Klotho puudulikkus intensiivistab hüpoksiast põhjustatud IFN-i ekspressiooni / RIG-I ülesreguleerimise kaudu neerudes
Mar 25, 2022
Abstraktne Hüpoksia on tavaline viis lõppstaadiumis progresseerumisenineeruhaigus.Retinoehappega indutseeritav geen I (RIG-I) kodeerib RNA helikaasi, mis tunneb ära viirused, sealhulgas SARS-CoV2, mis vastutab interferooni (IFN)-a/ tootmise eest, et vältida viirusnakkuse levikut. Hiljuti leiti hüpoksilistes tingimustes RIG-l aktivatsioon ja klotodefitsiit intensiivistas RIG-I aktiveerimist hiire ajus. Nende funktsioonide roll neerupõletikus on siiski raskesti mõistetav. Siin uuriti in vitro uuringute jaoks RIG-I ja IFN-a/ ekspressiooni normaalsetel rottidelneerud(NRK)-52E-rakud, inkubeeritud hüpoksilistes tingimustes (1 protsent O2). Järgmisena transfekteeriti RIG-I-le või segatud siRNA-le suunatud siRNA NRK52E rakkudesse, et uurida RIG-I ja IFN-a / ß ekspressiooni hüpoksilistes tingimustes. Samuti uurisime RIG-I ja IFN-a / ekspressioonitasemeid 33 inimeselneerudbiopsiaproovid, millel on diagnoositud lgA nefropaatia. In vivo uuringu jaoks kutsusime esile neerude hüpoksia, kinnitades neeruarteri 10 minutiks metsikut tüüpi hiirtel (WT hiired) ja Klotho-knockout hiirtel (KIT / hiired). Inkubeerimine hüpoksilistes tingimustes suurendas RIG-lI ja IFN-a / ekspressiooni NRK52E rakkudes. Nende ülesreguleerimist inhibeeriti NRK52E rakkudes, mis olid transfekteeritud siRNA-ga, mis oli suunatud RIG-I. IgA nefropaatiaga patsientidel näitas neerubiopsiaproovide immunohistokeemiline värvimine, et RIG-I ekspressioon oli korrelatsioonis IFN-a/ ekspressiooniga (r=0.57,P).<0.001, and="" r=""><0.001, respectively).="" the="" expression="" levels="" of="" rig-i="" and="" ifn-a/β="" were="" upregulated="" in="">neerudhüpoksiliste WT hiirte puhul ja hüpoksilistel hiirtel täheldati edasist ülesreguleerimist. Need leiud viitavad sellele, et hüpoksia indutseerib IFN-a/ ekspressiooni RIG-I ülesreguleerimise kaudu ja et kloto puudulikkus intensiivistab seda hüpoksiast põhjustatud ekspressioonineerud.
Märksõnad:neeruhaigus; neerurakud; neeru asendamine; neerukahjustus; neerud
CISTANCHE PARANDAB NEERU/NEERU FUNKTSIOONI
SissejuhatusKroonilineneeruhaigus2017. aastal mõjutas krooniline neeruhaigus kogu maailmas 697,5 miljonit inimest [1], seega on see hästi tunnustatud kui suur terviseprobleem. Kroonilise neeruhaiguse progresseerumise pidurdamiseks kasutatakse kliinilises keskkonnas reniin-angiotensiin-aldosterooni süsteemi (RAAS) inhibiitoreid [2,3]. Nende kasulik mõju on aga piiratud ja paljud patsiendid vajavad lõpuks neeruasendusravi[4]. Patoloogiliselt on krooniline põletik ja interstitsiaalne fibroos kroonilise neeruhaiguse ühised tunnused, olenemata primaarsest haigusest [5]. Kuigi transformeeriv kasvufaktor (TGF){10}} mängib interstitsiaalse fibroosi [6-8] tekkes keskset rolli, näitasid varasemad uuringud, et põletikuliste rakkude infiltratsioon vastutab TGF-i tootmise eest.{12} } [9]. Need leiud viitavad sellele, et põletik on interstitsiaalse fibroosi ülesvoolu sündmus ja põletik on kroonilise neeruhaiguse terapeutiline sihtmärk.
Hüpoksia on seisund, mille korral ebapiisav hapnik tungib kudedesse. Rakulise vastusena hüpoksiale mängivad hüpoksiast indutseeritavad tegurid (HIF) olulist rolli koekahjustuste ennetamisel [10-12]. Tõsine hüpoksia põhjustab aga ägedaid vaskulaarseid haigusi, nagu insult [13], stenokardia [14] ja perifeersete arterite haigus [15]. Viimasel ajal on teatatud, et krooniline hüpoksia, näiteks uneapnoe, soodustab ka erinevate haiguste teket [16]. Seosesneerud, hüpoksia intensiivistub väidetavalt kroonilise neeruhaiguse staadiumi progresseerumisel ja seda peetakse praegu tavaliseks patofüsioloogiaks, mis viib lõppstaadiumisseneeruhaigus[17]. Nagu eespool mainitud, peetakse põletikku ülesvoolu sündmuseks, seega tuleks molekulaarsel tasandil selgitada mehhanismi, mille abil hüpoksia põletikku esile kutsub. Põletikku iseloomustavad valu, kuumus, punetus, turse ja funktsiooni kaotus[18]. Põhimõtteliselt toimib see siiski rakukahjustuse algpõhjuse kõrvaldamiseks ning nekrootiliste rakkude ja kahjustatud koe eemaldamiseks. Igal juhul ei ole põletik spetsiifiline reaktsioon ja kaasasündinud immuunsus osaleb peamiselt põletiku algprotsessis interferooni (IFN) tootmise kaudu / [19]. Kaasasündinud immuunsusega seotud tegurite hulgas on retinoehappega indutseeritav geen I (RIG-I) vastutav immuunvastuse eest viirusnakkustele[20. Nimelt on hiljutised uuringud näidanud, et hüpoksia reguleerib RIG-I ekspressiooni ajus ja maksas üles, mille tulemuseks on IFN- / tootmine [21,22]. Kuid hüpoksia roll RIG-I-vahendatud IFN-/B ekspressioonisneerudjääb tabamatuks.
Klothost teatati esmakordselt kui vananemisvastast valku [23]. Tõepoolest, klotopuudulike hiirte eluiga on lühem, millega kaasnevad inimese vananemist meenutavad fenotüübid. Seevastu klothotransgeensete hiirte eluiga on pikem [24]. Renoprotektiivsete toimete osas on leitud, et neeruhaiguste eksperimentaalsetes mudelites suurendab kloto puudulikkus neerukahjustusi, samas kui kloto üleekspressioon või klothovalgu manustamine parandab seda [25]. Klotho valk eksisteerib kolmes vormis: membraan, sekreteeritud ja rakusisene koto. Nende hulgas on teatatud, et rakusisene klotho pärsib RIG-I ekspressiooni koos põletikuga [26], suurendades võimalust, et kloto puudulikkus süvendab hüpoksiast põhjustatud RIG-I ja IFN- / in hüpoksiast tingitud ülesreguleerimist.neerud.Need leiud panid meid oletama, et RIG-I ja IFN-/ ekspressioon suurenes hüpoksilistes tingimustes neerutuubulirakkude rakuliinis ja et nende hüpoksiast põhjustatud ülesreguleerimine intensiivistus kloto-knockoutiga hiirtel (KI-7 hiired). Selles uuringus näitame, et hüpoksia reguleerib normaalsetel rottidel nii RIG-I kui ka IFN-a /neerudrakud (NRK-52E) ja hiire neerud. Samuti näitame, et RIG-I vastutab hüpoksiast põhjustatud IFN-c/B ülesreguleerimise eest.neerudIgA nefropaatiaga diagnoositud patsientide proovides leiti, et RIG-I ekspressioon on positiivses korrelatsioonis IFN- / . Lõpuks intensiivistus hüpoksiast põhjustatud RIG-I ja IFN-/ ülesreguleerimine KI-/- hiirtel. Need leiud viitavad sellele, et kloto puudulikkus intensiivistab hüpoksiast põhjustatud IFN- / ekspressiooni RIG-I ülesreguleerimise kauduneerud.
CISTANCHE PARANDAB neeru-/NEerupuudulikkust
Materjalid ja meetodid LoomadIsased C57BL/6J metsiktüüpi (WT) hiired (vanuses 8 nädalat ja kaaluga 20-25 g) saadi ettevõttest Charles River Laboratories Japan (Yokohama, Jaapan). Isased hiired (vanused 6 nädalat ja kaaluga umbes 15 g) osteti ettevõttest CLEA Japan, Inc. Hiiri hoiti Hiroshima ülikooli laboratoorsete loomade teaduse instituudis (Hiroshima, Jaapan), nagu eelnevalt kirjeldatud [27]. Kõik katsed kiitis heaks. Hiroshima ülikooli institutsionaalne loomade hooldamise ja kasutamise komitee (lubade numbrid: A19-158 ja 2019-156) ning need viidi läbi vastavalt riiklike tervishoiuinstituutide (NIH) juhistele laboriloomade kasutamise kohta. WT- ja KI-'hiired jaotati kontrollrühma või hüpoksiarühma (n=5igas rühmas). Hüpoksilised seisundid kutsuti esile vasaku neeruarteri klambriga 10 minutiks üldnarkoosis (0,3 mg/kg medetomidiini, 4 mg/kg midasolaami ja 5 mg/kg butorfanooli)[28]. Kontrollrühma hiirtele tehti võltsoperatsioon, mis oli sama protseduur nagu hüpoksia rühma hiirtel, välja arvatud arterite ligeerimise puudumine. Pärast 10-minutilist hüpoksiat surmati hiired südamepunktsiooniga ja nendeneerudkoristati. Hüpoksianeerudkinnitati erütropoetiini ekspressiooni Western blot analüüsiga (joonis S1).
RakukultuurTavaline rottneerud(NRK)-52E-rakud osteti American Type Culture Col. lectionist (Manassas, VA, USA). NRK-52E-rakke kasvatati RPMI-1640söötmes, mis sisaldas 10 protsenti looteid. veise seerum (FBS) (Nichirei Bioscience, Tokyo, Jaapan) ja penitsilliini/streptoomiatsiin (Nacalai Tesque, Kyoto, Jaapan). Need seemned külvati 10 cm kultiveerimisnõudesse. Pärast subkonfluentsini kasvatamist inkubeeriti rakke 1-protsendilises O2Modulaarses inkubaatorikambris (MIC 101; Billups-Rothenberg, San Diego, CA, USA) 30, 60, 90 ja 120 minutit. Valmistati täisrakulüsaadid ja töödeldi neid. Western blot analüüsile. NRK-52E rakkude hüpoksiat kinnitati HIF-1 ekspressiooni Western blot analüüsiga (S2 joonis fig.).
RIG-I siRNA transfektsioonNRK52E rakud transfekteeriti 20 nM siRNA-ga, mis oli suunatud RIG-I-le (RSS311418: Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) või negatiivse kontrolli siRNA-ga (4390843; Applied Biosystems, Waltham, MA, USA), kasutades Lipofectamine 2000 ReagentThe FishermoTransfection. , vastavalt tootja juhistele. 43-45 tunni pärast inkubeeriti mõnda neist rakkudest hüpoksilistes tingimustes (1% O) 30 minutit, et hinnata RIG-I. Teised rakud vahetati värske söötme vastu. 24 tunni pärast inkubeeriti neid rakke hüpoksilistes tingimustes (1 % O2) 60 ja 120 minutit, et kinnitada IFN-a/ supressiooni. Valmistati terve raku lüsaadid ja viidi läbi Western blot analüüs.
Western blot analüüsProovide kogumine ja Western blotting viidi läbi vastavalt eelnevalt kirjeldatud meetoditele[29]. Küüliku monoklonaalne anti-RIG-I antikeha (#3743S; Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA), küüliku polüklonaalne anti-IFN- 11 antikeha (bs-7023R; Bioss Anti-bodies, Woburn, MA, USA), küüliku polüklonaalne IFN-vastane antikeha (GTX37658; GeneTex, Irvine, CA, USA), küüliku monoklonaalne anti-RIG-I antikeha (=700366; Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), küüliku polüklonaalne antikeha anti-IFN- 2 antikeha (ab193055; Abcam, Cambridge, UK), küüliku polüklonaalne IFN-vastane antikeha (PA5-20390; Invitrogen), roti monoklonaalne inimese klothovastane antikeha (KO603; TransGenic, Fukuoka , Jaapan), kasutati hiire monoklonaalset anti- -aktiini antikeha (A5316; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) ja hiire monoklonaalset anti- -tubuliini antikeha (T9026; Sigma-Aldrich). primaarsete antikehadena. Sekundaarsete antikehadena kasutati mädarõika peroksidaasiga konjugeeritud kitse küülikuvastast immunoglobuliini G (Dako, Glostrup, Taani) ja kitse hiirevastast immunoglobuliini G (Dako). Signaalide tuvastamiseks kasutati SuperSignal West Dura ja Pico süsteemi (Thermo Fisher Scientific). Iga riba intensiivsust mõõdeti ImageJ tarkvaraga (versioon 1.47y; National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA) ja normaliseeriti kas -aktiini või -tubuliini tasemele.
CISTANCHE PARANDAB NEERU-/NEERUHAIGUST
Hiire neerukoe immunohistokeemiline analüüsImmunohistokeemiline värvimine viidi läbi vastavalt eelnevalt kirjeldatud meetoditele [27]. Primaarsete antikehadena kasutati järgmisi tooteid: küüliku monoklonaalne anti-RIG-I antikeha (#700366; Invitrogen), küüliku polüklonaalne anti-IFN- 2 antikeha (ab193055; Abcam), küüliku polüklonaalne IFN-vastane antikeha ( PA5-20390; Invitrogen) ja roti monoklonaalne inimese klotovastane antikeha (KO603; TransGenic).RIG-I-, IFN-a/- ja kloto-positiivsed alad kvantifitseeriti 20 juhuslikult valitud välja keskmisena. ImageJ tarkvara.
Kliiniliste proovide kogumine ja eetikaavaldusNeeruproovid saadi neerubiopsiaga Hiroshima ülikooli haiglas ajavahemikus augustist 2014 kuni novembrini 2016 33 patsiendilt, kellel oli diagnoositud IgA nefropaatia. See uuring järgis Helsingi deklaratsioonis sätestatud põhimõtteid ja selle kiitis heaks Hiroshima ülikooli eetikakomitee (E-1718). Teadlik nõusolek saadi veebisaidil (httns:/inzounaika) loobumise vormis Hiroshima-uaciplresearchl loobuda.html).
Inimese neerukoe immunohistokeemiline analüüsImmunovärvimine viidi läbi vastavalt eelnevalt kirjeldatud meetoditele [27]. Kasutati järgmisi primaarseid antikehi: küüliku monodonaalne anti-RIG-I antikeha (#700366; Invitrogen), hiire monoklonaalne IFN-vastane antikeha (sc-373757; Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, USA) ja küülik polüklonaalne anti-IFN-antikeha (PA5-20390; Invitrogen), RIG-I- ja IFN-a/-positiivsed alad kvantifitseeriti tarkvaraga Image] viie juhuslikult valitud välja keskmisena.
Statistiline analüüsTulemused on esitatud kui keskmine ± standardhälve (SD). Korrelatsioonid arvutati ühemõõtmelise regressioonianalüüsi abil. Mitme võrdluse jaoks kasutasime ühesuunalist dispersioonanalüüsi (ANOVA), millele järgnes Studenti t-test Bonferroni korrektsiooniga. Kahe rühma erinevusi analüüsiti Studenti t-testiga.P<0.05 was="" considered="" as="" statistically="">
Tulemused:Hüpoksia reguleerib RIG-I ja IFN-a/ üles neeruepiteelirakkude roti rakuliinisEt tuvastada hüpoksia mõju RIG-I ja IFN-a/ ekspressioonile in vitro, teostasime nende valkude jaoks Western blot analüüsi hüpoksilistes tingimustes kultiveeritud NRK-52E rakkudes. RIG-I valgu tase saavutas haripunkti 30 minuti pärast ja langes seejärel järk-järgult NRK-52E rakkudes hüpoksilise stimulatsiooni korral (joonis 1A). IFN-/ß tase tõusis ja saavutas maksimumi vastavalt 120 ja 60 minuti pärast NRK-s. -52E-rakud hüpoksilise stimulatsiooniga (Eig 1Band1C). RIG-I pärssimine vähendab IFN-a/ ekspressiooni hüpoksiaga NRK52E rakkudes Et hinnata, kas RIG-I osaleb IFN- / ekspressioonis hüpoksia tingimustes, uurisime nende ekspressiooni NRK-52E rakkudes, mis olid transfekteeritud RIG-I siRNA või negatiivne
kontrollida siRNA-d. Esiteks kinnitasime RIG-siRNA knockdown-efekti NRK-52E rakkudes. RIG-I Western blotting näitas, et RIG-I siRNA vähendas RIG-I ekspressiooni NRK-52E rakkudes kas hüpoksilise stimulatsiooniga või ilma (Eig 2A). Järgmisena uurisime hüpoksiast põhjustatud RIG-i ülesreguleerimise rolli. -I IFN-/B ekspressioonis NRK{10}}E rakkudes RIG-I siRNA või negatiivse kontrolli abil. RIG-siRNA pärssis IFN- / ekspressiooni NRK{14}}E-rakkudes (Eig2Band2C).
RIG-I korreleerub IFN- / ekspressioonitasemetega inimese IgA nefropaatia neeruproovidesUurisime, kas RIG-I ekspressioonitase on seotud IFN-a/-ga neerubiopsia proovides, mis saadi IgA nefropaatiaga patsientidelt (n=33). Nende patsientide üksikasjalikud kliinilised omadused on näidatud tabelis S1. RIG-I ja IFN-/ immunohistokeemiline värvimine näitas nende ekspressiooni glomerulites ja neerutuubulites (joonis 3A) ning näitas, et RIG-I on positiivses korrelatsioonis IFN-o/-ga (r=0.57,P).<0.001, and="" r=""><0.001, respectively)(eig="">
Hüpoksia ei muuda klotho ekspressioonitaset WT ja K1-/ hiirtelHüpoksilise stimulatsiooni mõju määramiseks klotho ekspressioonile in vivo uurisime selle ekspressiooni WT- ja K-/hiirtel 10-minutilise hüpoksilise stimulatsiooniga või ilma. Western blotting ja immunohistokeemiline värvimine näitasid, et kloto ekspressioon ei erinenud hüpoksiaga ja ilma hüpoksiata WT hiirtel ning kloto ekspressiooni ei täheldatud KIT/hiirtel, olenemata hüpoksilise stimulatsiooni olemasolust või puudumisest (Eig 4A ja 4B). WT hiirtel klotho. valk värviti torukujuliste rakkude tsütoplasmas (joonis 4B).RIG-I ekspressioon intensiivistub hüpoksilistes tingimustes K~ hiirtel.Intratsellulaarne klotho annab teadaolevalt võime pärssida RIG-I-vahendatud põletikku, seega uurisime RIG-I ekspressioonitaset ja lokaliseerimist hüpoksilises seisundis.neerudWT ja Kl−/− hiirtel. Western blotting näitas, et RIG-I ekspressioon suurenes hüpoksilise stimulatsiooniga WT hiirtel ja et see intensiivistus Kl - / - hiirtel (joonis 5A). Immunohistokeemia näitas, et RIG-I-positiivne ala suurenes Kl-/- hiirtel, mis oli sarnane Western blot analüüsi tulemustega (joonis 5B).
IFN- on KI--hiirtel hüpoksia tingimustes ülesreguleeritudHüpoksia mõju tuvastamiseks-a ekspressioonile wvo-s uurisime selle ekspressioonitaset ja lokaliseerimist hüpoksilistel WT- ja KI-hiirtel. Western blotting näitas, et IFN-i ekspressioon suurenes WT hiirtel hüpoksilise stimulatsiooniga ja et see oli hiirtel veelgi ülesreguleeritud (joonis 6A). Immunohistokeemiline värvimine näitas ka, et IFN- --positiivset piirkonda täheldati peamiselt torukujulistes rakkudes ja et IFN-i ekspressioonitase näitas sama tendentsi kui Western blot analüüsis (joonis 6B).
IFN- suureneb hüpoksilistes tingimustes K1T-/hiirtelLisaks IFN-c-le uurisime IFN-Bin hüpoksilise WT ja hiirte ekspressioonitaset ja lokaliseerimist. Western blot analüüsi tulemuste põhjal suurenes IFN-i ekspressioon WT hiirtel hüpoksilise stimulatsiooniga, samas kui KIT / hiirte puhul täheldati täiendavat suurenemist (joonis 7A). IFN- -positiivse piirkonna kvantifitseerimisel tõusis IFN-i ekspressioonitase KI-/-hiirtel võrreldes WT'-hiirte omaga (joonis 7B).
täheldatud Kl-/- hiirtel, sõltumata hüpoksilisest stimulatsioonist. Näitasime, et neeru hüpoksia suurendas RIG-I ja IFN-/ ekspressiooni ning et nende ekspressioon intensiivistus veelgi Kl-/- hiirtel. Need leiud viitasid sellele, et kloto puudulikkus intensiivistas hüpoksiast põhjustatud RIG-I ekspressiooni, mille tulemuseks oli IFN- / ülesreguleerimine. Tuvastasime, et hüpoksia indutseeris RIG-I ja IFN-/ ekspressiooni nii in vitro kui ka in vivo uuringutes. Hüpoksiliste tingimustega kohanemiseks on HIF stabiliseeritud ja toimib transkriptsioonifaktorina [30]. Eelmises uuringus teatati, et RIG-I osaleb HIF-indutseeritavates molekulides. Kuid me ei suutnud tuvastada, et RIG-I on HIF-i allavoolu efektor. Lisaks viirusinfektsioonile suureneb hüpoksilistes tingimustes RIG-I ekspressioon [31]. Kuigi varasemad uuringud teatasid, et hüpoksia mõjutab tubulaarseid epiteelirakke, endoteelirakke, peritsüüte, fibroblaste, põletikurakke ja eellasrakke neerudes [32,33], näitame, et RIG-I ülesreguleerimist täheldati peamiselt hiirte tubulaarsetes epiteelirakkudes. hüpoksilise stimulatsiooniga, samuti IgA nefropaatiaga patsientidel. Kuna neerutuubuleid peetakse transuretraalsete patogeenide sisenemiskohaks [34], võib RIG-I mängida pöördelist rolli tubulaarsete epiteelirakkude immuunvastuses hüpoksilistes tingimustes. Kaasasündinud immuunvastust aktiveerivad mitte ainult mikroorganismid, vaid ka kahjustatud, vigastatud või stressis rakkude häiresignaalid [35]. Selles uuringus näitasime, et hüpoksiast põhjustatud RIG-I ekspressioon osales IFN- / tootmises neerutuubulite roti rakuliinis. Esitatud andmed viitavad sellele, et RIG-I ekspressioon toimib tsütosooli kaasasündinud immuunsüsteemina vastuseks nii hüpoksilisele stressile kui ka viirusinfektsioonile. Varasemad uuringud kirjeldasid, et hüpoksia süveneb kroonilise neeruhaiguse tekke ajal sõltumata primaarsest haigusest ja et hüpoksia aitab kaasa neerukahjustuse progresseerumisele [17]. Kliinilises uuringus, milles kasutati vere hapnikusisalduse tasemest sõltuvat magnetresonantstomograafiat, neerude hüpoksia mitte ainult ei intensiivistunud kroonilise neeruhaiguse progresseerumise ajal, vaid ennustas ka sellist progresseerumist [36]. Seega peetakse hüpoksiat praegu lõppstaadiumis progresseerumise ühiseks teeksneeruhaigus, seega peaks hüpoksiast põhjustatud põletik olema terapeutiline sihtmärk CKD progresseerumise pärssimiseks.
Näitasime, et hüpoksia indutseerib IFN- / tootmist, mis on klassifitseeritud 1. tüüpi interferoonideks. I tüüpi interferoonid toimivad põhiliselt viiruse replikatsiooni pärssimiseks [37] ja hüpoksiast põhjustatud immunosupressioonile [21,22]. Senised uuringud on aga teatanud, et 1. tüüpi interferoonid põhjustavad looduslike tapjarakkude aktiveerimist, mängides olulist rolli mitte ainult viirusega nakatunud rakkude eemaldamisel, vaid ka koekahjustusel [38]. Tegelikult teatasid varasemad uuringud, et RIG-I soodustab põletikku erinevates organites, näiteks kopsudes [39],neerud[40] ja närvisüsteem [21]. Selles uuringus näitasime ka, et hüpoksiast põhjustatud RIG-I ülesreguleerimine vastutab IFN- / tootmise eest. Seega võivad 1. tüüpi interferoonid kaitsta hüpoksia seisundis nakkuse eest, kuid nakatumata tingimustes võivad nad olla kahjulikud. Veelgi enam, varasemas uuringus teatati, et lisaks 1. tüüpi interferoonidele osaleb RIG-I mitmesuguste tsütokiinide, nagu IL-1, IL- 6 ja TNF- tootmises [41]. Kuna need tsütokiinid põhjustavad koekahjustusi, võib hüpoksiast põhjustatud RIG-I ülesreguleerimine osaleda kroonilise neeruhaiguse progresseerumisel. Näitasime, et kloto puudulikkus suurendab hüpoksiast põhjustatud RIG-I ekspressiooni, millega kaasneb IFN- / ülesreguleerimine. Väidetavalt väheneb Klotho ekspressioon vananemise ja kroonilise neeruhaiguse progresseerumisega [42,43]. Seetõttu võib hüpoksilistes tingimustes RIG-I ekspressioon eakatel ja kroonilise neeruhaigusega patsientidel rohkem ülesreguleerida, mis viib IFN- / tootmiseni. Nagu eespool mainitud, eksisteerib klotho kolmes vormis - membraan, sekreteeritud ja rakusisene klotho -, kusjuures viimane vastutab põletikuliste tsütokiinide RIG-I-vahendatud tootmise pärssimise eest [26]. Lokaliseerimise osas näitasime, et kloto ekspressioon esineb peamiselt neerutuubulite rakkudes, kusjuures on tõendeid selle kohta, et RIG-I ekspressioon intensiivistub peamiselt neerutuubulite rakkudes hüpoksilistes tingimustes. Need leiud viitavad sellele, et kloto ekspressiooni vähenemine aitab kaasa 1. tüüpi interferoonide suurenenud RIG-I-vahendatud tootmisele hüpoksilistes tingimustes.
CISTANCHE PARANDAB NEERU/NEERU VALU
Kokkuvõttes näitasime, et hüpoksilisest stimulatsioonist põhjustatud RIG-I ja IFN- / hiire neerudes ja roti neerutorurakkude rakuliinis ning et RIG-I oli seotud hüpoksiaga indutseeritud IFN- / in vitro katsete ülesreguleerimisega. IgA nefropaatiaga patsientide neerubiopsia proovides korreleerus RIG-I ekspressioon IFN-/ ülesreguleerimisega. Lõpuks intensiivistus hüpoksiast põhjustatud RIG-I ekspressioon klotho-knockout hiirtel koos IFN- / ülesreguleerimisega. RIG-I-vahendatud I tüüpi interferooni ekspressioon suurenes hüpoksilistes tingimustes ja kloto allareguleerimise seisundis täheldati edasist ülesreguleerimist. Kliiniliste uuringute kohaselt süveneb hüpoksia kaugelearenenud kroonilise neeruhaiguse staadiumis [36] ja see ennustab kroonilise neeruhaiguse pikaajalist progresseerumist [36]. Lisaks väheneb kloto ekspressioon koos neerufunktsiooni langusega ja kloto ekspressiooni vähenemine on seotud neerukahjustusega [44]. Selles uuringus näitame, et kloto puudulikkus intensiivistab hüpoksiast põhjustatud IFN- / ekspressiooni RIG-I ülesreguleerimise kaudu neerudes ja et RIG-I ekspressioon on seotud IFN- / ekspressiooniga tegelikel IgA nefropaatiaga patsientidel. Neid leide kokku võttes soodustatakse kroonilise neeruhaiguse progresseerumise ajal nii hüpoksiat kui ka klotho vähenemist ning seetõttu paraneb kroonilise neeruhaigusega patsientidel kaasasündinud immuunsuse aktiveerimine.