Kombineeritud bakterite kääritamise ja nende bioloogilise aktiivsuse ajal toodetud mikroobsete ensüümide uuring ⅲ

3. peatükk uuring ensüümide antioksüdantse aktiivsuse kohta

 

Paljud inimhaigused on tõestatud, et need on seotudaktiivsed hapnikud ja vabad radikaalidnagupõletik, arterioskleroos,vananemine, diabeet, vähkjneLiigsed vabad radikaalidKehas võib põhjustada valgu denatureerimist, rakkude kahjustusi ja surma ning isegi patoloogilisi muutusi kehas. Seetõttu otsivad paljud kodu- ja välismaal asuvad uuringud looduslike antioksüdantide koostisosade rikkaid toite, et ennetada ja reguleerida dieedi kaudu vabade radikaalide põhjustatud haigusi. Tänapäeval nihutavad inimesed kasvavate elatustasemetega järk -järgult oma fookuse oma kehale, nii et üha enam tervisetooteid tekivad lõputu voolu. Kuid tõeliselt kasulik pole lihtne olla. Ensüümid on omamoodi toit, mida saate ise inimeste elus valmistada. Maksumus pole eriti kõrge ja eeliseid on palju.
Mikroobsetel ensüümidel on mitmesuguseid tervisefunktsioone, näiteks antibakteriaalne ja põletikuvastane, soodustades metabolismi, parandades immuunsust, valgendamist ja vananemisvastast, võõrutust ja vähivastast. Praegu on mikroobsete ensüümide antioksüdantsete omaduste kohta suhteliselt vähe uuringuid kodus ja välismaal, nii et plaanime nende kohta põhjalikke uuringuid läbi viia. See artikkel võtab uurimisobjektina õuna -ensüümi ja kasutab kogu fenoolisisaldust, vähendades võimsust, dpph · vabade radikaalide, · vabade radikaalide, superoksiidi vabade radikaalide ja vabade radikaalide eemaldamise võimeks kui määramisindeksid, et viia läbi Apple ensüümi põhjalik ja süstemaatiline uurimine pärast kääritamist 3 kuud. Uuriti antioksüdantide koostisosade koostist ja sisaldust ning selle antioksüdantset toimet mõisteti.

Uued ravimtaimed cistanche, millel on palju rohkem antioksüdatsioonivõime kui bakterite kääritamine

Wecistanche toetav teenus-Hiina suurima tsistanche eksportija:
E -post: wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/tel: +86 15292862950

 

 

 

 

3.1 Materjalid ja meetodid

3.1.1 Materjalid

(1) eksperimentaalsed materjalid
Peske steriilsetes tingimustes värsked õunad steriilsetes tingimustes, kuivatage need looduslikult steriilses töölauas, koorige need ja viilutage hilisemaks kasutamiseks. Lisage valge suhkur ja õunad steriliseeritud klaasist purki massisuhtega 1: 1. Aktiveerige eksperimendi jaoks vajalikud bakterid ja nakatage need ensüümi vastavalt optimaalsele skeemile (see operatsiooni samm on kontrollrühmas välja jäetud), tihendage see ja asetage see jahedasse ja kuiva kohta. Pärast 3 -kuulist toatemperatuuri kääritamist võtke proov kogu tselluloosi sisaldava ensüümi vedeliku saamiseks ja filtreerige see. Enne asjakohaste andmete määramist võtke supernatant eksperimentaalse valimina ja tsentrifuugige valim kiirusel 10000 p / min 15 minutit kiires tsentrifuugis. Väärib märkimist, et ensüümide valmistamise käigus toimub tarbetu saastumise vältimiseks kõik meie toimingud steriilsetes tingimustes.

(2) Põhiinstrumendid
Spektrofotomeeter: V -1100, Shanghai Anting teaduslike instrumentide tehas;
Pidev temperatuuri veevann: HH -2, Wuhan Litian Technology Instrument Co., Ltd. Muud instrumendid on samad kui 2.1.3.

3.1.2 Meetodid

(1) kogu fenoolisisalduse määramine [53]
① Standardkõvera ettevalmistamine:
Kaaluge täpselt {{{0}}. Võtke 8 puhast 1 {{1 {0}}} ml mahulised kolsid, lisage 0, 0,2, 0,4, 0,4, 0,6, 0,8, 1,0, 1,2 ja 1,4 ml galüülhappe standardset standardset, lahjendage märgiks destilleeritud veega, mis on igas vettes 3 -protsendiline. Min, jahe ja lahjendage kuni 20 ml ning asetage 30 minutit toatemperatuuril. Kasutage spektrofotomeetrit, et mõõta neeldumist A lainepikkusel 650 nm ja tõmmata normaalse telje ja proovi kontsentratsioonina vertikaalteljena standardkõver. ② tuvastamine
Lisage destilleeritud vesi 100 μl, 200 μl, 300 μl, 400 μl ja 500 μl proovilahus 46 ml-ni, seejärel lisage 1 ml folin-fenoolreaktiivi, segage ühtlaselt, reageerige 3Mini jaoks, seejärel lisage 3ml 20% Naco3, raputage 25-kraadise konstantse temperatuuriga veega vees, mis on destilleeritud vees, mis on absorbeeritud 7-aastaseks vees. Spektrofotomeeter. Fenooli kogusisaldust väljendatakse gallushappe ekvivalentidena ja fenooli kogusisaldus arvutatakse vastavalt standardkõvera võrrandile.

(2) Redutseerimise test [54]
Lisage 1 0 0 μl, 2 0 0μl, 300μl, 400μl, 400 μl ja 500 μl proovi 2,5 ml fosfaatpuhvrile kontsentratsiooniga 0,2mol/l ja pH väärtus 6,6, aidake 2,5ml -i kontsentratsiooniga ja v 50 kraadi 30 minutit. Seejärel lisage 2,5 ml trikloroäädikhapet (mass/maht) massi kontsentratsiooniga 10%ja tsentrifuugis kiirusel 3000 p/min 10 minutit kiires tsentrifuugis. Vahetult pärast väljavõtmist võtke 2,5 ml supernatanti mahulisse kolbi, lisage 2,5 ml destilleeritud vett ja 0,5 ml raudkloriidi (mass/maht) massi kontsentratsiooniga 0,1%. Kasutage tühja juhtimisena destilleeritud vett ja mõõtke neeldumine A lainepikkusel 700Nm, kasutades spektrofotomeetri abil. Võimu vähendamise tugevust saab hinnata neeldumisväärtuse järgi. Mida suurem on neeldumisväärtus, seda tugevam on redutseeriv jõud.

 

(3) Superoksiidi anioonide vabade radikaalide eemaldamise efekti määramine [55]

Võtke 4,5 ml 0. Lisage 1 ml ensüümiproovilahust kontsentratsioonidega vastavalt 10%, 20%, 30%, 40%ja 50%ning 0,4 ml 25 mmol/L pürogallooli lahust. Segage hästi ja reageerige 5 minutit 25 -kraadises veevannis. Reaktsiooni lõpetamiseks lisage 1,0 ml 8 mol/l HCl. Kasutage võrdlusena Tris-HCl puhvrit ja kasutage neeldumise A mõõtmiseks spektrofotomeetri abil lainepikkusel 299 nm. Tühja kontrollrühma jaoks kasutati proovi asemel 1 ml lahusti. O {2- tükeldamiskiirus arvutati vastavalt valemile 3.1: o 2- hambumiskiirus (%) =} (a {1- a2)/a1 × 100 (3.1), kus: a1 on tühja toru neeldumine; A2 on proovi neeldumine.

(4) Hüdroksüülradikaalide koristamise mõju määramine [56]

1 0 0μl, 200 μl, 300 μl, 400 μl, 500 μl proovilahust lisati veega 2 ml, seejärel lisati 1,4 ml vesinikperoksiidi, mille molaarmassi kontsentratsioon oli 6 mmol/L, seejärel lisati 0,6 ml naatriumsalütsüülate ferr -massiga kontsentratsiooniga amolf -kontsentratsiooniga 20 mmol/L -ga. 1,5 mmol/L ja kuumutatud konstantses temperatuurivannis 37 kraadi juures 1 tunni jooksul. Reguleerige destilleeritud veega nulli ja mõõtke neeldumine A lainepikkusel 562nm, kasutades spektrofotomeetri abil. Tehke iga ravi jaoks 3 kordust. Arvutage hüdroksüülradikaalse hävitamise kiirus vastavalt valemile 3.2: hüdroksüülradikaalse hävitamise kiirus (%)=[(a 1- a2)/a1] × 100 (3,2) kus: A1 on tühja keskmine neeldumine; A2 on proovilahuse keskmine neeldumine. (5) DPPH vabade radikaalide eemaldamise efekti määramine [57]

Uued ravimtaimed cistanche, millel on palju rohkem antioksüdatsioonivõime kui bakterite kääritamine

 

Täpselt täpselt 2 ml ensüümiproovilahust, mille kontsentratsioon on 1 0%, 20%, 30%, 40%ja 50%10 ml ruumala, lisage seejärel mahulisse kolbi 2 ml 80%DPPH etanooli vesilahust. Molaarmassi kontsentratsioon on 2 × 10-4 mol/L. Pärast segamist laske sellel 30 minutit toatemperatuuril seista. Kasutades võrdlusna 80% etanoolilahust, mõõtke proovi neeldumine lainepikkusel 517 nm, mis registreeritakse A1 -na. Segage 2 ml DPPH lahust ja 2 ml etanoolilahust massi kontsentratsiooniga 80% ja mõõtke nende neeldumist samal lainepikkusel, mis registreeritakse kui A0. Segage 2 ml ensüümilahust ja 2 ml etanoolilahust massi kontsentratsiooniga 80% ja mõõtke nende neeldumist samal lainepikkusel, mis registreeritakse kui A2. Arvutage DPPH vabade radikaalide koristamise kiirus vastavalt valemile 3.3:
DPPH vaba radikaalse eemaldamise kiirus (%) {{{0}}} [1-} (a 1- a2)/a 0] × 100 (3.3), kus: A1 on 2 ml dpph 80% -s lahenduse neeldumine; A2 on 2 ml ensüümi lahuse segatud lahuse neeldumine ja massi kontsentratsiooni järgi 2 ml 80% etanooli; A0 on 2 ml DPPH lahuse segatud lahuse neeldumine ja massi kontsentratsiooni järgi 2 ml 80% etanooli.

(6) ABTS vabade radikaalide eemaldamise võime [58]
Lisage teatud kogus kaaliumsulfaati 7 mmol/L abst lahusele, kuni segatud lahuse lõppkontsentratsioon on 2,45 mmol/L. Asetage segatud lahus jahedasse ja kuiva kohta toatemperatuuril 12–16 tundi. 1μl, 3 μl, 5 μl, 7 μl ja 9 μl proovilahust täiendati 10 μl -ni 5 mmol/l pH7,4 fosfaatpuhvriga ja segati seejärel ühtlaselt 10 ml ülaltoodud kaaliumsulfaadi ja ABTS -i segatud lahusega ning lasteti reageerida 30 -kraadise ja reaktsiooniajaga 5MIN. Null destilleeritud veega ja mõõtke neeldumine A lainepikkusel 734nm, kasutades spektrofotomeetri abil. Arvutage ABTS -i vabade radikaalide eemaldamise kiirus vastavalt valemile 3.4:
ABTS vabade radikaalide hävitamise kiirus (%)=[(a 1- a2)/a1] × 100 (3.4) kus: a1 on tühja kontrollrühma neeldumine; A2 on eksperimentaalse rühma neeldumine

 

3.2 Tulemused ja analüüs

3.2.1 kogu fenoolisisaldus

(1) standardkõver
Fenooli kogusisalduse standardkõver tõmmati gallushappe kontsentratsiooniga horisontaalteljena ja neeldumisväärtus A vertikaalteljena, nagu on näidatud joonisel 3.1.

 

Joonis 3.1 Kogu fenooli sisalduse standardkõver

Jooniselt.3.1 näeme, et standardkõvera võrrand on y =11. 375x +0. 2593 (x on proovi kontsentratsioon, y on neeldumine), r 2=0. 9981.

(2) proovide määramine

Apple ensüümide fenooli sisalduse määramise tulemused kontrollrühmas ja eksperimentaalrühmas erinevates kontsentratsioonides on näidatud joonisel 3.2.

 

 

 

Joonis 3.2 Kogu fenoolisisalduse kõver

Nagu on näidatud joonisel 3.2, on nii kontrollrühma kui ka eksperimentaalrühma Apple ensüümidel fenoolne sisaldus kõrge ja mõlemad suurenevad lisatud proovilahuse suurenemisega. Samas kontsentratsioonigradiendis suurenes Apple ensüümi kogu fenoolsisaldus kontrollrühmas 0. 673 mg -lt 2,8 0 7 mg -ni ja eksperimentaalse rühma kogu fenoolsisaldus suurenes 0,961 mg -lt 4,185 mg -ni. Katserühma kogu fenoolsisaldus on palju suurem kui kontrollrühma oma ja ülespoole suunatud trend on ilmsem. Fenoolse kogu sisalduse kohaselt on eksperimentaalrühma üldine antioksüdantne aktiivsus suurem kui kontrollrühma oma.

 

3.2.2 Vähendav võimsus

Apple ensüümide võimsuse määramise vähendamise tulemused kontrollrühmas ja eksperimentaalrühmas erinevates kontsentratsioonides on näidatud joonisel 3.3.

 

Nagu on näidatud joonisel 3.3, on Apple ensüümide jõu vähendamise muutuv suundumus sarnane kogu fenooli sisalduse muutuva suundumusega. Katserühma redutseeriv võimsus on suurem kui kontrollrühma ja kas see on eksperimentaalne või kontrollrühm, katses esitatud kontsentratsioonivahemikus näitab redutseeriv võimsus suurenevat suundumust, suurendades lisatud proovilahendust. Eksperimentaalsed andmed kinnitasid ka, et võimsuse vähendamise osas on eksperimentaalse rühma antioksüdantne aktiivsus suurem kui kontrollrühma oma.

 

 

3.2.3 Superoksiidi anioonide vaba radikaalse koristamise võime

Juhtrühmas ja erinevates kontsentratsioonides eksperimentaalrühma superoksiidi anioonide vaba radikaalse kogumise võime tulemused on näidatud joonisel 3.4.

Nagu on näidatud joonisel 3.4, on katserühma ja kontrollrühma vahel suur erinevus superoksiidi anioonide vabade radikaalide eemaldamise võimes. Katses esitatud kontsentratsioonivahemikus muutub katserühma superoksiidi anioonivaba radikaalse hävitamise võime kõige olulisemalt, kui proovi kontsentratsioon on 10–20%ja muutus pole ilmne pärast seda, kui kontsentratsioon on suurem kui 20%; Kui kontsentratsioon on 50%, on superoksiidi anioonivaba radikaalide eemaldamise võime koguni 85,4%. Kontrollrühma näidatud superoksiidide vaba radikaali eemaldamise võime saab trendiagrammilt selgelt näha. Kui ensüümi kontsentratsioon suureneb, suureneb see vabade radikaalide hävitamise võime, muutub aeglaselt ja kaldub järk -järgult stabiilsesse olekusse. Karbimisvõime ulatub maksimaalselt 42,6%-ni. Katserühm on kontrollrühmas peaaegu kaks korda suurem.

 

 

3.2.4 Hüdroksüülivaba radikaalide eemaldamise võime

Joonisel 3.5 on näidatud õuna ensüümide hüdroksüülivaba radikaalide eemaldamise võime ja eksperimentaalrühma erinevates kontsentratsioonides.

 

 

Joonis.3.5 Hüdroksüülivaba radikaalide eemaldamise kõver

 

Jooniselt 3.5 võib näha, et katses esitatud kontsentratsioonivahemikus suurenes ensüümide hüdroksüülivaba radikaalsed kogumisvõime eksperimentaalrühmas ja kontrollrühm lisatud koguse suurenemisega. Katserühma hüdroksüülivaba radikaalide eemaldamise võime oli madalam kui kontrollrühmas ja see toimis madala kontsentratsiooni korral väga halvasti. Suure kontsentratsiooni korral suurenes hüdroksüülivaba radikaalide kogumise võime märkimisväärselt. Põhjus võib olla, et kääritamisprotsessi ajal olid eksperimentaalrühma ja kontrollrühma õuna ensüümide mikroorganismide tüübid ja sisu erinevad ning iga kääritamise tekitatud toote sekundaarsete metaboliitide ja komponentide sisu oli erinev, seega oli näidatud antioksüdantne võime erinev.

 

3.2.5 DPPH · Vabade radikaalide eemaldamise võime

Võrreldes teiste avastamismeetoditega, kasutatakse DPPH · Vabade radikaalide eemaldamise võimet lühikese aja jooksul antioksüdantide aktiivsuse hindamiseks laialdaselt [59]. DPPH · vabade radikaalide eemaldamise võime erinevates kontsentratsioonides joonistati vastavalt kontrollrühma ja eksperimentaalsete rühma Apple ensüümide tulemustele, nagu on näidatud joonisel 3.6.

Nagu on näidatud joonisel 3.6, kui kontrollrühma Apple'i ensüümi kontsentratsioon oli alla 30%, oli DPPH · vabade radikaalide eemaldamise võime alla 50%, kuid eksperimentaalse rühma Apple'i ensüüm näitas ka kõrgemat DPPH · vaba radikaalide eemaldamise võime madalates kontsentratsioonides. Eksperimentaalsed tulemused näitavad, et Aspergillus oryzae, pärmi, termofiilse streptokoki ja Bulgaaria laktobacillus lisamine on kasulik ensüümi DPPH · vabade radikaalide eemaldamise võimele. Kui ensüümide kontsentratsioon on 50%, on see võime koguni 91,4%, mis on palju suurem kui 69,8%kontrollrühmast samas kontsentratsioonis.

 

3.2.6 ABTS radikaalne hävitamisvõime

Apple ensüümide ABTS radikaalse hävitamise tulemused kontrollrühmas ja eksperimentaalrühma erinevates kontsentratsioonides on näidatud joonisel 3.7.

Joonis 3.7 ABTS -i radikaalse hävitamisvõime kõver
Jooniselt 3.7 võib näha, et Apple ensüümide hävitamise kiirus eksperimentaalses rühmas on suurem, kui ensüümi lisamismaht on suurem kui 5 μl. Ereli jt uurimus. näitas, et ABTS -radikaalide hävitamisvõime sõltub suuresti fenoolsete ainete kõrgemast kontsentratsioonist [60]. Fenooli sisalduse määramise tulemused näitasid, et eksperimentaalrühma kogu fenoolisisaldus oli suurem kui kontrollrühmas. Joonisel 3.7 esitatud eksperimentaalsed tulemused kinnitasid lihtsalt, et ABTS radikaalide hävitamisvõime on suurem kui kontrollrühma oma.

 

3.3 Selle peatüki kokkuvõte

Selles peatükis uuritakse seos kääritamisel toodetud õuna ensüümide antioksüdantse aktiivsuse vahel nelja valitud õunte tüve, ensüümiproovide kontsentratsiooni ja antioksüdantide aktiivsete komponentide võrdlemisel ning vabade radikaalide koristamisvõime eksperimentaalrühma ja kontrollrühma vahel. Eksperimentaalsed tulemused näitavad, et Apple ensüümi kogu fenoolisisaldus kontrollrühmas on madalam kui eksperimentaalrühmas ja selle redutseeriv võimsus, superoksiidi anioonivaba radikaal, DPPH vabade radikaalide ja vabade radikaalide eemaldamise võime on parem kui kontrollrühmas; Kontrollrühma ensüümil on eriti hea hävitamisvõime hüdroksüülivabade radikaalide jaoks.
Üldiselt näitas eksperimentaalrühm suuremat antioksüdantset toimet, mis kinnitas veelgi tüvede kunstliku lisamise teostatavust mikroobsete ensüümide valmistamiseks. Sel moel on mikroobse ensüümi toidud originaalse loodusliku kääritamise alusel rohkem inimeste tervisele kasulikke aineid ja nad saavad paremini areneda inimeste poole, mida inimesed eeldavad.