ABSTRAKTNE

Eesmärgid:Maclura pomifera (Rafin.) Schneider on kõikjal maailmas laialt levinud liik, mida kasvatatakse sageli ka dekoratiivsetel eesmärkidel. Varasemad uuringud näitasid, et M. pomifera viljad on rikkad prenüleeritud isoflavonoidide poolest, neil on märkimisväärne bioloogiline aktiivsus ja neil on tõenäoline kasu, eriti paiksel kasutamisel. Arvestades, et fenoolsed ühendid on vananemisvastaste kosmeetikatoodete väljatöötamisel olulised allikad, uuriti selles uuringus M. pomifera 80-protsendilise metanooliekstrakti (MPM) vananemisvastast potentsiaali, hinnates antioksüdantide ja rakuvälist maatriksit lagundavate ensüümide inhibeerivat aktiivsust.

Tistanche glükosiid võib samuti suurendada SOD aktiivsust südame- ja maksakudedes ning oluliselt vähendada lipofustsiini ja MDA sisaldust igas koes, eemaldades tõhusalt erinevaid reaktiivseid hapnikuradikaale (OH-, H2O₂ jne) ja kaitstes tekitatud DNA kahjustuste eest. OH-radikaalide poolt. Tsistanche fenüületanoidglükosiididel on tugev vabade radikaalide eemaldamisvõime, suurem redutseerimisvõime kui C-vitamiinil, nad parandavad SOD aktiivsust sperma suspensioonis, vähendavad MDA sisaldust ja omavad teatud kaitset sperma membraani funktsioonile. Tsistanche polüsahhariidid võivad suurendada SOD ja GSH-Px aktiivsust D-galaktoosi poolt põhjustatud eksperimentaalselt vananevate hiirte erütrotsüütides ja kopsukudedes, samuti vähendada MDA ja kollageeni sisaldust kopsudes ja plasmas ning suurendada elastiini sisaldust. hea puhastav toime DPPH-le, pikendab hüpoksia aega vananevatel hiirtel, parandab SOD aktiivsust seerumis ja aeglustab eksperimentaalselt vananevatel hiirtel kopsude füsioloogilist degeneratsiooni Raku morfoloogilise degeneratsiooniga on katsed näidanud, et Cistanche'il on hea antioksüdantne võime ja sellel on potentsiaal olla ravim naha vananemishaiguste ennetamiseks ja raviks. Samal ajal on Cistanche ehhinakosiidil märkimisväärne võime eemaldada DPPH vabu radikaale ja see suudab eemaldada reaktiivseid hapniku liike ja takistada vabade radikaalide poolt indutseeritud kollageeni lagunemist, samuti on sellel hea parandav toime tümiini vabade radikaalide anioonide kahjustustele.

Klõpsake valikul Cistanche Tubulosa Supplement

【Lisateabe saamiseks:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Materjalid ja meetodid:Selle uuringu jaoks hinnati 80-protsendilise MPM-i inhibeerivat potentsiaali erinevate vananemisprotsessiga seotud ensüümide suhtes. Arvestades oksüdatiivse stressi ühemõttelist rolli vananemises, kasutati ka in vitro antioksüdantide teste. Veelgi enam, osajin määrati kõrgefektiivse õhukese kihi kromatograafia analüüsiga proovi peamiseks bioaktiivseks isoflavonoidiks.

Tulemused:Mehaaniliselt erinevate antioksüdantide analüüside tulemused näitasid ekstrakti olulist antioksüdantset potentsiaali. Uuriti MPM-i inhibeerimispotentsiaali hüaluronidaasi, kollagenaasi ja elastaasi ensüümide suhtes, mis on otseselt seotud vananemisprotsessi kiirendamisega ja tulemused näitasid, et MPM inhibeeris ülaltoodud ensüüme selgesõnaliselt. MPM-il oli ainulaadne fenooli- ja flavonoidisisaldus; 113,92 ± 2,26 mg gallushappe ekvivalenti/g ja 66,41 ± 0,74 mg QE/g. Kui arvestada antioksüdantide koguvõimsuse teste, võib oletada, et MPM on paljulubav vananemisvastane aine.

Järeldus:Selle tulemusena avalikustab see uuring, et M. pomifera viljade ekstraktidel on märkimisväärne vananemisvastane potentsiaal ja neid võib sel eesmärgil kasutada.

Märksõnad:Maclura pomifera, vananemisvastane, antioksüdandid, HPTLC, osajin

SISSEJUHATUS

Samuti toimuvad vanuse kasvades erinevad füsioloogilised muutused kõigis elundites, sealhulgas inimese nahas.1 On olemas kaks vananemisklassi: sisemist vananemist kontrollib geneetika ja väline vananemine on füsioloogiliste muutuste loomulik tulemus, mis on tingitud keskkonnategurite, nagu ultraviolett (UV) kahjulikust mõjust. ). ).4

Suurima organina on nahal mitmeid ülesandeid, nagu kaitse, kehatemperatuuri reguleerimine ja meelte tuvastamine.5 Nahk koosneb epidermisest, pärisnahast ja nahaalusest koest ning on esimene barjäär inimkeha ja väliskesta vahel. keskkond.6,7 ECM on pärisnaha suurim üksus ning toetab kasvu ja elastsust, moodustades struktuurse karkassi.8 Naha fibroblastide poolt moodustatud kollageen, elastiin ja fibronektiin moodustavad ECM-i ja on sulandunud proteoglükaanidega.5 Kollageen on põhivalk, mis moodustab ligikaudu 25-35 protsenti kogu keha valgusisaldusest ja mida leidub erinevat tüüpi loomsete sidekudede rakuvälises ruumis.3 Üks peamisi naha vananemise ja kortsude tekke põhjuseid on kollageeni muutumine struktuur.1 Elastiin on valk, mis annab nahale ainulaadse füsioloogilise elastsuse ja esineb mitmes sidekoes.6 Naha niisutamine ning naha sileda, niiske ja määritud hoidmine on olulised tegurid, mis takistavad naha vananemist ning glükoosaminoglükaan (GAG), hüaluroonhape, mängib nendes tegevustes üliolulist rolli.8 Need pöördelised koostisosad lagunevad hüaluronidaasi, kollagenaasi ja elastaasi ensüümide toimel, mis viib naha vananemise kiirenemiseni. Lisaks põhjustab kokkupuude mikroorganismide, reostuse, ioniseeriva kiirguse, kemikaalide ja toksiinidega reaktiivsete hapnikuliikide (ROS) moodustumist ning kahjulikud tagajärjed kiirendavad naha vananemist.9 ROS võib käivitada keerulisi molekulaarteid ja selle tulemusena kollagenaas, elastaas , ja hüaluronidaasi aktiivsus võib suureneda, mis viib tuvastatava ECM-i lagunemiseni ja nahatekstuuri muutusteni.10 Mainitud põhjustel võivad uudsed looduslikud ained, mis pidurdavad ROS-i moodustumist ja pärsivad ECM-i lagundavaid proteaase, aeglustada naha vananemisprotsessi.11

Maclura pomifera (Rafin.) Schneider kuulub Moraceae või mooruspuu perekonda ja on tuntud ka kui osage apelsinipuu, mida kasvatatakse peaaegu kogu maailmas.12 M. pomifera omab mitmeid bioloogilisi toimeid, nagu antibakteriaalne, seenevastane, viirusevastane, tsütotoksiline, kasvajavastane, östrogeenne, ja malaariavastane13 prenüleeritud isoflavoonide, st osajiini ja pomiferiini tõttu, mida peetakse puuviljade peamisteks metaboliitideks.14 Vananemisvastase kosmeetikatoodete tootmises on fenoolühendid olulised looduslikud allikad. Seega on kasvav huvi selliste tegevuste jaoks fenoolühendirikaste taimede, nagu M. pomifera, uurimise vastu. Varasemad uuringud näitasid, et Maclura isoflavoonid suurendavad kollageeni, elastiini ja fibrilliini ekspressioonitaset, mis on võrreldav või parem kui samaväärsed retinooli kontsentratsioonid. Seega võib eeldada, et Maclura isoflavoonid on tugevad ECM-i valgu stimulandid.15 Neid andmeid arvesse võttes on selle uuringu eesmärk uurida M. pomifera 80-protsendilise metanooliekstrakti (MPM) vananemisvastast potentsiaali, uurides selle antioksüdantse bioaktiivsuse ja pärssimise potentsiaali. ECM-i lagundavad ensüümid. Lisaks mõõdeti ekstrakti peamise bioaktiivse komponendi, osajini kvantitatiivset analüüsi kõrgfektiivse õhukese kihi kromatograafiaga (HPTLC) ning fenooliprofiili täpsemaks mõistmiseks viidi läbi üldfenoolisisalduse ja flavonoidide kogusisalduse analüüsid. Tulemused näitavad, et M. pomifera võib olla väärtuslik vananemisvastaste toodete allikas.

MATERJALID JA MEETODID

Kemikaalid

Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA) andis kõik testides kasutatud ensüümid, kemikaalid ja viited. Kõikide kemikaalide kvaliteet oli analüütiline.

Taimne materjal

M. pomifera viljad koguti Uşakist Türkiye osariigist 2020. aasta mais. Dr Hilal Bardakcı viis läbi taimeproovide botaanilise identifitseerimise. Taime vautšeri proov deponeeriti Acıbademi ülikooli farmaatsiateaduskonna herbaariumis (ACUPH 00002).

Ekstraktide valmistamine

Puuviljad eraldati väikesteks tükkideks ja lasti läbi segisti. Puuvilju (6,45 kg) leotati 3125 ml 80% metanooliga (MeOH), kasutades loksutusseadet kolm päeva toatemperatuuril pimedas kohas. Matseraat filtriti ja seda protseduuri korrati kaks korda. Saadud filtraadid koguti kokku ja metanool aurustati rotaatoraurustis. Toormetanooliekstrakt lüofiliseeriti (saagis oli 204,37 g, 3,16 protsenti) ja säilitati temperatuuril -20 kraadi (MPM).

Peamiste bioaktiivsete ühendite kvantifitseerimise protseduur HPTLC abil

Kõik kasutatud kemikaalid ja reaktiivid olid analüütiliselt puhtad. Kloroform (CHCl3) ja etüülatsetaat (EtOAc) osteti firmalt Sigma-Aldrich. Kaubanduslikult saadav osajini standard osteti ettevõttelt Sigma-Aldrich (SMB {{10}}0092). HPTLC analüüsid viidi läbi 20 cm × 10 cm klaasist HPTLC silikageeli 60 F254 plaatidel (Merck, Darmstadt, Saksamaa). Osajini sisaldus MPM-is määrati CAMAG HPTLC analüütilise süsteemiga. Käesolevas uuringus kasutatud liikuvat faasi on varem kirjeldanud Bozkurt et al.16 M. pomifera toimeainete eraldamise käigus. Analüüsi testlahusena kasutati 10 mg/ml MeOH ekstrakti. Osajini standardlahus (0,5 mg/ml) valmistati, kasutades 2 ml atsetooni. Töölahus standardühendi kontsentratsiooniga 50 µg/ml valmistati põhilahusest atsetooniga lahjendamisel. Iga proov filtriti läbi 0,45 µm süstalfiltri. 10 μL ekstrakti koos vähemalt viie erineva kontsentratsiooniga standardlahusega (3.3-4,7 μL) kanti 8 mm pikkuste ribadena silikageelklaasist HPTLC plaatidele 60 F254 koos CAMAG Automaticiga. TLC proovivõttur IV. Arendused viidi läbi CAMAG Automatic Developing Chamber-2 (ADC- 2) ja liikuvaks faasiks oli CHCl3: EtOAc [8:2 (maht/maht)]. Kambrit küllastati 10 minutit ja plaati eelkonditsioneeriti 5 minutit enne ilmutamist. Niiskust kontrolliti ADC{30}} abil, kasutades MgCl2 (33% suhteline niiskus) 10 minuti jooksul. Densitomeetriline hindamine viidi läbi, kasutades CAMAG TLC Scanner IV fluorestsentsrežiimis. Pilu suurust hoiti 5 × 0, 2 mm, mikro ja skaneerimiskiiruseks määrati 20 mm / s. Standardsisu saadi, võrreldes vastuvõtja tööomaduste kõverate (AUC) aluste pindala standardite kalibreerimiskõveraga 280 nm juures. Standardite olemasolu ekstraktis tagati iga ekstrakti ja standardi nii retentsioonitegurite (Rf) kui ka katvate UV-spektrite võrdlemisega. Osajini kogus määrati ekstraktist ja fraktsioonidest difuusselt peegeldunud valguse intensiivsuse võrdlemisel standardühendiga.

Osajini sisaldust taime toorekstraktis mõõdeti HPTLC-densitomeetria abil. Osajini standardi Rf väärtuseks leiti 0,556. Osajini esinemist uuritavates proovides kontrolliti nende Rf väärtuste võrdlemise ja nende UV-spektrite kattumise teel (joonis 1). Kvantifitseerimiseks võrreldi proovide AUC-sid standardühendit osajin kasutades saadud kalibreerimiskõveraga. Kalibreerimisfunktsioon oli y=2.268*10-8x. Kalibreerimisfunktsiooni korrelatsioonikordaja (R) ja variatsioonikoefitsient olid vastavalt 0,998 protsenti ja 1.{11}}6 protsenti . HPTLC analüüs näitas, et MPM sisaldab 0,22% (w/w) osajiini. HPTLC uuringu tulemused on toodud tabelis 1.

Fenoolse profiili analüüs

Üldfenoolisisalduse analüüs

Analüüs viidi läbi proovide üldfenoolisisalduse hindamiseks Folin-Ciocalteu meetodil, mida varem kasutasid Kurt-Celep jt.{2}} μL värskelt lahjendatud proovilahuseid segati 75 μL Na2 CO3-ga (20 protsenti). ) ja 100 µL FCR-i (Folin-Ciocalteu reaktiiv), mis on lahjendatud veega (1:9). Pärast 30-minutilist inkubeerimist 45 °C juures loeti segude neelduvus spektrofotomeetriliselt 765 nm juures. Tulemused väljendati mg gallushappe ekvivalentidena (GAE) grammi ekstrakti kohta.

Flavonoidide üldsisalduse analüüs

Fraktsioonide flavonoidide kogusisalduse mõõtmine viidi läbi Bardakci jt poolt varem kirjeldatud meetodil.18 Lühidalt, värskelt valmistatud 1 M CH3 COONa ja 10 protsenti AlCl3 segati proovidega. Seejärel inkubeeriti segusid 30 minutit toatemperatuuril ja pimedas. Pärast inkubeerimisprotsessi arvutati neeldumine lainepikkusel 415 nm. Tulemused kinnitati mg kvertsetiini ekvivalentidena (QE) 1 g proovi kohta.

In vitro antioksüdantse aktiivsuse määramine

2,2-difenüül-1-pikrüülhüdrasüüli (DPPH) radikaali püüdmise aktiivsuse test

DPPH radikaali püüdva aktiivsuse määramiseks kombineeriti värskelt lahjendatud proovilahused (erinevad kontsentratsioonid valmistati 1 mg/ml põhilahusest) ja metanooli DPPH lahus (100 mM). Pärast 45-minutilist inkubeerimisintervalli toatemperatuuril loeti neeldumine 517 nm juures. Kalibreerimiskõvera saamiseks kasutati võrdlusühendina butüülhüdroksütolueeni (BHT). Tulemuste IC50 väärtused märgiti µg/ml.19

Raudmetalli redutseeriva antioksüdandi võimsuse (FRAP) test

FRAP-reagendi saamiseks 25 ml 300 mM atsetaatpuhvrit (pH 3,6), 2,5 ml TPTZ [2,4,6-tris(2-püridüül)-s-triasiin] ja 2,5 ml FeCl3.6H20 (20 mM) segati. Pärast seda lisati 10 ml proovi 260 ml FRAP reagendile ja lahjendati destilleeritud veega 96 süvendiga plaadil 300 ml-ni. Pärast 30-minutilist inkubeerimist 37 kraadi juures mõõdeti neeldumist lainepikkusel 593 nm. BHT-d kasutati võrdlusühendina. Standardkõvera saamiseks kasutati raudkloriidi lahust (0,252 mM) ja tulemused esitati kui mM FeSO4 1 g kuivekstraktis.20

Vaski vähendava antioksüdantide võime (CUPRAC) test

CUPRAC-testi hinnati vastavalt meetodile, mida on eelnevalt kirjeldanud Barak et al.21. 96-süvendiga plaadil segati võrdsed kogused 10 mM CuSO4, neokupriini ja ammooniumatsetaatpuhvrit (85 ml). Seejärel lisati segule vastavalt 51 ml destilleeritud vett ja 43 ml proovilahuseid. Pärast 20-minutilist inkubeerimist loeti neeldumine 450 nm juures. Tulemused väljendati mg askorbiinhappe ekvivalendina 1 g kuivekstraktis.

Üldise antioksüdandivõimekuse (TOAC) määramine

Kogu antioksüdantide võimekuse test arvutati Barak jt poolt varem selgitatud fosfomolübdeeni meetodi järgi.22 Esiteks, TOAC lahuse saamiseks; Segati 28 mM ühealuselist naatriumfosfaati, 4 mM ammooniummolübdaati ja 600 mM H2S04. Seejärel segati 300 µl TOAC lahust 30 µL proovilahustega 96 tervel plaadil. Pärast inkubatsiooniperioodi 95 kraadi juures 90 minutit loeti neeldumine 695 nm juures. Standardkõvera saamiseks kasutati askorbiinhapet ja tulemused arvutati mg Troloxi ekvivalentidena 1 g kuivekstraktis.

Naha vananemisega seotud ensüümide pärssiv toime

Kollagenaasivastane aktiivsus

MPM-i kollagenaasivastase aktiivsuse mõõtmiseks valmistati 50 mM tritsiini puhverlahus (pH: 7,5) (400 mM NaCl ja 10 mM CaCl2). Kollagenaasi allikana kasutati Clostridium histolyticum'i (ChC - EC. 3.4.23.3), mis lahustati 50 mM tritsiini puhverlahuses, et saada algkontsentratsioon 0,8 U/mL. Substraadina kasutati 2 mM tritsiinipuhvris lahustatud N-[3-(2-furüül)akrüloüül]-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA). Ekstrakte inkubeeriti kollagenaasi ensüümiga puhverlahuses 15 minutit enne substraadi lisamist reaktsiooni alustamiseks. Lõpliku reaktsioonisegu kogumaht oli 150 ui; tritsiini puhver, 0,8 mM FALGPA, 0,1 ühikut ChC ja 25 µl MPM. Pimekatsetulemuste jaoks kasutati vett. Pärast substraadi lisamist tehti koheselt neeldumise mõõtmine. Positiivsed kontrollid teostasid epigallokatehhiingallaati (EGCG).23

Elastaasivastane aktiivsus

MPM-i antielastaasi aktiivsuse hindamine viidi läbi, kasutades 0,2 mM Tris-HCl puhverlahust (pH: 8.{5}}). Sea kõhunäärmest saadud elastaasi (PE, EC 3.4.21.36) põhilahus valmistati destilleeritud veega kontsentratsioonis 3,33 mg/ml. Substraadina kasutatav N-suktsinüül-Ala-Ala-p-nitroaniliid (AAAPVN) lahustati puhverlahuses (1,6 mM). MPM ekstrakti inkubeeriti 1 µg/ml PE-ga 15 minutit 37 kraadi juures enne substraadi lisamist. 15-minutise eelinkubatsiooni lõpus lisati ensüümi segule, mis sisaldas 1 mg/ml taimeekstrakti, 0,8 mM AAAPVN substraati ja inkubeeriti uuesti 15 minutit 37 kraadi juures. Kui kasutati positiivse kontrollina 0,25 mg/mL EGCG-d, sisaldab see testitav proov MPM-i asemel sama kogust EGCG-d ja testi seadistust korrati. Pärast inkubatsiooniperioode tehti mõõtmised neljal erineval ajahetkel 5 kuni 30 minuti jooksul Thermo Scientific Multiskan SkyHigh Microplate spektrofotomeetriga 365 nm ergastuse ja 410 nm emissiooni juures.24, 25

Hüaluronidaasi vastane toime

Hüaluronidaasivastane toime viidi läbi, muutes Kolayli jt26 ja Lee jt.3 kirjeldatud meetodit. Esiteks lahustati kaubanduslikult ostetud hüaluronidaas (EC 3.2.1.35, Sigma-Aldrich) 0-s. 02 M fosfaatpuhver (pH: 3,5), mis sisaldab NaCl ja veise seerumi albumiini. Seejärel valmistati atsetaatpuhvris (0,1 M, pH: 3,5) hüaluroonhape, ensüümi sobiv substraat, ja valmistati kasutusvalmis. Analüüsisegu, mis koosnes 20 ui MPM-ist kontsentratsiooniga 1 mg/ml, 10 ui hüaluronidaasist ja 60 ui 0,1 M atsetaatpuhvrist, eelinkubeeriti 20 minutit temperatuuril 37 °C. Pärast inkubatsiooniaega lisati segule 10 µL hüaluroonhapet ja inkubeeriti uuesti 37 kraadi juures 20 minutit. Kogu inkubatsiooniaja lõpus tehti mõõtmised erinevatel ajahetkedel Thermo Scientific Multiskan SkyHigh Microplate spektrofotomeetriga 600 nm juures. Tühi rühm ei sisaldanud katseseades ensüüme, samas kui kontrollrühm ei sisaldanud ekstrakti. Hüaluronidaasivastase aktiivsuse protsent arvutati järgmise võrrandi abil:

Vananemisvastased tegevused ( protsent )=[(kontrolli abs – proovi abs)/ kontrolli abs] × 100

Statistiline analüüs

Sellesse uuringusse kaasatud anti-elastaasi, anti-kollagenaasi ja anti-hüaluronidaasi aktiivsuse katseid korrati kolm korda sõltumatult. Statistilist erinevust analüüsiti GraphPad Prism 8 tarkvara t-testi abil (p Väiksem või võrdne 0,05).

TULEMUSED JA ARUTLUS

Vananemisvastase potentsiaali määramine

Elastiin, kollageen ja hüaluroonhape on ECM-i teadaolevad komponendid, millel on naha nooruses välimuses keskne roll. Elastiin on oluline valk naha elastsete omaduste säilitamiseks, järelikult viib elastiini vähenemine ECM-is vananemisprotsessi kiirenemiseni.27 Eelnev kirjandus viitab otsesele seosele kortsude tekke ja naha vananemise vahel, kuna elastiinisisaldus on vähenenud.28 Hüaluroonhape on hüdrofoobne GAG ​​molekul, mis depolümeriseeritakse hüaluronidaasi kaudu. Hüaluroonhape on ülioluline naha sileduse ja niiskuse stabiilsena hoidmiseks; seega on näidatud, et liigne lagunemine põhjustab naha kuivamist ja kortsude teket.29 Aja jooksul vananemisprotsessi tõttu põhjustab kollageeni vähenemine dermise õhenemist, mida peetakse mikroskoopilisel uurimisel iseloomulikuks näitajaks.3{{23 }} Täpselt viidati, et kollageeni lagunemise edasilükkamine kollagenaasi inhibiitorite kaudu aeglustab järelikult naha struktuuri kortsude teket ja vananemist.5 Seda teavet arvesse võttes on elastaasi, kollagenaasi ja hüaluronidaasi pärssivatel ainetel märkimisväärne potentsiaal vananemisvastastes toodetes. Varasemad uuringud on näidanud, et erinevatel isoflavonoididel on eelnimetatud ensüümide suhtes märkimisväärne inhibeeriv bioaktiivsus. Addotey et al.31 näitasid, et neli erinevat isoflavonoidi inhibeerisid hüaluronidaasi kuni 61,2 protsenti. Kim et al.32 on näidanud, et Glycyrrhiza uralensis Fisch. isoleeritud isoflavonoidil, likoritsidiinil, on märkimisväärne elastaasi inhibeeriv toime. Lagritsa IC50 väärtuseks arvutati 61,2 ± 4,2 uM, samas kui oleanoolhappe kui võrdlusühendi väärtuseks arvutati 131,4 ± 11,4. Tulemused näitasid, et isoflavonoidid võivad inhibeerida elastaasi ensüüme. Kooskõlas ülalmainitud uuringuga uurisid Kim jt 33 üheksat erinevat prenüleeritud isoflavonoidi, mis on osajiiniga väga sarnased struktuurid, mis on eraldatud Flemingia philippinensis Merr juurtest. & Rolfe. Teadlased teatasid, et viiel prenüleeritud isoflavoonil oli tugev neutrofiilide elastaasi inhibeeriv toime, IC50 väärtused varieerusid vahemikus 19-12,0 µM, samas kui oleanoolhappe IC50 väärtus oli 28,4 µM. Teises uuringus on Ergene Öz et al. 34 uuris Ononis spinoza L. juurtest eraldatud viie isoflavonoidi in vitro inhibeerivat toimet hüaluronidaasi, kollagenaasi ja elastaasi suhtes. Teatati, et isoflavoonide hüaluronidaasi inhibeeriv aktiivsus oli vahemikus 22.{29}},58 protsenti, samas kui tanniinhape inhibeeris samal kontsentratsioonil 88,32 protsenti. Kollagenaasi inhibeerimise tulemused arvutati vahemikus 20.41- 28.49 protsenti ja elastaasi inhibeerimise mõõdeti 20.47-46.88 protsenti . EGCG-d kasutati võrdlusena mõlemas testis ja inhibeerimisaktiivsuseks mõõdeti samal kontsentratsioonil vastavalt 41,18 protsenti ja 84,64 protsenti. Teises uuringus uuriti M. pomiferast otse eraldatud pomiferiini paikset ravi. 15 Pomiferiin on prenüleeritud isoflavonoid, mida leidub M. pomifera viljades ja mille molekulaarstruktuur sarnaneb ülimalt osajiini omaga. Uurijad teatasid, et pomiferiin avaldas tugevat ECM-i valku stimuleerivat toimet, suurendades kollageeni ja elastiini, mis on võrdlusühendist retinoolist parem või samaväärne. Kõik mainitud uuringud näitasid, et isoflavoonid on nende ensüümide mõõdukad kuni tugevad inhibiitorid ja neil on märkimisväärne potentsiaal looduslike vananemisvastaste materjalidena.

Selles uuringus uuriti MPM-i in vitro hüaluronidaasi, kollagenaasi ja elastaasi inhibeerivat toimet vananemisvastase potentsiaali määramiseks. Võrdlev analüüs viidi läbi kollagenaasi inhibeerimise testi jaoks kahel ajahetkel, nt 20 ja 40 min, nii MPM kui ka võrdlusühendi EGCG jaoks. Tulemused näitasid, et kollagenaasi inhibeerimise aktiivsus suurenes aja jooksul. 1 mg/ml MPM näitas 84,55 ± 1,99 protsendilist inhibeerimist, samas kui 25{{40}} µg/mL EGCG näitas pärast 20 minutit kestnud inkubeerimist 84,66 ± 1,83 protsenti. Inhibeeriv bioaktiivsus võimendus aja jooksul, pärast 40 min MPM ja EGCG inhibeerisid kollagenaasi vastavalt 94,68 ± 2,42 protsenti ja 94,98 ± 2,81 protsenti. Kooskõlas kirjandusega avaldas MPM olulist elastaasi inhibeerivat toimet. Tulemusi mõõdeti nelja ajapunkti (5, 10, 20 ja 30 min) kohta ja näidati aja jooksul suurenemist (joonis 2). Võrdlusena kasutati EGCG-d (250 µg/mL) ja inhibeerimisaktiivsus suurenes igal ajahetkel (44,07 ± 0.{33}} protsenti , 52,19 ± 0.{37}} protsenti , 64,69 ± 0.{41 vastavalt }} protsenti ja 86,21 ± 0.00 protsenti). Samal ajal näitas MPM kontsentratsioonis 1 mg/ml kõrgemat võimendus- ja inhibeerimisaktiivsust, mis tõusis 34,70 ± 0,57 protsendilt 97,40 ± 1,04 protsendile 5 minutilt 30 minutile. Samamoodi inhibeeris 1 mg/ml MPM märkimisväärselt hüaluronidaasi ensüümi pärast 40-minutilist inkubeerimist. Pärast 40-minutilist inkubeerimist mõõdeti 83,91 ± 2,36 protsenti inhibeerimist, pärast seda 80-minutilist inkubeerimist võimendus inhibeerimise määr 97,19 ± 0,45 protsendini. Kui arvestada kogu ensüümi inhibeerimise analüüsiga, näitasid tulemused märgatavalt, et MPM võib olla väärtuslik looduslik vananemisvastane aine ja seda võib kasutada mitmesuguste vananemisvastaste toodete koostises; seega võib M. pomifera saada täiendavat majanduslikku tähtsust.

Antioksüdandi potentsiaali määramine

Paljud eksogeensed ja endogeensed tegurid põhjustavad erinevate mehhanismide kaudu naha vananemist. Enamikku neist teguritest mõjutab otseselt või kaudselt ROS-i moodustumine naha ECM-is.35 Kuna nahk katab meie keha välimist osa, puutub see igapäevaelus kokku märkimisväärses koguses UV-kiirgusega. Seega on enamik nahaprobleeme, nagu päikesepõletus, hüperpigmentatsioon ja naha kantserogenees, pärinevad või on seotud UV-kiirguse otsese mõjuga. Samuti on fotovananemine selle ohtlike omaduste lisatagajärg.36 Lisaks tekitab UV-valgus ROS-i moodustumist ja järelikult ka oksüdatiivset stressi nahakoes, mis on üks olulisemaid fotovananemist põhjustavaid mehhanisme.37 Hüpotees oli, et kuna ülemäärane aeg on ülemäärane. ROS-i teke põhjustab naha enneaegset vananemist, olulise antioksüdatiivse võimega ained võivad olla väärtuslikud vahendid UV-kiirguse ohtlike mõjude vastu. Sellest lähtuvalt näitavad kliinilised uuringud, et antioksüdantide paiksel kasutamisel on nahale kaitsev toime.38

Pärast antioksüdantide paikse kasutamise ja naha vananemise edasilükkamise vastastikust seost, mis on varasemas kirjanduses hästi tõestatud, annab MPM-i in vitro antioksüdantide potentsiaali uurimine väärtuslikku teavet selle kohta, et see on paikselt manustatuna vananemisvastane potentsiaal. Varasem kirjandus on näidanud, et suure hulga isoflavonoide sisaldavad ekstraktid võivad olla väärtuslikud antioksüdandid. Eelmises uuringus vähendas F. macrophylla ekstrakti isoflavonoidirikas ekstrakt UVB-indutseeritud nahakahjustusi, eemaldades ROS-i.39 Santos ja Silva4{{10}} näitasid, et prenüülitud isoflavonoididel on nende tõttu oluline antioksüdantne potentsiaal. flavonoidosa ja prenüüli külgahela aditiivne toime. M. pomifera ekstraktide ja isoflavonoidide antioksüdantset potentsiaali hinnati eelmises uuringus. Tulemused näitasid, et hüdroalkohoolne ekstrakt ja puhas osajin näitasid märkimisväärset aktiivsust DPPH, FRAP ja TOAC analüüsides, kuigi pomiferiini ja etüülatsetaadi fraktsioonid näitasid suuremat aktiivsust.41 Selle uuringu jaoks olid DPPH radikaali eemaldamise aktiivsus, FRAP, CUPRAC ja TOAC testid. viidi läbi MPM-i in vitro antioksüdantse potentsiaali põhjalikuks määramiseks (tabel 2). MPM-il oli märkimisväärne DPPH radikaali püüdev aktiivsus, kus IC50 väärtus mõõdeti 1998. aastal.86 ± {{20}}.02. FRAP ja TOAC testid andsid samuti märkimisväärse metalli redutseeriva aktiivsuse, vastavalt 0,191 ± 0,01 mM FeSO4/DE ja 114,43 ± 0,02 AAE/g DE. Need leiud olid kooskõlas Orhani jt poolt avaldatud eelmise uuringuga.41 CUPRAC-i test viidi läbi M. pomifera puuviljaekstraktidega meie teadmiste kohaselt esimest korda. Vastavalt sellele näitas MPM märkimisväärset vasesisaldust vähendavat toimet CUPRAC testis, kus mõõdeti 73,928 ± 0,01 AAE/g DE. Kui arvestada antioksüdantide koguvõimsuse teste, võib oletada, et MPM on paljulubav vananemisvastane aine.

Fenoolprofiil ja HPTLC analüüs

Isoflavonoidid on fenoolsed ained, mis on tuntud kui taimsed koostisosad, mis vastutavad mitmesuguse märkimisväärse bioloogilise toime eest, nagu antioksüdant, vähivastane toime ja günekoloogiliste probleemide vastu.42 Varasemad uuringud on näidanud, et prenüülitud isoflavonoidid on M. pomifera viljade peamised fenoolsed ühendid.43 Paljud uuringud tuvastasid osajiini. ja pomiferiin kui M. pomifera viljade peamised koostisosad, mis on peamiselt tingitud bioloogilisest aktiivsusest.12 Osajin ja pomiferiin on väga sarnased prenüleeritud isoflavonoidid, mis erinevad ainult ühe hüdroksüülrühma poolest.44 Varasemad aruanded näitasid osajiini ja pomiferiini sisalduse osas vastuolulisi tulemusi. M. pomifera viljadest. Kartal et al.45 töötasid välja LC-MS meetodi osajiini ja pomiferiini määramiseks M. pomiferas, mis koguti Ankara provintsist Türkiye. Tulemused näitasid, et pomiferiini sisaldus oli puuviljaproovide erinevates osades veidi kõrgem kui osajiini sisaldus. Teises uuringus koguti M. pomifera viljaproovid Ameerika Ühendriikide kesk- ja lõunaosa erinevatest piirkondadest ning osajiini ja pomiferiini sisaldust mõõdeti uudse HPLC analüüsimeetodi abil. Tulemused näitasid, et geograafilised erinevused põhjustavad olulisi muutusi proovide isoflavonoidide kogustes.46 Tsao jt47 määrasid Kanadast kogutud puuviljade osajiini ja pomiferiini sisalduse ning leidsid, et pomiferiini sisaldus oli veidi kõrgem kui osajiini sisaldus. Seevastu Hwang jt 48 tegid kokkuvõtte mitmest uuringust, mille käigus leiti, et osajiini kogused on erinevates ekstraktides suuremad kui pomiferiini kogused. Võib väita, et osajiini ja pomiferiini sisaldus M. pomifera viljades on geograafiliste erinevuste ja ekstraheerimistehnikate poolest erakordselt varieeruv, kuna nende keemiline struktuur on selgelt analoogne. Selle uuringu jaoks mõõdeti MPM kogust HPTLC analüüsi abil, meile teadaolevalt esimest korda. Analüüsi tulemused näitasid, et osajin on Uşaki provintsist kogutud MPM-i domineeriv koostisosa, 0.22 protsenti proovist koosnes osajiinist (tabel 1). Lisaks viidi MPM-i fenoolprofiili edasiseks hindamiseks läbi üldfenooli ja flavonoidide kogusisalduse testid. Tulemused näitasid, et MPM-il oli märkimisväärne fenooli- ja flavonoidisisaldus järgmiselt; 113,92 ± 2,26 mg GAE/g ja 66,41 ± 0,74 mg QE/g. Fenoolse profiili hindamise tulemused näitasid, et MPM võib olla uudse loodusliku vananemisvastase ainena silmapaistev kandidaat.

KOKKUVÕTE

Kuigi M. pomifera viljade aktuaalset juurutamist käsitlevad uuringud on suhteliselt uued, on sellel viisil tähelepanu julgustavate aruannete tõttu suurenenud. Seetõttu oli selle uuringu eesmärk kirjeldada M. pomifera puuviljaekstrakti võimaliku vananemisvastase potentsiaali põhjalikku hindamist. HPTLC analüüsi kasutati M. pomifera viljade puhul isoflavonoidide sisalduse määramiseks meile teadaolevalt esimest korda koos in vitro uuringutega kogu fenooliprofiili määramiseks. Tulemused näitasid, et osajin on proovide peamine koostisosa. Lisaks hinnati ekstrakti in vitro antioksüdantset potentsiaali nelja erineva testiga ja tulemused näitasid MPM-i olulist antioksüdantset potentsiaali. Lisaks mõõdeti inhibeerivat aktiivsust ensüümide suhtes, mis on seotud vananemisprotsessiga, ja ilmnes, et MPM-il oli märkimisväärne ensüümi inhibeeriv toime. Kokkuvõtteks võib öelda, et see uuring annab teavet, mis võib viia uute nahahooldustoodete tootmiseni.

Eetika

Eetikakomitee heakskiit:Uuringu jaoks ei ole eetikakomitee heakskiitu vaja.

Teadlik nõustumine:Ei ole vajalik.

Vastastikune eksperdihinnang:Väliselt eelretsenseeritud.

Autorsuse kaastööd

Kontseptsioon: THB, TBŞ., HB, kujundus: THB, İ.KC, EC, andmete kogumine või töötlemine: THB, İ.KC, HB, analüüs või tõlgendamine: THB, İ.KC, kirjanduse otsing: THB, TBŞ., Kirjutamine: THB, EC

Huvide konflikt:Autorid ei deklareerinud huvide konflikti.

Finantsteave:Seda uuringut toetas Acıbadem Mehmet Ali Aydınlari ülikooli teadusprojektide komisjon (nr: 2020/02/07).

VIITED

1. Hwang E, Park SY, Yin CS, Kim HT, Kim YM, Yi TH. Panax ženšenni ja Crataegus pinnatifida segu vananemisvastane toime inimese dermaalsetele fibroblastidele ja tervele inimese nahale. J Ginseng Res. 2017;41:69-77.

2. Ganceviciene R, Liakou AI, Theodoridis A, Makrantonaki E, Zouboulis CC. Naha vananemisvastased strateegiad. Dermatoendokrinool. 2012;4:308-319.

3. Lee H, Hong Y, Tran Q, Cho H, Kim M, Kim C, Kwon SH, Park S, Park J, Park J. Ginsenoside RG3 uus roll vananemisvastases protsessis mitokondrite funktsiooni kaudu ultraviolettkiirgusega kiiritatud inimese nahas fibroblastid. J Ginseng Res. 2019;43:431-441.

4. Rouvrais C, Bacqueville D, Patrick B, Haure MJ, Duprat L, Coutanceau C, Castex-Rizzi N, Duplan H, Mengeaud V, Bessou-Touya S. Retinaldehüüdi, delta-tokoferoolglükosiidi ja glütsüülglütsiini vananemisvastaste omaduste hindamine oleamiidi kombinatsioon. J Invest Dermatol. 2017;137 (lisa 2):S303.

5. Bravo K, Alzate F, Osorio E. Valitud looduslike ja kultiveeritud Andide taimede viljad kui potentsiaalsete antioksüdantse ja vananemisvastase toimega ühendite allikad. Ind Crops Prod. 2016;85:341-352.

6. Yepes A, Ochoa-Bautista D, Murillo-Arango W, Quintero-Saumeth J, Bravo K, Osorio E. Lillad kannatusvilja seemned (Passiflora edulis f. edulis Sims) kui paljulubav naha vananemisvastaste ainete allikas: ensümaatiline , antioksüdantide ja mitmetasandilised arvutusuuringud. Arab J Chem. 2021;14:102905.

7. Rittié L, Fisher GJ. UV-valgusest põhjustatud signaalikaskaadid ja naha vananemine. Aging Res Rev. 2002;1:705-720.

8. Duque L, Bravo K, Osorio E. Holistiline vananemisvastane lähenemine, mida rakendatakse valitud kultiveeritud ravimtaimedes: vaade naha fotokaitsele erinevate mehhanismide abil. Ind Crops Prod. 2017;97:431-439.

9. Manjia NJ, Njayou NF, Joshi A, Upadhyay K, Shirsath K, Devkar VR, Moundipa FP. Ravimtaimede vananemisvastane potentsiaal KamerunisHarungana madagascariensis Lam. ja Psorospermum aurantiacum Engl. vältida in vitro ultraviolett-B valguse poolt põhjustatud nahakahjustusi. Eur J Integr Med. 2019;29:100925.

10. Pujimulyani D, Suryani CL, Setyowati A, Handayani RAS, Arumwardana S, Widowati W, Maruf A. Curcuma mangga Val kosmeetilised potentsiaalid. ekstrakt inimese BJ fibroblastides MMP1, MMP3 ja MMP13 vastu. Heliyon. 2020;6:e04921.

11. Stavropoulou MI, Stathopoulou K, Cheilari A, Benaki D, Gardikis K, Chinou I, Aligiannis N. Kreeka taruvaigu proovide NMR metaboolne profileerimine: nende fütokeemiliste koostiste võrdlev hindamine ning nende vananemisvastaste ja antioksüdantsete omaduste uurimine. J Pharm Biomed Anal. 2021;194:113814.

12. Filip S, Djarmati Z, Lisichkov K, Csanadi J, Jankov RM. Superkriitilise vedeliku ekstraheerimisel saadud Maclura (Maclura pomifera) ekstraktide eraldamine ja iseloomustamine. Ind Crops Prod. 2015;76:995-1000.

13. Saloua F, Eddine NI, Hedi Z. Osage orange Maclura pomifera (Rafin.) Schneideri seemne ja seemneõli keemiline koostis ja profiili omadused. Ind Crops Prod. 2009;29:1-8.

14. Veselá D, Kubínová R, Muselík J, Zemlicka M, Suchý V. Osajini ja pomiferiini antioksüdatiivsed ja EROD-i tegevused. Fitoteraapia. 2004;75:209-211.

15. Gruber JV, Holtz R, Sikink SK, Tobin DJ. Paiksete pomiferiinravi in ​​vitro ja ex vivo uurimine. Fitoteraapia. 2014;94:164-171.

16. Bozkurt İ, Dilek E, Erol HS, Çakir A, Hamzaoğlu E, Koç M, Keleş ON, Halici MB. Maclura pomifera pomiferiini mõju uurimine indometatsiinist põhjustatud maohaavandile: eksperimentaalne uuring rottidel. Med Chem Res. 2017;26:2048-2056.

17. Kurt-Celep İ, Celep E, Akyüz S, İnan Y, Barak TH, Akaydın G, Telci D, Yesilada E. Hypericum Olympic L. taastab DNA kahjustuse ja hoiab ära UVB poolt indutseeritud MMP{2}} aktivatsiooni inimese nahas fibroblastid. J Etnopharmacol. 2020;246:112202.

18. Bardakci H, Cevik D, Barak TH, Gozet T, Kan Y, Kirmizibekmez H. Sideritis congesta PH Davis et Hub.- Mor. Biochem Syst Ecol. 2020;92:104120.

19. Celep E, Seven M, Akyüz S, İnan Y, Yesilada E. Ekstraheerimismeetodi mõju Sideritis trooja Bornm ensüümi inhibeerimisele, fenoolprofiilile ja antioksüdantide võimele. Lõuna-Aafrika päritolu J Bot. 2019;121:360–365.

20. Bardakcı H, Barak TH, Özdemir K, Celep E. Pruulimismaterjali ja erinevate lisandite mõju kaubandusliku Tilia platyphyllos Scop polüfenoolsele koostisele ja antioksüdantsele bioaktiivsusele. infusioonid. J Res Pharm. 2020;24:133-141.

21. Barak TH, Celep E, İnan Y, Yesilada E. In vitro inimese seedimise mõju Viburnum opulus L. (Euroopa jõhvika) puuviljaekstraktide fenoolisisalduse biosaadavusele ja antioksüdantsele aktiivsusele. Ind Crops Prod. 2019;131:62-69.

22. Barak TH, Celep E, İnan Y, Yeşilada E. Sambucus ebulus L. puuviljaekstraktide fenoolide biosaadavuse ja antioksüdantse aktiivsuse simulatsioon inimese seedimisega in vitro. Food Biosci. 2020;37:100711.

23. Ersoy E, Eroglu Ozkan E, Boga M, Yilmaz MA, Mat A. Kolme Hypericum liigi vananemisvastane potentsiaal ja türosinaasivastane aktiivsus, keskendudes LC-MS/MS fütokeemilisele koostisele. Ind Crops Prod. 2019;141:111735.

24. Lee KK, Kim JH, Cho JJ, Choi JD. 150 taimeekstrakti pärssiv toime elastaasi aktiivsusele ja nende põletikuvastane toime. Int J Cosmet Sci. 1999;21:71-82.

25. Itoh S, Yamaguchi M, Shigeyama K, Sakaguchi I. Chaenomeles sinensise ekstraktide vananemisvastane potentsiaal. Kosmeetika 2019;6:21.

26. Kolayli S, Can Z, Yildiz O, Sahin H, Karaoglu SA. Kastani (Castanea sativa Mill.) erineva üheõielise astme mee hüaluronidaasi, antifriisi, antioksüdantide, antimikroobsete ja füüsikalis-keemiliste omaduste võrdlev uuring. J Enzyme Inhib Med Chem. 2016;31 (lisa 3):96-104.

27. Korkmaz B, Horwitz MS, Jenne DE, Gauthier F. Neutrofiilide elastaas, proteinaas 3 ja katepsiin G kui terapeutilised sihtmärgid inimeste haiguste korral. Pharmacol Rev. 2010;62:726-759.

28. Akazaki S, Nakagawa H, Kazama H, Osanai O, Kawai M, Takema Y, Imokawa G. Vanusega seotud muutused naha kortsudes, mida hinnati uudse kolmemõõtmelise morfomeetrilise analüüsi abil. Br J Dermatol. 2002;147:689- 695.

29. Barla F, Higashijima H, Funai S, Sugimoto K, Harada N, Yamaji R, Fujita T, Nakano Y, Inui H. Alküülgallaadide inhibeeriv toime hüaluronidaasile ja kollagenaasile. Biosci Biotechnol Biochem. 2019;73:2335-2337.

30. Chung JH, Kang S, Varani J, Lin J, Fisher GJ, Voorhees JJ. Vähenenud rakuvälise signaaliga reguleeritud kinaasi ja suurenenud stressiga aktiveeritud MAP kinaasi aktiivsus vananenud inimese nahas in vivo. J Invest Dermatol. 2000;115:177-182.

31. Addotey JN, Lenger's I, Jose J, Gampe N, Béni S, Petereit F, Hensel A. Ononis spinosa L. juureekstraktist pärinevad isoflavonoidid, millel on inhibeeriv toime inimese hüaluronidaasile-1 ja norneolignaalsele klitorienolaktoonile B. Fitoteraapia. 2018;130:169-174.

32. Kim KJ, Xuan SH, Park SN. Likoritsidiin, Glycyrrhiza uralensis Fisherist eraldatud isoflavonoid, hoiab ära inimese naha fibroblastide UVA-indutseeritud fotovananemise. Int J Cosmet Sci. 2017;39:133-140.

33. Kim JY, Wang Y, Uddin Z, Song YH, Li ZP, Jenis J, Park KH. Konkureerivad neutrofiilide elastaasi inhibeerivad isoflavoonid Flemingia philippinensise juurtest. Bioorg Chem. 2018;78:249-257.

34. Ergene Öz B, Saltan İşcan G, Küpeli Akkol E, Süntar İ, Bahadır Acıkara Ö. Isoflavonoidid kui Ononidis radix haavade paranemise ained. J Etnopharmacol. 2018;211:384-393.

35. Azevedo Martins TE, de Oliveira Pinto CAS, de Oliveira AC, Robles Velasco MV, Gorriti Guitiérrez AR, Cosquillo Rafael MF, Huamani Tarazona JP, Retuerto-Figueroa MG. Paiksete antioksüdantide panus terve naha säilitamisse – ülevaade. Sci Pharm. 2020;88:27.

36. Krutmann J, Schroeder P. Mitokondrite roll inimese naha fotovananemises: defektne jõujaama mudel. J Investig Dermatol Symp Proc. 2009;14:44-49.

37. Dong KK, Damaghi N, Picart SD, Markova NG, Obayashi K, Okano Y, Masaki H, Grether-Beck S, Krutmann J, Smiles KA, Yarosh DB. UV-indutseeritud DNA kahjustus käivitab MMP-1 vabanemise inimese nahas. Exp Dermatol. 2008;17:1037-1044.

38. Oresajo C, Pillai S, Manco M, Yatskayer M, McDaniel D. Antioksüdandid ja nahk: koostise ja tõhususe mõistmine. Dermatol Ther. 2012;25:252-259.

39. Chiang HM, Chiu HH, Liao ST, Chen YT, Chang HC, Wen KC. Isoflavonoidirikas flemingi makrofülla ekstrakt nõrgendab UVB-indutseeritud nahakahjustusi, eemaldades reaktiivsed hapniku liigid ning pärssides MAP kinaasi ja MMP ekspressiooni. Evid Based Complement Alternatiivne Med. 2013; 2013: 696879.

40. Santos CMM, Silva AMS. Prenüülflavonoidide antioksüdantne toime. Molekulid. 2020;25:696.

41. Orhan IE, Sezer Senol F, Demirci B, Dvorska M, Smejkal K, Zemlicka M. Mõnede looduslike ja poolsünteetiliste flavonoidderivaatide ja Maclura pomifera (Rafin.) Schneideri (roosaapelsini) ja selle oluliste ekstraktide antioksüdantpotentsiaal õli koostis. Türgi J Biochem. 2016;41:403-411.

42. Křížová L, Dadáková K, Kašparovská J, Kašparovský T. Isoflavones. Molekulid. 2019;24:1076.

43. Su Z, Wang P, Yuan W, Grant G, Li S. Fenoolid Maclura pomifera viljadest. Nat Prod Commun. 2017;12:1743-1745.

44. Orazbekov Y, Ibrahim MA, Mombekov S, Srivedavyasasri R, Datkhayev U, Makhatov B, Chaurasiya ND, Tekwani BL, Ross SA. Maclura pomifera prenüleeritud flavonoidide eraldamine ja bioloogiline hindamine. Evid Based Complement Alternatiivne Med. 2018;2018:1370368.

45. Kartal M, Abu-Asaker M, Dvorska M, Orhan I, Zemlicka M. LC-DAD-MS meetod pomiferiini ja osajiini, peamiste isoflavoonide analüüsimiseks Maclura pomifera (Rafin.) Schneideris. Chromatographia 2009;69:325-329.

46. ​​Darji K, Miglis C, Wardlow A, Abourashed EA. Isoflavooni tasemete HPLC määramine osage oranžis Ameerika Ühendriikide kesk- ja lõunaosast. J Agric Food Chem. 2013;61:6806-6811.

47. Tsao R, Yang R, Young JC. Antioksüdant isoflavoonid osage apelsinis, Maclura pomifera (Raf.) Schneid. J Agric Food Chem. 2003;51:6445-6451.

48. Hwang HS, Winkler-Moser JK, Tisserat B, Harry‐O'kuru RE, Berhow MA, Liun SX. Sojaoaõlis ja kalaõlis sisalduva osage apelsini ekstrakti antioksüdantne aktiivsus ladustamise ajal. J Am Oil Chem Soc. 2021;98:73-87.

【Lisateabe saamiseks:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】