Cistanche-põhise Xian Fang Huo Mingi joogi mehhaaniline uuring kroonilise prostatiidi ravis: integreeritud võrgufarmakoloogia ja eksperimentaalne valideerimine, mis on suunatud PI3K/Akt/NF-κB rajale
Oct 27, 2025
2. Meetodid
2.1 Võrgufarmakoloogia ja molekulaarse dokkimise analüüs
2.1.1 Aktiivsete komponentide ja haiguse sihtmärkide tuvastamine
TCMSP andmebaasi kasutades skriiniti Cistanche-põhise Xian Fang Huo Ming joogi (XFHY) aktiivseid ühendeid ADME kriteeriumidega: suukaudne biosaadavus (OB) suurem või võrdne 30% ja ravimisarnasus (DL) suurem või võrdne 0,18. Nende ühendite potentsiaalsed sihtmärgid tuvastati SwissTargetPrediction abil (tõenäosus on suurem või võrdne 0,1). Cytoscape 3.9.1 abil konstrueeriti "ürdi-ühendi sihtmärgi" võrgustik ja viis parimat ühendit tuvastati tsentraalsuse astme põhjal. Samal ajal koguti GeneCardsist, OMIM-ist ja DisGeNETist CP/CPPS-iga seotud haiguste sihtmärgid, kasutades selliseid märksõnu nagu "krooniline prostatiit" ja "prostatiit".
Tistanche ekstrakti toidulisandid eesnäärme ja neerude tervise jaoks PhGs75% Ech 30% Act 12%
Võtke meiega ühendust osta kohe
2.1.2 Ristmiku sihtmärkide tuvastamine
XFHY ühendi sihtmärkide ja CP / CPPS haiguse sihtmärkide vaheline ristumiskoht määrati Venny 2.1 tarkvara abil, et luua Venni diagramm, mis tuvastab peamised potentsiaalsed terapeutilised sihtmärgid.
2.1.3 PPI võrgu ehitamine
Ristmiku sihtmärgid imporditi andmebaasi STRING (liik: Homo sapiens; interaktsiooniskoor > 0,9). Saadud valgu ja valgu interaktsiooni (PPI) võrk imporditi Cytoscape'i ja põhisihtmärgid tuvastati CytoHubba abil, võttes aluseks võrgu topoloogia parameetrid, nagu aste, vaheldus ja lähedus.
2.1.4 Võrgustiku "Maitsetaim-ühend-siht-tee" ehitamine
Kasutades Cytoscape 3.9.1, koostati võrgumudel, et visualiseerida seost XFHY, selle aktiivsete ühendite, sihtmärkide ja signaaliradade vahel. Võtmesõlmede määramiseks analüüsiti võrguparameetreid.
2.1.5 GO ja KEGG rikastamise analüüs
Intersection targets were uploaded to the DAVID database for Gene Ontology (GO) and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) pathway enrichment analysis (P < 0.05). Tulemused visualiseeriti bioinformaatika tööriistade abil.
2.1.6 Molekulaarne dokkimine
Ligandidena kasutati viit parimat ühendit (nt kvertsetiin, kaempferool) ja retseptoritena PPI võrgustiku kümmet peamist sihtmärki. Valgustruktuurid saadi Protein Data Bankist (PDB), eeltöödeldud AutoDockTools 1.5.6 abil (sealhulgas dehüdratsioon, hüdrogeenimine ja laengu lisamine) ja teisendati PDBQT-vormingusse. MOL2-vormingus ligandistruktuurid saadi TCMSP-st ja teisendati sarnaselt. Molekulaarne dokkimine viidi läbi AutoDocki abil ja sidumisafiinsused visualiseeriti GraphPad Prism 8 abil.
2.2 Loomkatse
2.2.1 Mudeli loomine
CP/CPPS modelleerimiseks kasutati keemilise induktsiooni meetodit. Rotid anesteseeriti 3% pentobarbitaalnaatriumiga (50 mg/kg). A midline incision was made in the lower abdomen, and 80 μL of 3% λ-carrageenan was injected into each lateral lobe of the prostate (total 160 μL). Näidisoperatsiooni saanud rotid said soolalahuse süsti. Operatsioonijärgne hooldus hõlmas paikset antibiootikumide kasutamist. On day 7, modeling success was confirmed via gross and histological examination of the prostate (edema, congestion, epithelial degeneration, and inflammatory infiltration).
2.2.2 Rühmitamine ja käsitlemine
Seitsekümmend isast SD-rotti jagati juhuslikult seitsmesse rühma (n=10):
Tavaline kontroll
Näidisoperatsioon
Mudeli juhtimine
Madala, keskmise ja suure annusega XFHY rühmad
Tamsulosiini rühm
Annused arvutati inimese ekvivalentdoosi (7,29 g/kg/päevas) põhjal. XFHY-d manustati suukaudse sondiga 0,3645 g/ml (madal) ja 1,458 g/ml (kõrge). Tamsulosiini manustati annuses 0,0018 mg/kg. Kõik ravid kestsid 28 päeva, alustades 8 päeva pärast modelleerimist.
2.2.3 Histopatoloogiline hindamine
Vasaku eesnäärme lobud fikseeriti 4% paraformaldehüüdis, sisestati parafiini, lõigati ja värviti hematoksüliin-eosiiniga. Histoloogilisi muutusi hinnati valgusmikroskoopia abil.
2.2.4 ELISA põletikumarkerite jaoks
Kõhuaordi kaudu kogutud veri tsentrifuugiti ning seerumi TNF-, IL-1 ja COX-2 tasemeid mõõdeti ELISA komplektidega vastavalt tootja juhistele.
2.2.5 qRT-PCR geeniekspressiooniks
Kogu RNA ekstraheeriti eesnäärmekoest ja pöördtranskribeeriti cDNA-ks. Reaalajas PCR viidi läbi, kasutades PI3K, Akt ja NF-κB p65 jaoks spetsiifilisi praimereid. GAPDH-d kasutati sisekontrollina. Suhteline ekspressioon arvutati 2^-ΔΔCt meetodil.
2.2.6 Western blot valgu ekspressiooniks
Valk ekstraheeriti külmutatud eesnäärmekoest, kasutades RIPA puhvrit. Pärast kvantifitseerimist eraldati valgud SDS-PAGE abil, kanti üle PVDF membraanidele ja sondeeriti primaarsete antikehadega PI3K, p-PI3K, Akt, p-Akt (Ser473/Thr308), NF-κB p65 ja p-NF-κB p65 vastu. Kasutati HRP-ga konjugeeritud sekundaarseid antikehi ja ECL tuvastamist. Riba intensiivsused kvantifitseeriti ImageJ abil.
2.2.7 Statistiline analüüs
Kõik katsed viidi läbi kolmes eksemplaris. Andmeid analüüsiti GraphPad Prism 8 abil ja väljendati kui keskmine ± standardhälve. Mitme rühma võrdlemiseks kasutati ühesuunalist ANOVA-d, millele järgnes LSD või Dunnetti test. P < 0,05 loeti statistiliselt oluliseks.
3. Tulemused
3.1 Võrgufarmakoloogia ja molekulaarne dokkimine
Liit-sihi ristmik:912 ühendi sihtmärki ja 2197 haiguse sihtmärki andsid 374 kattuvat sihtmärki.
Peamised tuvastatud ühendid:Kvertsetiin, kaempferool, pelargonidiin, naringeniin ja byakangelikool – kõik on teadaoleva põletikuvastase ja antioksüdantse toimega.
PPI analüüs:Peamised sihtmärgid olid TP53, AKT1, EGFR, TNF, IL6, STAT3, BCL2, CASP3, CCND1 ja NFKB1.
GO ja KEGG rikastamine:Rikastatud rajad hõlmasid PI3K / Akt, MAPK, RAS ja põletikuga seotud bioloogilisi protsesse.
Molekulaarne dokkimine:Täheldati tugevat seondumisafiinsust põhisihtmärkide ja peamiste ühendite vahel (sidumisenergia alla -5,0 kcal/mol või sellega võrdne), mis viitab kõrgele bioaktiivsusele.
3.2 Eksperimentaalne valideerimine
3.2.1 HE värvimine
Mudelrühma rottidel ilmnes näärmeepiteeli degeneratsioon, stroomaturse ja ulatuslik põletikuline infiltratsioon. XFHY-ga ravitud rühmad vähendasid põletikku, eriti keskmise ja suure annusega rühmades.
3.2.2 Põletiku markeri tasemed
Võrreldes mudelrühmaga vähendas XFHY oluliselt seerumi TNF-, IL-1 ja COX-2 taset (P < 0,01), mis viitab põletikuvastasele efektiivsusele.
3.2.3 Geeni ekspressioon (qPCR)
XFHY vähendas oluliselt PI3K, Akt ja NF-KB p65 mRNA taset annusest sõltuval viisil. Ainult väikeses annuses vähendatud Akt ja p65; keskmise ja suure annusega rühmad näitasid laiemat supressiooni.
3.2.4 Valgu ekspressioon (Western Blot)
PI3K, Akt (Ser473, Thr308) ja NF-κB p65 fosforüülimise tasemed olid mudelrühmas märkimisväärselt tõusnud ja XFHY-ga ravitud rottidel vähenenud, eriti keskmiste ja suurte annuste korral.
4. Arutelu
Kliinilisele kogemusele tuginedes kinnitab käesolev uuring sedaCistanche-põhine XFHYomab märkimisväärset põletikuvastast toimet CP/CPPS-ile. Võrgufarmakoloogia tuvastas eelkõige peamised aktiivsed ühendidkvertsetiin, millel on tõestatud põletikuvastased ja antioksüdantsed omadused. PPI analüüs tõi esile sellised eesmärgid naguTNF, IL6jaAKT1, mis on prostatiidi põletikul kesksel kohal.
KEGG analüüs soovitas kaasataPI3K/Akt/NF-κBsignalisatsioonirada, mis on põletikus ja immuunregulatsioonis laialdaselt tunnustatud. XFHY võib avaldada terapeutilist toimet, inhibeerides seda rada, vähendades seega põletikueelset tsütokiini ekspressiooni.
Lisaks näib, et Akt (Ser473 ja Thr308) topeltfosforüülimine on NF-κB aktiveerimise jaoks kriitilise tähtsusega. XFHY inhibeeris fosforüülimist mõlemas kohas, mis viitab NF-κB signaaliülekande pärssimisele ülesvoolu Akt supressiooni kaudu.
Järeldus
XFHY võib leevendada CP/CPPS-i, blokeerides PI3K/Akt/NF-κB raja, vähendadesIL-1, TNF-jaCOX-2ja eesnäärmekoe põletikuliste reaktsioonide leevendamine. Raja osalus, eriti Akt fosforüülimine Ser473 ja Thr308 juures, annab potentsiaalse mehaanilise seletuse XFHY efektiivsusele. Täiendavad uuringud on õigustatud, et kinnitada, kas PI3K / Akt / NF-κB on lõplik rada, mille kaudu XFHY oma terapeutilist toimet avaldab.
Huvide konflikt:
Autorid ei deklareeri huvide konflikti.
Andke mulle teada, kui soovite agraafiline abstraktne, kokkuvõtlik tabel, võiPowerPointi esitlusselle uuringu põhjal!
