Ehhinakosiidi ja akteosiidi tootmise parandamine Cistanche Deserticola rakususpensiooni kultuuris kaheastmelise esilekutsumisega

lisateabe saamiseks:ali.ma@wecistanche.com

Wen-Hao Chen et al

Abstraktne

Sobivates kontsentratsioonides soodustasid polüamiinid kalluse kasvu jaehhinakosiidsisuCistanche deserticolasamas kui Ag pluss suurendas sisaldustehhinakosiidjaakteosiid. 20-päevasel kultiveerimisperioodil, kui putrestsiini (25 lM) ja Ag pluss (10 lM) lisati vastavalt 8. ja 16. päeval,ehhinakosiidtoodang(1,7 gl–1) jaakteosiidproduktsioon (0,4 gl–1) saavutas maksimumi, mis oli 1.4-kordne ja 1.5-kordne neist ühekordsest putrestsiinravist, 1.6-kordne ja 1.{10}}korda nendest vastavalt ühe Ag pluss ravi korral. Eksogeenne putrestsiin suurendas rakkude elujõulisust ja antioksüdantsete ensüümide aktiivsust, seega suurendas lõplikku biomassi. Ag pluss lisamine suurendas oluliselt H2O2 sisaldust ja fenüülalaniinammoniaaklüaasi aktiivsust, mis viis kõrgemaleehhinakosiidjaakteosiidsisu.

Märksõnadakteosiid,Cistanche deserticola, ehhinakosiid, Elicitor, Suspensioonikultuur

Lühendid

APOX askorbaatperoksidaas

CAT Katalaas

H2O2 Vesinikperoksiid

PAL Fenüülalaniini ammoniaak-lüaas

PeGs fenüületanoidglükosiidid

ROS reaktiivsed hapniku liigid

SOD superoksiidi dismutaas

Cistanche deserticola

Klõpsake Cistanche UK ja Cistanche ekstrakti toodetele

Sissejuhatus

Cistanche deserticolaYC Ma kasutatakse laialdaselt traditsioonilises hiina meditsiinis. Fenüületanoidglükosiidid (PeG-d) on selle taime peamised bioaktiivsed koostisosad. PeG-de hulgas onehhinakosiidjaakteosiidon seksuaalse potentsi parandamise, immuunfunktsiooni reguleerimise, vabade radikaalide eemaldamise ja vananemisvastaste omaduste peamised komponendid (Song et al. 2003). Ülekasutamise, raske kasvatamise ja halvenenud keskkonna tõttu metsik Cistanche deserticolataimed on väljasuremise äärel. Taimerakkude kultuur võib olla atraktiivne alternatiiv nende bioaktiivsete komponentide saamiseks. Peamised probleemid in vitro kultiveerimiselCistanche deserticolaon madala biomassi ja madala PeG-sisaldusega. Teatati, et paljud kutsujad stimuleerivad PeG-sünteesi (Cheng et al. 2005, 2006; Lu ja Mei 2003; Ouyang jt 2003a; Xu jt 2005), kuid kahjuks vähendas enamik kutsujaid raku biomassi.

Viimastel aastatel on taimerakkude suspensioonikultuuris uuritud erinevate esilekutsujate kombinatsiooni. Erinevate esilekutsujate erinevuse tõttu võib erinevate esilekutsujate kombinatsioon saavutada sünergilise efekti. Eliitsioreid võib samal ajal lisada näiteks Taxus spp. suspensioonikultuuri. (Yuan et al. 2002) ja ženšenn (Bae et al. 2006). Teisalt andis erinevate esilekutsujate lisamine vastavalt biomassi kasvufaasis ja sekundaarsete metaboliitide tootmise etapis maksimaalse biomassi ja taksooli tootmise Taxus baccata suspensioonikultuuris ( Khosroushahiet al. 2006). Siiski on vähe aruandeid kombineeritud esilekutsujate kasutamise kohta rakukultuuris Cistanche deserticola.

EhcinacosidesisseCistanche deserticola

Varasemad aruanded selle kohtaCistanche deserticolakeskendus PeG sisalduse suurendamisele, kuid biomassi edendamiseks kasutatavaid esilekutsujaid nagu polüamiinid jäeti osaliselt tähelepanuta. Polüamiinid võivad soodustada kalluse biomassi, suurendades rakkude proliferatsiooni ja leevendades rakkude vananemist (Bais ja Ravishankar 2002). Hiljuti teatati, et polüamiinid osalesid interaktsioonis etüleeni ja abiootilise stressitaluvusega, samas kui abiootilisest stressist tingitud etüleen ja reaktiivsed hapnikuliigid (ROS) põhjustasid rakkude vananemise ja surma (Cona et al. 2006). Teisest küljest põhjustas esilekutsujate põhjustatud oksüdatiivne stress ROS-i, sealhulgas vesinikperoksiidi (H2O2) ja superoksiidi aniooni (O2–) kuhjumise, mis väidetavalt vahendavad programmeeritud rakusurma ja sekundaarset metaboliitide sünteesi signaalmolekulidena (Yuan et al. 2001). Xu ja Dong 2005). Näiteks indutseeris H2O2 kaitsereaktsiooni ja sekundaarse metabolismi võtmeensüümi fenüülalaniini ammoniaaklüaasi (EC 4.3.1.5) geeniekspressiooni (Desikan et al. 1998), mis reguleeris PeG tootmistCistanche deserticola(Cheng jt 2005; Ouyanget al. 2003a). Oksüdatiivset stressi silmas pidades soodustasid mõned metalliioonid, nagu Ni2 plus, Co2 plus, Ag plus, paljudes taimedes tõhusalt sekundaarset metaboliitide sünteesi (Zhao et al. 2005). Võib-olla võivad need suurendada PAL aktiivsust ja PeG tootmist. Selles uuringus kasutati kalluse kasvu soodustamiseks polüamiine ja metalliioone, samuti nende esilekutsujate kombinatsiooni,ehhinakosiidjaakteosiidsisu Cistanche deserticola. Lisaks uuriti ka seoseid esilekutsujate ja H2O2 sisalduse vahel, samuti nende mõju PAL-i ja antioksüdantsete ensüümide aktiivsusele.

materjalid ja meetodid

Taimsed materjalid

Cistanche deserticolarakuliinid indutseeriti tüvest. Pärast steriliseerimist lõigati vars umbes 1 cm3 tükkideks ja kultiveeriti B5 söötmel (Gamborg et al. 1968), mis sisaldas 5 lM naftaleenäädikhapet (NAA), 9 lM 6-bensüüladeniini (6-BA), 4 lM 2,4-diklorofenoksüäädikhape (2,4-D) ja 30 g sahharoosi l–1. 30 päeva pärast võeti helekollane kallus välja ja kultiveeriti B5-söötmel 5 lMNAA, 9 lM 6-BA ja 1 lM 2,4-D-ga ning rakususpensiooni kultuur loodi vastavalt meetoditele. ofOuyang et al. (2003b).

Kalluse kultuur

Umbes 1,5 g värsket kallust (0,125 g DW) 20-ühepäevasest suspensioonikultuuristCistanche deserticolainokuleeriti 250- ml Erlenmeyeri kolbi, mis sisaldas 50 ml B5 söödet. Enne autoklaavimist lisati B5 söötmele 5 lM NAA, 9 lM 6-BA, 1 lM 2,4-D ja 30 g sahharoosi l–1 pH väärtusel 5,6. Kõik katsed viidi läbi kolme kordusega 25 kraadi juures pimedas pöörleval loksutil (110 p/min–1) 20 päeva jooksul.

ActedosiesisseCistanche deserticola

Eliitoorsed ravimeetodid

Ühes esilekutsumiskatses lisati söötmele kavandatud kontsentratsioonides putrestsiini (Put), spermiini (Spm), spermidiini (Spd), hõbenitraadi ja koobaltkloriidi filtriga steriliseeritud lahuseid, et uurida nende mõju onkalluse kasvule ja PeG sisaldusele. Optimaalse esilekutsuja tüübi ja kontsentratsiooniga uuriti söötmisaja mõju. Seejärel töötati optimaalse kontsentratsiooni ja söötmisaja põhjal välja erinevate esilekutsujate kombinatsioon, et suurendada PeG tootmist kaheetapilises esilekutsumiskatses. Kontrollina toimis kallusekultuur ilma kutsujateta. Et uurida esilekutsujate toimemehhanismi, võeti kahe stageelitsitatsiooni katses edasiseks analüüsiks kallus välja kavandatud ajal pärast esilekutsuja lisamist.

Biokeemilised analüüsid

Määratud ajal pärast esilekutsuja lisamist rakud filtriti ja pesti õrnalt destilleeritud veega. Seejärel määrati rakkude elujõulisus 2,3,{2}}trifenüültetrasooliumkloriidiga värvimisega vastavalt Verleysenet al. (2004), Elujõulisuse indeks on defineeritud kui neeldumine, mõõdetuna grammi värske koe kohta. Värskete rakkude H2O2 sisaldus määrati vastavalt Velikova jt meetodile. (2000). Fenüülalaniini ammoniaaklüaasi (PAL) (EC 4.3.1.5) aktiivsuse määramine põhines Koukoli ja Conni (1961) meetodil. Superoksiiddismutaasi (SOD) (EC1.15.1.1), katalaasi (CAT) (EC 1.11.1.6), askorbaatperoksidaasi (APOX) ekstraheerimiseks ja määramiseks kasutatud meetodid olid samad, mis Jebara jt. (2005).

Biomassi, ehhinakosiidi ja akteosiidi mõõtmine

Kuivmassi (DW) määramiseks kallus filtriti ja pesti destilleeritud veega ning seejärel külmkuivatati kuni konstantse massini, et registreerida kuivkaal.

Kuivad rakud (20 mg) ekstraheeriti toatemperatuuril ultraheliga (40 kHz, 160 W) 15 minuti jooksul 10 ml 50% (maht/maht) metanooliga. Pärast filtreerimist läbi 0,22 lm afiltri süstiti 20 ui proovi HPLC-süsteemi (Waters 2695), mis oli varustatud C18 kolonniga (Diamonsil, 250 mm × 4,6 mm, osakeste suurus 5 μm). Liikuv faas koosnes metanoolist ja 0,05% äädikhappe-vee lahusest (maht/maht) vahekorras 35:65 (maht/maht). Voolukiirus oli 1,0 ml min^–1, oli kolonni temperatuur 30 kraadi ja UV-tuvastuse lainepikkus (Waters 2996) 334 nm.

Kalibreerimiskõveradehhinakosiidjaakteosiidolid heas lineaarsuses vahemikus {{0}},2–6,4 lg(r=0,9997) ja 0,16–4,6 lg (r {{1{{ 24}}}}.9995). Ehhinakosiidi ja akteosiidi (n=5) keskmine saagis oli 98,7 protsenti (RSD=1,5 protsenti ) ja 98,2 protsenti (RSD=1 vastavalt .28 protsenti ). Täpsus- ja täpsuskatsed näitasid häid tulemusi, suhteline standardhälve oli alla 2 protsendi. Kvantifitseerimispiirid olid ehhinakosiidi ja akteosiidi puhul vastavalt 0,04 ja 0,06 lg. Ehhinakosiidi ja akteosiidi standardid osteti NICPBP-st (National Institute for the Controlof Pharmaceutical and Biological Products, Peking, Hiina). Ehhinakosiidi/akteosiidi tootmine=ehhinakosiidi/akteosiidi sisaldus (mg g–1 DW) x biomass (g DW l^–1).

Statistilised analüüsid

Kõiki katseid ja määramisi korrati kolm korda ning kõik väärtused olid kolme korduse keskmised ± SE. Andmed esitati dispersioonanalüüsile (ühesuunaline ANOVA, Tukey test), et tuvastada olulisi erinevusi SAS versiooni 6.12 PROC ANOVA abil.

Tulemused

Polüamiinide mõju kalluse kasvule,ehhinakosiidjaakteosiidsisu.

Tabel 1 näitab polüamiinide mõju kalluse kasvule,ehhinakosiidjaakteosiidsisuCistanche deserticola. Put ja Spm soodustasid kalluse kasvu märkimisväärselt sobivas kontsentratsioonis. Umbes 25 lM put oli kõige tõhusam ja biomass (11,2 g DW l–1) oli 1.{5}}kordne kontroll. Samaaegselt täiustatud polüamiinidehhinakosiidsisu oluliselt. Kui lisati 25 lM put,ehhinakosiidsisaldus suurenes 46 protsenti võrreldes kontrolliga, samas kui akteosiidisisalduse olulist suurenemist ei leitud.

Ag plusi ja Co2 plusi mõju kalluse kasvule, ehhinakosiidile ja akteosiidisisaldusele

metalliioonide mõju kalluse kasvule,ehhinakosiidjaakteosiidsisu on illustreeritud tabelis 2. Ehhinakosiidi ja akteosiidi sisaldust soodustas oluliselt Ag plus, samas kui kalluse kasv oli veidi pärsitud. Kui lisati 10 lM Ag plus,ehhinakosiidsisu jaakteosiidsisaldus suurenes kontrolliga võrreldes vastavalt 73 protsenti ja 62 protsenti. Samal ajal ei olnud Ag pluss töötlemise ja kontrolli vahel olulist erinevust biomassis. Co2 pluss ei avaldanud peaaegu positiivset mõju kalluse kasvule ja PeG-sisaldusele.

Toitmisaja mõju kalluse kasvule, ehhinakosiidile ja akteosiidisisaldusele

Edasisteks katseteks valiti put (25 lM) ja Ag pluss (10 lM). Toitmisaja mõju kalluse kasvule,ehhinakosiidjaakteosiidsisaldus on näidatud tabelis 3. Kui put (25 lM) lisati 8. päeval, saadi maksimaalne biomass (11,8 g DW l–1). Vahepeal onehhinakosiidsisaldus tõsteti samal ajal 107,2 mg g-1 DW-niakteosiidsisu oli peaaegu sama, mis kontrollil.

Ag pluss lisamine varasemal ajal tõi kaasa väiksema biomassi. Lisades Ag plus (10 lM) 16. päeval, mõlemadehhinakosiidsisaldus (127,9 mg g–1 DW) jaakteosiidsisaldus (34,2 mg g–1 DW) saavutas maksimumi, mis oli vastavalt 22-- ja 14--kordne kontrollrühma omadest.

Put ja Ag plus kombineeritud mõju kalluse kasvule, ehhinakosiidide ja akteosiidide tootmisele

Nagu on näidatud üksikute esilekutsujate tulemustes, suurendas varajases staadiumis lisamine biomassi ja Ag pluss lisamine hilises staadiumis soodustas ehhinakosiidi ja akteosiidi sisaldust ilma biomassi märkimisväärselt vähendamata. Nii koostati kahe stageelitsitatsiooni protokoll. Put (25 lM) ja Ag plus (10 lM) lisati nende vastavates optimaalsetes etappides.

Joonisel 1 on näidatud Putand Ag plusi lisamise kombineerimise mõju kalluse kasvule,ehhinakosiidjaakteosiidtootmist erinevalt kontrollist. Kui 8. päeval lisati Put (25 lM) ja 16. päeval Ag pluss (10 lM), saadi optimaalne biomass (11,4 g DW l–1), ehhinakosiidi sisaldus (152,4 mg g–1 DW) ja akteosiidisisaldus (36,1). mg g–1 DW) saavutati 20. päeval (joonis 1). Theehhinakosiidtoodang (1,7 gl–1) jaakteosiidproduktsioon (0,4 gl–1) oli vastavalt 3.3-- ja 2.1--kordne kontrollrühma omadest, mis olid suuremad kui ühekordsel esilekutsumisel (tabel 3) . Võrreldes ühe esilekutsuva raviga, onehhinakosiidjaakteosiidproduktsiooni esilekutsujate kombineerimisel oli 1.4-kordne ja 1.5-kordne nendest ühekordse put-ravi korral, 1.6-kordne ja 1.{7}}kordne nendest üksikutest Ag pluss ravist. , vastavalt. Pikaajaline kultiveerimine vähendas biomassi, ehhinakosiidide tootmist ja akteosiidide tootmist (joonis 1)

Joonis 1 Biomassi profiilid (A),ehhinakosiidjaakteosiidproduktsioon (B) koos esilekutsujate kombineerimiseta suspensioonikultuurisCistanche deserticola. Vertikaalsed ribad tähistavad kolme korduse standardviga. Kallus, 0,125 g DW, inokuleeriti 250- ml Erlenmeyeri kolbidesse, mis sisaldasid 50 ml B5 söödet. Put (25 lM) ja Ag plus (10 lM) lisati vastavalt 8. ja 16. päeval. Katsed viidi läbi 25 kraadi juures pimedas pöördloksutil (110 p/min–1) 20 päeva.

Put ja Ag plus mõju rakkude elujõulisusele, H2O2 sisaldusele ning PAL-i ja antioksüdantsete ensüümide aktiivsusele

Et mõista esilekutsujate toimemehhanismi rakkude kasvule ja sekundaarsele metabolismileCistanche deserticola, uuriti kaheetapilises esilekutsumiskultuuris rakkude elujõulisuse, H2O2 sisalduse ning PAL-i ja antioksüdantsete ensüümide aktiivsuse muutusi pärast Put ja Ag plusi lisamist. Kui Put lisati 8. päeval (0 h joonisel 2), vähenes H2O2 sisaldus kiiresti, mis moodustas 6. tunniks vastavalt vaid 48,9 protsenti kontrollrühmast ja taastus järk-järgult 24 tunni pärast kontrolli tasemeni (joonis fig. 2A). Rakkude elujõulisus suurenes kuni 12 tunnini ja langes seejärel pidevalt, mis oli vastavalt 26,9% ja 16,7% kõrgem kui kontrollrühmal 24 ja 48 tunni pärast (joonis 2B). SOD ja APOX aktiivsus suurenes märgatavalt 6 tunni pärast ja SOD aktiivsus langes 24 tunni pärast kontrollrühmaga sarnasele tasemele, samas kui APOX aktiivsus oli endiselt 1 3- korda suurem kui kontroll (joonis 2C, D). Lisamine ei näidanud olulist mõju CAT aktiivsusele (joonis 2E). H2O2 sisalduse vähenemine ja antioksüdatiivsete ensüümide aktiivsuse suurenemine tähendas vähem oksüdatiivseid kahjustusi ja hoidis rohkem rakke elujõulisena kui kontroll.

Joonis 2 H2O2 sisalduse, rakkude elujõulisuse, APOX-i, SOD-i, CAT-i ja PAL-i aktiivsuse muutused pärast insuspensiooni kultuuri lisamist 8. päevalCistanche deserticola. Vertikaalsed tulbad tähistavad kolme replikatsiooni standardviga

Samal ajal saavutas PAL-i aktiivsus maksimumi 12. tunnil ja langes seejärel järk-järgult 48 tunni pärast kontrolliga sarnasele tasemele (joonis 2F).

Rakke kultiveeriti pidevalt pärast Put lisamist ja söötmele lisati Ag plus 16. päeval (0 h joonisel 3). H2O2 sisaldus suurenes kiiresti ja hoidis oluliselt kõrgemat taset kui kontroll kuni 48 tunnini (joonis 3A). Kuid rakkude elujõulisus inhibeeriti oluliselt ja muutus väiksemaks (joonis 3B). APOX aktiivsus püsis konstantsel tasemel ja vähenes 24 tunni pärast (joonis 3C). SOD ja CAT aktiivsus suurenesid järsult 3 tunni pärast ja saavutasid maksimumi vastavalt 12 ja 6 tunni pärast, mis olid 16-korda ja 10- korda kõrgemad kui kontrollidel, seejärel langesid aeglaselt (joonis 3D). , E). PAL-i aktiivsus suurenes 24 tunni pärast 2.{19}}korda kontrollrühmast, mis oli 48 tunni pärast siiski 22,5 protsenti kõrgem kui kontrollrühmal (joonis 3F).

Joonis fig 3 H2O2 sisalduse, rakkude elujõulisuse, APOX, SOD, CAT ja PAL aktiivsuse muutused pärast Ag lisamist 16. päeval suspensioonikultuuriCistanche deserticolakoos Put liitmise onday 8. Vertikaalsed tulbad tähistavad kolme replikatsiooni standardviga.

Arutelu

Polüamiinid ja metalliioonid avaldasid erinevat mõju kalluse kasvule ja PeG tootmiseleCistanche deserticola. Õigetes kontsentratsioonides suurendasid polüamiinid peamiselt kalluse kasvu, samas kui Ag pluss soodustas kalluse tootmistehhinakosiidjaakteosiidoluliselt. Kui nii Putand Ag pluss optimaalses kontsentratsioonis lisati erinevatel aegadel, ilmnesid mõned sünergilised efektid.

Kalluse kasvu soodustav toime sõltus polüamiinide tüübist, kontsentratsioonist ja söötmisajast. 25 lMPut oli kalluse kasvu jaoks kõige tõhusam, kui seda lisati 8. päeval. Eliitsitor näitas optimaalset soodustavat toimet varases kasvufaasis. Kuigi leiti, et Ag plus ja Co2 plus suurendavad erinevates taimedes sekundaarseid metaboliite (Zhaoet al. 2005), avaldas ainult Ag plus positiivne mõju taimede sisaldusele.ehhinakosiidjaakteosiid. Kuna Ag pluss võib pärssida rakkude elujõulisust ja rakkude proliferatsiooni, suurendas Ag pluss lisamine 16. päeval rakkude tootmist.ehhinakosiidjaakteosiidbiomassi oluliselt vähendamata.

Kui taimerakud puutuvad kokku esilekutsujaga, käivitab see plasmamembraani pinnalt signaaliülekande ja ROS-i tootmise, indutseerib taimede kaitsereaktsiooni ja suurendab taime sekundaarset metabolismi, reguleerides võtmeensüüme, mis katalüüsivad sihtmärk-sekundaarsete metaboliitide biosünteesi (Zhao et al. 2005). Valutajaravist tingitud oksüdatiivne stress põhjustab ROS-i akumulatsiooni ja seda saab leevendada antioksüdantsete ensüümidega, sealhulgas SOD, APX, CAT ja POD. Kui oksüdatiivne kahjustus on väljaspool antioksüdantensüümide funktsioone, võivad taimerakud rakkude elujõulisuse vähenedes surra.

Arvatakse, et H2O2, teatud tüüpi ROS, vahendab programmeeritud rakusurma ja reguleerib sekundaarset metaboliitide sünteesi, kutsudes esile paljude kaitsegeenide ja sekundaarsete metaboliitide biosünteetiliste geenide, nagu PAL, ekspressiooni. Arvatakse, et H2O2, teatud tüüpi ROS, vahendab programmeeritud rakusurma ja reguleerib sekundaarset metaboliitide sünteesi, kutsudes esile paljude kaitsegeenide ja sekundaarsete metaboliitide biosünteetiliste geenide, nagu PAL, ekspressiooni.

Polüamiinid parandasid abiootilist stressitaluvust, eemaldades tõhusalt ROS-i, kaitstes nukleiinhappeid ja membraane (Alca´zar et al. 2006) ning suurendades antioksüdantide aktiivsust (Tang ja Newton 2005). Vastavalt sellele Papadakise ja Roubelakis-Angelakise (2005) aruandele näitas Put paremat blokeerivat mõju ROS-i akumulatsioonile kui Spd ja Spm. Nagu meie tulemused näitavad, oli lõplik biomassi inPut töötlemine suurem kui Spd- ja Spm-ravi puhul. Eksogeenne Put vähendas H2O2 sisaldust, suurendas tõhusalt antioksüdantsete ensüümide aktiivsust ja rakkude elujõulisust. Tõenäoliselt aitas rakkude suurem elujõulisus kaasa suuremale proliferatsioonile ja suuremale biomassile. Siis võib selgitada, miks Ag pluss lisamine varasemal ajal põhjustas vähem biomassi Ag jaoks, lisaks suurendas H2O2 akumulatsiooni ja vähendas oluliselt rakkude elujõulisust. Antioksüdantsete ensüümide aktiivsust suurendati, et leevendada oksüdatiivset stressi ilma rakkude elujõulisust mõjutamata. Ag pluss lisamine edendas ka PAL-aktiivsust ja ka tootmistehhinakosiidjaakteosiidoluliselt. Mehhanism võib olla kooskõlas Desikeni jt tulemustega. (1998) ja Yuan et al. (2001). H2O2 võib mängida võtmerolli rakkude proliferatsioonis ja PeG tootmises. Pane suurenenud PAL aktiivsus jaehhinakosiidsisaldus teatud määral, võib-olla mõnel erineval viisil, et panna vähenenud H2O2 sisaldus.

Viimastel aastatel on enamik aruandeid keskendunud ühe esilekutsuja mõjule kalluse kasvule ja PeG-de sisaldusele.Cistanche deserticola. Siiski ei suurendanud paljud esilekutsujad kalluse kasvu optimaalsel kontsentratsioonil, näiteks askistosaan, seeneeliitsiaator (Fusarium solani), metüüljasmonaat ja salitsüülhape (Cheng et al. 2006; Lu ja Mei2003; Xu jt 2005). Haruldaste muldmetallide elementide segu parandas rakkude kasvu ja PeG tootmist, vastavalt 26% ja 167% kõrgem kui kontrollrühmal (Ouyanget al. 2003b). Korduv esilekutsumine ühe esilekutsujaga suurendas samuti oluliselt PeG tootmist (Cheng et al. 2005, 2006). See on hea alternatiiv optimaalse biomassi ja PeG produktsiooni saamiseks erinevate esilekutsujate lisamisega erinevatel etappidel. Kui 8. ja 16. päeval lisati vastavalt 25 lM put ja 10 lM Ag pluss,ehhinakosiidproduktsioon (1,7 gl–1) ja akteosiidide tootmine (0,4 gl–1) saavutasid maksimumi, mis olid kõrgemad kui üksiku put või Ag pluss esilekutsumisel ja ka eelmistes aruannetes.

Alates: ' Parandamineehhinakosiidjaakteosiidtootmine kaheastmelise esilekutsumisega rakususpensiooni kultuurisCistanche deserticola' kõrvalWen-Hao Chen et al

---World J Microbiol Biotechnol (2007) 23:1451–1458 / Springer Science plus Business Media BV 2007

Viited

Alca´zar R, Marco F, Cuevas JC, Patron M, Ferrando A, Carrasco P, Tiburcio AF, Altabella T (2006) Polüamiinide kaasamine taimede vastuses abiootilisele stressile. Biotechnol Lett 28:1867–1876
Bae KH, Choi YE, Shin CG, Kim YY, Kim YS (2006) Suurendas ginsenosiidi tootlikkust etefooni ja metüüljasmonaadi kombinatsiooni abil ženšenni (Panax ginseng CA Meyer) juhuslikes juurekultuurides. Biotechnol Lett 28:1163-1166
Bais HP, Ravishankar GA (2002) Polüamiinide roll taimede ja nende biotehnoloogiliste rakenduste ontogeneesis. Plant Cell Tissue Organ Cult 69:1–34
Cheng XY, Guo B, Zhou HY, Ni W, Liu CZ (2005) Korduv esilekutsumine suurendab fenüületanoidglükosiidide akumulatsiooni rakususpensiooni kultuuridesCistanche deserticola. Biochem Eng J 24:203–207
Cheng XY, Zhou HY, Cui X, Ni W, Liu CZ (2006) Fenüületanoidglükosiidide biosünteesi parandamine aastalCistanche deserticolarakususpensiooni kultuurid kitosaani esilekutsuja abil. J Biotechnol. 121:253-260
Cona A, Rea G, Angelini R, Federico R, Tavladoraki P (2006) Functions of amiini oksüdaasid taimede arengus ja kaitses. Trends Plant Sci 11:80–88
Desikan R, Reynolds A, Hancock JT, Neill SJ (1998) Harpin ja vesinikperoksiid algatavad mõlemad programmeeritud rakusurma, kuid neil on erinev mõju kaitsegeeni ekspressioonile Arabidopsise suspensioonikultuurides. Biochem J 330:115-120
Gamborg OL, Miller RA, Ojima K (1968) Sojaoa juurerakkude suspensioonikultuuride toitainevajadused. Exp Cell Res 50:151–158Jebara S, Jebara M, Limam F, Aouani ME (2005) Muudatused
askorbaatperoksidaasi, katalaasi, guajakoolperoksidaasi ja superoksiidi dismutaasi aktiivsus hariliku oa (Phaseolus vulgaris) sõlmedes soola stressi all. J Plant Physiol. 162:929–936
Khosroushahi AY, Valizadeh M, Ghasempour A, Khosrowshahli M, Naghdibadi H, Dadpour MR, Omid Y (2006) Taxus baccata suspensiooni rakukultuuris indutseerivate tegurite kombinatsiooni abil paranes taksooli tootmine. Cell Biol Int 30:262-269
Koukol J, Conn EE (1961) Hordeum vulgare fenüülalaniini deaminaasi aromaatsete ja omaduste metabolism. J Biol. Chem. 236:2692-2698
Lu CT, Mei XG (2003) Fenüületanoidglükosiidide tootmise parandamine seente esilekutsuja abil rakususpensiooni kultuurisCistanche deserticola. Biotechnol Lett 25:1437-1439
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, Yuan XF, Wang YC (2003a) Fenüületanoidglükosiidide moodustumineCistanche deserticolatahkel söötmel kasvatatud kallus. Biotechnol Lett 25:223–225
Ouyang J, Wang XD, Zhao B, Yuan XF, Wang YC (2003b) Haruldaste muldmetallide mõju kasvuleCistanche deserticolarakud ja fenüületanoidglükosiidide tootmine. J Biotechnol 102:129-134
Papadakis AK, Roubelakis-Angelakis KA (2005) Polüamiinid pärsivad NADPH oksüdaasi poolt vahendatud superoksiidi teket ja putrestsiin takistab programmeeritud rakusurma, mis on põhjustatud polüamiini oksüdaasi tekitatud vesinikperoksiidist. Planta 220:826–837
Song ZH, Lei L, Tu PF (2003) Edusammud taimede farmakoloogilise aktiivsuse uurimiselCistancheHoffing ja link. Chin Tradit Herbal Drugs 34:16–18
Tang W, Newton RJ (2005) Polüamiinid vähendavad soolast põhjustatud oksüdatiivseid kahjustusi, suurendades virgiinia männi antioksüdantsete ensüümide aktiivsust ja vähendades lipiidide peroksüdatsiooni. Taimekasvu määrus 46:31–43
Velikova V, Yordanov I, Edreva A (2000) Oksüdatiivne stress ja mõned antioksüdantide süsteemid happevihmadega töödeldud olnud taimedele kaitsev roll eksogeensete polüamiinide puhul. Plant Sci 151:59–66
Verleysen H, Samyn G, Van Bockstaele E, Debergh P (2004) Analüütiliste meetodite hindamine elujõulisuse ennustamiseks pärast külmsäilitamist. Taimeraku koe organ Kultus 77:11–21
Xu MJ, Dong JF (2005) O2 – esilekutsujast põhjustatud oksüdatiivsest purunemisest on vajalik fenüülalaniini ammoniaagi-lüaasi aktiveerimise ja katarantiini sünteesi käivitamiseks Catharanthus roseuse rakukultuurides. Enzyme Microb Technol. 36:280-284
Xu LS, Xue XF, Fu CX, Jin ZP, Chen YQ, Zhao DX (2005) Metüüljasmonaadi ja salitsüülhappe mõju fenüületanoidglükosiidide sünteesile suspensioonikultuuridesCistanche deserticola. Chin J Biotechnol 21:402–406
Yuan YJ, Li C, Hu ZD, Wu JC (2001) Signaaliülekande rada oksüdatiivse purske ja taksooli tootmiseks Taxus Chinensis var. mairei, mis on indutseeritud Fusarium oxysprumi oligosahhariidi poolt. Enzyme Microb Technol. 29:372-379
Yuan YJ, Wei ZJ, Miao ZQ, Wu JC (2002) Taxol biosynthesis rada ja nende sünergistlik toime. Biochem Eng J 10:77–83
Zhao J, Davis LC, Verpoorte R (2005) Elicitor signaali ülekanne, mis viib taimede sekundaarsete metaboliitide tootmiseni. Biotechnol Adv 23:283–333