Guy JM Cameron jt

Äge neerukahjustus(AKI) võib lõppeda surmaga ja on täpselt määratletud riskitegur haiguse tekkekskroonilineneerudhaigus. 2. rühma kaasasündinud lümfoidrakud (ILC2) on -2 tüüpi tsütokiinide kaasasündinud tootjad ja perifeersete organite homöostaasi kriitilised regulaatorid. Kuid meie teadmised nende funktsioonistneerudon suhteliselt piiratud. Hiljutised tõendid näitavad, et ILC2 arvu suurendamine rekombinantse interleukiini (IL)-25 või IL-33 süsteemse manustamisega kaitseb neerukahjustuse eest. Kuigi ILC2-sid saab indutseerida kaitseks isheemilise või keemiliselt indutseeritud AKI eest, ei ole ILC2 puudulikkuse või ammendumise mõju neerukahjustuse raskusele teada. Esiteks, ILC2 fenotüüp ja asukohtneerudhinnati homöostaatilistes tingimustes.NeerILC2-d ekspresseerisid konstitutiivselt kõrget IL-5 taset ja asusid neeruveresoonkonna vahetus läheduses. Et testida ILC2 funktsionaalset rollineerud, kasutati neeruisheemia-reperfusioonikahjustuse (IRI) eksperimentaalset mudelit ja vigastuse raskust hinnati metsiktüüpi, ILC2-vähendatud, ILC2-puuduliku ja ILC{{4} järgi. }vaesestatud hiired. Üllataval kombel ei olnud vigastustega seotud (Lcn2), põletikuliste (Cxcl1, Cxcl2 ja Tnf) või rakuvälise maatriksi (Col1a1, Fn1) faktorite histopatoloogias, kollageeni ladestumises ega mRNA ekspressioonis erinevusi pärast IRI-d ILC2-de puudumisel. Need andmed viitavad sellele, et ILC2 puudumine ei muuda haiguse tõsidustneerukahjustus, mis viitab võimalikule koondamisele. Seetõttu kompenseerivad ILC2 puudumisel tõenäoliselt muud tüüpi 2-vahendatud immuunrakkude aktiveerimise mehhanismid. Seega ei suurenda ILC2-de kadu tõenäoliselt AKI vastuvõtlikkust või raskust.

Märksõnad:ILC2, 2. rühma kaasasündinud lümfoidrakk, IL-5, IL-13,neerud, neeru-, IRI, isheemia-reperfusioonikahjustus

Lisateabe saamiseks võtke ühendust:emily.li@wecistanche.com

Cistanche tubulosa hoiab ära neeruhaiguse, proovi saamiseks klõpsake siin

SISSEJUHATUS

Äge neerukahjustus(AKI) ja sellega seotud patoloogiad avaldavad inimeste tervisele sügavat mõju (1). AKI levinud põhjus on neeruisheemia, mis mõjutab eelkõige tubulaarset epiteeli nende rakkude suure mitokondriaalse tiheduse ja metaboolse aktiivsuse tõttu (2); arvustanud Devarajan (3) ning Bonventre ja Yang (4). Äge torukujuline nekroos kahjustab jäätmete eritumist, muudab vee ja elektrolüütide tasakaalu häireid ning põhjustab tugevaid põletikulisi reaktsioone; arvustanud Bonventre ja Yang (4). Neutrofiilide ja monotsüütide sissevool aitab kaasa vigastusele, kuid teised kaasasündinud immuunrakud võivad hõlbustada homöostaasi naasmist (5); arvustanud Friedewald ja Rabb (6). Kaasasündinud lümfoidrakud (ILC) on sellesse perekonda hiljuti lisandunud ja liigitatakse nende arenguks vajalike transkriptsioonifaktorite ja nende poolt toodetavate efektortsütokiinide alusel kolme rühma (7). 2. rühma ILC-d (ILC2-d) on tugevad 2. tüüpi tsütokiinide, peamiselt interleukiini (IL)-5 ja IL-13 (8, 9) tootjad. Need rakud soodustavad ka kudede taastumist pärast mitme organi solvamist ja neil on erinevad funktsioonid in vivo (10). Näiteks pärast gripiviirusega hingamisteede viirusinfektsiooni koordineerivad ILC2-d hingamisteede epiteeli paranemist, luues kasvufaktori amfireguliini (AREG) (11). Hiljuti on ILC2-sid uuritud neerukahjustuse mudelites, sealhulgas isheemia-reperfusioonikahjustuse (IRI) ja nefrotoksiliste kemikaalide põhjustatud kahjustuste puhul doksorubitsiini või tsisplatiiniga (12–16). Neerude IRI saavutatakse tavaliselt neerude verevoolu ajutise piiramisega 20–30 minutiks, modelleerides siirdamisest või kirurgilisest sekkumisest tekkinud traumat (17–21). Need uuringud näitavad ühiselt, et ILC2-sid aktiveerivate rekombinantsete hiire tsütokiinide, nimelt IL-25 või IL-33, in vivo manustamine on piisav tubulaarsete epiteelirakkude kahjustuse raskuse vähendamiseks (12–16). Sarnased tulemused on saavutatud ka ex vivo aktiveeritud ILC2-de ülekandmisel (12, 15). Kuigi ILC2-sid saab kunstlikult esile kutsuda vohama ja kaitsma eksperimentaalse neerukahjustuse kahjulike tagajärgede eest, jääb ILC{38}defitsiidi mõju ebatäielikult mõistetavaks. Tõepoolest, teised immuunrakud, millel on keeruline interaktsioon ILC2-dega, nagu regulatiivsed T-rakud (Treg) ja alternatiivselt aktiveeritud makrofaagid (AAM; tuntud ka kui M2), on selle renoprotektiivse toime jaoks kriitilised (22–25). Selles uuringus püüdsime täiendavalt iseloomustada ILC2-sid neerudes, nende asukohta selles elundis ja määrata nende funktsionaalset rolli IRI-s, kasutades funktsiooni kadumise lähenemisviisi. Siin me leidsime selleneerudILC2-d ekspresseerivad konstitutiivselt IL- 5 ja paiknevad peamiselt neeruveresoonkonna vahetus läheduses, adventitsias. Lisaks näitame, et ILC2-de vähenemine, puudulikkus või ammendumine mõjutas IRI raskust minimaalselt. Kuigi varem on näidatud, et ILC2-de aktiveerimine ja sellega seotud lokaalse 2. tüüpi immuunsuse võimendamine vähendab AKI kahjulikke tagajärgi, näitavad meie tulemused, et võrreldav vigastus tekib ka ILC2-de puudumisel, mis viitab sellele, et ILC2-d võivad olla IRI-s üleliigsed, kui muud kompenseerivad immuunsüsteemid. rakud, nagu T-rakud, on olemas.

MATERJALID JA MEETODID

Hiired

Kaheksa kuni kaheteistkümne nädala vanused isased metsikut tüüpi (WT; C57BL/6JAusb), vehiik (soolalahusega töödeldud Icosdtr/ pluss Cd4cre/ plus ), ILC2-vähendatud (Roraflfl/ pluss Il7rcre/ plus ), ILC{{ 8}}puudulik (Roraflfl/flfl Il7rcre/ plus ), ILC2- ammendunud (Dipteeria toksoidiga ravitud [DTx] Icosdtr/ plus Cd4cre/ plus ) ja IL-5/IL-13 topeltreporterhiired (Il5venus/ pluss Il13td tomato/ plus ) saadi ettevõttest Australian Bioresources (Moss Vale, Austraalia). Il5td tomatoCre; Rosa26-CAG-RFP reporter-jälgija hiired saadi firmast Jackson Labs (viitenumbrid 030926 ja 007914). Kõik operatsiooni läbinud hiired peeti spetsiaalsetes patogeenivabades füüsilises isolatsioonitingimustes 2 individuaalselt ventileeritud puurides. Hiired puutusid operatsiooni ajal steriliseeritud keskkonnas kokku normaalse toaõhuga. Hiirtel lasti enne katsete alustamist 1 nädal aklimatiseeruda ja neid hoiti 12-h päeva/öö tsüklis, võimaldades ad libitum juurdepääsu standardsele laboratoorsele toidule ja veele.

Voolutsütomeetria ja t-SNE analüüs

Neerudja kopsud koguti reporterhiirtelt. Üherakulised suspensioonid valmistati nii, nagu on kirjeldatud jaotises "Üherakuliste suspensioonide valmistamine hiire kopsudest kollagenaas D-ga töötlemisega" (Miltenyi Biotec GmbH, 2008; Bergisch Gladbach, Saksamaa). Rakud blokeeriti Fc-blokiga (puhastatud hiirevastane CD16/32; Biolegend, San Diego, USA) 30 minutit ja värviti fluorestseeruvalt konjugeeritud antikehadega sihtrakkude pinnaantigeenide vastu (täiendav tabel 1). Värvimise ja pesemise etapid viidi läbi BSA värvimispuhvriga (BD Biosciences, North Ryde, Austraalia). Proovid võeti BD LSR Fortessa X20 voolutsütomeetriga. Voolutsütomeetria andmeid analüüsiti kasutades FlowJo v10.5.3 (Tree Star, Ashland, USA). T-jaotatud stohhastiline naabermanustamine (t-SNE) viidi läbi ILC2-del (CD45 pluss Lineage [TCR [TCR TCR δ CD8 CD4 ]CD11b GR-1 B220 TER-119 CD3 NK-1 .1 ] IL7R pluss CD90.2 pluss ST2 pluss FSClowSSClow üksikrakud). Juhusliku allavalimise pistikprogrammi abil normaliseeriti sündmuste arv igas valimis võrduma väikseimaga, ümardati allapoole lähima 10 sündmuseni. Kõik populatsioonid ühendati allavalimitud populatsioonide ühendamise teel üheks .fcs-failiks. t-SNE analüüs viidi läbi ühendatud prooviga, mis sisaldas kõigi neeru- ja kopsuproovide ühendatud populatsioone. Selleks hinnati kompenseeritud kanaleid, mida väravaks ei kasutatud järgmiste t-SNE seadistuste all: Iteration 1000, Perplexity 20, Eta 224. Histogramme kasutati, et näidata rakupinna antigeenide ja tsütokiinide erinevat ekspressiooni kopsudes ja tsütokiinides.neerud

Immunofluorestsents Il5td tomatoCre; Rosa26-CAG-RFP reporter-jälgija hiired surmati ja perfuseeriti intrakardiaalselt fosfaatpuhverdatud soolalahusega (PBS) ja seejärel 4-protsendilise paraformaldehüüdiga (PFA) PBS-is. Neerud eemaldati ja hoiti värskes 4% PFA-s 24 tundi temperatuuril 4 °C ja seejärel pesti PBS-s. Kolmsada mikromeetrit valmistati vibratoomi abil. Seejärel inkubeeriti koelõike permeabiliseerimispuhvris (PBS/0,2 protsenti Triton X-100/0,3 M glütsiin), seejärel blokeeriti PBS/0,2 protsenti Triton X- 100/5 protsenti eesli seerumit temperatuuril 4 °C üleöö. Proove pesti PBS/0,2 protsenti Tween-20 üks kord, seejärel inkubeeriti primaarsete antikehadega, mis olid lahjendatud PBS-s/0,2 protsenti Tween-20/3 protsenti eesli seerumiga. toatemperatuuril kuni järgmise päevani. Järgmisena pesti proove PBS/0,2% Tween-20 lahuses 30 min 3–4 korda, seejärel inkubeeriti sekundaarsete antikehadega, mis olid lahjendatud PBS/0-s. 0,2 protsenti Tween-20/3 protsenti eesli seerumit toatemperatuuril 6–8 tundi. Proove pesti PBS/0.2% Tween-20 lahuses 1 päev ja seejärel dehüdreeriti kasvavas etanooliseerias (20, 30, 50, 70, 95, 100 protsenti), igas etapis 10 minutit . Lõpuks puhastati neerulõigud metüülsalitsülaadis (M-2047; Sigma-Aldrich, Castle Hill, Austraalia) leotamise teel ja paigaldati seejärel värske metüülsalitsülaadiga nõgusale katteklaasile või kambrile. Pildid jäädvustati Nikon A1R laserskaneeriva konfokaalse laseriga, mis sisaldas 405, 488, 561 ja 650 laserjoont ergastamiseks ja pildistamiseks 16X/0.8 või 25X1.1, NA Plan Apo pika töökaugusega veekümblusobjektiividega. Z sammu saadi iga 6 µm järel. Pilte töödeldi ImageJ-ga (NIH, Bethesda, MD, USA) ja Bitplane Imarise tarkvaraga v8 (Andor Technology PLC, Belfast, N. Iirimaa). Alfa-silelihaste aktiiniga märgistatud veresoonte pinnarekonstruktsioonid viidi läbi Imarisega ja pseudovärviti nende iseloomuliku arhitektuuri ja mahu põhjal, et visualiseerida suuri artereid ja veene. Kasutati järgmisi antikehi ja lahjendusi: Living Colors anti-DsRed Rabbit Polyclonal Pan Antibody (1:500; TaKaRa, Mountain View, USA), kitse polüklonaalne alfa-silelihase aktiini antikeha (1:200; Abcam, Cambridge, UK ), eFluor 660 LYVE1 monoklonaalne antikeha (1:300, kloon ALY7, eBioscience), Armeenia hamstri hiirevastane CD3 antikeha (1:100, kloon 145-2C11, Biolegend), Alexa Fluor R 488 eesli kitsevastane IgG (H pluss L), Alexa Fluor R 555 eesli küülikuvastane IgG (H pluss L) Alexa Fluor R 647 kitse hamstrivastane IgG (H pluss L) ristadsorbeeritud (1:400, ThermoFisher Scientific).

Ühepoolne isheemia-reperfusioonikahjustus

Kirurgiline anesteesia kutsuti esile 4-protsendilise isofluraani sissehingamisega ja seda säilitati pideva 1–1,5-protsendilise isofluraani sissehingamisega läbi ninakoonuse. Kogu protseduuri ajal hoiti hiiri kirurgilisel platvormil, mida hoiti digitaalse termostaadiga juhitava soojusmati abil 37 ± 1 °C juures. Kõigil loomadel tehti parema neeru nefrektoomia. Ühepoolse isheemia esilekutsumiseks kinnitati vasaku neeru veresooned 29-minutiseks neerupea lähedale, kasutades mittetraumaatilist steriilset vaskulaarset klambrit (Coherent Scientific; Hilton, Austraalia), rakendades piisavat jõudu, et takistada veresooni sisenemist ja sealt lahkumist.neerudilma laevade pöördumatu kahjustamiseta. Ühtlane ja kiire reperfusioonneerudtäheldati pärast veresoonte klambri eemaldamist kõigil hiirtel. Lihas- ja nahahaavad suleti 5/0 vikrüülõmblusega (Johnson & Johnson Medical, North Ryde, Austraalia), seejärel nahk suleti haava kaitsmiseks dermaalse liimiga (Provet, Charlestown, Austraalia) ja vältida nakatumist. Kontrollloomadele tehti identse anesteesiaajaga võltsoperatsioon ja neile tehti ainult kontralateraalne nefrektoomia. Tõhusaks valuvaigistamiseks said hiired 30 min enne operatsiooni subkutaanselt 0,1 mg/kg buprenorfiini ja seejärel 0,05–0,1 mg/kg iga 8–12 tunni järel, nõutud. Loomad võõrutati tavaliselt analgeesiast 4 päeva pärast operatsiooni ilma valu või stressi tunnusteta, nagu on määratletud näoomadustega, kasutades standardset hiire grimassi skaalat; nagu kirjeldatud (26). Kõik hiired jäid ellu kuni eelnevalt kindlaksmääratud lõpp-punktini.

ILC2-de ammendumine in vivo

ILC2-d ammendati Icosdtr/ plus Cd4cre/ plus hiirtel DTx (Sigma-Aldrich) intraperitoneaalse süstimisega 0,025 mg/kg, nagu eelnevalt kirjeldatud (27). DTx manustati 30 minutit enne operatsiooni ja seejärel iga päev kuni lõpp-punktini. ILC2- ammendumise kinnitamiseks sai naiivsete loomade alamhulk DTx 3 päeva. Kontroll-Icosdtr/ plus Cd4cre/ plus hiired said intraperitoneaalse soolalahuse süsti.

Histoloogia

Välja lõigatudneerudlõigati kohe pikisuunas pooleks läbi hilum. Pool fikseeriti 10% puhverdatud formaliinis, mis sisaldas 4% formaldehüüdi 24 tundi enne ajutist säilitamist 10% etanoolis, parafiini sisestamist ja lõikamist. Neli mikromeetrit, pikisuunas lõigatud lõigud värviti perioodilise happe-Schiffi (PAS) ja Massoni trikroomiga. Histopatoloogia kvantifitseeriti, visualiseerides tuubulite laienemist, apoptoosi või kipsi moodustumist ühekordselt pimendatud uurija poolt, kasutades hästi väljakujunenud poolkvantitatiivset meetodit (28), koos väikeste muudatustega, nagu kirjeldatud (15). Iga looma korduvate PAS-värvitud lõikude skoori keskmine väärtus võeti. Ülaltoodud histopatoloogilised tunnused mõjutasid 0=0 protsenti tuubulitest; 1=1–10 protsenti ; 2=11–25 protsenti ; 3=26–50 protsenti ; 4=51–75 protsenti ; 5=76–100 protsenti . Kollageeni ladestumist hinnati Massoni trikroomiga ja kollageen tuvastati metüülsinise sisaldusena külgnevate tuubulite vahel.

RNA ekstraheerimine, pöördtranskriptsioon ja qPCR

Geeniekspressiooni analüüsiks säilitati pool ühest neerust. Kude homogeniseeriti 400 µl PBS-s, kasutades TissueLyser LTTM-i (Qiagen, Chadstone Centre, Austraalia) 50 võnkumisega sekundis 2 minuti jooksul. Teiste analüüside jaoks eemaldati proovist kakssada mikroliitrit. Ülejäänud 200 µl proovile lisati üks milliliiter TRI Reagenti R (Sigma-Aldrich), mis sai 1–2 minuti jooksul kuni täieliku homogeniseerumiseni veel 50 võnkumist sekundis. Pärast 5-minutilist inkubeerimist toatemperatuuril ja tsentrifuugimist kiirusel 12,{10}}xg 10 minutit, supernatant ekstraheeriti ja vorteksiti 250 µl kloroformiga (Sigma-Aldrich). Pärast 10-minutilist inkubeerimist toatemperatuuril ja tsentrifuugimist kiirusel 12,{16}}xg 15 minutit, supernatant ekstraheeriti ja vorteksiti 500 µl 70-protsendilise isopropanooliga (Sigma-Aldrich). Proovi inkubeeriti uuesti 10 minutit toatemperatuuril, seejärel tsentrifuugiti 12,000xg juures 10 minutit. Supernatant visati ära ilma RNA-rikka pelletit lõhkumata. Pelletit pesti kaks korda 1 ml 75-protsendilise RNA-klassi etanooliga (Sigma-Aldrich), tsentrifuugiti 10,{31}}xg 5 minutit ja supernatant visati iga kord ära. Pellet kuivatati õhu käes lühiajaliselt toatemperatuuril enne uuesti suspendeerimist 80–100 µl UltraPureTM DNaasi/RNaasi vabas topeltdestilleeritud vees (ddH2O; Thermo-Fisher Scientific) ja säilitati seejärel enne pöördtranskriptsiooni temperatuuril 80 ◦C. . Vahetult enne pöördtranskriptsiooni määrati RNA saagis spektrofotomeetrilise hindamisega, kasutades Nanodrop2{46}}TM (Thermo-Fisher Scientific). Viis mikroliitrit igast proovist lahjendati ddH2O-ga nii, et proovi kohta laeti 1000 ng RNA-d. Pärast DNAse (Sigma-Aldrich) töötlemist genereeriti cDNA, kasutades M-MLV (Thermo-Fisher Scientific, North Ryde, Austraalia) ensüümi standardseid tööprotseduure, kasutades termotsükleri T100TM (BioRad Laboratories, Gladesville, Austraalia). SYBR-il põhinevat metoodikat kasutades viidi qPCR läbi CFX384 TouchTM-i (BioRad Laboratories) abil vastavalt standardsetele tööprotseduuridele. Iga praimerite komplekti testiti gradiendiga, et määrata amplifikatsiooni optimaalne temperatuur (täiendav tabel 2). Tsükli kvantifitseerimist tõlgendati iga sihtmärgi regressiooni abil, geeniekspressioon normaliseeriti hüpoksantiin-guaniini fosforibosüültransferaasi (Hprt) suhtes. Sulamiskõveraid hinnati praimeri dimeriseerumise ja mittespetsiifilise amplifikatsiooni tunnuste suhtes. Igal plaadil kasutati iga sihtmärgi jaoks vähemalt ühte negatiivset kontrolli ja ilma mallita kontrolli, et tagada saastumise puudumine igas põhisegus või kasutatud ddH2O-s.

RT2 Profiler Array

RT² ProfifilerTM PCR-massiivi hiire ekstratsellulaarne maatriks ja adhesioonimolekulid (Qiagen) viidi läbi vastavalt tootja juhistele ja andmed laaditi üles ja seejärel analüüsiti veebitööriista abil, mis on saadaval aadressil https://dataanalysis. qiagen.com/pcr/arrayanalysis.php. See massiiv võimaldab profileerida 84 geeni maksimaalselt 4 proovis, seetõttu ühendati 1., 3. või 7. päeval pärast IRI-d WT-hiirtelt võrdsed kogused cDNA-d rühma iga replikaadi kohta ja igast replikaadist kombineeriti võlts. nendest ajapunktidest. Iga sihtmärgi puhul võrreldi IRI-le järgnenud voltide muutust võltsitud ekspressiooniga.

Statistiline analüüs

Kõiki andmeid analüüsiti tarkvaraga Graphpad Prism v8.{6}}2, kasutades mitteparameetrilisi sidumata t-teste (Mann-Whitney U-test). P < 0,05="" määrati="" statistiliselt="" oluliste="" erinevuste="" määramise="" läveks.="" ∗p="">< 0,05,="" ns="" ei="" ole="" oluline.="" kõik="" andmed="" on="" väljendatud="" keskmisena="" ±="" sem.="" igas="" analüüsis="" oli="" n="4–8" kordust="" rühma="" kohta="" ja="" tulemused="" esindasid="" vähemalt="" kahte="" katset.="" iga="" katse="" valimi="" suurust="" kirjeldatakse="" vastavas="" joonise="">

TULEMUSED

Neerude ILC2-d ekspresseerivad konstitutiivselt IL-5 ja paiknevad homöostaatilistes tingimustes neeruveresoonkonnas

Viidi läbi neeru ILC2 fenotüübi ja asukoha üksikasjalik analüüs homöostaatilistes tingimustes. Võrreldes kopsudega oli neerudes oluliselt rohkem ILC2-sid (CD45 pluss Lineage IL- 7R pluss CD90.2 pluss ST2 pluss FSClowSSClow üksikrakud), kui seda väljendati protsendina CD45 pluss üksikute rakkude koguarvust (joonis 1A; Täiendavad joonised 1A, B). Neerude ja kopsude ILC2-de t-SNE analüüs näitas ainulaadset klastrite moodustamist, kuigi need klastrid ei olnud üksteisest täiesti erinevad (joonis 1B). Neerude ILC2-del oli aga märgatavalt madalam CD25 ekspressioon, ICOS-i ja KLRG1 pidev ekspressioon, kuid kõrgem IL-5 ekspressioon võrreldes kopsu ILC2-dega (joonis 1C). Neeru ILC2-de IL-5 konstitutiivne ekspressioon oli kõrgem kui IL-13 (joonis 1D; täiendavad joonised 1C, D). Leiti, et ILC2-d on peamine IL-5 tootv rakutüüp neerus, kusjuures T-abistajatüüpi -2 (TH2) rakkude panus on tühine (joonis 1E, täiendavad joonised 1E, F). Seetõttu kasutati IL-5 asendusmarkerina, et tuvastada ILC2-de asukoht hiire neerus, nagu on kirjeldatud mitme perifeerse organi puhul (29–31). See saavutati hiirte abil, kes ekspresseerivad IL-5-seotud Cre-rekombinaasi, ristudes Rosa-tomati päritolu jälgijaga (30, 31). IL-5 pluss rakke (peamiselt ILC2-d) leiti kogu ulatusesneerudkuid need paiknesid peamiselt peamises veresoonkonnas, nagu visualiseeriti alfa-silelihase aktiini (-SMA) positiivse värvimisega (joonis 2A; täiendavad joonised 2A, B), mis on kooskõlas meie hiljutise aruandega (29). Leiti, et ILC2-d on seotud nii interlobulaarsete kui ka kaarekujuliste neeruveresoontega ajukoores ja medullaarses piirkonnas, nagu näitab lümfisüsteemi endoteeli hüaluronaani retseptori -1 (LYVE1) ekspressioon (joonis 2B). Täiendav pildistamine näitas, et väga vähesed CD3 pluss rakkudest (peamiselt TH2 rakud) aitasid kaasa endogeense IL-5 plusssignaali tekkele (joonis 2C). ILC2-d tuvastati veresoone adventitsiumis, kasutades arteriaalse -SMA pseudovärvilisi pinnarekonstruktsioone.

ILC2 vähenemine, puudulikkus või ammendumine ei muuda hiirte eksperimentaalse neeruisheemia-reperfusioonikahjustuse raskust

Given ILC2s were present in the kidney and localized to the renal vasculature, the impact of ILC2 reduction, deficiency, or depletion on the severity of experimental renal IRI was assessed. This was achieved by using ILC2-reduced (Roraflfl/+Il7rcre/+)-deficient (Roraflfl/flfl Il7rcre/+), and -depleted (DTx-treated Icosdtr/+Cd4cre/+) mice compared to WT and vehicle (saline-treated Icosdtr/+Cd4cre/+) controls. These mice have been previously described as appropriate tools for assessing ILC2 function in vivo in other organs such as the lung (27, 32). Here we show that these tools are also appropriate for assessing ILC2 function in the kidney. Indeed, kidney ILC2s were significantly lower in the ILC2-reduced, -defificient, and -depleted groups compared to WT or saline-treated controls (Figure 3A). Time-course analysis of IRI in wild-type mice identified day 7 as the most appropriate time point for the assessment of injury severity due to the presence of histopathological features of acute tubular necrosis, collagen deposition and increased mRNA expression of extracellular matrix, injury-associated, and inflflammatory factors (Supplementary Figures 3, 4). At day 7, 25/84 extracellular matrix factors were increased >2-korda võrreldes võltskontrollidega, samal ajal kui 1/84 ja 6/84 suurenesid vastavalt 1. ja 3. päeval (täiendav joonis 4A). IRI indutseeritud äge tubulaarnekroos, mida iseloomustavad laienenud tuubulid ja kipsi moodustumine, võrreldes võltskontrollidega (joonis 3B, täiendavad joonised 3A, 4B). See kvantifitseeriti torukujulise vigastuse skoorina ja vigastuse raskusaste oli kõigi genotüüpide puhul sarnane (joonis 3C). IRI indutseeris ka kollageeni ladestumist, mida iseloomustab metüülsinise sisaldus medulla ja ajukoore tuubulite vahel, võrreldes võltskontrollidega (joonis 3D; täiendav joonis 3B). Kollageeni ladestumist ILC2 puudumine ei mõjutanud. IRI suurendas ka vigastustega seotud tegurite, kemokiinide ja põletikku soodustavate tsütokiinide mRNA ekspressiooni (joonised 3E–J, täiendavad joonised 4C–K). Neutrofiilide želatinaasiga seotud lipokaliini (Lcn2; NGAL), neerukahjustuse biomarkeri (33, 34) taset suurendas IRI ja seda ei mõjutanud ILC2 vähenemine, puudulikkus ega ammendumine (joonis 3E). CXC motiivi kemokiini ligandi 1 (Cxcl1) ja Cxcl2 suurendas samuti märkimisväärselt IRI kõigis genotüüpides (joonised 3F, G). Samamoodi suurendas IRI põletikku soodustavat tsütokiini kasvaja nekroosifaktorit (Tnf) võrreldes võltskontrollidega (joonis 3H). Kooskõlas nähtava kollageeni ladestumisega suurendas rakuvälise maatriksi faktorite kollageeni I tüüpi alfa 1 ahela (Col1a1) ja fibronektiini 1 (Fn1) mRNA ekspressiooni IRI kõigis genotüüpides (joonised 3I, J).

ARUTELU

ILC2-d on kudede homöostaasi kriitilised regulaatorid, kuid nende roll neerudes on veel täielikult välja selgitamata. Kuigi ILC2-sid saab indutseerida vohama ja kaitsta eksperimentaalse neerukahjustuse kahjulike tagajärgede eest, ei ole veel teada, mis juhtub nende rakkude puudumisel. Esmalt uurisime, kas ILC2 arvud CD45 pluss vereloomerakkude osakaaluna erinevad kopsudes ja neerudes. ILC2-d moodustasid suurema osa CD45 pluss rakkudest neerudes kui kopsudes. t-SNE analüüs rühmitas mõlemast kohast pärit ILC2-d erinevalt, kuid klastrid ei olnud nende kudede vahel täiesti erinevad. Nende rakupinna antigeenis ja 2. tüüpi tsütokiinide ekspressioonis esines erinevusi, kusjuures neeru ILC2-d ekspresseerisid suuremas koguses IL-5. Tõepoolest, neeru ILC2-d väljendasid homöostaatilistes tingimustes konstitutiivselt kõrget IL-5 taset. ILC2-d olid ka peamine IL-5 allikas neerudes, kusjuures TH2-rakkude panus oli tühine. Seetõttu kasutati IL-5 surrogaatmarkerina, et määrata nende rakkude asukoht neerus. ILC2-d tuvastati neerudes ja need paiknesid peaaegu eranditult piki neeruveresoonkonda. Nendes uuringutes kasutati IL-5-seotud Cre-rekombinaasi koos flox-stop-flox järjestusega CAG-RFP-WPRE kassetist ülesvoolu konstitutiivselt ekspresseeritud ROSA26 lookuses, et määrata ILC2-d. LYVE1, mida ekspresseerivad neeru lümfisüsteemi endoteelirakud, kasutati nende rakkude asukoha täpsemaks määratlemiseks hiire neerus (35). Ootuspäraselt sisestati LYVE1 värvumine ajukoore neeruarterite sidekoesse, kuid mitte medullasse, kuna selles neeru piirkonnas pole märgatavat lümfivõrku (35–37). Arvatavasti asuvad ILC2-d veresoonte lähedal, kuna neeru endoteelirakud on peamine IL-33 allikas neerudes (38, 39). Kinnitades meie tähelepanekut FACS-i poolt üherakuliste neerususpensioonide kohta, leiti, et ILC2-d on neerukoe lõikudes taas peamised IL-5 tootjad, kusjuures CD3 ja T-rakkude panus on minimaalne. Kuigi need uuringud näitavad reporterhiirte abil ILC2-de asukohta neerus, tuleb veel kindlaks teha, kas ILC2-d paiknevad ka inimese neeru veresoonkonna kõrval ja kas ILC2-de asukohta muudetakse vastusena neerukahjustusele. Kuigi mitmetes aruannetes on leitud, et ILC2 numbrid ei ole neerukahjustuse tõttu muutunud, vajavad nende fenotüüp ja vigastusjärgne aktivatsiooni olek täiendavat selgitamist (12–16). Järgmisena iseloomustasime ILC2-de funktsionaalset rolli neerudes, kasutades funktsiooni kadumise lähenemisviisi. Selle saavutamiseks kasutasime ILC{48}}vähenenud ja puudulikkusega hiiri ning hiiri, kellel võib pärast DTx manustamist ILC2-d tinglikult tühjaks saada (27). Kinnitasime nende tööriistade kasutamise ILC2-de katkestamiseks või eemaldamiseks neerudes. Arvestades ILC2-de lähedust neeruveresoonkonnale, valiti IRI eksperimentaalne mudel. Kuigi vigastuse tunnused ilmnesid pärast IRI-d silmanähtavalt, ei muutnud ILC2 vähenemine, puudulikkus või ammendumine neerude üldist histopatoloogiat ega põhjustanud ka suremust. Tõepoolest, IRI-indutseeritud remodelleerimine ja kollageeni ladestumine toimusid ILC2-dest sõltumatult. Kuigi on võimalik, et varasem vigastusjärgne ajahetk võis tuvastada erinevusi histopatoloogias ja geeniekspressioonis, võimaldas meie uuringu ajahetk hinnata ka kollageeni ladestumist, mis on ILC2-de poolt reguleeritud remodelleerumise oluline tunnus (16, 32, 40). –44). Samuti on usutav, et ILC2-de vähenemine ajal

AKI võib kahjustada neerude struktuuri ja funktsiooni, kui seda hinnatakse hilisematel ajahetkedel, kuna ILC2-de puudumisel on võimalik halvasti kohaneda parandusvastus. Selle lahendamiseks tuleb tulevastes uuringutes uurida ILC2 rolli AKI progresseerumisel krooniliseks neeruhaiguseks (45, 46).

Kokkuvõttes näitab see uuring, et ILC2 vähenemine, puudulikkus või ammendumine ei muuda eksperimentaalse AKI raskust hiirtel. Kuigi varem on näidatud, et ILC2-de aktiveerimine ja sellega seotud lokaalse 2. tüüpi immuunsuse võimendamine vähendab AKI kahjulikke tagajärgi, tekib võrreldav vigastus, kui ILC2-d on vähenenud, puuduvad või ammendunud, mis viitab võimalikule koondamisele ja kompensatsioonile teiste immuunrakkude, näiteks Tregi poolt. , AAM ja TH2 rakud. Seda kontseptsiooni toetavad uuringud, milles kasutati Rag1 / või Rag2 / hiiri, kellel puuduvad küpsed T- ja B-rakud.neerukahjustus(13, 15, 47, 48). Ühes uuringus kasutati CD90.2-vastast manustamist ILC2-de kahandamiseks, kuid neil loomadel puudusid ka Treg- ja TH2-rakud (15). Hoolimata ILC2-de ammendumisest anti-CD90.2-ga ei ole selles mudelisüsteemis T-rakkude sektsiooni kompenseerimine võimalik. Meie andmed näitavad, et ILC2-de kadumisel, kui T-rakkude sektsioon jääb puutumata, on IRI raskusele minimaalne mõju. Meie andmed toetavad kontseptsiooni, et ILC2-d lisaks teistele immuunrakkudele, nagu Treg ja AAM, aitavad kaasa AKI-le. Tõepoolest, Tregi ammendumine halvendas pärast IRI-d histopatoloogiat (15). Samamoodi soodustab makrofaagide polarisatsioon AAM-i suunas vigastuste paranemist (5, 12, 46, 49, 50). Vaja on täiendavaid uuringuid, et selgitada välja ILC2-de esinemise põhjus neerudes, sealhulgas tõusvad kuseteede infektsioonid ja muud neerukahjustused, samuti progresseeruv neerukahjustus.krooniline haigus.

EETIKAAVALDUS

Kõik kirurgilised protseduurid kiitis heaks Newcastle'i ülikooli loomade hooldamise ja eetika komitee vastavalt Austraalia koodeksile loomade hooldamise ja kasutamise kohta teaduslikel eesmärkidel. Immunofluorestseeruva pildistamise protseduurid kiideti heaks ja viidi läbi vastavalt UCSF-i loomade hooldamise ja kasutamise komitee ning laboratoorsete loomade ressursside keskuse kehtestatud juhistele.

AUTORI KAASALAD

Esitletud teos on tehtud koostöös kõigi autoritega. GC viis läbi kirurgilise mudeli, voolutsütomeetria, histoloogilise hindamise, geeniekspressiooni analüüsi ja analüüsis andmeid. KC ja ABM viisid läbi immunofluorestsentskatsed. SL-i aitas loomade jälgimine ja voolutsütomeetria. SJ ja AD andsid kliinilise ülevaate uuringu kavandamisest ja kirurgilisest tehnikast. ANM lõi, tarnis ja nõustas ILC{0}}puudulike ja tühjenenud ning Il13td tomatihiiride kasutamist. PF tarnis ja nõustas Il5venuse reporteriliini kasutamist. PF ja PH nõustasid eksperimentaalset kavandamist. MS kavandas, juhendas ja hõlbustas uuringute kõiki aspekte. Kõik autorid osalesid andmete tõlgendamises, intellektuaalse sisu käsikirjade ettevalmistamises ja toimetamises.

RAHASTAMINE

MS-i toetab Austraalia Teadusnõukogu (ARC) Discovery Early Career Researcher Award (DECRA) stipendium ning riikliku tervise- ja meditsiiniuuringute nõukogu (NHMRC), Hunteri meditsiiniuuringute instituudi ja Hunter Children's Research Foundationi toetused.

VIITED

1. Susantitaphong P, Cruz DN, Cerda J, Abulfaraj M, Alqahtani F, Kouloururidis I jt. AKI esinemissagedus maailmas: metaanalüüs.Clin J Olen Soc Nephrol. (2013) 8:1482–93.

2. Hall AM, Unwin RJ, Parker N, Duchen MR. Multifotooniline kujutis näitab erinevusi nefroni segmentide mitokondriaalses funktsioonis.J Am Soc Nephrol. (2009) 20:1293–302.

3. Devarajan P. Uuendused isheemilise ägeda neerukahjustuse mehhanismide kohta.J Am Soc Nephrol. (2006) 17:1503–20. 

4. Bonventre JV, Yang L. Isheemilise ägeda neerukahjustuse rakuline patofüsioloogia.J Clin Invest.(2011) 121:4210–21. DOI: 10.1172/JCI 45161

5. Lee S, Huen S, Nishio H, Nishio S, Lee HK, Choi BS jt. Erinevad makrofaagide fenotüübid aitavad kaasa neerukahjustusele ja paranemisele.J Am Soc Nephrol. (2011) 22:317–26. 

6. Friedewald JJ, Rabb H. Põletikulised rakud isheemilise ägeda neerupuudulikkuse korral.Kidney Int.(2004) 66:486–91. 

7. Spits H, Artis D, Colonna M, Diefenbach A, Di Santo JP, Eberl G jt. Kaasasündinud lümfoidrakud – ettepanek ühtseks nomenklatuuriks.NatRev Immunol.(2013) 13:145–9. 

8. Moro K, Yamada T, Tanabe M, Takeuchi T, Ikawa T, Kawamoto H jt. T(H)2 tsütokiinide loomupärane tootmine rasvkoega seotud c-Kit( plus )Sca-1( plus ) lümfoidrakkude poolt.Loodus. (2010) 463:540–4. 

9. Neill DR, Wong SH, Bellosi A, Flynn RJ, Daly M, Langford TKA jt. Nuotsüüdid esindavad uut kaasasündinud efektorleukotsüüti, mis vahendab -2 tüüpi immuunsust.Loodus. (2010) 464:1367–70. 

10. Loering S, Cameron GJM, Starkey MR, Hansbro PM. Kopsude areng ja 2. tüüpi immuunsuse esilekerkivad rollid.J Pathol.(2018) 247:686–96. 

11. Monticelli LA, Sonnenberg GF, Abt MC, Alenghat T, Ziegler CG, Doering TA jt. Kaasasündinud lümfoidrakud soodustavad kopsukoe homöostaasi pärast gripiviirusega nakatumist.Nat Immunol. (2011) 12:1045–54. 

12. Huang Q, Niu Z, Tan J, Yang J, Liu Y, Ma H jt. IL-25 kutsub esile kaasasündinud lümfoidrakud ja multipotentsed 2. tüüpi eellasrakud, mis vähendavad neerude isheemilist/reperfusioonikahjustust.J Am Soc Nephrol.(2015) 26:2199–211. 

13. Riedel JH, Becker M, Kopp K, Duster M, Brix SR, Meyer-Schwesinger C jt. IL-33-vahendatud 2. tüüpi kaasasündinud lümfoidrakkude laienemine kaitseb progresseeruva glomeruloskleroosi eest.J Am Soc Nephrol.(2017) 28:2068–80. 

14. Stremska ME, Jose S, Sabapathy V, Huang L, Bajwa A, Kinsey GR jt. IL233, uudne IL-2 ja IL-33 hübriidtsütokiin, leevendab neerukahjustusi.J Am Soc Nephrol. (2017) 28:2681–93. 

15. Cao Q, Wang Y, Niu Z, Wang C, Wang R, Zhang Z jt. Kudedes elavate 2. tüüpi kaasasündinud lümfoidrakkude võimendamine IL-33 abil, et vältida neeruisheemia-reperfusioonikahjustust.J Am Soc Nephrol.(2018) 29:961–76. 

16. Sabapathy V, Cheru NT, Corey R, Mohammad S, Sharma R. Uudne hübriidtsütokiin IL233 vahendab regeneratsiooni pärast doksorubitsiinist põhjustatud nefrotoksilist vigastust.Sci Rep. (2019) 9:3215. 

17. Cameron GJM, Jiang SH, Loering S, Deshpande AV, Hansbro PM, Starkey MR. 2. rühma kaasasündinud lümfoidrakkude terapeutiline potentsiaal ägeda neerukahjustuse korral.J Pathol. (2019) 2019:5242. 

18. Singh AP, Junemann A, Muthuraman A, Jaggi AS, Singh N, Grover K jt. Ägeda neerupuudulikkuse loommudelid.Pharmacol Rep. (2012) 64:31–44. 

19. Ramesh G, Ranganathan P. Hiiremudelid ja meetodid inimese haiguste, ägeda neerukahjustuse (AKI) uurimiseks.Meetodid Mol Biol.(2014) 1194:421–36. 

20. Skrypnyk NI, Harris RC, de Caestecker MP. Ägeda neerukahjustuse ja vigastusjärgse fibroosi isheemia-reperfusioonimudel hiirtel.J VisExp.(2013) 9:78. 

21. Wei Q, Dong Z. Isheemilise ägeda neerukahjustuse hiiremudel: tehnilised märkused ja nipid.Am J Physiol Renal Physiol.(2012) 303:F1487–94? 

22. Starkey MR, McKenzie ANJ, Belz GT, Hansbro PM. 2. kopsurühma kaasasündinud lümfoidrakud: üllatused ja väljakutsed.Limaskestade immunool.(2019) 12:299–311. 

23. Jang HR, Rabb H. Immuunrakud eksperimentaalses ägedas neerukahjustuses.Nat Rev Nephrol.(2015) 11:88–101. DOI: 10.1038/nrneph.2014.180

24. Turner JE, Becker M, Mittrucker HW, Panzer U. Kudedes elavad lümfotsüüdid neerus.J Am Soc Nephrol.(2018) 29:389–99. 

25. Jang HR, Rabb H. Kaasasündinud immuunvastus isheemilise ägeda neerukahjustuse korral.Clin Immunol. (2009) 130:41–50. 

26. Langford DJ, Bailey AL, Chanda ML, Clarke SE, Drummond TE, Echols S jt. Valu näoilmete kodeerimine laborihiirel.Natmeetodid.(2010) 7:447–9.

27. Oliphant CJ, Hwang YY, Walker JA, Salimi M, Wong SH, Brewer JM jt. MHCII-vahendatud dialoog rühma 2 kaasasündinud lümfoidrakkude ja CD4 pluss T-rakkude vahel tugevdab 2. tüüpi immuunsust ja soodustab parasiitide helmintide väljutamist.Immuunsus. (2014) 41:283–95. 

28. Shih W, Hines WH, Neilson EG. Tsüklosporiin A mõju immuunvahendatud interstitsiaalse nefriidi tekkele.Neer Int. (1988) 33:1113–8.

29. Dahlgren MW, Jones SW, Cautivo KM, Dubinin A, Ortiz-Carpena JF, Farhat S jt. Adventitsiaalsed stroomarakud määravad 2. rühma kaasasündinud lümfoidrakkude kudede nišid.Immuunsus. (2019) 50:707–22. 

30. Molofsky AB, Nussbaum JC, Liang HE, Van Dyken SJ, Cheng LE, Mohapatra A jt. Kaasasündinud 2. tüüpi lümfoidrakud säilitavad vistseraalse rasvkoe eosinofiile ja alternatiivselt aktiveeritud makrofaage.J Exp Med.(2013) 210:535–49. 

31. Nussbaum JC, Van Dyken SJ, von Moltke J, Cheng LE, Mohapatra A, Molofsky AB jt. 2. tüüpi kaasasündinud lümfoidrakud kontrollivad eosinofiilide homöostaasi.Loodus.(2013) 502:245–8. 

32. Donovan C, Starkey MR, Kim RY, Rana BMJ, Barlow JL, Jones B jt. T/B lümfotsüütide ja ILC2 rollid eksperimentaalses kroonilises obstruktiivses kopsuhaiguses.J Leukoc Biol.(2019) 105:143–50. 

33. Mishra J, Ma Q, Prada A, Mitsnefes M, Zahedi K, Yang J jt. Neutrofiilide želatinaasiga seotud lipokaliini tuvastamine uudse varajase uriini biomarkerina isheemilise neerukahjustuse korral.J Am Soc Nephrol.(2003) 14:2534–43. 

34. Supavekin S, Zhang W, Kucherlapati R, Kaskel FJ, Moore LC, Devarajan P. Diferentsiaalne geeniekspressioon pärast varajast neeruisheemiat/reperfusiooni.Kidney Int.(2003) 63:1714–24. 

35. Skorecki K, Chertow GM, Marsden PA, Taal MW, Alan SL, Luyckx V. Neeru anatoomia: lümfisüsteemid. In:Brenner jarektorNeerude e-raamat. 10. väljaanne Amsterdam: Elsevier (2015). lk. 80–1.

36. Banerji S, Ni J, Wang SX, Clasper S, Su J, Tammi R jt. LYVE-1, CD44 glükoproteiini uus homoloog, on hüaluronaani lümfispetsiifiline retseptor.J Kamber Biol. (1999) 144:789–801. 

37. Lee HW, Qin YX, Kim YM, Park EY, Hwang JS, Huo GH jt. Lümfisüsteemi endoteeli-spetsiifilise hüaluronaani retseptori LYVE-1 ekspressioon arenevas hiire neerus.KamberPabertaskurätikRes.(2011) 343:429–44.

38. Shelite TR, Liang Y, Wang H, Mendell NL, Trent BJ, Sun J jt. IL- 33-sõltuv endoteeli aktiveerimine aitab kaasa apoptoosi ja neerukahjustuse tekkele orienteeritud tsutsugamushiga nakatunud hiirtel.PLoS Negl Trop Dis.(2016) 10:e0004467.

39. Ferhat M, Robin A, Giraud S, Sena S, Goujon JM, Touchard G jt. Endogeenne IL-33 aitab alarmiinina kaasa neeruisheemia-reperfusioonikahjustusele.J Olen Soc Nephrol. (2018) 29:1272–88. 

40. Mchedlidze T, Waldner M, Zopf S, Walker J, Rankin A, Schuchmann M jt. Interleukiini-33-sõltuvad kaasasündinud lümfoidrakud vahendavad maksafibroosi.Immuunsus. (2013) 39:357–71. 

41. Moretti S, Renga G, Oikonomou V, Galois C, Pariano M, Iannitti RG jt. Nuumraku-ILC2-Th9 rada soodustab tsüstilise fibroosi korral kopsupõletikku.Nat Commun. (2017) 8:14017. 

42. Hams E, Armstrong ME, Barlow JL, Saunders SP, Schwartz C, Cooke G jt. IL-25 ja 2. tüüpi kaasasündinud lümfoidrakud kutsuvad esile kopsufibroosi.ProcNatlAcad Sci USA. (2014) 111:367–72.

43. Wohlfahrt T, Usherenko S, Englbrecht M, Dees C, Weber S, Beyer C jt. 2. tüüpi kaasasündinud lümfoidrakkude arv suureneb süsteemse skleroosiga patsientidel ja on korrelatsioonis fibroosi ulatusega.Ann Rheum Dis.(2016) 75:623–6. 

44. Li D, Guabiraba R, Besnard AG, Komai-Koma M, Jabir MS, Zhang L jt. IL-33 soodustab ST2-sõltuvat kopsufibroosi, indutseerides hiirtel alternatiivselt aktiveeritud makrofaage ja kaasasündinud lümfoidrakke.J Allergy Clin Immunol. (2014) 134:1422–32. 

45. Sharp CN, Doll MA, Megyesi J, Oropilla GB, Beverly LJ, Siskind LJ. Korduvast tsisplatiini manustamisest põhjustatud subkliiniline neerukahjustus põhjustab progresseeruvat kroonilist neeruhaigust.Am J Physiol Renal Physiol.(2018) 315:F161–72? 

46. ​​Liu J, Kumar S, Dolzhenko E, Alvarado GF, Guo J, Lu C jt. Isheemia / reperfusiooni järgselt ägedast kroonilisest neerukahjustusest ülemineku molekulaarne iseloomustus.JCI Insight.(2017) 2:94716. 

47. Li L, Huang L, Sung SJ, Lobo PI, Brown MG, Gregg RK jt. NKT-rakkude aktiveerimine vahendab neutrofiilide IFN-gamma tootmist ja neeruisheemia-reperfusioonikahjustust.J Immunol.(2007) 178:5899–911.

48. Chan AJ, Alikhan MA, Odobasic D, Gan PY, Khouri MB, Steinmetz OM jt. Kaasasündinud IL-17A-d tootvad leukotsüüdid soodustavad põletikuliste ja Toll-tüüpi retseptorite aktiveerimise kaudu ägedat neerukahjustust.Olen J Pathol.(2014) 184:1411–8? 

49. Cao Q, Wang C, Zheng D, Wang Y, Lee VWS, Wang YM jt. IL-25 indutseerib M2 makrofaage ja vähendab neerukahjustust proteinuurilise neeruhaiguse korral.J Olen Soc Nephrol. (2011) 22:1229–39.

50. Chung S, Overstreet JM, Li Y, Wang Y, Niu A, Wang S jt. TGF-beeta soodustab fibroosi pärast rasket ägedat neerukahjustust, suurendades neerude makrofaagide infiltratsiooni.JCI Insight.(2018) 3:123563.