Neeru peritsüütide hüpoksia-indutseeritav tegur reguleerib erütropoeesi, kuid mitte neerufibroosi
Mar 13, 2022
Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Szu-Yu Pan1,2,3et al
Prolüülhüdroksülaasi domeeniensüümi (PHD) inhibiitorid on efektiivsedkrooniline neeruhaigus(CKD)- seotud aneemia, stabiliseerides hüpoksia-indutseeritavat tegurit (HIF), suurendades seeläbi erütropoetiini ja sellest tulenevalt erütropoeesi. Siiski tuleb kliinilistes uuringutes tegeleda murega CKD progresseerumise pärast. Kuigi prekliinilised uuringud näitasid põletikuvastast toimetneerhaigusmudelid, PHD inhibiitorite mõjuneerFibroosioli ebajärjekindel tõenäoliselt seetõttu, et HIF-i mõju on lahtritüüp ja kontekstist sõltuv. Suurneererütropoetiini tootvad rakud on peritsüüdid, mis toodavad erütropoetiini HIF-2a-sõltuva geeni transkriptsiooni kaudu. Mure HIF-i mõju pärast peritsüütidesneerFibroosituleneb asjaolust, et peritsüüdid on müofibroblastide peamised lähterakud CKD-s. Kuna Gli1 ekspresseerivad rakud vastavad peritsüütide morfoloogilistele ja anatoomilistele kriteeriumidele, indutseerisime Gli1+ rakuspetsiifilise HIF-i stabiliseerimise või nokaudiga, et uurida HIF-i mõju peritsüütidesneerhiirte patoloogia, kellel on fibrootilise vigastusega või ilma, mis on põhjustatud ühepoolsest kuseteede obstruktsioonist. Võrreldes littermate kontrolliga näitasid peritsüütispetsiifilise HIF-stabiliseerimisega hiired von Hippel-Lindau valgu või PHD2 nokaudiga suurenenud seerumi erütropoetiini ja polütsütemiat, mitte märgatavat erinevustneerFibroosi. Võrreldes Gli1-ga+pesakonna juhtelementidest sorteeritud peritsüüdid, Gli1+PHD2 nokaudiga hiirtelt sorteeritud peritsüüdid näitasid pigem erütropoetiini geeniekspressiooni suurenemist kui märgatavaid muutusi Col1a1 või Acta2 ekspressioonis. Lisaks ei mõjutanud HIF-1a või HIF-2a peritsüüdispetsiifiline nokautneerFibroosi. Seega toetab meie uuring PHD inhibiitorite negatiivse mõju puudumistneerFibroosihiirtest hoolimata HIF-i stabiliseerumisest peritsüütides.
MÄRKSÕNAD: erütropoetiin;Fibroosi; hüpoksia-indutseeritav tegur; peritsüüt
Cistancheon heaNeerufunktsioon
Tõlkeline avaldus
Prolüülhüdroksülaasi domeeni ensüümi (PHD) inhibiitorid on efektiivsed aneemia raviskroonilineneertõbi(CKD) hüpoksia indutseeritava teguri (HIF) stabiliseerimise kaudu, suurendades seeläbi erütropoetiini (EPO) ja erütropoeesi. Neeru peritsüüdid toodavad EPO-d HIF-2a kaudu normaalses füsioloogias, kuid nad eristuvad arme tootvatest müofibroblastidest CKD-s. Ei ole selge, kas HIF-i ekspressioon neeru peritsüütides mõjutabNeeruFibroosi. HIF-i manipuleerimise ja neerufibroosi prekliiniliste muriinimudelite abil näitame, et Gli1 + peritsüütide spetsiifiline HIF-manipuleerimine mõjutab EPO tootmist ja erütropoeesi, kuid mitteneerufibroos. Meie uuring toetab PHD inhibiitorite negatiivse mõju puudumist neerufibroosile.
Aneemia ravi põhialus patsientidel, kellel onkroonilineneertõbi(CKD) on erütropoteesi stimuleerivad ained ja rauapreparaadid. 1,2 Hiljuti kerkib prolüülhüdroksülamiini domeeniensüüm (PHD) inhibiitor CKD-ga seotud aneemia paljutõotavaks terapeutiliseks aineks peamiselt hüpoksia indutseeritava teguri stabiliseerimise (HIF) stabiliseerimise ja seeläbi erütropoetiini (EPO) tootmise suurendamise kaudu.3–5 PHD inhibiitorite või HIF-stabilisaatorite kliiniline kasutamine CKD-ga patsientidel on lähitulevikus vahetu, kui võimaliku angiogeneesiga seotud mured on lähitulevikus vahetud, kui võimaliku angiogeneesiga seotud mured, kasvajate kasv, ebanormaalne glükoosi metabolism janeerfunktsiooni tuleb käsitleda kliinilistes uuringutes.
HIF on kõige olulisem teadaolev rakuline hapnikutundlik masin.6,7 Funktsionaalne HIF koosneb a- ja b-alaühikutest. HIF-a on hapniku labiilne alaühik, mis laguneb kiiresti normoksilises seisundis kofaktorite juuresolekul. HIF-b-d ei reguleeri hapnikupinge. HIF-a lagunemisele eelneb proliini hüdroksülatsioon ja polüubiquitinatsioon. Proliini hüdroksülatsiooni katalüüsib PHD hapniku, raua ja 2-oksoglutaraadi juuresolekul kofaktoritena. Polüubiquitinatsiooni katalüüsib seejärel E3 ubikvitiinligaas, mis koosneb von Hippel Lindau proteiinist (pVHL)-Elongin BC-CUL2 kompleksist. Raua, PHD ja pVHL-i nõue HIF-i lagunemiseks võimaldab stabiliseerida HIF-i normoksilises seisundis nende põhikomponentide inhibeerimise või vähenemisega.
Neeruperitsüüdid on põimitud mikrovaskulaarsesse keldrimembraani ja tihedas kontaktis endoteelirakkudega, et toetada mikrovaskulaarsust ja reguleerida verevoolu.8–13 Oleme teatanud, et neeruperitsüüdid on neeru-ePO tootvad rakud, kes toodavad EPO-d HIF-2a sõltuva geenitranskriptsiooni kaudu, mis on põhjustatud aneemiast või hüpoksiast.14 Peritsüüdid on osutunud peamiseks arme tootvate müofibroblastide allikaks CKD-s, 8,10,11,15,16 järeldus, mida toetavad teised sõltumatud aruanded.17,18 Kuigi üleminek müofibroblastidele viib Epo transkriptsiooni represseerimiseni, taastab HIF-2a üleekspresseerimine osaliselt EPO tootmise müofibroblastides.14,17
Meie uuringud on näidanud, etneerufibroosvõib vähendada peritsüütide-müofibroblasti ülemineku katkestamisega kasvufaktori b, 19 trombotsüütidest saadud kasvufaktori, 19 trombotsüütide tuletatud kasvufaktori, 20 vaskulaarse endoteeli kasvufaktori,21 või WNT/b-kateniini radade farmakoloogilise blokaadi kaudu.22
Seoses murega kiirenenud languse pärastneerphd inhibiitoritega ravitavatel patsientidel on vähe teada HIF-aktiivsuse mõjust peritsüütides või müofibroblastidesneerufibroos.23 Seevastu HIF-i üleekspressiooni või nokaudiga mõjuneerufibrooson põhjalikult uuritud, kas mitteselektiivselt24–27 või valikuliselt torukujulistes rakkudes, 28,29 endoteelirakkudes,30 ja podotsüütides.31,32 Tulemused olid siiski vastuolulised ilmselt seetõttu, et HIF-i mõjud on rakutüübid ja kontekstist sõltuvad.
In vitro uuringud, milles kasutati isoleeritud inimese neeru fifibroblasts33 ja roti neeru medullaarseid interstitsiaalseid rakke34, näitasid HIF-1a profibrootilist rolli. Kuid Souma et al.17 teatas, et phd1, PHD2 ja PHD3 samaaegne nokaut Tg (Epo-Cre) hiirte REPC-des, kes väljendavad Cre rekombinaasi Epo promootori kontrolli all, ei mõjutaneerufibroosühepoolse kusiti obstruktsiooni (UUO) mudelis. Kuid neeru Epo ekspressioon on madal ja REPC-de basseini suurus on püsivas olekus väike ilma hüpoksia või aneemiata,35 mis viitab sellele, et Epo-Cre transgeen määratleb vaid väikese osa kõigist REPC-dest. Hiljuti näidatakse, et neeru Gli1 ekspresseerivad rakud on peritsüüdid ja diferentseeruvad müofibroblastideganeervigastus.11,36 Gli1+ rakkude ablatsioon leevendab UUO indutseeritudNeeruFibroosi.11 Siin kasutasime hiiri, kellel oli Cre rekombinaas Gli1 promootori /tugevdaja kontrolli all, et uurida peritsüütispetsiifilise HIF-stabiliseerimise või nokaudiga mõjurenaalfibroos.
cistanche on heaneer
MEETODID
Hiired
Gli1CreERT2/+, Tg(UBC-CreERT2), VhlF/F,ROSA26fstdTomato/fstdTomat, Hif1aF/Fja Hif2aF/Fhiired osteti Jacksoni laboratooriumist (Bar Harbor, ME). Egln1F/Fhiiri pakkus lahkelt professor Guo-Hua Fong (Connecticuti ülikooli tervisekeskus, Farmington, CT). Kõik uuringud viidi läbi taiwani ülikooli meditsiinikolledži (IACUC 20160499) institutsionaalse loomahoolduse ja -kasutamise komitee poolt heaks kiidetud protokolli alusel.
Ühepoolne kusiti obstruktsioon
Seda protseduuri oli üksikasjalikult kirjeldatud eelmises uuringus.14 Lühidalt öeldes, täiskasvanud hiirtel, kes olid 7–9 nädala vanused anesteesia all ketamiini/ksülasiiniga (ketamiin 100 mg/kg, ksülasiin 10 mg/kg), puutusid hiirte vasaku külje sisselõike kaudu kokku ja ligeeriti nailonõmblusega. UUO operatsiooni kuupäev tuvastati katse 0. päevaks.
Statistilised analüüsid
Andmeid väljendati keskmiste+SD. Statistilised analüüsid viidi läbi GraphPadi prisma (GraphPad Software, San Diego, CA) abil. Statistilise tähtsuse määras student t-test või Mann-Whitney U test, nagu on näidatud pealdistes.
Täiendavad meetodid
Lisameetodites on täielikud meetodid, sealhulgas hiired, UUO, tamoksifeeni manustamine, kvantitatiivne polümeraasi ahelreaktsioon, immunobioblot, immunohistochemistry, RNA in situ hübridiseerumine, mikroskoopia, voolutsütomeetria ja neeru Gli1+ rakkude isoleerimine.
TULEMUSED
Suurenenud EPO tootmine ja erütropoieses hiirtel, kellel on Gli1+ peritsüütide spetsiifiline PHD2 nokaut
Et näidata, et Gli1+ peritsüüdid tootsid EPO-d enne, kui hakkasime uurima peritsüütidespetsiifilise HIF-manipuleerimise mõjuneerufibroos, lõime Gli1CreERT2/+; Egln1F/Fhiired indutseerima PHD2 nokauti Gli1+ peritsüütides tingimuslikult (joonis 1a). Võrreldes pesakonnakaaslase Egln1-gaF/Fhiired, Gli1CreERT2/+; Egln1F/Fhiirtel oli seerumi EPO kõrgem tase (joonis 1b), raskem spleeniline kaal (joonis 1c), rohkem TER-119+erütroidne sugupuu splenotsüütides 14. päevaks pärast tamoksifeeni (joonis 1d), kuid sarnane kehakaalu muutus pärast tamoksifeeni manustamist (täiendav joonis S1A). Hematokrit (Hct) oli Gli1-s kõrgemCreERT2/+; Egln1F/Fhiired 21. päeval (joonis 1e). Analüüsisime neeru Epo mRNA-d ja perifeerset vereanalüüsi 14 päeva pärast tamoksifeeni. Võrreldes pesakonnakaaslase Egln1-gaF/Fhiired, Gli1CreERT2/+; Egln1F/Fhiirtel oli suurenenud neeru Epo ekspressioon (joonis 1f) ja perifeersed retikulotsüüdid (joonis 1g), samas kui perifeersed valgete vereliblede arv ja trombotsüütide arv ei olnud erinevad (täiendav joonis S1B ja C). Epo ekspressiooni eest vastutavate neerurakkude tuvastamiseks viisime läbi Epo in situ hübridisatsioonineerlõigud egln1F/F ja Gli1CreERT2/+; Egln1F/Fhiired (täiendav joonis S2A–F). Suurenenud Epo-ekspressitsioonilisi interstitsiaalseid rakke võib tuvastada peamiselt kortikomöödia ristmikul ning vähemal määral Gli1 sisemises medullas ja ajukoores.CreERT2/+; Egln1F/FHiired. Need tulemused näitasid, et Gli1+ peritsüütspetsiifiline PHD2 nokaut indutseeris neeru EPO tootmist ja erütropoeesi.
Et teha kindlaks, kas PHD2 reguleerib EPO tootmist rakutüüpides ja elundites, mis ei ole peritsüüdidneer, lõime Tg(UBC-CreERT2); Egln1F/Fhiired, et indutseerida ülemaailmset PHD2 nokauti (täiendav joonis S3A). Pärast tamoksifeeni manustamist on Egln1 geeni nokautneervõib tuvastada maksa, põrna, südant ja kopsu (täiendav joonis S4). Inneer, vähenes Egln1 mRNA ekspressioon 4%ni, mis näitab PHD2 nokaudiga suurt efektiivsust (täiendav joonis S3B). Nagu Gli1CreERT2/+; Egln1F/Fhiired, Tg(UBC-CreERT2); Egln1F/Fhiirtel oli hct järk-järguline kasv võrreldes pesakonnakaaslase Egln1-gaF/Fhiired(täiendav joonis S3C). Nimelt Tg(UBC-CreERT2); Egln1F/Fhiirtel ilmnes kehakaalu langus (täiendav joonis S3D). Tg-s (UBC-CreERT2) leiti märkimisväärselt kõrget seerumi EPO taset, umbes 130 000 pg/ml; Egln1F/Fhiirtel, mis oli palju suurem kui see, mis saavutati flebotoomiaga (alla 5000 pg/ml) metsikut tüüpi hiirtel (täiendav joonis S3E). Seerumi EPO allika tuvastamiseks kontrollisime Epo mRNA taset erinevates organites Tg-st (UBC-CreERT2); Egln1F/F,ja pesakonnad kontrollivad hiiri 15. päeval. Littermate kontrollhiirtel ei tuvastatud Epo mRNA-d üheski elundis peaaegu üldse. Viies suuremas elundis (neerTg (UBC-CreERT2) maks, kops, süda, põrn); Egln1F/Fhiired, ainultneerEpo mRNA märkimisväärne kasv, mis tähendab, etneerseerumi EPO peamise allikana (täiendav joonis S3F ja G). In situ hübridiseerimine Epo mRNA onneerlõigud näitasid, et Epo ekspressiooniga neerurakud olid interstitsiaalsed rakud, millel oli peritsüütide morfoloogia Tg(UBC-CreERT2); Egln1F/Fhiired (täiendav joonis S5). Seetõttu kinnitasid need andmed, et neerud Gli1+ peritsüüdid tootsid EPO-d PHD2 nokaudil, suurendades seeläbi erütropoeesi ja Hct.
Gli1+ peritsüütide spetsiifiline pVHL nokaut põhjustab polütsütemiat, kuid ei mõjuta neerufibroosi
Kooskõlas varasemate aruannetega suurenes Gli1 11,36+peritsüüdid näidati kortikomedullaarses ristmikus ja medullas pärast UUO vigastust Gli1-sCreERT2/+; ROSA26fstdTomato/ fstdTomatoreporterhiired (täiendav joonis S6), mis viitab sellele, et Gli1+ peritsüüdid vohavad ja aitavad märkimisväärselt kaasa müofibroblastideleneerufibroos.Seega uurisime HIF-i stabiliseerimise või nokaudiga mõju Gli1-s+peritsüüdid onneerufibroos.
Me kasutasime hiiri Gli1-ga+peritsüütide spetsiifiline nokaut pVHL-ist, mitte PHD2-st võimaliku koondamise tõttu kolmes erinevas doktorikraadis. Uurida peritsüütidespetsiifilise HIF-stabiliseerimise pikaajalist mõjuNeerudhiirtel ilma CKD-ta, Gli1CreERT2/+; VhlF/Fhiired ja VhlF/Flittermates manustati tamoksifeeni 6 nädala vanuselt ja seejärel täheldati neid kuni 30 nädala vanuseni (täiendav joonis S7A). Üks ootamatu surm Gli1CreERT2-s/+; VhlF/Fhiired toimusid 25 nädala vanuselt (14,3% suremus), kuid Vhl-is surmajuhtumeid ei olnudF/Flittermates. Gli1-s leiti nõrkust ja kehakaalu tõusu vähenemistCreERT2/+; VhlF/Fhiired juba 16 nädala vanuselt (täiendav joonis S7B). Emaciatsiooni ja ootamatu surma tõttu eutaniseeriti mõned hiired enne 30 nädala vanust. Patoloogia näitas difuusset rasket erütropoteesi põrnas ja punaste vereliblede ummikutes maksas, kopsus janeer18 nädala vanuselt (täiendav joonis S8). Välja arvatud punaste vereliblede ülekoormus, ei ole märgatavFibroositäheldati suuremates organites, sealhulgasNeerud. Hct ja seerumi EPO tase tõusis 30 nädala vanuselt (st 24 nädalat pärast tamoksifeeni) tasemele 87+-2,6% ja 1604 +-141 pg/ml-ni (st 24 nädalat pärast tamoksifeeni) (täiendav joonis S9A ja B)
Kuna ei ole märgatavatneerufibrooshiirtel, kellel oli Gli1+ peritsüütspetsiifiline pVHL-nokaut, indutseerisime hiirtel UUO ja hindasime neerufibroosi raskust 7 või 14 päeva hiljem (joonis 2a). Kustutatud Vhl-alleelid rakenduses Gli1CreERT2/þ; VhlF/Fhiirtel avastatineergenoomne DNA polümeraasi ahelreaktsiooni abil, mis näitab pVHL-i nokauti peritsüütides (täiendav joonis S10). Hct-d suurendati Gli1-sCreERT2/+; VhlF/Fhiired isegi pärast UUO operatsiooni (joonis 2b). Eelkõige suurenes EPO mRNA ekspressioon nii kontralateraalses kui ka UUO-sNeerudGli1CreERT2/+; VhlF/Fhiired (joonis 2c), mis viitab HIF-i stabiliseerimisele, võivad aktiveerida Epo transkriptsiooni nii peritsüütides kui ka müofibroblastides. Siiski ei ole vahetneerufibroosGli1 vahelCreERT2/+; VhlF/Fja pesakonnakaaslane VhlF/Fhiiri võib tuvastada, mõõdetuna picrosirius punase värviga alaga (joonised 2d ja 3a ja b) ning Col1a1 mRNA (joonis 2e) ekspressiooniganeer. Pealegi ei erinenud mRNA ja a-silelihaste aktiini valgusisaldusNeerud(Joonised 2f ja g ning täiendav joonis S11). Kinnitamaks, et myofibroblasts säilitas Epo väljendusvõime pärast pVHL-i nokauti, teostasime Epo ja Acta2 kohapealses hübridisatsioonisneer(täiendavad arvud S12 ja S13). Renal Acta2 ekspressioon suurenes drastiliselt ja võrreldavalt pärast UUO vigastust mõlemas Gli1-sCreERT2/+; VhlF/Fja VhlF/FHiired. Gli1-s võib täheldada rohkem interstitsiaalseid Epo ekspresseerivaid rakkeCreERT2/+; VhlF/Fhiired kui Vhl-isF/Fhiired, olenemata UUO vigastuse olemasolust. Lisaks võib UUO-s tuvastada Acta2 ja Epo samaaegse ekspressiooniga rakke.neerGli1CreERT2/+; VhlF/Fhiired, aga mitte VhlF/FHiired. Tegelikult ei suutnud me UUO-s tuvastada ühtegi Epo-ekspressitsioonilist rakku.neerVhl-istF/FHiired. Need tulemused näitasid, et Gli1 + peritsüütide piiratud pVHL-i nokaut soodustas Epo ekspressiooni, kuid mitte müofibroblasti diferentseerumise või kollageeni tootmist isegi pärast UUO vigastust.
Kuna UUO vigastus põhjustab proksimaalsete torukujuliste rakkude kahjustusi ja makrofaagide värbamist, on Havcr1 37 mRNA tase (kodeerimineneervigastuste molekul-1) (joonis 4a) ja Adgre1 (endoteeli kasvufaktoritaoline moodul, mis sisaldab mutsiinilaadset hormooni retseptorit sarnast 1, tuntud ka kui F4/80) (joonis 4b) suurenes UUO-sNeerud, kuid Gli1 vahel ei olnud võimalik tuvastada erinevusiCreERT2/+; VhlF/Fja pesakonnakaaslane VhlF/FHiired. Vegfa, Hmox1, Egln1 ja Egln3 mRNA tasemed (vaskulaarse endoteelirakkude kasvufaktori A, heme oxygenase-1, PHD2 ja PHD3 kodeerimine)Neerudneid ei muudetud (joonis 4c–f), mis ilmselt peegeldas, et neid transkriptsioone ei tootnud domineerivalt Gli1+ peritsüüdiga vhl-nokaudid või et neid ei muudetud pärast Gli1+ peritsüütide piiranguga VHL-nokauti. Hindasime tubulointerstitsiaalset vigastust perioodilises happe-Schiffi-värvitudneerja Gli1-CreERT2/+; VhlF/F,ja pesakonnakaaslane VhlF/Fhiired (joonised 4g ja 5a ja b). Kuna on teatatud, et tamoksifeen nõrgenebFibroosi,38,39 pikendasime viimase tamoksifeeni manustamise ja UUO operatsiooni vahelist pesemisperioodi 2 nädalalt 4 nädalale (täiendav joonis S14A). Jällegi ei tuvastatud Gli1 vahel erinevust.CreERT2/+; VhlF/Fja pesakonnakaaslane VhlF/Fhiired (täiendav joonis S14B–E). Need leiud näitasid, et Gli1+ peritsüütide spetsiifiline pVHL-nokaut põhjustab EPO tootmist ja polütsütemiat, kuid ei mõjutaNeeruFibroosi.
cistanche on heaneer
Gli1+ peritsüütide spetsiifiline PHD2 nokaut suurendab EPO tootmist, kuid mitte kollageeni tootmist ega müofibroblasti diferentseerumist
HIF-i stabiliseerimise mõju kinnitamiseks Gli1+ peritsüütides rakutasandil sorteerisime tdTomato+ rakudNeerudGli1CreERT2/+; ROSA26fstdTomato/fstdTomatoja Gli1CreERT2/+; Egln1F/F; ROSA26fstdTomato/fstdTomatohiired pärast UUO vigastust (täiendavad arvud S15 ja S16). Mikroskoopilise uurimise käigus eraldasid sorteeritud rakud ergastamisel oranžpunast fluorestsentsi (täiendav joonis S17A–C). Võrreldes Gli1 omadegaCreERT2/+; ROSA26fstdTomato/fstdTomatohiired, Egln1 mRNA tase tdTomato+ rakkudes, mis on sorteeritud kontralateraalsetest ja UUO-destNeerudGli1CreERT2/+; Egln1F/F; ROSA26fstdTomato/fstdTomatohiired 7 päeva pärast UUO vigastust vähenesid vastavalt 46% ja 33% -ni (täiendav joonis S17D ja E).
Analüüsisime Epo, Col1a1, Col3a1 ja Acta2 mRNA tasemeid sorteeritud tdTomato+ Gli1+ peritsüütides alates Gli1CreERT2/+; ROSA26fstdTomato/fstdTomatoja Gli1CreERT2/+; Egln1F/F; ROSA26fstdTomato/fstdTomatoHiired. Kooskõlas Gli1+ peritsüütspetsiifilise pVHL-nokaudiga hiirtelt saadud tulemustega suurendas PHD2 nokaut Gli1+ peritsivüütides Epo ekspressiooni, kuid ei mõjutanud Col1a1, Col3a1 ja Acta2 ekspressiooni rakutasandil (joonis 6), kinnitades HIF-i stabiliseerimise neutraalset toimet peritsüütide/müofibroblastide profibrootilistele omadustele.
Gli1þ peritsüütide spetsiifiline HIF nokaut ei mõjuta neerufibroosi
Kuna need katsed kinnitasid HIF-i stabiliseerimise neutraalset mõju peritsüütide / müofibroblastide profibrootilistele omadustele, lõime Gli1CreERT2 / +; Hif1aF/F; Hif2aF/Fhiired, et uurida HIF-nokaudiga mõju peritsüütides /müofibroblastidesneerufibroos(Joonis 7a). Hif1a ja Hif2a kustutamineneervõib tuvastadaneergenoomne DNA pärast tamoksifeeni manustamist (täiendav joonis S18). Võrreldes littermate kontrolliga, Gli1CreERT2/+; Hif1aF/F; Hif2aF/Fhiirtel oli sarnane kehakaalu muutus ja Hct tase 7 päeva pärast UUO-d (joonised 7b ja c). Mis puutubneerufibroos, ei olnud võimalik tuvastada erinevust picrosirius punase värviga alal, mRNA tasemetes Col1a1 ja Acta2neer(Joonis 7d–f). Havcr1 ja Adgre1 mRNA tasemed ei olnud samuti erinevad (joonised 7g ja h). Muutsime tamoksifeeni annust ja pesemisperioodi (täiendavad arvud S19A ja S20A) ning kollageeni ladestumise ja geeniekspressiooni tulemused olid sarnased (täiendavad arvud S19B–E, S20B–E). Kordasime eksperimente Gli1-s.CreERT2/+; Hif1aF/F(Joonised 8a–c) ja Gli1- CreERT2/+; Hif2aF/F(Joonis 8d–f) hiirtel ja ei näidanud UUO indutseeritudneerufibroosvõrreldes pesakonna kontrolliga.
ARUTELU
Selle uuringu peamised leiud olid järgmised: i) neeru Gli1+ peritsüütide spetsiifiline HIF-stabiliseerimine viis EPO tootmise ja erütropoeeesini, kuid ei mõjutanud UUO vigastusega või ilma selleta neerude patoloogiat; ja ii) neeru Gli1+ peritsüütspetsiifiline HIF-1a ja HIF-2a nokaut ei mõjutanudneerufibrooskas.
Varem teatasime, et neeru Foxd1 + eellassaadusega peritsüüdid on REPC-d ja neid reguleerib HIF-2a. 14 Selles uuringus näitasime, et neeru Gli1+ rakud on ka REPC-d. Kuigi otsesed tõendid ei selgita FOXD1 ja GLI1 vahelist seost peritsiüütides, on varasemad uuringud näidanud, et nii neeru Foxd1+ eellaslasrakud kui ka Gli1+ rakud on peritsüüdid ja suudavad diferentseeruda müofibroblastidega vigastuse korral.10,11,36 Meie andmed näitasid, et kas PHD2 või pVHL-i nokaut konkreetselt Gli1+ peritsüütides põhjustas neeru EPO tootmise suurenemise, erütropoiesis ja polütsütemia, mis on kooskõlas Greenwaldi hiljutise aruandega jt.40 Lisaks, võrreldes Epo ekspressiooni märgatava vähenemisega metsikut tüüpi pesakonnade UUO neerus, oli Epo ekspressioon UUO neerus võrreldav Gli1-spetsiifilise pVHL-nokaudiga hiirte UUO neerus näidatud tasemega võrreldes kontroll kontralateraalses kontrollis näidatud tasemega.neer, HIF-i stabiliseerimise toetamine võib ületada Epo represseerimise mehhanismi fibrootilistes neerude müofibroblastides.14,17 Kooskõlas meie leiuga teatas Souma jt.17, et EPO süntees taastatakse UUO-s-neermyofibroblasts hiirtel PHD2 nokaudiga. Kooskõlas meie leidudega teatas väga hiljutine uuring41, et neeru Gli1+ rakud on trombotsüütide poolt saadud kasvufaktori retseptori b + REPC-de alampopulatsioon ja säilitavad EPO tootmise võime UUO-sNeerud.
Kliinilised uuringud on tõestanud PHD inhibiitorite efektiivsust CKD-ga seotud aneemia ravis.3–5,42–45 Oluline on see, et roxadustati III faasi uuringute koondanalüüsid näitasid mitte-halvemat või isegi paremat kardiovaskulaarset tulemust.46 Seni ei ole avaldatud ametlikku aruannet PHD inhibiitorite mõju kohta CKD progresseerumisele. Eksperimentaalselt on hüpoksia ja HIF-i rollneerufibrooson vastuoluline.47,48 Hiirtel, kellel oli äge neerukahjustus (AKI), mille põhjustas isheemia-reperfusioonikahjustus, näitas Kapitsinou jt.24, et PHD inhibeerimine enne AKI leevendamistFibroosi, samas kui pärssimine AKI varajases taastumisfaasis ei ole. Lisaks näitasid Uchida jt.26, et PHD inhibiitor võib leevendadaneerufibroosseoses proinflammatoorsete tsütokiinide redutseerimisega ja kapillaaride tiheduse taastamisega roti CKD mudeli neerudes, mille on indutseerinud 5/6 subtotaalne nefrektoomia, kuigi ei ole näidatud mõju proteinuuriale ja seerumi kreatiniinisisaldusele. Seevastu hiljutine aruanne näitas, et PHD inhibiitor aitab kaasa polütsütemiale ja tubulointerstitsiaalse nefriidi nõrgenemisele, kuid see ei mõjuta neerufibroosi adeniini poolt indutseeritud kroonilise tubulointerstitsiaalse nefriidi mudelis.25 PHD inhibiitorite põletikuvastast toimet demonstreeriti ka rasvunud 2. tüüpi diabeedi muriini mudeli neerudes.27 Kas PHD inhibiitorid leevendavad neerufibroosi interstitsiaalse põletiku nõrgestamise kaudu, mis õigustab edasist uurimist. Kuigi need uuringud ei teatanud PHD inhibiitorite mõjust neeru müofibroblasti aktiveerimisele, võib negatiivse mõju puudumine neerufibroosile toetada HIF ekspressiooni ignoreeritavat mõju kollageeni tootmisele neeru peritsüütides. HIF-i mõju hindamine neerudele on keeruline.49 Esiteks võivad erinevad rakutüübid väljendada erinevaid HIF-isovorme.50 Teiseks võib isegi sama HIF-isovorm reguleerida erinevaid sihtgeene erinevates rakutüüpides.51 Kolmandaks võib HIF-i ekspressioon ja regulatsioon füsioloogilises seisundis erineda haigestunud neerust.50 Lisaks suurendab HIF-i kiire lagunemine normoksilistes tingimustes HIF-valgu taseme ebatäpsete analüüside raskust kudedes.52 Seetõttu on varasemad vastuolulised tulemused neerufibroosile avalduva mõju kohta tõenäoliselt tingitud sellest, et HIF-i mõju on rakutüüp ja kontekstist sõltuv. Näiteks on tõendid näidanud, et PHD inhibiitor enne isheemia-reperfusioonikahjustuse põhjustatud AKI-d leevendab AKI-järgset fibroosi endoteeliaalse HIF-2a-sõltuva mehhanismi kaudu,24,30 samas kui HIF-1a-sõltuvat põletikku, fibroosi ja neerurakkude düsplaasiat on leitud Tg-s (Hoxb7-Cre); VhlF/Fhiired, kellel on kogumiskanalites pVHL-nokaut ja distaalsete tubulite alamhulk.29 Meie uuringus keskenduti sellele, kas HIF aktiivsus peritsüütides moduleerisneerufibroos,kontrollikoda näitas, et EPO tootmine suurenes oluliselt neeruperitsüütide puhul hiirtel, kellel oli Gli1+ peritsüütspetsiifiline HIF-stabiliseerimine rakuspetsiifilise pVHL-i või PHD2 nokaudiga, ning eelkõige säilitati Epo ekspressioon UUO-neeru müofibroblastides. Siiski ei leidnud me, et peritsüütide spetsiifiline HIF-stabiliseerimine mõjutas peritsüütide-müofibroblasti üleminekut, kollageeni tootmist müofibroblastides või UUO-indutseeritudneerFibroosi. Lisaks ei mõjutanud Havcr1 jaAdgre1 ekspressioonid UUO neerus, mis tähendab, et peritsüütide spetsiifilise HIF-stabiliseerimisega hiirtel ei mõjutanud neerutorukujulise vigastuse ja neerupõletiku raskust. Sest müofibroblast on arme tootev rakutüüp ajalneerufibroos, meie tulemused võivad anda eksperimentaalseid tõendeid HIF-stabiliseerimise negatiivse mõju puudumise kohta PHD inhibiitorite poolt neerufibroosile. Kooskõlas meie uuringuga teatasid Souma jt.17 ka, etneerufibroosseda ei mõjuta phd1, PHD2 ja PHD3 samaaegne nokaut Tg (Epo-Cre) hiirte repc-des.
cistanche on heaNeeru
Meie uuringus Gli1CreERT2/+; VhlF/Fhiiri iseloomustasid nii endogeense EPO suurenenud tootmine kui ka polütsütemia. Kas seerumi EPO suurenenud polütsütemia tase mõjutabneerufibroosSee on vastuoluline. On olemas ulatuslikud uuringud eksogeense rekombinantse EPO mõju kohta AKI-le või CKD-le.53–57 Varasemates uuringutes on teatatud, et suure annusega rekombinantne EPO põhjustab polütsütemiat, hüpertensiooni ja neerufunktsiooni halvenemist.56,58 Huvitav on see, et mõned uuringud näitasid, et väikese annuse eksogeenne EPO analoog, mis on nii madal, et mitte erütropoeesi esile kutsuda, põhjustab jääkis renoprotektiivset toimet.neerja db/db hiirte mudelid.59,60 Lisaks näidati, et polütsütemia normaliseerimiseks kasutatav flebotoomia leevendab suurenenud albuminuriat db/db hiirtel, kellele tehti suures annuses eksogeense EPO analoog.60 Polütsütemia veraga patsientide kliinilises kohordis leevendas polütsütemiaga seotud haigus ilma endogeense EPO suurenemiseta,61 CKD sagedust (määratletud kui hinnanguline glomerulaarne filtreerimiskiirus<60 ml/min="" per="" 1.73="" m2="" )="" was="" 27%,="" which="" was="" higher="" than="" in="" the="" general="" population.62,63="" however,="" the="" annual="" decline="" rate="" of="" estimated="" glomerular="" filtration="" rate="" was="" slower="" in="" patients="" with="" polycythemia="" vera="" than="" with="" other="" myeloproliferative="" diseases.="" in="" the="" study="" of="">CreERT2/+; VhlF/FUUO vigastuse all kannatanud hiirtel näitasid meie andmed neeru Epo ekspressiooni suurenemist ja polütsütemiat, kuid muutusi ei toimunudneerufibroospõletik ja torukujulised vigastused. Seega olid peritsüütespetsiifilise HIF-stabiliseerimise üldised mõjud neerukahjustusele, põletikule ja fibroosile neutraalsed, toetades PHD inhibiitorite ohutust CKD progresseerumisel. Neeruperitsüüte võib määratleda kui fibroblastide heterogeenset populatsiooni, mis on tihedas kontaktis endoteelirakkudeganeer.8–13 Arengu keerukuse tõttu on 64,65 heterogeenset bioloogilist funktsiooni,8,11–13,23 ning difereeruaalset PHD ja HIF määrust, 17,41,66 neeruperitsüütide optimaalset geneetilist markerit veel määratlemata. Gli1+ rakud vastavad peritsüütide morfoloogilistele ja anatoomilistele kriteeriumidele. Pärast UUO vigastust vohavad neerud Gli1+ rakud ja diferentseeruvad müofibroblastideks. Neeru Gli1+ rakud moodustasid umbes 45% kogu neerumüofibroblasti basseinist ja neeru Gli1+ rakkude ablatsioon vähenesneerufibroos.11,36 Me teadsime, et neerud Gli1+ rakud on trombotsüütide päritolu kasvufaktori retseptori –b+ rakkude alapopulatsioon11,36,41 ja et Gli1+ peritsüütide piiratud geneetilise manipulatsiooni mõju võivad varjata teised fibroblastid. Kuid meie katsed sorteeritud neeru Gli1+ rakkudega tõestasid, et HIF-i stabiliseerimine suutis suurendada Epo, kuid mitte kollageeni või Acta2 ekspressiooni rakutasandil. Me ei saa välistada võimalust, et hif-stabiliseerimisel, mida juhivad teised peritsüütide markerid, võivad olla erinevad tulemused. Cre rekombinaasiga hiiri juhivad Col1a1, Foxd1 või Pdgfrb promootorit ei kasutatud selles uuringus peritsüütide määratlemiseks, sest nende cre rekombinaasis on aktiivne ka glomerulaarsetes podotsüütides,8 glomerulaarsetes mesangiaalsetes rakkudes,67 vaskulaarsetes silelihasrakkudes,68 ja ilmselt mõnes torukujulises epiteelirakkudes.69 pVHL-i nokaut podotsüütides ja torukujulistes rakkudes teatati neerupatoloogiate indutseerimisest, nagu poolkuuline glomerulonefriit31 ja neerutsüstid.70 Lisaks sellele teatati, et pVHL-i nokaut podotsüütides ja torukujulistes rakkudes indutseeriti neerupatoloogiaid, nagu poolkuuline glomerulonefriit31 ja neerutsüstid.70 Lisaks sellele teatati, et pVHL-i nokaut podotsüütides ja torukujulistes rakkudes indutseeriti neerupatoloogiaid, nagu poolkuu glomerulefitsiit31 ja neerutsüstid.70 Lisaks teatati, et pVHL-i nokaut podotsüütides ja torukujulistes rakkudes indutseeriti neerupatoloogiaid, nagu poolkuuline glomerulefitsiit31 ja neerutsüstid.70 Lisaks sellele teatati, et pVHL-i nokaut podotsüütides ja torukujulistes rakkudes indutseeritakse neerupatoloogiaid, nagu poolkuuline glomerulonefriit31 ja neerutsüstid.70 Lisaks teatati, et pVHL-i nokaut podotsüütides ja torukujulistes rakkudes indutseeriti neerupatoloogiaid, nagu poolkuuline glomerulonefriit31 ja neerut kasutasime indutseeritavat Cred phd2 või pVHL-i nokautimiseks pärast 5-nädalast vanust, sest Foxd1 väljendub foxd1 ekspressiivsetes peritsiidides kas pVHL-i või PHD2 embrüonaalses staadiumis ja nokaut on tõestatud, et see kahjustab nefrogeneesi.71,72
Sorteeritud neeru Gli1+ lahtrites PHD2 nokaudiga Gli1 abilCreERT2/+; Egln1F/F; ROSA26fstdTomato/fstdTomatohiirtel täheldasime rakulise Epo mRNA ekspressiooni olulist suurenemist, kuid mitte Col1a1 või Acta2. Epo mRNA 50-kordne tõus kinnitas HIF-i üleekspressiooni sorteeritud neeru Gli1 + peritsüütides PHD2 nokaudiga. Lisaks sellele põhjustas in vivo pVHL või PHD2 nokaut Gli1+ peritsüütides neeru Epo ekspressiooni suurenemist ja polütsütemiat, kuid mitteneerufibroos. Me usume, et kui HIF-i allavoolu molekulid peritsüütides mõjutavadneerufibroos, seda täheldatakse meie uuringus. PHD2 inaktiveerimise mõju HIF-i stabiliseerimisele võib varjata PHD1 ja PHD3 bioloogiline koondamine. Siiski täheldasime järjepidevat mõju EPO-le ja kollageeni tootmisele Gli1+ peritsüütides kas pVHL-i või PHD2 nokaudiga, toetades veelgi HIF-i stabiliseerimist peritsüütides, soodustab erütropoeesi, kuid mitteFibroosi. Me ei suutnud Gli1 luuaCreERT2/+; VhlF/F; ROSA26fstdTomato/fstdTomatohiired läbi Gli1CreERT2/þ risti; VhlF/Fja ROSA26fstdTomato/fstdTomatohiirtel, sest nii Vhl kui ka ROSA26 asuvad 6. kromosoomis.
Me kasutasime UUO-dneervigastuste mudel, et uurida HIF-i peritsüütispetsiifilise manipuleerimise mõju HIF-ineerufibroossest UUO mudelis on enamikku Gli1+ peritsüüte, mis on diferentseeritud müofibroblastidele ja Gli1+ rakkude ablatsioonile, leevendatakse neerufibroosi.11,36 UUO mudelit on edukalt kasutatud ka kollageeni ja EPO tootmise muutuste demonstreerimiseks peritsüütide-müofibroblasti üleminekul meie grupi ja teiste poolt.14,17,41 Kuid UUO-l on CKD mudelina oma piirangud ja meie tulemusi selles uuringus ei pruugi olla üldistatud teiste CKD mudelitega. Tulevased uuringud on õigustatud peritsüütide spetsiifilise HIF-manipuleerimise mõju testimiseks erinevates CKD-mudelites.
Kokkuvõttes näitasime, et Gli1+ peritsütsepikektiivne HIF-i stabiliseerimine suurendab EPO-d, erütropoeesi, kuid ei mõjutanudFibroosimudelites, millel on UUO vigastus või ilma. Rakutasandil suurendab Gli1+ peritsüütide spetsiifiline HIF-stabiliseerimine Epo ekspressiooni, kuid mitte Col1a1, Col3a1 ja Acta2 ekspressiooni. Peritsüüdispetsiifiline HIF-nokaut ei mõjutanudneerufibrooskas. Need tulemused annavad eksperimentaalseid tõendeid PHD inhibiitorite negatiivse mõju puudumise kohta neerufibroosile ja CKD progresseerumisele.
Cistanche parandamiseksneerfunktsioon
AVALIKUSTAMINE
Kõik autorid ei deklareerinud konkureerivaid huve.
TUNNUSTUSED
SYP-d toetavad teadus- ja tehnoloogiaministeerium (toetused 106-2314-B-418-006, 107-2314-B-418-001 ja 108-2314-B-418-004) ja Kaug-Ida Memoriaalhaigla (toetused 2017-C-037 ja 2020-C-037). SLL-i toetavad teaduse ja tehnoloogia ministeerium (toetused 108-2314-B-002-078-MY3 ja 109-2314-B-002-260), riiklikud terviseuuringute instituudid (grant EX108-10633SI), Taiwani riiklik ülikooli haigla (NTUH; toetused 108-T16 ja 109-T16), NTUH ja NTU meditsiinikolledž (grant NSCCMOH-131-43), proua Hsiu-Chin LeeNeerResearch Foundation ja Taiwan Health Foundation.
Täname professor Guo-Hua Fong (University of Connecticut Health Center) egln1F/Fhiired; Dr. Yi-Ting Tsai (NTU Meditsiinikolledž) Gli1 patoloogiliseks uurimiseksCreERT2/+; VhlF/Fja VhlF/Fhiired; ja NTUH meditsiiniuuringute osakond, esimese põhilabori rakkude sorteerimise ja pildistamise põhirajatis, Transgeense hiire mudeli põhirajatis ja NTU meditsiinikolledži geeni knockout hiire põhilabor seadmete toetamiseks ja tehniliseks abiks.
AUTORI KAASTÖÖD
SYP, PZT, YHC, YTC, FCC, YLC ja WCC viisid läbi katseid ja analüüsisid andmeid. SYP, YLC, TH, YMC ja TSC osalesid eksperimentide projekteerimisel ja andmete analüüsimisel. SLL kavandas ja juhtis projekti. SYP ja SLL kirjutasid käsikirja.
TÄIENDAV MATERJAL
Lisafail (PDF)
Täiendavad meetodid.
Joonis S1. Peritsüütispetsiifilise PHD2 nokaudiga hiirtel ei muutunud kehakaal, perifeerse valgete vereliblede arv ja trombotsüütide arv.
Joonis S2. RNA poolt kohapeal hübridisatsiooni käigus avastatud Epo mRNA representatiivsed pildidneeregln1F/F ja Gli1CreERT2/þ; Egln1F/FHiired. Joonis S3. Ülemaailmne PHD2 nokaut edendab EPO tootmist ja
erütropoiesis.
Joonis S4. PCR analüüs genoomsest DNA-st, mis on ekstraheeritudneermaks, põrn, süda ja kops Tg-s (UBC-CreERT2); Egln1F/F ja littermate kontrollhiired.
Joonis S5. RNA poolt kohapeal hübridisatsiooni käigus avastatud Epo mRNA representatiivsed pildidneerEgln1F/F hiirtest.
Joonis S6. Gli1þ peritsüütide representatiivsed pildid CLK-s ja UUO-sNeerudPärast UUO vigastust.
Joonis S7. Peritsüütispetsiifilise HIF-stabiliseerimise pikaajalised mõjud
Gli1CreERT2/þ; VhlF/F hiired.
Joonis S8. Gli1CreERT2/+patoloogiaaruanne; VhlF/F hiired.
Joonis S9. Suurenenud hematokriidi ja seerumi EPO tase Gli1CreERT2/ +; VhlF/FHiired.
Joonis S10. PCR-analüüsneergenoomne DNA pärast tamoksifeeni induktsioone.
Joonis S11. Täisgeelpildid a-SMA ja a[1]tubuliini immunoblottinguks.
Joonis S12. Renal Epo ja Acta2 väljend Vhl-isF/Fja Gli1CreERT2/+; VhlF/Fhiired 7 päeva pärast UUO vigastust.
Joonis S13. Renal Epo ja Acta2 väljend Vhl-isF/Fja Gli1CreERT2/+; VhlF/Fhiired 14 päeva pärast UUO vigastust.
Joonis S14.Neerufibrooslaiendatud tamoksifeeni pesumudelis.
Joonis S15. Eksperimentaalne skeem neeru Gli1þ rakkude märgistamiseks tdTomatoga.
Joonis S16. Neeru tdTomatoþi rakkude sortimise gating-strateegia.
Joonis S17. tdTomato avaldise ja Egln1 kustutamise kinnitamine sorditud neeru tdTomatoþ lahtrites.
Joonis S18. PCR-analüüsneergenoomne DNA alates Gli1CreERT2/+; Hif1aF/F; Hif2aF/Fja pesakonnakaaslane Hif1aF/F; Hif2aF/Fkontrollida hiiri pärast tamoksifeeni manustamist.
Joonis S19. UUO indutseeritudneerufibroosGli1-sCreERT2/+; Hif1aF/F; Hif2aF/Fhiired pärast suurt annust ja lühikest tamoksifeeni pesemisperioodi.
Joonis S20. UUO indutseeritudneerufibroosGli1-sCreERT2/+; Hif1aF/F; Hif2aF/Fhiired pärast pooltoosi ja tamoksifeeni pikemat pesemisperioodi.
Tabel S1. Genotüpiseerimiseks kasutatavad praimerid.
Tabel S2. Kvantitatiivse PCR-i jaoks kasutatavad krundid.
Täiendav makro. Makro picrosirius punaseks värvitud automaatseks kvantifitseerimiseksneerala imagej järgi.
Cistanche tooted sobivad hästiNeeru
VIITED
1.Neeruhaigus: Globaalsete tulemuste parandamine (KDIGO) aneemia töörühm. KDIGO kliinilise praktika suunis aneemia kohtakrooniline neeruhaigus.Neeru int Suppl. 2012;2:279–335.
2. Astor BC, Muntner P, Levin A jt. Ühendusneerfunktsioon aneemiaga: kolmas riiklik tervise- ja toitumisalane uuring (1988-1994). Arch Intern Med. 2002;162:1401–1408.
3. Maxwell PH, Eckardt KU. HIF prolyl hüdroksülaasi inhibiitorid neeru aneemia raviks ja kaugemalgi. Nat Rev Nephrol. 2016;12:157–168.
4. Chen N, Hao C, Peng X jt. Roxadustat aneemia korral patsientidel, kellel onneerhaigus, mis ei saa dialüüsi. N Engl J Med. 2019;381:1001–1010.
5. Chen N, Hao C, Liu BC jt. Roxadustat ravi aneemia patsientidel, kes läbivad pikaajalist dialüüsi. N Engl J Med. 2019;381:1011–1022.
6. Schodel J, Ratcliffe PJ. Hüpoksia signaalimise mehhanismid: uued tagajärjed nefroloogiale. Nat Rev Nephrol. 2019;15:641–659.
7. Pan SY, Chiang WC, Chen YM. Teekond erütropoetiinist 2019. aasta Nobeli preemiani: keskenduge hüpoksia-indutseeritavatele teguriteleneer. J Formos Med Assoc. 2021;120:60–67.
8. Lin SL, Kisseleva T, Brenner DA jt. Peritsüüdid ja perivaskulaarsed fibroblastid on kollageeni tootvate rakkude peamine allikas obstruktiivsetesFibroosineerust. Am J Pathol. 2008;173:1617–1627.
9. Pan SY, Chang YT, Lin SL. Mikrovaskulaarsed peritsüüdid tervetes ja haigetes neerudes. Int J Nephrol Renovasc Dis. 2014;7:39–48.
10. Humphreys BD, Lin SL, Kobayashi A jt. Saatuse jälgimine näitab müofibroblastide peritsüüti, mitte epiteelilist päritoluneerufibroos. Am J Pathol. 2010;176:85–97.
11. Kramann R, Schneider RK, DiRocco DP jt Perivascular Gli1þ eellased on vigastustest põhjustatud elundi peamised panustajadFibroosi. Raku tüvirakk. 2015;16:51–66.
12. Schrimpf C, Xin C, Campanholle G jt. Peritsüüt TIMP3 ja ADAMTS1 moduleerivad vaskulaarset stabiilsust pärastneerKahju. J Am Soc Nephrol. 2012;23: 868–883.
13. Lemos DR, Marsh G, Huang A jt. Vaskulaarse terviklikkuse säilitamine peritsüütide poolt on normaalseks eluks hädavajalikneerfunktsioon. Am J Physiol Renal Physiol. 2016;311:F1230–F1242.
14. Chang YT, Yang CC, Pan SY jt DNA metüültransferaasi inhibeerimine taastab erütropoetiini tootmise fibrootilistes muriini neerudes. J Clin Invest. 2016;126:721–731.
15. Chou YH, Pan SY, Shao YH jt. Metülatsioon peritsüütides pärast ägedat vigastust soodustab kroonilistneertõbi. J Clin Invest. 2020;130:4845–4857.
16. Chang FC, Chou YH, Chen YT jt. Uudsed arusaamad peritsüütemüofibroblast üleminekust ja terapeutilistest sihtmärkidestneerufibroos. J Formos Med Assoc. 2012;111:589–598.
17. Souma T, Nezu M, Nakano D jt. Erütropoetiini süntees neerumüofibroblastides taastatakse hüpoksia signaalimise aktiveerimisega. J Am Soc Nephrol. 2016;27:428–438.
18. Asada N, Takase M, Nakamura J jt. Neeruvälise päritoluga fibroblastide düsfunktsioon on aluseksneerufibroosja neeru aneemia hiirtel. J Clin Invest. 2011;121:3981–3990.
19. Wu CF, Chiang WC, Lai CF jt. Kasvufaktori beeta-1 muundamine stimuleerib profibrootilist epiteeli signaalimist, et aktiveerida peritsüütide-müofibroblasti üleminek obstruktiivsesneerufibroos.Am J Pathol. 2013;182:118–131.
20. Chen YT, Chang FC, Wu CF jt. Trombotsüütidelt saadud kasvufaktori retseptori signalisatsioon aktiveerib peritsüütide-müofibroblasti ülemineku obstruktiivses ja post-isheemilises faasisneerFibroosi. Neeru int. 2011;80:1170–1181.
21. Lin SL, Chang FC, Schrimpf C jt. Endoteeli-peritsüütide ristkõne sihtimine VEGF retseptori signalisatsiooni attenuaatide pärssimise teelneermikrovaskulaarne haruldane jaFibroosi. Am J Pathol. 2011;178:911–923.
22. Ren S, Johnson BG, Kida Y jt LRP-6 on peritsüütide ja müofibroblastide mitmete fibrogeensete signaaliradade tuumtseptor, mida DKK-1 inhibeerib. Proc Natl Acad Sci U S A. 2013;110:1440–1445.
23. Kawakami T, Mimura I, Shoji K jt. Hüpoksia jaFibroosiinkrooniline neeru disease: peritsüütide ületamine. Neeru int Suppl. 2014;4:107–112.
24. Kapitsinou PP, Jaffe J, Michael M jt. HIF prolhüdroksülatsiooni preiskeemiline sihtimine pärsibFibroosiseotud ägedaneerKahju. Am J Physiol Renal Physiol. 2012;302:F1172–F1179.
25. Schley G, Klanke B, Kalucka J jt. Mononukleaarsed fagotsüüdid orkestreerivad prolüülhüdroksülaasi inhibeerimist vahendatavat renoprotektsiooni kroonilises tubulointerstitsiaalses nefriitises. Neeru int. 2019;96:378–396.
26. Uchida L, Tanaka T, Saito H jt. Prolüülhüdroksülaasi inhibiitori mõjuneerja kardiovaskulaarsed tüsistused kroonilise neeruhaiguse rotimudelis. Am J Physiol Renal Physiol. 2020;318:F388–F401.
27. Sugahara M, Tanaka S, Tanaka T jt. Prolüülhüdroksülaasi domeeni inhibiitor kaitseb ainevahetushäirete ja nendega seotud häirete eestneerrasvunud 2. tüüpi diabeetiliste hiirte haigus. J Am Soc Nephrol. 2020;31:560–577.
28. Higgins DF, Kimura K, Bernhardt WM jt. Hüpoksia soodustab fibrogeneesi in vivo kaudu HIF-1 epiteeli-mesenhümaalse ülemineku stimuleerimist. J Clin Invest. 2007;117:3810–3820.
29. Pritchett TL, Bader HL, Henderson J jt. Hiire von Hippel–Lindau kasvaja supressorgeeni tingimuslik inaktiveerimine põhjustab neerudes laialt levinud hüperplastilisi, põletikulisi ja fibrootilisi kahjustusi. Oncogene. 2014;34:2631.
30. Kapitsinou PP, Sano H, Michael M jt. Endoteeli HIF-2 vahendab kaitset ja taastumist isheemilisestneerKahju. J Clin Invest. 2014;124:2396–2409.
31. Ding M, Cui S, Li C jt. Kasvaja supressori Vhlh kadumine põhjustab Cxcr4 ja hiirtel kiiresti progresseeruva glomerulonefriiti ülesreguleerimist. Nat Med. 2006;12:1081–1087.
32. Ding M, Coward RJ, Jeansson M jt. Hüpoksia-indutseeritava teguri 2-a reguleerimine on glomerulaarse barjääri terviklikkuse jaoks hädavajalik. Am J Physiol Renal Physiol. 2013;304:F120–F126.
33. Norman JT, Clark IM, Garcia PL. Hüpoksia soodustab fibrogeneesi inimese neeru fibroblastides. Neeru int. 2000;58:2351–2366.
34. Wang Z, Tang L, Zhu Q jt. Hüpoksia-indutseeritav tegur-1alpha aitab kaasa angiotensiin II profibrootilisele toimele neeru medullaarsetes interstitsiaalsetes rakkudes.NeerInt. 2011;79:300–310.
35. Koury MJ, Haase VH. Aneemia inneerhaigus: hüpoksia reaktsioonide rakendamine ravile. Nat Rev Nephrol. 2015;11:394–410.
36. Fabian SL, Penchev RR, St-Jacques B jt. Hedgehog-Gli raja aktiveerimise ajalneerufibroos.Am J Pathol. 2012;180:1441–1453.
37. Lin SL, Castano AP, Nowlin BT jt. Luuüdi Ly6Chigh monotsüüdid värvatakse valikuliselt vigastatudNeerudja eristada funktsionaalselt eristatavateks populatsioonideks. J Immunol. 2009;183:6733–6743.
38. Delle H, Rocha JR, Cavaglieri RC jt. Tamoksifeeni antifibrootiline toime progresseeruva neeruhaiguse mudelis. J Am Soc Nephrol. 2012;23:37–48.
39. Falke LL, Broekhuizen R, Huitema A jt. Tamoksifeen krerekombinatsiooni induktsiooniks võib segi ajadaFibroosiuuringud emastel hiirtel. J-raku kommuuni signaal. 2017;11:205–211.
40. Greenwald AC, Licht T, Kumar S jt VEGF laiendab erütropoeesi hüpoksiast sõltumatu erütropoetiini induktsiooni kaudu mittekanoonilistes perivaskulaarsetes stromaalsetes rakkudes. J Exp Med. 2019;216:215–230.
41. Broeker KAE, Fuchs MAA, Schrankl J jt. Erinevad alampopulatsioonidneerinterstitsiaalsed rakud toodavad erütropoetiini ja kudede hapnikuga varustamist toetavaid tegureid vastuseks hüpoksia in vivole.NeerInt. 2020;98:918–931.
