 60 minutit pimedas toatemperatuuril. Seejärel tsentrifuugiti 15 minutit kiirusel 3000 p/min. Mõõtmisel kasutati 100 µl supernatanti. Gallushappe ekvivalendi (GAE) TPC (ühik: mg) määramiseks ühe grammi kuiva RPH-proovi kohta (ühik: mg GAE/g RPH-d) sisestati optilise neeldumise andmed gallushapet kujutavale standardkõverale. Neelduvus saadi 700 nm juures, kasutades spektrofotomeetrit EpochMicroplate (BioTek, VT, USA).

3.3.2. Flavonoidide kogusisaldus (TFC)

TFC saadi Wathoni jt lähenemisviisi järgi. väikeste muudatustega [60]. Kõigepealt segati 500 µl iga proovi ja 2% (mass/maht) alumiiniumkloriidi lahust. Reaktsioonilahust segati põhjalikult ja jäeti 10 minutiks seisma ning hinnati neeldumist lainepikkusel 415 nm. Tulemus on esitatud kvertsetiini ekvivalendi (QE) mikrogrammides kuiva RPH proovi grammi kohta (µg QE/g RPHs).

cistanche kulturism

3.3.3. DPPH vabade radikaalide eemaldamise tegevus

Kõigepealt segati 198 µM DPPH etanoolilahus (50 µL) ja RPH lahus või DI vesi (0,5 µL; vastavalt proov ja kontroll) ning lasti seejärel 30 minutit toatemperatuuril pimedas seista. Seejärel saadi lahuse neeldumine 517 nm juures. Suhteline puhastusaktiivsus arvutati proovi ja kontrolli vahelise neeldumise erinevuse määramise teel. Kõrge DPPH vabade radikaalide eemaldamise aktiivsus peegeldus madalas optilises neeldumises. RPH lahuse DPPH vabade radikaalide eemaldamise aktiivsuse hindamisel kasutati standardina C-vitamiini [61–63].

3.3.4. ABTS-i vabade radikaalide eemaldamistegevus

Wu et al. kasutati RPH lahuse antioksüdantse aktiivsuse hindamiseks [64]. Esiteks pandi 7 mM ABTS põhilahus (250 µL) reageerima 2,45 mM kaaliumpersulfaadiga (250 µL), saades vabade radikaalide ABTS katiooni (ABTS• plus), kusjuures segu hoiti alles. 16 tundi temperatuuril 4 ◦C pimedas enne kasutamist. Pärast pimedas toatemperatuuril tasakaalustamist kasutati 0,1 M fosfaatpuhverdatud soolalahust (PBS; pH 7,4), et lahjendada lahus neeldumiseni 0,70 ± 0,02 lainepikkusel 734 nm. Seejärel lisati 180 µL lahjendatud ABTS lahusele 20 µL Troloxi (positiivne kontroll) või RPH lahust (proov). Seejärel inkubeeriti segu 10 minutit toatemperatuuril. See uuring määras optilise neeldumise 734 nm juures; madalam neeldumine vastas suuremale ABTS vabade radikaalide eemaldamise aktiivsusele. RPHsolutioni ABTS vabade radikaalide eemaldamise aktiivsuse hindamiseks kasutatud standard oli antioksüdant Trolox.

3.3.5. Vähendamisvõimsus

RPHsolutioni kogu antioksüdantse aktiivsuse määramiseks kasutati rauasisaldust redutseeriva antioksüdandi võimsuse testi. Nagu on teatanud Lin et al. [29], RPH lahus (200 µL) segati ühtlaselt 1 protsendi (mass/maht) K3Fe(CN)6 ja 0,2 M PBS puhvriga (pH 6,6; kumbki 100 µL). .Segu kuumutamiseks kasutati 20 minutit 50 ◦C veevanni; pärast segu vannist eemaldamist jahutati see kiiresti 3 minutiks. Seejärel lisati 10% (mass/maht) trikloroäädikhapet (100 µL) ja tsentrifuugiti 10- min kiirusel 3000 p/min. Sellele järgnes supernatandi ekstraheerimine (400 µL) ja selle ühtlane segamine 0-ga. 1 % (mass/maht) FeCl3 (100 µL) ja DI vesi (400 µL). Fe4[Fe(CN)6]3 saadi selle segu 10-minutise reaktsiooniga pimedas. Seejärel näitas suurem optiline neeldumine (mõõdetuna lainepikkusel 700 nm) suuremat redutseerimisvõimet. C-vitamiini ekvivalendi (VCE) sisalduse määramiseks ühe grammi RPH-de kohta kasutati standardset C-vitamiini.

3.3.6. Hapnikuradikaalide neeldumisvõime (ORAC)

Selles uuringus saadi ORAC, muutes varem teatatud meetodit [65]. Pärast RPH proovi lahustamist destilleeritud vees segati RPH lahus (50 µL) fluorestseiiniga (10 µM) 96- süvendiga mikrotiiterplaadil. Lahust inkubeeriti 15-min temperatuuril 37 ◦C, millele järgnes 50 µL AAPH (500 mM) lisamine. Iga 5 minuti järel ja kokku 120 minuti järel registreeriti fluorestsents (vastavalt λex ja λem=485 ja 528 nm). RPH-de antioksüdantne võimsus leiti fluorestsentsi lagunemise kineetikast, arvutades kõveraaluse pindala (AUC). ). RPH ORACi arvutamisel oli standard 15–250 µM Trolox. ORAC on esitatud Troloxi ekvivalendi (TE) mikromoolidena kuiva RPH proovi grammi kohta (µmol TE/g RPHs).

3.4. Hüaluronidaasi inhibeeriv aktiivsus

Hüaluronidaasi inhibeerimise test viidi läbi, kasutades {{0}}süvendiga mikroplaati ja varem teatatud meetodit väikeste muudatustega [40]. N-atsetüülglükoosamiin vabastati hüaluronidaasi reageerimisel HA substraadiga. Mis tahes inhibiitori juuresolekul vähenes N-atsetüülglükoosamiini vabanemine ja see vabanemine tuvastati 600- nm neeldumise abil. HA sadestati happelise albumiini lahusega, mis koosnes 0,1 M atsetaatpuhvrist (pH 3,9) ja veise seerumi albumiinist (1 mg/ml). Proovilahust ja 5 mg/ml hüaluronidaasi inkubeeriti 20-min temperatuuril 37 ◦C. Seejärel lisati inkubeerimissegule HA (1{{20}}0 µL; 5,0 mg/ml 0,1 M atsetaatpuhvris). Edasi inkubeeriti 40 minutit temperatuuril 37 °C. Ensümaatilise reaktsiooni peatamiseks lisati 0,1 ml 0,4 M leeliselist boraadi lahust.

3.5. Türosinaasi inhibeeriv aktiivsus

Käesolevas uuringus hinnati RPH-de türosinaasivastast aktiivsust, kasutades eelnevalt teatatud modifikatsioonidega protokolli [66]. Ensüümilahus (135 U/mL) valmistati türosinaasi lahustamisega 20 mM fosfaatpuhvris (pH 6,8). Lisaks kasutati 1,25 mM L-DOPA lahuse valmistamiseks DIvett. Seejärel segati 40 µL erineva kontsentratsiooniga RPH proovilahuseid 40 µL türosinaasi lahuse ja 120 µL L-DOPA lahusega. RPH-de inhibeerimise testimisel hoiti seda segu 30 minutit temperatuuril 37 °C.türosinaastegevust. 475-nm neeldumise saamiseks kasutati spektrofotomeetrit (FLUOstar Omega MicroplateReader, BMG Labtech GmbH, Saksamaa). Kõik mõõtmised viidi läbi kolm korda. Vastava rühma neelduvus, kuitürosinaasei olnud, lahutati. Ensüümi inhibeerimise määr määrati kui

3.6. RPH-de iseloomustus

3.6.1. Aminohapete profiilid

See uuring avastas RPH-de aminohappelise koostise. Esiteks kasutati 24 tundi temperatuuril 115 °C 4 M metaansulfoonhapet proovide hüdrolüüsimiseks evakueeritud suletud torudes. ASpherisorb ODS2 kolonnis, mille mõõtmed on 25 m, kasutati kahte Waters 510 lahusti kohaletoimetamise süsteemi ja aminohapete analüsaatorit (L 8900; Hitachi, Tokyo, Jaapan) × 64,6 mm. Selles uuringus kasutati järgmisi lahusteid: (a) naatriumatsetaat (0,14 M) ja trietüülamiin (850 µL/L; pH 5,6) ja (b) 60 protsenti atsetonitriili, mille gradient oli 0 protsenti 2 minuti jooksul; 0–42 protsenti 15,5 minutiks (kumer kõver); ja 100 protsenti 4 minutiks. Aminohappeprofiilide mõõtmiseks lainepikkusel 254 nm võeti topeltproovid [67,68].

3.6.2. Valgu molekulmass (MW).

Vastavalt Schäggeri meetodile [69] ja redutseerivates tingimustes saadi selles uuringus MW jaotus tritsiin-naatriumdodetsüülsulfaadi (SDS)-polüakrüülamiidgeel-elektroforeesi (PAGE) abil koos väikeste modifikatsioonidega. Proovipuhver (30 g/l SDS, 0.375 MTris-HCl, 0.125 g/l Coomassie Brilliant Blue G-250 ja 75 g/ Külmkuivatatud proovi dispergeerimiseks kasutati L glütserooli; pH 7), tsentrifuugiti seejärel enne laadimist. 1 ml tritsiin-SDS-PAGE proovile lisati kokku 20 µL 2-merkaptoetanooli. Proovi kuumutati 100 ◦C juures 90 sekundit. Iga proovi ja värvimata valgu standardlaia ulatusega (Bio-Rad Laboratories, Saksamaa) laaditi mikrosüstla abil proovisüvend. Seejärel viidi läbi elektroforees – esmalt konstantsel 30 mV pingel, kuni kogu proov oli virnastamisgeeli sees, ja seejärel kuni konstantse 100 mV pingeni. Seejärel kanti geeliga värvimiseks peale 0,02 protsenti Coomassie Brilliant Blue R{23}} lahust. Geelide absoluutne taustavärvi eemaldamine viidi läbi, loksutades geele 10% äädikhappes üleöö. Lõpuks analüüsiti geelipilti, et tuvastada radadel olevad valguribad; see analüüs viidi läbi ImageJ-s (USNational Institutes of Health, Bethesda, MD, USA). Kasutati standardseid markereid, et saada kalibreerimiskõver, mille põhjal hinnati MW. Lühidalt, esimene samm oli määrata iga riba migratsiooni pikkus (Rf) eraldusgeeli ülaosast. See teine ​​samm oli kalibreerimiskõvera arvutamine, kasutades Rf ja log (MW) standardmarkerit antud MW-ga. MW määramine viidi läbi, kasutades RPH-de valgu ribasid.

3.7. Tsütotoksilisuse test

Toores 264.7 rakke kultiveeriti kõrge glükoosisisaldusega Dulbecco Modified Eagle söötmes (DMEM), mis sisaldas 10 protsenti veise loote seerumit (FBS), 4,5 g/l glükoosi, 1 protsenti antibiootikumilahust (100 ühikut/). ml penitsilliini ja 100 µg/ml streptomütsiini), 4 mM L-glutamiini ja 1,5 g/naatriumvesinikkarbonaati temperatuuril 37 °C ja 5 protsenti CO2. Toores 264.7 rakkude toksilisust RPHs suhtes mõõdeti 3-(4,5-dimetüültiasool-2-üül)-2,5-difenüültetrasooliumbromiidi (MTT) proliferatsioonitesti meetodiga . Umbes 1 × 104 rakku süvendi kohta plaaditi 96-süvendiga plaatidele. 24 tunni pärast lisati rakkudesse erinevates kontsentratsioonides RPH-sid (0–2000 µg/ml). Pärast 24 ja 48 tundi kestnud inkubeerimist lisati 100 ui MTT lahust (0,5 mg/ml). Mikroskoobi all kontrollimisel täheldati siniseid formazankristalle. DMEM eemaldati ja igasse süvendisse lisati 100 ui dimetüülsulfoksiidi (DMSO). Neeldumist mõõdeti mikrotiiterplaadi lugejaga. Seejärel arvutati rakkude elujõulisus (protsent) järgmiselt: [A570 (töödeldud rakud) - A570 (taust)] / [A570 (töötlemata rakud) - A570 (taust)] × 100 protsenti [70].

3.8. Statistiline analüüs

Iga hüdrolüsaadi proovi aruanne oli kolme sõltumatu korduva katse ja määramise keskmine väärtus. Keskmises ± standardhälves (SD) väljendatud tulemusi analüüsiti ühesuunalise ANOVA ja Duncani post hoc testiga, kasutades StatisticalAnalysis Systemi (versioon 20.0; SPSS, Armonk, NY, USA). Väärtused p < 0,05="" loeti="" statistiliseks="">

4. Järeldused

Selles uuringus uuriti RPH-de funktsioone. Eksperimentaalsed tulemused näitasid, et RPH-d sisaldasid fenoolseid ühendeid ja flavonoide ning avaldasid mitmesuguseid antioksüdantseid toimeid, nagu DPPH ja ABTS-i eemaldamisaktiivsus, redutseerimisvõime ja ORAC. Lisaks pärsisid RPH-d tõhusalttürosinaasja hüaluronidaasi aktiivsus. Proteaas oli kriitiline tegur, mis mõjutas RPH-de MW-mustreid. RPH-de analüüs näitab nende potentsiaali kasutada kosmeetikatoodete koostisosana.

cistanche kulturism

Viited

1. Ichihashi, M.; Ando, ​​H.; Yoshida, M.; Niki, Y.; Matsui, M. Naha fotovananemine. Vananemisvastane Med. 2009, 6, 46–59. [CrossRef]

2. Kim, J.-S.; Kim, D.; Kim, H.-J.; Jang, A. Eeslinaha želatiinhüdrolüsaatide kaitseefekt inimese naha fibroblastide UVB-indutseeritud fotovananemisele. Protsess. Biochem. 2018, 67, 118–126. [CrossRef]

3. Carocho, M.; Ferreira, IC Ülevaade antioksüdantidest, prooksüdantidest ja nendega seotud poleemikatest: looduslikud ja sünteetilised ühendid, sõelumis- ja analüüsimetoodikad ning tulevikuperspektiivid. Food Chem. Toksikool. 2013, 51, 15–25. [CrossRef]

4. Guo, X.; Zhang, J.; Ma, Y.; Tian, ​​S. Valkude piiratud hüdrolüüsi optimeerimine riisijäägis ja toodete funktsionaalsete omaduste iseloomustamine. J. Food Proc. Säilitada. 2013, 37, 245–253. [CrossRef]

5. Park, H.-Y.; Lee, K.-W.; Choi, H.-D. Riisikliide koostisosad: immunomoduleerivad ja terapeutilised tegevused. Toidu funktsioon. 2017, 8935–943. [CrossRef] [PubMed]

6. Zhou, K.; Canning, C.; Sun, S. Mikroobsete proteaaside ja ultrafiltratsiooni abil valmistatud riisivalgu hüdrolüsaatide mõju vabadele radikaalidele ja liha lipiidide oksüdatsioonile. LWT 2013, 50, 331–335. [CrossRef]

7. Piu', LD; Tassoni, A.; Serrazanetti, DI; Ferri, M.; Babini, E.; Tagliazucchi, D.; Gianotti, A. Tärklisetööstuse vedela kõrvalsaaduse kasutamine bioaktiivsete peptiidide tootmiseks riisi hüdrolüüsitud valkudest. Food Chem. 2014, 155, 199–206. [CrossRef]

8. Ferri, M.; Graen-Heedfeld, J.; Bretz, K.; Guillon, F.; Michelini, E.; Calabretta, MM; Lamborghini, M.; Gruarin, N.; Roda, A.;Kraft, A.; et al. Peptiidifraktsioonid, mis on saadud riisi kõrvalsaadustest keskkonnasõbraliku protsessi abil, näitavad in vitro tervisega seotud bioaktiivsust. PLOS ONE 2017, 12, e0170954. [CrossRef]

9. Wen, C.; Zhang, J.; Zhang, H.; Duan, Y.; Ma, H. Taimsetest valkudest pärinevad antioksüdantsed peptiidid: eraldamine, tuvastamine, toimemehhanism ja rakendamine toidusüsteemides: ülevaade. Trends Food Sci. Technol. 2020, 105, 308–322. [CrossRef]

10. Phelan, M.; Aherne, A.; FitzGerald, RJ; O'Brien, NM Kaseiinist saadud bioaktiivsed peptiidid: bioloogilised mõjud, tööstuslik kasutus, ohutusaspektid ja regulatiivne staatus. Int. Meierei J. 2009, 19, 643–654. [CrossRef]

11. Udenigwe, CC; Aluko, RE Toiduvalgust saadud bioaktiivsed peptiidid: tootmine, töötlemine ja võimalik kasu tervisele. J. Food Sci. 2012, 77, 11–24. [CrossRef] [PubMed]

12. Fardet, A.; Rock, E. Piimade, jogurtite, fermenteeritud piimade ja juustude antioksüdantide potentsiaal in vitro ja in vivo: tõendite narratiivne ülevaade. Nutr. Res. Rev 2018, 31, 52–70. [CrossRef]

13. Leach, JB; Kathryn, AB; Charles, WPJ; Christine, ES Fotoristseotud hüaluroonhappe hüdrogeelid: looduslikud, biolagunevad koekonstruktsioonid. Biotehnoloogia. Bioeng. 2003, 82, 578–589. [CrossRef]

14. Jegasothy, SM; Zabolotniaia, V.; Bielfeldt, S. Uue paikse nanohüaluroonhappe efektiivsus inimestel. J. Clin. Aesthet.Dermatol. 2014, 7, 27–29.

15. Ndlovu, G.; Fouche, G.; Tselanyane, M.; Cordier, W.; Steenkamp, ​​V. Nelja lõunapoolse Aafrika ravimtaimede vananemisvastase potentsiaali in vitro määramine. BMC täiendus. Altern. Med. 2013, 13, 304. [CrossRef]

16. Jiratchayamaethasakul, C.; Ding, Y.; Hwang, O.; Im, S.-T.; Jang, Y.; Myung, S.-W.; Lee, JM; Kim, H.-S.; Ko, S.-C.; Lee, S.-H. 22 halofüütide taimeekstrakti elastaasi, kollagenaasi, hüaluronidaasi ja türosinaasi inhibeeriva ja antioksüdantse toime in vitro skriinimine uudsete kosmeetikatoodete jaoks. Kala. Aquat. Sci. 2020, 23, 1.–9. [CrossRef]

17. Kang, M.; Park, S.-H.; Oh, SW; Lee, SE; Yoo, JA; Nho, YH; Lee, S.; Han, BS; Cho, JY; Lee, J. Resortsinooli anti-melanogeenset toimet vahendab cAMP signaaliülekande supressioon ja p38 MAPK signaaliülekande aktiveerimine. Biosci. Biotehnoloogia. Biochem.2018, 82, 1188–1196. [CrossRef]

18. Chatatikun, M.; Yamauchi, T.; Yamasaki, K.; Aiba, S.; Chiabchalard, A. Croton roxburghii ja Crotonsublyratus lehtede melanogeenne toime -MSH-ga stimuleeritud B16F10 rakkudes. J. Tradit. Täiendage. Med. 2019, 9, 66–72. [CrossRef] [PubMed]

19. Rizzello, CG; Nionelli, L.; Coda, R.; Gobbetti, M. Vähi ennetava peptiidi lunasiini süntees piimhappebakterite poolt hapukoore kääritamise ajal. Nutr. Vähk 2012, 64, 111–120. [CrossRef] [PubMed]

20. Rizzello, CG; Tagliazucchi, D.; Babini, E.; Rutella, GS; Saa, DLT; Gianotti, A. Bioaktiivsed peptiidid taimsetest toidumaatriksitest: uurimissuunad ja uudsed biotehnoloogiad sünteesiks ja taastamiseks. J. Funktsioon. Toidud 2016, 27, 549–569. [CrossRef]

21. Coscueta, ER; Campos, DA; Osório, H.; Nerli, BB; Pintado, M. Ensümaatiline sojavalgu hüdrolüüs: tööriist biofunktsionaalse toidu koostisosade tootmiseks. Food Chem. X 2019, 1, 100006. [CrossRef]

22. Aydemir, LY; Yemenicioglu, A. Kas valkudega seotud fenoolsed antioksüdandid kaunviljades on jäämäe osa? J. Plant. Biochem.Physiol. 2013, 1, 1–3. [CrossRef]

23. Huang, SH; Ng, LT Mõnede Taiwani kaubanduslike riisisortide polüfenoolide sisalduse ja bioaktiivsete koostisosade kvantifitseerimine. J. Food Compos. Anal. 2012, 26, 122–127. [CrossRef]

24. Yoshitomi, K.; Taniguchi, S.; Tanaka, K.; Uji, Y.; Akimitsu, K.; Gomi, K. Rice terpene süntaas 24 (OsTPS24) kodeerib jasmonaadile reageerivat monoterpeeni süntaasi, mis toodab antibakteriaalset terpeeni riisi patogeeni vastu. J. Plant. Physiol. 2016, 191 120–126. [CrossRef]

25. Kamolsukyeunyong, W.; Sukhaket, W.; Pitija, K.; Thorngkham, P.; Mahatheeranont, S.; Toojinda, T.; Vanavichit, A. Rice Seskviterpeen mängib olulist rolli riisis sisalduva pruuni plantopperi vastases antiksenoosis. Plants 2021, 10, 1049. [CrossRef][PubMed]

26. Liu, Y.; Wang, Z.; Li, H.; Liang, M.; Yang, L. Riisivalgu in vitro antioksüdantne aktiivsus, mida mõjutab leeliseline aste ja gastrointestinaalne proteaasi seedimine. J. Sci. Toidupõllumajandus. 2016, 96, 4940–4950. [CrossRef] [PubMed]

27. Phongthai, S.; D'Amico, S.; Schoenlechner, R.; Homthawornchoo, W.; Rawdkuen, S. In vitro gastrointestinaalse seedimisega stimuleeritud riisikliivalgu hüdrolüsaatide fraktsioneerimine ja antioksüdantsed omadused. Food Chem. 2018, 240, 156–164. [CrossRef][PubMed]

28. Huang, S.-L.; Wang, W.-H.; Zhong, X.-Y.; Lin, C.-T.; Lin, W.-S.; Chang, M.-Y.; Lin, Y.-S. Jatropha curcas L. Seed Shelli ja tuumaekstraktide antioksüdantsed omadused. Rakendus Sci. 2020, 10, 3279. [CrossRef]

29. Lin, Y.-S.; Lin, W.-S.; Tung, J.-W.; Cheng, Y.-C.; Chang, M.-Y.; Chen, C.-Y.; Huang, S.-L. Jujube puuviljaseemnete ja koore viljaliha antioksüdantsed omadused. Rakendus Sci. 2020, 10, 6007. [CrossRef]

30. Shahi, Z.; Sayyed-Alangi, SZ; Najafian, L. Ensüümi tüübi ja protsessiaja mõju hüdrolüüsiastmele, elektroforeesi ribadele ja rasvatustatud Bunium persicum Bioss'ist saadud hüdrolüüsitud valkude antioksüdantsetele omadustele. pressi kook. Heliyon 2020, 6, e03365. [CrossRef] [PubMed]

31. Xie, H.; Huang, J.; Woo, MW; Hu, J.; Xiong, H.; Zhao, Q. Külma ja kuuma ensüümi deaktiveerimise mõju riisipuru valgu hüdrolüsaatide struktuursetele ja funktsionaalsetele omadustele. Food Chem. 2021, 345, 128784. [CrossRef]

32. Rani, S.; Pooja, K.; Pal, GK Riisivalgu hüdrolüsaatide ja peptiidide uurimine, pöörates erilist tähelepanu antioksüdantide potentsiaalile: arvutuslikud meetodid bioaktiivsuse määramiseks. Trends Food Sci. Technol. 2018, 80, 61–70. [CrossRef]

33. Bisby, RH; Brooke, R.; Navaratnam, S. Antioksüdantide oksüdatsioonipotentsiaali mõju hapnikuradikaalide absorptsioonivõime (ORAC) analüüsis. Food Chem. 2008, 108, 1002–1007. [CrossRef]

34. Elias, RJ; Kellerby, SS; Decker, E. Valkude ja peptiidide antioksüdantne aktiivsus. Crit. Rev. Food Sci. Nutr. 2008, 48, 430–441.[CrossRef] [PubMed]

35. Minu, Y.; Li-Chan, E.; Jiang, B. (Eds.) Bioaktiivsed valgud ja peptiidid kui funktsionaalsed toidud ja toitained; Wiley-Blackwell: Hoboken, NJ, USA, 2010; lk 29–42.

36. Adebiyi, AP; Adebiyi, AO; Yamashita, J.; Ogawa, T.; Muramoto, K. Riisikliivalgu hüdrolüsaatidest saadud antioksüdatiivsete peptiidide puhastamine ja iseloomustamine. Eur. Food Res. Technol. 2008, 228, 553–563. [CrossRef]

37. Thamnarathip, P.; Jangchud, K.; Nitisinprasert, S.; Vardhanabhuti, B. Peptiidi molekulmassi tuvastamine kõrge antioksüdantse aktiivsusega riisi kliivalgu hüdrolüsaadist. J. Cereal Sci. 2016, 69, 329–335. [CrossRef]

38. Tacias-Pascacio, VG; Morellon-Sterling, R.; Siar, E.-H.; Tavano, O.; Berenguer-Murcia, Á.; Fernandez-Lafuente, R. Alcalaseiini kasutamine bioaktiivsete peptiidide tootmisel: ülevaade. Int. J. Biol. Macromol. 2020, 165, 2143–2196. [CrossRef] [PubMed]

39. Sarringkarin, W.; Laokuldilok, T. Antioksüdatiivsete omadustega liimjas riisikliivalgu hüdrolüsaadi tootmistingimuste optimeerimine. CMU J. Nat. Sci. 2017, 16, 1–18. [CrossRef]

40. Zhang, Q.; Tong, X.; Qi, B.; Wang, Z.; Li, Y.; Sui, X.; Jiang, L. Alcalase-hüdrolüüsitud sojahüdrolüsaadi antioksüdantse aktiivsuse muutused simuleeritud seedetrakti seedimisel ja transepiteliaalsel transpordil. J. Funktsioon. Toidud 2018, 42, 298–305. [CrossRef]

41. Tu, PTB; Tawata, S. Alpinia zerumbet'i kahe sordi eeterlike õlide antioksüdantsed, vananemisvastased ja melanogeensed omadused. Molecules 2015, 20, 16723–16740. [CrossRef]

42. Nishida, Y.; Sugahara, S.; Wada, K.; Toyohisa, D.; Tanaka, T.; Ono, M.; Yasuda, S. Scilla scilloides'i sibulate etüülatsetaadi ekstrakti pärssiv toime lipoksügenaasi ja hüaluronidaasi aktiivsusele. Pharm. Biol. 2014, 52, 1351–1357. [CrossRef]

43. Chen, H.-J.; Dai, F.-J.; Fan, S.-L.; Huang, Y.-C.; Chau, C.-F.; Lin, Y.-S.; Chen, C.-S. Riisi (Oryza sativa L.) valguhüdrolüsaadi hüaluronidaasi inhibeerimise kineetika. Rakendus Sci. 2020, 10, 9087. [CrossRef]

45. Girish, K.; Kemparaju, K. Võluliim hüaluronaan ja selle kustutuskumm hüaluronidaas: bioloogiline ülevaade. Life Sci. 2007, 80,1921–1943. [CrossRef] [PubMed]

45. Zolghadri, S.; Bahrami, A.; Khan, MTH; Munoz-Munoz, J.; Garcia-Molina, F.; Garcia-Canovas, F.; Saboury, AA Türosinaasi inhibiitorite põhjalik ülevaade. J. Enzym. Inhib. Med. Chem. 2019, 34, 279–309. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Seo, EJ; Hong, ES; Choi, MH; Kim, KS; Lee, SJ Rhamnus yoshinoi ekstraktide antioksüdant ja nahka valgendav toime. Korea J. Food Sci. Technol. 2010, 42, 750–754.

47. Ochiai, A.; Tanaka, S.; Tanaka, T.; Taniguchi, M. Riisikliivalk kui tugev türosinaasi inhibeeriva toimega antimelanogeensete peptiidide allikas. J. Nat. Prod. 2016, 79, 2545–2551. [CrossRef] [PubMed]

48. Kubglomsong, S.; Theerakulkait, C.; Reed, RL; Yang, L.; Maier, CS; Stevens, JF Hüdrolüüsitud riisikliidest saadud albumiinist türosinaasi inhibeerivate ja vaske kelaativate peptiidide eraldamine ja tuvastamine. J. Agric. Food Chem. 2018, 66, 8346–8354.[CrossRef]

49. Schurink, M.; van Berkel, WJ; Wichers, H.; Boeriu, CG Uued türosinaasi inhibeeriva toimega peptiidid. Peptides 2007, 28 485–495. [CrossRef]

50. Ishikawa, M.; Kawase, I.; Ishii, F. Aminohapete kombinatsioon vähendab pigmentatsiooni B16F0 melanoomirakkudes. Biol. Pharm.Bull. 2007, 30, 677–681. [CrossRef] [PubMed]

51. Zhang, R.; Wei, Y.; Li, M.; Cai, M.; Gu, R.; Ma, Y.; Chen, L.; Wang, J. Riisivalgu hüdrolüsaadi ja sellele iseloomulike peptiidide Leu-Leu-Lys, Leu-Pro-Lys ja pyroGlu-Lys melanogeneesi mõju UVB-indutseeritud inimese epidermise melanotsüütide rakkudele. FoodFunt. 2020, 11, 8757–8767. [CrossRef]

52. Wang, Y.; Cai, D.; Tema, M.; Wang, Z.; Qin, P.; Tan, T. L-piimhappe avatud fermentatiivne tootmine valge riisiklii abil samaaegse suhkrustamise ja kääritamise teel. Bioresour. Technol. 2015, 198, 664–672. [CrossRef] [PubMed]

53. Pan, M.; Jiang, TS; Pan, JL rapsi valgu hüdrolüsaatide antioksüdantne toime. Toidu bioprotsess. Technol. 2009, 4, 1144–1152.[CrossRef]

54. Chen, HM; Muramoto, K.; Yamauchi, F.; Nokihara, K. Sojaoa valgu seedimisest eraldatud antioksüdatiivsel peptiidil põhinevate kavandatud peptiidide antioksüdantne aktiivsus. J. Agric. Food Chem. 1996, 44, 2619–2623. [CrossRef]

55. Liu, Q.; Kong, B.; Xiong, YL; Xia, X. Sigade plasmavalgu hüdrolüsaadi antioksüdantne aktiivsus ja funktsionaalsed omadused, mida mõjutab hüdrolüüsi aste. Food Chem. 2010, 118, 403–410. [CrossRef]

57. Lemes, A.; Sala, L.; Maagid, JDC; Braga, ARC; Egea, MB; Fernandes, KF Ülevaade viimastest edusammudest valgurikaste jäätmete krüpteeritud bioaktiivsete peptiidide vallas. Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 950. [CrossRef] [PubMed]

57. Wang, J.-S.; Zhao, M.-M.; Zhao, Q.-Z.; Jiang, Y.-M. Nisugluteeni papaiini hüdrolüsaatide antioksüdantsed omadused erinevates oksüdatsioonisüsteemides. Food Chem. 2007, 101, 1658–1663. [CrossRef]

58. Gao, M.-T.; Kaneko, M.; Hirata, M.; Toorisaka, E.; Hano, T. Riisikliide kasutamine toitaineallikana fermentatiivse piimhappe tootmiseks. Bioresour. Technol. 2008, 99, 3659–3664. [CrossRef] [PubMed]

59. Huang, WY; Lin, YR; Ho, RF; Liu, HY; Lin, YS Vesilahuste mõju rohelise tee lehtede ekstraheerimisele. Sci. World J. 2013, 2013, 368350. [CrossRef]

60. Wathoni, N.; Shan, CY; Shan, WY; Rostinawati, T.; Indradi, RB; Pratiwi, R.; Muchtaridi, M. Indoneesia mangustanipuu (Garcinia mangostana L.) koorest pärineva pektiini iseloomustus ja antioksüdantne aktiivsus. Heliyon 2019, 5, e02299. [CrossRef]

61. Tsai, C.-C.; Chan, C.-F.; Huang, W.-Y.; Lin, J.-S.; Chan, P.; Liu, H.-Y.; Lin, Y.-S. Lactobacillus rhamnosus'e kulutatud kultuuri supernatandi rakendused kosmeetilises antioksüdatsiooni, valgendamise ja niiskuse säilitamise rakendustes. Molecules 2013, 18, 14161–14171.[CrossRef]

62. Huang, W.-Y.; Lee, P.-C.; Hsu, J.-C.; Lin, Y.-R.; Chen, H.-J.; Lin, Y.-S. Veekvaliteedi mõju Yerba Mate ekstraktipulbrite lahustumisele. Sci. World J. 2014, 2014, 1–6. [CrossRef] [PubMed]

63. Chan, C.-F.; Wu, C.-T.; Huang, W.-Y.; Lin, W.-S.; Wu, H.-W.; Huang, T.-K.; Chang, M.-Y.; Lin, Y.-S. Antioksüdatsioon ja melanogenees Erinevate dendrobium tosaense ekstraktide pärssimine. Molecules 2018, 23, 1810. [CrossRef] [PubMed]64. Wu, C.-T.; Agrawal, DC; Huang, W.-Y.; Hsu, H.-C.; Yang, S.-J.; Huang, S.-L.; Lin, Y.-S. Hüdrotermilise meetodiga saadud kasutatud kohvijahvatatud ekstraktide funktsionaalsuse analüüs. J. Chem. 2019, 2019, 1.–8. [CrossRef]

65. Dorta, E.; Rodríguez-Rodríguez, EM; Jiménez-Quezada, A.; Fuentes-Lemus, E.; Speisky, H.; Lissi, E.; López-Alarcón, C. Hapnikuradikaalide neeldumisvõime (ORAC) testi kasutamine mango (Mangifera indica L.) kõrvalsaaduste suutlikkuse ennustamiseks lihavalgu oksüdatsiooni inhibeerimiseks. Toidu anal. Meetodid 2016, 10, 330–338. [CrossRef]

66. Lin, Y.-S.; Chen, H.-J.; Huang, J.-P.; Lee, P.-C.; Tsai, C.-R.; Hsu, T.-F.; Huang, W.-Y. Türosinaasi inhibeeriva aktiivsuse kineetika, kasutades Vitis vinifera leheekstrakte. BioMed Res. Int. 2017, 2017, 5232680. [CrossRef] [PubMed]

67. Bidlingmeyer, BA; Cohen, SA; Tarvin, TL Aminohapete kiire analüüs kolonnieelse derivatiseerimise abil. J. Chromatogr. BBiomed. Sci. Rakendus 1984, 336, 93–104. [CrossRef]

68. Asai, TT; Oikawa, F.; Yoshikawa, K.; Inoue, N.; Sato, K. Toidust pärinevad kollageenipeptiidid, prolüül-hüdroksüproliin (Pro-Hyp) ja hüdroksüprolüülglütsiin (Hyp-Gly) suurendavad primaarse kultiveeritud hiire naha fibroblasti kasvu, kasutades veise loote seerumit, mis ei sisalda hüdroksüprolüülpeptiidi. Int. J. Mol. Sci. 2019, 21, 229. [CrossRef]

69. Schägger, H. Tricine–SDS–PAGE. Nat. Protoc. 2006, 1, 16–22. [CrossRef]

70. Diao, J.; Chi, Z.; Guo, Z.; Zhang, L. Mungoa valgu hüdrolüsaat moduleerib immuunvastust NF-kB raja kaudu inlipopolüsahhariidiga stimuleeritud RAW 264.7 makrofaagide kaudu. J. Food Sci. 2019, 84, 2652–2657.[CrossRef]