Rasvarikas dieet süvendab neeruisheemia-reperfusioonikahjustust

lisateabe saamiseks:ali.ma@wecistanche.com

Ⅰ OSA: Dieedi muutmine muudab neerusisest immunoloogilist mikromiljöö ja vastuvõtlikkust isheemilisele ägedale neerukahjustusele

Junseok Jeon'f, Kyungho Leef, Kyeong Eun Yang, Jung Eun Lee, Ghee Young Kwon, Wooseong Huh jt.

SISSEJUHATUS

Isheemilineäge neerukahjustus(AKI) on AKI kõige levinum põhjus ja aitab sageli kaasa selle arengule ja progresseerumiselekrooniline neeruhaigus(CKD) nii natiivsel kui ka siirdatudneerud(1,2). Isheemia-reperfusioonikahjustus(IRI) põhjustab siiriku vigastust, mis on selle vältimatu tagajärgneerudsiirdamine (3). Paljudes uuringutes (4,5) on tõestatud immunoloogiliste mehhanismide oluline roll isheemilise AKI patogeneesis peale lihtsa hüpoksilise kahjustuse.neerudjärgides IRI(Isheemia-reperfusioonikahjustus), tulemuseks on nii kaasasündinud kui ka adaptiivse immuunsüsteemi põhjustatud tugev põletikuline reaktsioonneerukahjustus(6). Lisaks tsirkuleerivate immuunrakkude infiltratsioonile soodustab intrarenaalne immunoloogiline mikrokeskkond, sealhulgas residendist neerusisesed immuunrakud (7) ja Toll-like retseptorid (TLR-id) neerutuubulitel (8), oluliselt kaasa neerukahjustuse tekkele pärast IRI-d.(Isheemia-reperfusioonikahjustus) (6).

Hiljutised uuringud on näidanud seost toitumise ja immuunfunktsiooni vahel (9). Muutused toidu koostises võivad süvendada või leevendada selliste haiguste raskusastet, mille patogeneesis mängivad olulist rolli immuunmehhanismid, näiteks hüpertensioon soolatundliku hüpertensiooni või rasvumisega seotud hiiremudelis.neerukahjustusseeskõrge rasvasisaldusega(HF) dieedist põhjustatud rasvumise mudel (10-12). Siiski ei ole veel kindlaks tehtud, kas toitumise muutmine võib muuta neerusisest immunoloogilist mikrokeskkonda ja vastuvõtlikkust isheemilisele AKI-le, kuigi on teatatud toitumise sekkumise rollist kroonilise neeruhaiguse korral (13). Arvestades toitumise sekkumise ennetavat või terapeutilist toimet isheemilise AKI korral, on oluline uurida toitumise muutmise mõju normaalsele seisundile.neerud.

Selle uuringu eesmärk oli paljastada südamepuudulikkuse mõjukõrge rasvasisaldusega) või kõrge soolasisaldusega (HS) dieet normaalsetel neerudel ja isheemilise AKI areng, keskendudes neerusisesele immunoloogilisele mikrokeskkonnale.

Klõpsake orgaaniliseksCISTANHE NEERUHAIGUSTE ARVEST

MATERJALID JA MEETODID

Dieedi muutmine ja neerude IRI(Isheemia-reperfusioonikahjustus)Mudel

Selle uuringu kiitsid heaks Samsungi meditsiinikeskuse loomade hooldamise ja kasutamise komitee ja Samsungi meditsiinikeskuse institutsionaalne läbivaatamisnõukogu (IACUC nr 20180314002) ning see viidi läbi kooskõlas loomuuringute: in vivo katsete aruandluse juhistega (14, 15). Isased 9-nädalased C57BL/6 hiired osteti ettevõttest Orient Bio Inc. (Seongnam, Kyoungki-do, Korea). Kõik hiired paigutati spetsiaalsesse patogeenivabasse barjäärirajatisse.

Uurisime HF mõju(kõrge rasvasisaldusega)või HS-dieet normaalsetel neerudel ja post-isheemilistel neerudel kahepoolse IRI poolt indutseeritud isheemilise AKI mudeli korral(Isheemia-reperfusioonikahjustus)kirurgia. Igas mudelis jaotati hiired juhuslikult nelja dieedirežiimi; tavaline toitumine (0,25% NaCl massist, 10% rasva kaloritest), HF(kõrge rasvasisaldusega) dieet (0,25% NaCl massist, 60% rasva kaloritest), HS-dieet (8% NaCl massist, 10% rasva kaloritest) ja kõrge rasvasisaldusega dieet kõrge soolasisaldusega (HF)(kõrge rasvasisaldusega)pluss HS) (8 massiprotsenti NaCl, 60 protsenti rasva kalorite järgi). Tavalise ja HS-toidu koostises oli 20 protsenti valku (peamine kaseiini allikas), 70 protsenti süsivesikuid (peamine sahharoosi allikas) ja 10 protsenti rasva (peamine sojaõli allikas) (D12450B, Research Diets, New Brunswick, NJ). HF koostis(kõrge rasvasisaldusega)dieet ja HF(kõrge rasvasisaldusega) pluss HS-i dieet sisaldas 20 protsenti valku (peamine kaseiini allikas), 20 protsenti süsivesikuid (peamine allikas Lodex 10) ja 60 protsenti rasva (peamine seapekk) (D12492, Research Diets). Kõigil dieedirežiimidel oli sama mineraalide ja vitamiinide kontsentratsioon, välja arvatud NaCl.

Nagu tavaliste hiirte puhul, peeti iga rühma määratud dieedil 42 päeva ja seejärel lülitati 14 päevaks tavalisele dieedile.

Isheemilise AKI mudeli puhul kasutasime väljakujunenud hiire IRI-d(Isheemia-reperfusioonikahjustus)mudel laparotoomia lähenemisviisiga (16, 17). Kahepoolne IRI(Isheemia-reperfusioonikahjustus)tekkis pärast 1-nädalast või 6-nädalast toitumise muutmist. Lühidalt, hiired tuimastati ketamiini (100 mg/kg; Yuhan, Seoul, Korea) ja ksülasiini (10 mg/kg; Bayer, Leverkusen, Saksamaa) intraperitoneaalse süstiga. Pärast kõhu keskjoone sisselõiget isoleeriti mõlemad neerupead ja kinnitati 27 minutiks mikrovaskulaarse klambriga (Roboz Surgical Instrument, Gaithersburg, MD). Operatsiooni ajal hoiti tuimastatud hiiri sooja steriilse soolalahusega hästi hüdreeritud ja asetati termostaadiga juhitavale kuumutuslauale. 27 minuti pärast vabastati mikrovaskulaarsed klambrid neerupeadest reperfusiooniks. Pärast õmbluste paigaldamist lasti hiirtel taastuda ning neil oli vaba juurdepääs eraldatud dieedile ja veele. Kõik hiired surmati 2. päeval pärast IRI-d(Isheemia-reperfusioonikahjustus)operatsiooni ja pärast veretustamist koguti isheemilised neerud.

CISTANŠE VÄLJAtõmmeVÕIB VÄLTIDA NEEREDE KAHJUSTUST

Neerufunktsiooni hindamine

Normaalsetel hiirtel mõõdeti vere uurea lämmastiku (BUN; Fujifilm, Bedford, UK) ja plasma kreatiniini (Arbor Assays, Ann Arbor, MI) kontsentratsiooni sabaveenidest järjestikku päevadel 0, 7,14 kogutud plasmaproovides. , 28, 42 ja 56 pärast dieedi muutmist. Kolorimeetrilisi komplekte kasutati vastavalt tootja soovitatud meetoditele. IRI-s(Isheemia-reperfusioonikahjustus)mudeli puhul mõõdeti plasmaproove päeval 0, 1. ja 2. pärast operatsiooni, kasutades samu meetodeid.

Kudede histoloogiline analüüs

IRI-s(Isheemia-reperfusioonikahjustus)mudelis fikseeriti isheemilise neerukoe lõigud 10-protsendilise puhverdatud formaliiniga ning värviti hematoksüliini ja eosiiniga. Neerupatoloog, kes jäi dieedi jaotuse suhtes pimedaks, tuvastas neerutuubulite nekroosi post-isheemiliste neerude ajukoores ja välimises medullas.

CD45 immunohistokeemia ja koefakside analüüs

Formaliiniga fikseeritud neerukoe lõigud immunovärviti CD45 tuvastamiseks järgmiselt. Sektsioonid (paksused 4-μm) deparafiiniti ksüleeniga, rehüdreeriti astmelises alkoholiseerias ja asetati tsitraatpuhverlahusesse (pH6.{5}}). Objektiklaasid pandi kiirkeedulisse ja kuumutati 10 minutit antigeeni otsimise tõhustamiseks. Pärast jahutamist sukeldati neerulõigud endogeense peroksidaasi aktiivsuse blokeerimiseks 30 minutiks vesinikperoksiidi lahusesse (Dako, Carpinteria, CA), millele järgnes üleöö inkubeerimine 4 kraadi juures seerumivaba valgublokiga (Dako). Järgmisel päeval inkubeeriti slaide 1:100 lahjendusega hiire CD45-vastase monoklonaalse antikehaga (BD Biosciences, San Jose, CA) 1 tund toatemperatuuril. Pärast loputamist inkubeeriti CD45-värvitud sektsioone 30 minutit toatemperatuuril sekundaarse antikehaga, kasutades Dako REAL EnVisoni komplekti (Dako). Seejärel kanti 3,3'-diaminobensidiintetrahüdrokloriidi (Dako) slaidid pruuni värvi saamiseks ja objektiklaasid värviti Mayeri hematoksüliini lahusega (Dako).

Nagu eelnevalt kirjeldatud, kasutati TissueFAXS-i tööjaama (Tissue Gnostics, Viin, Austria), et analüüsida ja arvutada CD{0}}positiivsete rakkude protsent neeruproovides (18).

Neerusse infiltreeruvate mononukleaarsete rakkude voolutsütomeetriline analüüs

Neeru mononukleaarsete rakkude (KMNC-de) isoleerimine põhines kehtestatud protokollil (19). Lühidalt, dekapsuleeritud neerud sukeldati RPMI puhvrisse (Mediatech, Manassas, VA), mis sisaldas 5 protsenti FBS-i, ja purustati mehaaniliselt Stomacher 80 Biomaster (Seward, Worthing) abil. , Ühendkuningriik). Proovid kurnati, pesti ja resuspendeeriti 36% Percolli lahuses (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ), millele järgnes õrn katmine 72% Percollile. Proove tsentrifuugiti toatemperatuuril 30 minutit kiirusel 1,000g. KMNC-d koguti 36 protsendi ja 72 protsendi Percolli liidesest.

Eraldatud KMNC-d resuspendeeriti FACS puhvris ja eelinkubeeriti CD16/CD32-vastaste antikehadega 10 minutit, et minimeerida mittespetsiifilist seondumist Fc-retseptorite kaudu. KMNC-sid inkubeeriti hiirevastaste anti-CD3, CD4, CD8, CD19, CD21, CD25, CD44, CD45, CD62L, CD69, CD126, CD138, Gr-1, F4/80, FoxP3 ja NK1.1-ga. (kõik ettevõttest BD Biosciences, San Jose, CA) 25 minutit 4 kraadi juures, pesti FACS puhvriga ja fikseeriti 1% paraformaldehüüdi lahusega. Proovid koguti BD FACSVerse voolutsütomeetriga. Andmeid analüüsiti programmi FACSuite (BD Biosciences) abil.

Mitmekordne tsütokiini/kemokiini test

Mitmekordse tsütokiini ja kemokiini analüüs terve neeruvalgu ekstraktides viidi läbi Milliplex MAP Mouse Cytokine/Chemokine Kit (Luminex, Austin, TX) abil, järgides tootja juhiseid. Selles multipleksitud osakestepõhises voolutsütomeetrilises testis kasutati tsütokiinivastaseid monoklonaalseid antikehi, mis olid seotud kahe fluorestseeruva värvaine erinevate omadustega mikrosfääridega. Meie test oli mõeldud interleukiini(I)-2;IL-4 kvantifitseerimiseks; IL-6; I-10; interferoon (IFN)-y; monotsüütide kemoatraktantne valk (MCP)-1; reguleeritakse aktiveerimisel, normaalsed T-rakud ekspresseeritakse ja sekreteeritakse (RANTES/CCL5); kasvaja nekroosifaktor (TNF)-; ja veresoonte endoteeli kasvufaktor (VEGF). Iga tsütokiini või kemokiini väärtus normaliseeriti, jagades toorkontsentratsiooni (pg/ml) neeruvalgu kontsentratsiooniga (mg/ml, mõõdetuna Pierce BCA valguanalüüsi komplektiga, Thermo Fisher). Scientific, Waltham, MA).

Intrarenaalsete teemaksulaadsete retseptorite 2. ja 4. Western blot analüüs

Intrarenaalseid Toll-sarnaseid retseptoreid 2 ja 4 (TLR-2 ja TLR-4) analüüsiti Western blot analüüsiga. Tootja juhiste kohaselt eraldati NuPAGE Bolt minigeelisüsteemis (Thermo Fisher Scientific) elektroforeesiga võrdsed kogused terve neeruvalgu ekstrakti (3{9}} ug). Geelid kanti pärast elektroforeesi iBlot 2 Dry Blotting Systemi (Thermo Fisher Scientific) abil nitrotselluloosmembraanile. Membraanid blokeeriti 5% kooritud piima tris-puhverdatud soolalahusega 0,1% Tween20-ga (TBST) 1 tund toatemperatuuril ja seejärel inkubeeriti üleöö 4 kraadi juures ühe järgmistest antikehadest: hiire monoklonaalne anti-TLR2 antikeha (MyBioSource, San Diego ,CA) või anti-TLR4 antikeha (Novus Biologicals, Centennial, CO). Mädarõika peroksidaasiga konjugeeritud sekundaarset antikeha kanti peale TBST-ga pesemist 30 minutiks toatemperatuuril. Signaali visualiseerimiseks kasutati Amersham ECL-i tuvastamise süsteemi (GE Healthcare, Chicago, IL), järgides tootja juhiseid. Ribasid analüüsiti densitomeetriliselt, kasutades tarkvara ImageJ 1.8 (Wayne Rasband, National Institutes of Health, MD) ja normaliseeriti sisekontrollina vastava aktiiniriba intensiivsusega.

HK-2 rakkude hüpoksia mudel ja proliferatsiooni test

Inimese neeru-2(HK-2) raku (tavalise täiskasvanud inimese neeru immortaliseeritud proksimaalse tuubuli epiteeli cll liin) hüpoksia mudelit kasutati in vitro uuringus, et uurida HS või HF mõju(kõrge rasvasisaldusega) keskkond rakutasandil.

Inimese neeru-2(HK-2) rakud osteti Ameerika tüübikultuuride kollektsioonist (CRL-2190, Manassas, VA) ja kultiveeriti keratinotsüütide seerumivabas söötmes (Thermo Fisher Scientific), millele oli lisatud lisandit. veise hüpofüüsi ekstrakti ja inimese rekombinantse epidermaalse kasvufaktoriga. Rakke inkubeeriti 37 kraadi juures 5% CO2-sisaldusega niisutatud atmosfääris, söödet vahetati iga 2-3 päeva järel. Hüpoksia indutseeriti 48 tunni jooksul kokkupuutel lämmastikuga tasakaalustatud 1% O2-ga ja 5% CO2-ga mitmegaasilises inkubaatoris (APM-30D, Astec, Fukuoka, Jaapan).

HK-2 rakud jagati nelja rühma. Esimene ja teine ​​rühm olid kontrollrühmad vastavalt normoksia (21 protsenti O2) ja hüpoksia (1 protsenti O2) all. Kolmandat ja neljandat rühma töödeldi vastavalt täiendavalt 25 mM NaCl ja 1:250 lahjendatud lipiidikontsentraadiga (Thermo Fisher Scientific). , enne ja pärast hüpoksilist solvamist.

HK{{0}} rakkude proliferatsiooni astet 0., 1. ja 2. päeval pärast hüpoksiat hinnati Cell Titer96 vesilahuse ühelahuse rakkude proliferatsioonitestiga (Promega, Madison, WI) vastavalt tootja juhistele.

Põletikulise signaalimolekuli ekspressiooni kvantifitseerimiseks hüpoksilistes HK{{0}} rakkudes mõõdeti TLR-2 ja TLR-4 Western blot analüüsiga, kasutades hiire monoklonaalset anti-TLR2 (Santa Cruz). Biotechnology, Dallas, TX) ja anti-TLR4 (Novus Biologicals, Centennial, CO) antikehad päevadel 0 ja 2. Lühidalt, rakud pandi RIPA puhvrisse (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), mis sisaldas proteaasi inhibiitori kokteili (Sigma-Aldrich). Homogenaati tsentrifuugiti 13,{12}}g juures 4 kraadi juures 10 minutit ja supernatandiga viidi läbi ülalnimetatud Western blot protseduur.

Statistilised analüüsid

Kõik andmed väljendati kui keskmine ± keskmise standardviga (SEM). Rühmade või ajapunktide vahelisi erinevusi analüüsiti Mann-Whitney U-testi või kahesuunalise dispersioonanalüüsi (ANOVA) abil, millele järgnes Tukey post-hoc analüüs. Kõik statistilised analüüsid viidi läbi tarkvara GraphPad Prism versiooni 8 abil (GraphPad Software, La Jolla, CA).P väärtused<0.05 were="" considered="" statistically="">

TULEMUSED

Dieedi muutmise mõju füsioloogilistele muutustele normaalsetel hiirtel Et uurida füsioloogilisi muutusi, mis on põhjustatud toitumise muutmisest normaalsetel hiirtel, mõõdeti seeriaviisiliselt kehakaalu, plasma üldkolesterooli, kreatiniini ja BUN kontsentratsiooni. Toidu kaudu tarbitud koguhulk HE-s, HF(kõrge rasvasisaldusega)pluss HS ja kontrollrühmad olid sarnased, samas kui HS-i rühm kaldus tarbima veidi rohkem sööda (täiendav joonis 1). HF-i kehakaal(kõrge rasvasisaldusega)dieedi rühm suurenes oluliselt alates 7. päevast pärast HF-i alustamist(kõrge rasvasisaldusega)dieeti. HS-dieedi rühmal oli 42. päeval madalam kehakaal kui kontrollrühmal ja alates 1 nädalast pärast normaalsele dieedile üleminekut oli kehakaal võrreldav kontrollrühma omaga (joonis 1A).(kõrge rasvasisaldusega)dieedirühmas oli 14. päeval oluliselt kõrgem võrreldes kontrollrühma omaga ja see oli võrreldav kontrollrühma omaga 1 nädal pärast normaalsele dieedile üleminekut. Plasma kolesteroolitase kontrollrühmas, HS-dieedis ja HF-s(kõrge rasvasisaldusega)pluss HS-i dieedirühmad olid 6-nädalase dieedi muutmise ajal võrreldavad (joonis 1B). BUN oli kõrgem HF-i korral(kõrge rasvasisaldusega)dieedigrupp ja HF(kõrge rasvasisaldusega)pluss HS-dieedi rühm 7. päeval. Üldine neerufunktsioon oli 6-nädalase dieedi muutmise rühmade vahel võrreldav (joonis 1C).

JOONIS 1|Toitumise muutmise mõju normaalsete hiirte füsioloogilistele muutustele.(A) HF(kõrge rasvasisaldusega)dieedirühmas tõusis kaal märkimisväärselt alates 7. päevast pärast HF-i alustamist(kõrge rasvasisaldusega)dieediga ja näitas pärast tavapärasele dieedile üleminekut statsionaarset kehakaalu. HS-dieedirühmal oli 42. päeval madalam kehakaal kui kontrollrühmal ja 1 nädal pärast normaalsele dieedile üleminekut taastus kehakaal, mis oli võrreldav kontrollrühma omaga. (B) HF(kõrge rasvasisaldusega)dieet suurendas märkimisväärselt plasma üldkolesterooli kontsentratsiooni alates 14. päevast pärast dieedi muutmist. HF üldkolesterooli tase(kõrge rasvasisaldusega)dieedirühmas taastus võrreldav kontsentratsioon pärast tavapärasele dieedile üleminekut. (C) BUN tase 7. päeval oli HF-is oluliselt kõrgem(kõrge rasvasisaldusega)dieet ja HS-dieedirühmad. Plasma kreatiniinisisaldusega mõõdetud üldine neerufunktsioon oli rühmades võrreldav kogu uuringuperioodi jooksul.*P < {{0}},05,="" võrreldes="" kontrollrühmaga="" igal="" ajahetkel.="" †p="">< 0,05,="" võrreldes="" sama="" rühma="" 7.="" päevaga="" (n="5" iga="" rühma="" kohta="" igal="" ajahetkel).="" statistilised="" analüüsid="" viidi="" läbi="" kahesuunalise="" anova="" testiga,="" millele="" järgnes="" tukey="" test.="">(kõrge rasvasisaldusega), kõrge rasvasisaldusega; HS, kõrge soolasisaldusega; HF(kõrge rasvasisaldusega)pluss HS, kõrge rasvasisaldusega ja kõrge soolasisaldusega.

Dieedi modifitseerimise mõju normaalsete hiirte intrarenaalsetele leukotsüütidele Leukotsüütide koguarvu normaalsetesse neerudesse viimist hinnati CD45 immunohistokeemilise värvimisega, millele järgnes poolkvantitatiivne analüüs TissueFAXS-iga (joonis 2A). rühmad igal ajahetkel (joonis 2B).

JOONIS 2|Toitumise modifitseerimise mõju normaalsete hiirte intrarenaalsetele leukotsüütidele.Residentseid leukotsüüte analüüsiti CD45 immunohistokeemia ja normaalse neerukoe voolutsütomeetria abil. (A) Tüüpilised immunohistokeemilised leiud ja CD45-positiivsete leukotsüütide poolkvantitatiivne analüüs kontrollrühma normaalses neerus päeval 0. Nooled näitavad CD45-positiivseid leukotsüüte (×200). (B) CD45 ekspresseerivate leukotsüütide protsendid kõigi tuumarakkude hulgas olid dieediga toidetud rühmades võrreldavad.

Nii kaasasündinud kui ka adaptiivse immuunsüsteemi peamisi efektorrakke, mis viidi neerudesse pärast toitumise muutmist, analüüsiti voolutsütomeetriaga. Seoses T-rakkude alatüübiga suurenes CD8 T-rakkude, efektormälu CD4T-rakkude ja NK T-rakkude koguarv dieedi muutmise ajal aja jooksul, samas kui CD4 T-rakkude koguarv vähenes. Rühmadevaheliste erinevuste osas igal ajahetkel on HF(kõrge rasvasisaldusega)grupp ja HF(kõrge rasvasisaldusega)pluss HS-rühmas oli 42. päeval pärast dieedi muutmist suurem CD8T-rakkude osakaal kõigi T-rakkude hulgas võrreldes kontrolldieedi rühmaga. HF(kõrge rasvasisaldusega)pluss HS rühm näitas ka suuremat osakaalu CD4 ja CD8T rakkude ning aktiveeritud CD4 ja CD8 T-rakkude efektormälu alamhulkadest (joonised 3A, B, täiendav joonis 2). Mitte-T-rakkude populatsioonide puhul vähenes B-rakkude koguarv ja suurenes NK-rakkude arv. 14. päeval võrreldes 7. päevaga pärast dieedi muutmist. Plasmarakud saavutasid kõrgsageduslikus maksimumarvu(kõrge rasvasisaldusega)dieedi- ja HS-dieedirühmad 42. päeval ja langesid pärast 2-nädalast tavalist dieeti kontrollrühma omadega võrreldavatele tasemetele. NK-rakkude ja aktiveeritud küpsete B-rakkude osakaal kogu B-rakkude hulgas oli HF-is oluliselt suurem(kõrge rasvasisaldusega)dieet ja HF(kõrge rasvasisaldusega)pluss HS dieedirühmad 14. päeval pärast dieedi muutmist. HF(kõrge rasvasisaldusega)dieedi ja HS-i dieedirühmad näitasid neutrofiilide suuremat intrarenaalset infiltratsiooni päeval 14 pärast dieedi muutmist (joonised 3C, D, täiendav joonis 2).

JOONIS 3|Normaalsete hiirte neerudest eraldatud KMNC-de voolutsütomeetria analüüsid.(A) Muutused intrarenaalses T-rakkude alampopulatsioonis toitumise muutmise teel. HF(kõrge rasvasisaldusega)ja HF pluss HS dieedid suurendasid CD8 T-rakkude osakaalu T-rakkude koguarvust 42. päeval pärast dieedi muutmist. HF(kõrge rasvasisaldusega)pluss HS-dieet suurendas ka efektormälu CD4 ja CD8 T-rakkude osakaalu. (B) T-rakke analüüsivad tüüpilised punktdiagrammid 42. päeval. Suletud rakud näitavad CD4 T-rakke ja CD8 T-rakke T-rakkude koguarvu hulgas. (C) HF(kõrge rasvasisaldusega)dieet ja HS-dieet suurendasid plasmarakkude ja neutrofiilide infifiltratsiooni vastavalt 42. ja 14. päeval pärast dieedi muutmist. HF(kõrge rasvasisaldusega)dieet ja HF pluss HS dieet suurendasid aktiveeritud küpsete B-rakkude ja NK-rakkude infifiltratsiooni 14. päeval pärast dieedi muutmist. (D) Tüüpilised punktdiagrammid, mis analüüsivad plasmarakke päeval 42. Piiratud rakud näitavad CD138 ja CD126 ekspresseerivaid plasmarakke neerude mononukleaarsete rakkude hulgas. *P < 0.05,="" võrreldes="" kontrollrühmaga="" igal="" ajahetkel.="" †p="">< 0,05,="" võrreldes="" sama="" rühma="" 7.="" päevaga="" (n="5" iga="" rühma="" kohta="" igal="" ajahetkel).="" statistilised="" analüüsid="" viidi="" läbi="" kahesuunalise="" anova="" testiga,="" millele="" järgnes="" tukey="" test.="">kõrge rasvasisaldusega; HS, kõrge soolasisaldusega; HF(kõrge rasvasisaldusega)pluss HS,kõrge rasvasisaldusegasuure soolasisaldusega.

Dieedi muutmise mõju normaalsete hiirte intrarenaalsetele tsütokiinidele / kemokiinidele

Võrreldes tavalise dieedi, HS-dieedi või HF-ga(kõrge rasvasisaldusega)pluss HS-dieet suurendas põletikueelsete tsütokiinide/kemokiinide, sealhulgas TNF-, INF-y, MCP-1 ja RANTES-i, intrarenaalset ekspressiooni (joonis 4A). IL-6 ekspressioon oli kõrgem HF-is(kõrge rasvasisaldusega)pluss HS-dieedirühm 7. päeval (täiendav joonis 3). Seevastu VEGF-i intrarenaalne ekspressioon hiirtel, keda toideti HS-i dieedi ja HF-iga(kõrge rasvasisaldusega)pluss HS-i dieet oli oluliselt madalam kui kontrollrühmal (joonis 4B).

JOONIS 4|Dieedi muutmise mõju normaalsete hiirte neerude tsütokiinidele ja kemokiinidele.HS ja HF(kõrge rasvasisaldusega)pluss HS-dieedid suurendasid 42. päeval TNF-, INF-, MCP-1 ja RANTES-i intrarenaalset ekspressiooni.(kõrge rasvasisaldusega)pluss HS-dieet suurendas ka IL{0}} ekspressiooni 7. päeval pärast dieedi muutmist. Kuigi IL-10 ekspressioonis olulisi erinevusi ei olnud, oli VEGF-i intrarenaalne ekspressioon HS-dieedi rühmas ja HF-i rühmas madalam.(kõrge rasvasisaldusega)pluss HS-dieedirühm 7. ja 42. päeval pärast dieedi muutmist. *P < 0.05,="" võrreldes="" kontrollrühmaga="" igal="" ajahetkel.="" †p="">< 0,05,="" võrreldes="" sama="" rühma="" 7.="" päevaga="" (n="5" iga="" rühma="" kohta="" igal="" ajahetkel).="" statistilised="" analüüsid="" viidi="" läbi="" kahesuunalise="" anova="" testiga,="" millele="" järgnes="" tukey="" test.="">kõrge rasvasisaldusega; HS, kõrge soolasisaldusega; HF pluss HS,kõrge rasvasisaldusegasuure soolasisaldusega.

Dieedi muutmine mõjutab vastuvõtlikkust lheemilisele AKI-le

Uurida toitumise muutmise mõju post-isheemilistele neerudele, kahepoolne IRI(Isheemia-reperfusioonikahjustus)viidi läbi 1 või 6 nädalat pärast dieedi muutmist. Üldiselt neerufunktsiooni halvenemine pärast IRI-d(Isheemia-reperfusioonikahjustus)oli kontrollrühmaga võrreldes silmatorkavam hiirtel, kes said HS-põhise dieedi modifikatsiooni nii 1 kui ka 6 nädala jooksul. Nii BUN-i kui ka plasma kreatiniini kontsentratsioonid olid oluliselt kõrgemad hiirtel, keda toideti HS-i või HF-ga.(kõrge rasvasisaldusega)pluss HS-dieet 1 nädala jooksul võrreldes kontrollrühmaga 2. päeval pärast IRI-d(Isheemia-reperfusioonikahjustus)(Joonis 5A). Plasma kreatiniini kontsentratsioon hiirtel, kellele toideti HF-i(kõrge rasvasisaldusega)pluss HS-dieet 6 nädala jooksul oli 1. ja 2. päeval pärast IRI-d oluliselt kõrgem kui kontrollrühmas(Isheemia-reperfusioonikahjustus)(Joonis 5B).

JOONIS 5|Toitumise muutmise mõju ägeda neerukahjustuse (AKI) tekkele pärast kahepoolset IRI-d(Isheemia-reperfusioonikahjustus)kirurgia.(A, B) Neerude funktsionaalsed muutused pärast IRI-d(Isheemia-reperfusioonikahjustus)igas dieedirühmas. Neerufunktsiooni halvenemine pärast IRI-d(Isheemia-reperfusioonikahjustus)HF kippus seda süvendama(kõrge rasvasisaldusega)või HS-dieedil, mida toidetakse nii 1 nädala kui ka 6 nädala jooksul. BUN ja plasma kreatiniini tase olid HS-i ja HF-i korral oluliselt kõrgemad(kõrge rasvasisaldusega)pluss HS-dieedirühmad, keda toideti 1 nädal pärast IRI-d(Isheemia-reperfusioonikahjustus). Plasma kreatiniini tase südamepuudulikkuse korral(kõrge rasvasisaldusega)pluss HS-dieedi rühm, keda toideti 6 nädalat, oli 2. päeval pärast IRI-d oluliselt kõrgem kui kontrollrühmal(Isheemia-reperfusioonikahjustus). *P < 0,05,="" võrreldes="" kontrollrühmaga="" igal="" ajahetkel="" (n="5–10" iga="" rühma="" kohta).="" statistiline="" analüüs="" viidi="" läbi="" mann-whitney="" u-testi="" abil.="">kõrge rasvasisaldusega; HS, kõrge soolasisaldusega; HF pluss HS,kõrge rasvasisaldusegasuure soolasisaldusega.

Nekrootiliste tuubulite osakaal oli suurem hiirtel, keda toideti HS-i või HF-ga(kõrge rasvasisaldusega)dieet võrreldes kontrollrühmaga (joonis 6). Rühm toitis HF-i(kõrge rasvasisaldusega)pluss HS-dieet ühe nädala jooksul näitas märkimisväärselt suuremat nekrootiliste tuubulite osakaalu kui kontrollrühmas (joonis 6C).

JOONIS 6|Toitumise muutmise mõju struktuurikahjustustele pärast IRI-d(Isheemia-reperfusioonikahjustus)kirurgia.(A, B) Isheemiliste neerude hematoksüliini ja eosiini värvimine 2. päeval pärast IRI-d(Isheemia-reperfusioonikahjustus). Nooled näitavad kahjustatud või nekrootilisi tuubuleid (×200). (C) Nekrootiliste tuubulite protsent oli kõrgem hiirtel, keda toideti HF-ga(kõrge rasvasisaldusega)või HS-dieeti võrreldes kontrollrühmaga. HF(kõrge rasvasisaldusega)pluss HS dieedi rühmas, keda toideti 1 nädal, oli nekrootiliste tuubulite protsent oluliselt suurem kui kontrollrühmas. *P < 0,05,="" võrreldes="" kontrollrühmaga="" (n="5–10" iga="" rühma="" kohta).="" statistiline="" analüüs="" viidi="" läbi="" mann-whitney="" u-testi="" abil.="">kõrge rasvasisaldusega; HS, kõrge soolasisaldusega; HF pluss HS,kõrge rasvasisaldusegasuure soolasisaldusega.

CD45 ekspresseerivate leukotsüütide koguarvu protsent isheemiajärgsete neerude tuumade hulgas oli oluliselt kõrgem HF-i saanud rühmas.(kõrge rasvasisaldusega)pluss HS-dieet nii l nädala kui ka 6 nädala jooksul (joonised 7A, B). Rühm toitis HF-i(kõrge rasvasisaldusega)6-nädalane dieet näitas ka CD45-positiivsete rakkude suuremat osakaalu kui kontrollrühmas (joonis 7C).

JOONIS 7|Toidu muutmise mõju leukotsüütide liikumisele post-isheemilisse neerudesse.(A, B) CD{0}}positiivsete leukotsüütide tüüpilised immunohistokeemia tulemused ja poolkvantitatiivsed analüüsid post-isheemilistes neerudes 2. päeval pärast IRI-d(Isheemia-reperfusioonikahjustus). HF-ga toidetud hiirtel esines rohkem väljendunud leukotsüütide infifiltratsioone post-isheemilistes neerudes.(kõrge rasvasisaldusega)või HS-dieeti nii 1 kui 6 nädalat. Nooled näitavad CD45-positiivseid leukotsüüte (×200). (C) CD45 ekspresseerivate leukotsüütide koguarvu protsent tuumaga rakkude hulgas oli kõrgem HF-i post-isheemilistes neerudes(kõrge rasvasisaldusega)- või HS-ga toidetud hiirtel võrreldes normaalse dieediga toidetud hiirtega. *P < 0,05,="" võrreldes="" kontrollrühmaga="" (n="5–10" iga="" rühma="" kohta).="" statistiline="" analüüs="" viidi="" läbi="" mann-whitney="" u-testi="" abil.="">kõrge rasvasisaldusega; HS, kõrge soolasisaldusega; HF pluss HS,kõrge rasvasisaldusegasuure soolasisaldusega.

TLR-2 ja TLR-4 intrarenaalne ekspressioon 2. päeval pärast IRI-d(Isheemia-reperfusioonikahjustus)hinnati post-isheemilistest neerudest ekstraheeritud valguproovide Western blot analüüsiga. Nii TLR-2 kui ka TLR-4 ekspressioon kippus HF-ga toidetud hiirtel suurenema(kõrge rasvasisaldusega)või HS-dieet 1 nädala jooksul (joonised 8A, C). Hiired said HF-i(kõrge rasvasisaldusega)pluss HS-dieet 6 nädalat näitas märkimisväärselt suurenenud nii TLR-2 kui ka TLR-4 ekspressiooni (joonised 8B, C).

JOONIS 8|Postisheemilistest neerudest ekstraheeritud valguproovide Western blot analüüs 2. päeval pärast IRI-d(Isheemia-reperfusioonikahjustus).(A) TLR2 ja TLR4 üldine ekspressioon kaldus olema kõrgem isheemiajärgsetes neerudes hiirtel, keda toideti 1 nädala jooksul HF- või HS-dieediga, võrreldes normaalse dieediga hiirtega. (B,C) TLR-2 ja TLR-4 ekspressioon oli HF-is oluliselt kõrgem(kõrge rasvasisaldusega), HS ja HF(kõrge rasvasisaldusega)pluss HS-dieedirühmad, keda toideti 6 nädalat võrreldes kontrollrühmaga. *P < 0,05,="" võrreldes="" kontrollrühmaga="" (n="3–4" iga="" rühma="" kohta).="" statistiline="" analüüs="" viidi="" läbi="" mann-whitney="" u-testi="" abil.="">kõrge rasvasisaldusega; HS, kõrge soolasisaldusega; HF pluss HS,kõrge rasvasisaldusegasuure soolasisaldusega.

Kõrge naatriumi ja lipiidide mõju hüpoksilistele HK{0}} rakkudele

Joonisel 9A on näidatud HK-rakkude proliferatsiooni astet pärast hüpoksilist solvamist sõltuvalt täiendavast NaClandlipid-ravist. Päev 0, hüpoksia lõpp, oli päev, mil HK-2 rakud eemaldati multigaaside inkubaatorist pärast 48-tunnist hüpoksiat. Töötlemine suure soolasisaldusega (lisa NaCl 25 mM) pärssis hüpoksiliste HK-2 rakkude proliferatsiooni. Vastupidi, lipiididega töötlemine soodustas hüpoksiliste HK-2rakkude proliferatsiooni.

TLR-2 ja TLR-4 Western blot analüüs hüpoksiliste HK-2 rakkude valguekstraktides näitas, et lipiididega töötlemine vähendas TLR-2 ekspressiooni ja suurendas TLR{ ekspressiooni {4}}, võrreldes hüpoksia kontrollrühmaga 2. päeval pärast hüpoksilist insuldi (joonised 9B, C). Täiendav NaCl-ravi ei muutnud oluliselt TLR-2 või TLR-4 ekspressiooni võrreldes hüpoksia kontrollrühma omadega.

JOONIS 9|Naatriumi ja lipiididega töötlemise mõju hüpoksilistele HK-2 rakkudele.(A) Täiendav NaCl-ravi pärssis hüpoksia kontrollrühmaga võrreldes HK{{0}} rakkude proliferatsiooni pärast hüpoksilist solvamist. Vastupidiselt soodustas täiendav ravi lipiididega HK-2 rakkude proliferatsiooni pärast hüpoksilist solvamist. (B,C) TLR-2 ja TLR-4 Western blotting näitas, et lipiididega töötlemine vähendas TLR-2 ekspressiooni ja suurendas TLR-4 ekspressiooni võrreldes hüpoksiaga kontrollrühm 2. päeval pärast hüpoksilist solvamist. Päev 0: päev, mil HK-2 rakud eemaldati mitme gaasiga inkubaatorist 48 tundi pärast hüpoksiat. *P < 0,05,="" võrreldes="" normoksia="" kontrollrühmaga.="" †p="">< 0,05,="" võrreldes="" hüpoksia="" kontrollrühmaga.="" statistiline="" analüüs="" viidi="" läbi="" mann-whitney="" u-testi="">

Traditsiooniline Hiina ravimtaim:cistanche

Märkus: traditsiooniline Hiina ravimürdi tsitanche(tuntud ka kui "draakonirohi" ja "kõrbe ženšenn"), kasvab ainult kuivades ja soojades kõrbetes. Ühena üheksast surematust ürdist,Cistanche(cistanche tubulosa/cistanche deserticola/desertliving cistanche/cistanche salsa)sisaldab rikkalikke tõhusaid koostisosi nagu ehhinakosiid, akteosiid, fenüületanoidglükosiidid, flavonoidid, polüsahhariidid jne. Need tõhusad koostisosad tegid tsitanche'ist väärtusliku toitva ürdi ja toidumaterjali inimeste immuunsuse, siseorganite ja ajurakkude jaoks ja neuronid jne. Kaasaegsed farmakoloogilised uuringud on kinnitanud järgmistcistanche mõju(cistanche'i eelised): parandada immuunsust; parandada seksuaalfunktsiooni ja neerufunktsiooni; väsimusevastane; Vananemisvastane; parandada mälu; Parkinsoni tõve vastu võitlemine; Alzheimeri tõve vastane; antioksüdatsioon; kergendus - kõhukinnisus; põletikuvastane; soodustada luude kasvu, valgendades nahka; kaitsta maksa; jne.

OSA Ⅱ saamiseks klõpsa SIIA