Salvia Haenkei kui uuendusliku strateegia edasine hindamine naha fotovananemise vastu võitlemiseks ja barjääri terviklikkuse taastamiseks

Palun võtke ühendustoscar.xiao@wecistanche.comrohkem informatsiooni

abstraktne:Nahk on inimkeha oluline barjäär, mis täidab mitmeid funktsioone. Endogeensed tegurid koos väliste rünnakutega mõjutavad pidevalt naha terviklikkust, põhjustades selgeid struktuurseid muutusi, mis ei mõjuta mitte ainult naha välimust, vaid ka selle erinevaid füsioloogilisi funktsioone. Barjäärifunktsioonide muutused toovad kaasa suurenenud riski haigestuda haigustesse ja kõrvalreaktsioonidesse, mistõttu on ilmne epidermise barjääri terviklikkuse säilitamise ja naha vananemisprotsessi aeglustamise olulisus.cistanche peenise kasvSalvia hankie (SH) on hiljuti tuvastatud kui võimalik vananemisvastane aine; selle ekstrakt on võimeline vähendama vananevate rakkude taset, mõjutades ll.1a vabanemist ja vähendades reaktiivsete hapnikuliikide (ROS) teket. Selles uuringus testiti SH ekstrakti inimese keratinotsüütide rakuliinil (HaCaT), mis puutus kokku rakkude enneaegse vananemisega seotud stressiteguritega, nagu vabad radikaalid ja ultraviolett-B-kiirgus. Kinnitasime, et SH toimib ROS-i püüdjana ja leidis selle võime taastada naha barjääri terviklikkust, tugevdades tsütoskeleti struktuuri, tihendades tihedaid ristmikke ja suurendades rakkude migratsioonikiirust. Arvestades neid tulemusi, muutub see töö asjakohaseks, identifitseerides Salvia hankie kui ühendit, mis on kasulik naha vananemisvastaseks raviks kliinilises töös.

Lisateabe saamiseks klõpsake siin

Sissejuhatus

Tervislik ja toimiv nahk on oluline, et kaitsta dehüdratsiooni ja erinevate ainete tungimist 100% mikroorganismide, allergeenide, ärritajate ja kiirguse eest. Igapäevane kokkupuude väliste mõjuritega koos mõningate sisemiste teguritega, nagu geneetika, raku ainevahetus, hormoonid ja ainevahetusprotsessid, viib naha loomuliku vananemiseni [1]. Eelkõige on naha vananemisnähtus tohutult seotud ultraviolettkiirguse, saaste, korduva lihaste kasutamise ja gravitatsiooniga [2, 3]. Naha vananemine tuleneb seega kumulatiivsetest struktuursetest ja füsioloogilistest muutustest ning nahakihtide järkjärgulisest modulatsioonist [2, 4, 5]. Isegi kui vananemist ei peeta patoloogiliseks seisundiks, vaid pigem bioloogiliseks ja vältimatuks protsessiks, on selle seos erinevate nahahaigustega nüüdseks hästi kindlaks tehtud. Arvestades, et kõige olulisemad vanusega seotud nahahaigused on degeneratiivsed häired, hea- ja pahaloomulised kasvajad jne, on nahahoolduse tähtsus teatud nahahaiguste ravimisel või ennetamisel ilmne.[6-8]. Tänapäeval aitavad naha vananemisvastased strateegiad muuta naha ja epidermise foto-/kronoloogilise vananemise märke. Nende lähenemisviiside põhjal võib neid liigitada järgmiselt: kosmetoloogiline hooldus, paiksed ained, invasiivsed protseduurid, süsteemsed ained, vananemisvastaste eksogeensete tegurite vältimine, elustiili ja harjumuste korrigeerimine ning ennetav meditsiin [9]. Vananemisvastaste preparaatide komponentidena saab kasutada kahte põhirühma: 1. rakuregulaatorid, nagu retinool, peptiidid ja kasvufaktorid, mis mõjutavad otseselt kollageeni metabolismi ja tootmist; 2. Antioksüdandid, nagu vitamiinid, polüfenoolid ja flavonoidid, on võimelised vähendama kollageeni lagunemist [9].

Olulised tõendid toetavad ideed, et naha vananemist põhjustab peamiselt ROS, mis tekib endogeense oksüdatiivse raku metabolismi käigus [10, 11]. On teada, et ROS-i akumuleerumine põhjustab rakukahjustusi, sealhulgas lipiidide peroksüdatsiooni, membraanivalgu kahjustusi ja DNA mutatsioone, mis põhjustavad naha struktuurseid ja funktsionaalseid muutusi. Aja jooksul toetavad inimrakud ROS-i taseme loomulikku tõusu, mis on seotud antioksüdantide kaitse osalise kadumisega. Seda vältimatut seisundit soodustab veelgi igapäevane ultraviolettkiirgus (UVR), mis kutsub esile maatriksi metalloproteinaaside (MMP) sünteesi ja sellest tulenevalt MMP-vahendatud kollageeni hävitamise [12, 13]. In vivo uuringud näitasid põhjuslikku seost mitokondriaalse oksüdatiivse kahjustuse, rakkude vananemise ja vananemise fenotüüpide vahel [10, 14].

Rakkude vananemist määratletakse kui rakkude kasvu stabiilset peatumist, mis toimub vananemise ajal kõigis inimrakkudes [15-17]. Stressi tekitavate sündmuste, nagu onkogeeni üleekspressioon, ROS-i teke ja DNA kahjustus (näiteks UVR-i, eriti UVB-valguse poolt esile kutsutud) tulemusena võivad rakud enneaegselt vananeda [18].cistanche salsa eelisedSelle stsenaariumi puhul näib olevat ilmne uuenduslike strateegiate väljatöötamise tähtsus, mis suudavad ära hoida vananevate rakkude kuhjumist või neid valikuliselt tappa, takistades seega vananemist ja vananemisega seotud häireid. Hiljuti tuvastasime potentsiaalse vananemisvastase ainena Salvia hankie (SH), Boliivia taime, mis on rikas B-vitamiini ja antioksüdantsete omaduste poolest [18].

Vananevate rakkude akumuleerumine aja jooksul on teadaolevalt üks olulisemaid mehhanisme, mille kaudu koed läbivad vananemisprotsessi, mis näib olevat peamiselt põhjustatud tüüpilise põletikulise seisundi püsimisest. Vaatamata sellele, et vananevad rakud ei suuda paljuneda, on neil kõrge metaboolne aktiivsus ja nad toodavad tõhusalt mitmeid põletikuvastaseid molekule [19]. Inimese naha epidermise (EpiSkin) mudeli abil näidati tõepoolest, et SH ekstrakt vähendab vananevate rakkude taset, mõjutades ILa vabanemist ja vähendades ROS-i teket [18].

Homöostaatilistes tingimustes on nahk tõhus barjäär, mis kaitseb väliste rünnakute ja endogeensete tegurite eest ning reguleerib vedeliku, elektrolüütide ja valkude kadu. See oluline ülesanne on peamiselt omistatud epidermisele, dünaamilisele, tugevalt kihistunud epiteelile. Epidermise kaks peamist koostisosa on sarvkiht, välimine kiht ja tihedad ristmikud (TJ), rakkudevahelised ühendused, mis sulgevad külgnevad keratinotsüüdid granulooskihis [20]. Rakkude ja rakkude adhesioonid on vajalikud epidermise barjääri terviklikkuse säilitamiseks.cistanche tubulosa dosage redditSeda olulist funktsiooni täidavad spetsiaalsed raku-raku ühendused: adherensi ristmikud (AJ), desmosoomid ja tihedad ühendused. Need struktuurid ei võimalda mitte ainult füüsilisi ühendusi rakkude vahel, vaid korraldavad üldiselt tsütoskeleti elemente ja moduleerivad koe arengu, struktuuri ja füsioloogiaga seotud signaaliradu. Hiljutised geneetilised uuringud näitasid ootamatult ühendusvalkude mittekanoonilist rolli, tuues esile ristlõike, vastastikuse sõltuvuse ja kompensatsiooni tähtsuse, et võimaldada kudede vastupidavust [21].

Siin uurisime Salvia haenkei ekstrakti aktiivsust, et mõista molekulaarset mehhanismi, mis vastutab selle kaitsva mõju eest foto / kronoloogilisele naha vananemisele. Sellest vaatenurgast kasutati in vitro mudelina inimese spontaanselt immortaliseeritud keratinotsüüte (HaCaT) ja SH toimemehhanismi analüüsiti nii põhirežiimi kui ka H202 ja/või UVB-kiirguse poolt esile kutsutud stressitingimustes.

TULEMUSED

SH ekstrakti ohutu profiil ja vananemisvastased omadused Naha oksüdatiivne stress mängib olulist rolli vananemisprotsessis ja mitmete nahahaiguste patogeneesis [22]. Matic et al. on juba näidanud Salvia haenkei vananemisvastast toimet, mis korreleerus ka selle eemaldamisomadustega [18]. Neid kaitsvaid toimeid saab ära kasutada uudse nahka parandava raviviisi väljatöötamiseks, mis suudab säilitada barjääri terviklikkuse. SH omaduste põhjaliku uurimise eesmärgil kontrolliti esmalt ekstrakti aktiivsust rakkude elujõulisusele ja ROS-i tekkele HaCaT rakumudelis.

Cistanche on vananemisvastane toime

Rakkude elujõulisuse test viidi läbi, et käsitleda Salvia haenkei ekstrakti võimalikke tsütotoksilisi mõjusid keratinotsüütidele. HaCaT rakke töödeldi SH ekstraktiga (0.01-10 ug/ml) 24 ja 48 tundi. Rakkude elujõulisust hinnati Trypan blue Exclusion Assay abil. Joonistel fig 1A ja 1B on näidatud, et SH-ekstraktiga töötlemine ei mõjuta rakkude elujõulisust, mis kinnitab ekstrakti ohutusprofiili HaCaT-rakkudel kasutatud katsetingimustes.

Salvia haenkei ekstrakti aktiivsust ROS-i tekkele analüüsiti HaCaT rakkudes pärast 3-24 tundi kestnud töötlemist ning enne ja pärast H2O2 kokkupuudet.

Tulemused joonisel 2A näitavad, et SH on võimeline vähendama ROS-i baastasemeid rakkudes, eriti 3-tunnise ravi ajal. Lisaks ROS-i taseme olulisele tõusule pärast H-Oz-stimulatsiooni (joonis 2C), on SH võimeline takistama ROS-i tootmist. SH ekstrakt (0,01 ug/ml) vähendas oluliselt (-25 protsenti) oksüdatiivse stiimuli poolt indutseeritud ROS-i teket (joonis 2B), mis näitab NAC-ga võrreldavat toimet pärast 3-tunnist ravi. 24 tundi kestnud SH-ravi näib olevat tõhusam ROS-i vastumõju suurendamine, vähendades oluliselt ROS-i taset 1 ja 10 ug/ml juures (joonis 2B). Need tulemused kinnitavad Salvia haenkei

antioksüdantsed toimed, nagu varem täheldatud [18], näitavad antioksüdantset põhiefekti juba alates lühikestest ravikuuridest; oksüdatiivsest stiimulist põhjustatud kasvu ennetav toime on kõige olulisem pikemate raviaegade puhul.

On teatatud, et ultraviolettkiirgus põhjustab inimese nahas ROS-i rakusisese taseme tõusu, põhjustades kahjustusi ja enneaegset vananemist ning muid patoloogiaid [23-25]. Seetõttu on hinnatud SH-ekstrakti mõju UVB-vahendatud ROS-i tootmisele. Nagu oodatud, näitavad tulemused joonisel 3C pärast UVB-stimulatsiooni olulist rakusisese ROS taseme tõusu. Ravi SH-ga, mis indutseerib kalduvust vähendada rakkudes põhi-ROS-i taset (joonis 3A), suudab ära hoida UVB-stimulatsioonist põhjustatud suurenemise (joonis 3B). 3 tundi SH-ravi kutsub esile kalduvuse ROS-i taseme langusele; pikem SH-ravi on oksüdatiivse stressi vastu tõhusam, näidates olulist langust, nagu on näidatud joonisel 3A. Need andmed rõhutavad Salvia haenkei antioksüdantset aktiivsust ka UVB-vahendatud oksüdatiivse stressi korral.

Nagu mainitud, näitavad üha enam tõendid, et vananevad rakud kogunevad kronoloogiliselt ja fotovananenud nahasse, aidates kaasa vanusega seotud nahamuutustele ja patoloogiatele [26]. Seetõttu hinnati Salvia hankie toimet p21 ja p27 vananemismarkeritele (mis takistavad retinoblastoomi valgu (Rb) fosforüülimist ja inhibeerivat aktiivsust vastavalt CDK2-tsükliin E [27]) pärast fotostressi põhjustatud fotostressi. ultraviolettkiirgus. Tulemused joonisel 4 näitavad, et UVB kiiritamine kutsub esile p21 ja p27 mRNA taseme olulise tõusu võrreldes stimuleerimata kontrolliga.cistanche แอ ม เว ย์Sarnast suundumust suurenemise ennetamisel täheldatakse SH-ga töödeldud rakkudes. SH 1 ug/ml indutseerib p21 taseme olulise vähenemise võrreldes UVB-stimuleeritud kontrolliga, samas kui teised kontsentratsioonid kutsuvad esile vähenemise (joonis 4A). Eeltöötlemine SH-ga 0.01,0,1 ja 10 ug/ml vähendab oluliselt P27 taset (joonis 4B).

Samuti on kindlaks tehtud, et vananevad rakud mõjutavad mikrokeskkonda negatiivselt, eritades kemokiinide, tsütokiinide, kasvuhormoonide ja proteaaside põletikueelset segu, mida tuntakse vananemisega seotud sekretoorse fenotüübina (SASP) [28]. Tulemused joonisel 5 näitavad, et UVB-stimulatsioon kutsub esile ILla (A), IL6 (B) ja IL18 (C) mRNA taseme olulise tõusu võrreldes stimuleerimata kontrolliga. Eeltöötlemisel SH-ga on tugev toime tsütokiinitaseme tõusu vastu. Nagu on näidatud joonisel 5A, vähendas SH 10 ug/ml oluliselt ILa taset; IL6 suurenemist neutraliseerib märkimisväärselt SH 0,01, 0,1 ja 10 ug/ml (joonis 5B), samas kui kõik testitud kontsentratsioonid suudavad IL18 taset oluliselt vähendada (joonis 5C). Nahabarjääri säilitamine Võttes arvesse ülaltoodud tulemusi epiteeli rakuliini kohta, hinnati SH ekstrakti mõju mitmetele valkudele ja protsessidele, mis on seotud naha barjääri säilitamise ja koekahjustuste parandamisega.

Sirtuini-1 avaldis

Mitmed in vitro uuringud teatasid, et UVB-kiirgus indutseerib inimese fibroblastide Sirtuinl (SIRT1) valgu taseme langust, mis viitab SIRT1 osalemisele UVB-vahendatud kahjustustes [29]. Niisiis hinnati Salvia haenkei ekstrakti mõju Sirtuinli valgu ekspressioonile Western blot testiga (joonis 6). Nagu oodatud, põhjustas UVB-stimulatsioon SIRTI valgu ekspressiooni olulise vähenemise HaCaT rakkudes. Seetõttu uuriti SH ekstrakti aktiivsust SIRT1 tasemel. Huvitaval kombel näitavad tulemused, et 1 ug/ml SH ekstrakt, võrreldes kontrolliga, põhjustas SIRTl ekspressiooni suurenemise (pluss 4{10}} protsenti) põhitingimustes, mis viitab potentsiaalsele stimuleerivale toimele SIRT1 tasemetele. Nagu oodatud, indutseerib UVB-stimulatsioon SIRT1 taseme olulist langust. Tulemused näitavad, et eeltöötlemine 0,01 ug/ml SH ekstraktiga avaldab Sirtuin 1 taset parandavat toimet võrreldes UVB-ga töödeldud kontrolliga.

Haava paranemise test

Keratinotsüüdid on epidermise peamised koostisosad, pakkudes barjääri organismi ja keskkonna vahel. Seetõttu on nende vohamisel ja migratsioonil võtmeroll tõhusa barjääri säilitamisel ja vigastuste järgsel haavade paranemisel [30, 31]. Seega hinnati SH mõju HaCaT rakkude migratsioonile. Joonisel 7A olevad pildid näitavad, et SH-ga töötlemine vähendab kriimustuse paksust, mis näitab mõju HaCaT rakkude migratsioonile. joonisel fig 7B on kujutatud HaCaT rakkude migratsioonikiiruse kymogrammi konstruktsioon; pildid näitavad kontsentratsioonist sõltuvat rakkude migratsiooni suurenemist. Joonisel 7C olev graafik näitab rakkude migratsioonikiiruse olulist suurenemist pärast 4-8 tundi kestnud töötlemist 0,01 ug/ml SH ekstraktiga. Maksimaalne kasv saavutatakse 8-12-tunnise intervalliga, kus rakkude migratsioonikiiruse lahtrites on kontrollrühma suhtes umbes 165 protsenti. Need andmed, nagu rakkude proliferatsiooni kohta saadud tulemused, mis näitavad, et SH ekstrakti madalaim kontsentratsioon on võimeline esile kutsuma rakkude migratsioonikiiruse suurenemise, mis ei ole seotud hüperproliferatiivse fenotüübiga.

Tihedate ristmike hooldus

Lisaks sarvkihile mängivad tihedad ristmikud (TJ-d) olulist rolli naha terviklikkuses, toimides barjäärina vee ja lahustunud ainete jaoks ning osaledes rakkude diferentseerumises, proliferatsioonis, rakkude polaarsuses ja signaaliülekande protsessides. Hiljutised uuringud näitasid, et UV-valgus muudab TJ struktuuri üksikute valkude ekspressiooni ja lokaliseerumist, mis omakorda häirib naha barjäärifunktsiooni [32].

Selleks, et hinnata Salvia haenkei ekstrakti kui võimalikku kaitsvat ainet TJ-de katkemise vastu, mõõdeti okludiini ekspressiooni immunotsütokeemia abil pärast kokkupuudet UVB-kiirgusega. Joonistel fig 8A ja 8B kujutatud kujutised näitavad, et töötlemine SH mõlema kontsentratsiooniga kutsub esile okludiini valgu ekspressiooni suurenemise, soodustades epidermise barjääri terviklikkuse säilitamiseks kasuliku ristmiku moodustumist. Nagu oodatud, on pärast UVB-kiirgusega kokkupuudet rakkudel ebakorrapärane ja määratlemata membraanirõngas (joonis 8A). SH-ravi, eriti suurema kontsentratsiooni korral, säilitab membraani morfoloogia, säilitades struktuuri, mis on võrreldav stimuleerimata kontrolliga. SH ekstrakt soodustab ristmiku tugevdamist ja hoiab ära UVB-kiirguse põhjustatud kahjustused, säilitades nahabarjääri funktsionaalsuse.

Filaggrini väljend

Salvia haenkei ekstrakti mõju filaggriini (FLG) valgu ekspressioonile hinnati immunotsütokeemia abil. Filaggriin on nahabarjääri väljatöötamisel ja säilitamisel põhiline struktuurvalk. Tulemused joonistel 9A ja 9B näitavad filaggriini valgu ekspressiooni kontsentratsioonist sõltuvat suurenemist pärast 24-tunnist töötlemist SH ekstraktiga. Lisaks näitab F-aktiini valgu ekspressioon rakkude korrapärast jaotumist pärast SH-ga töötlemist, mis viib epiteeli barjääri hästi organiseeritud struktuurse järjepidevuseni. Need andmed näitavad, et SH-l on kasulik mõju nahabarjäärile, parandades filaggriini ekspressiooni, mis on vajalik naha õigeks kujunemiseks ja talitluseks.

Metalloproteinaasi ekspressioon

Naha kokkupuude ultraviolettkiirgusega põhjustab rakuvälise maatriksi (ECM) kahjustusi, põhjustades naha kortsude teket, lõtvumist ja lõtvust, mis on naha vananemise peamised tunnused. Maatriksmetalloproteinaasid (MMP-d) vastutavad peamiselt ECM-i komponentide, nagu kollageen, elastiin, fibronektiin ja proteoglükaanid, lagundamise eest [33].kui palju tsistanši võttaPaljud uuringud rõhutavad, et naha kokkupuude UV-kiirgusega kutsub esile erinevate MMP-de ülesreguleerimise, mõjutades naha välimust ja tervist [34-37].

Tulemused joonisel 10 näitavad, et UVB-kiirgus suurendab želatinaasi MMP-2 mRNA ekspressiooni, mis lagundab basaalmembraani kollageene ja denatureeritud struktuurseid kollageene [38]. Ravi SH-ga võib oluliselt vähendada MMP-2 mRNA taset (SH 0.01-0.1-10 ug/ml), mis näitab SH ekstrakti aktiivsust näärme struktuurse terviklikkuse säilitamisel. fotostressist kahjustatud nahk.

ARUTELU

Naha vananemine on sisemiste ja väliste tegurite kumulatiivne mõju, mis viib naha hõrenemiseni, põhjustades õhenemist, jäikust ja paindlikkuse kaotust. Nahk on esimene barjäär organismi ja keskkonna vahel, mistõttu on selle funktsionaalse ja anatoomilise terviklikkuse säilitamine hädavajalik. Lisaks loomulikele vananemisprotsessidele ja vananemisega seotud seisunditele, nagu diabeet, menopaus jne, võivad naha struktuuri mõjutada välised tegurid; eelkõige võivad naha struktuuri ja funktsioone kahjustada fotokahjustused, saaste või elustiili tegurid (suitsetamine, toitumine, emotsionaalne stress jne) [39,40]. Keratinotsüüdid on epidermise peamised koostisosad, mis loovad rakulise aluse kõige välimise barjääri jaoks; selles töös on HaCaT inimese keratinotsüütide rakuliin kokku puutunud stressiteguritega, nagu vabad radikaalid ja ultraviolett-B-kiirgus, et jäljendada loomulikku naha vananemist, muutes seega barjäärifunktsiooni. Salvia neelake on hiljuti tuvastatud kui potentsiaalne vananemisvastane aine, mis viitab selle võimalikule kasutamisele naha vananemise ja naha vananemisega seotud häirete korral; Seetõttu uuriti põhjalikult selle taime ekstrakti mõju naha vananemise, naha terviklikkuse säilitamise ja füsioloogiliste seisunditega seotud parameetritele. Arvatakse, et reaktiivsete hapnikuliikide või vabade radikaalide tootmine normaalsete endogeensete ainevahetusprotsesside või UV-kiirguse ja saaste kaudu aitab kaasa naha vananemisprotsessidele. Nahk on tundlik mitmesuguste redoksreaktsioonide suhtes ja redoks-tasakaalu on naha homöostaasi säilitamiseks hädavajalik. Madalad ROS-i kontsentratsioonid avaldavad füsioloogilist toimet, kuid nende liikide suurenenud tase on seotud radade aktiveerimisega, mille tulemuseks on kollageeni suurenenud lagunemine, elastiini akumuleerumine, maatriksit lagundavate metalloproteaaside aktiveerimine jne [41]. Lisaks mängib ROS olulist rolli patoloogilistes protsessides, sealhulgas vananemises, põletikus, vigastustes ja mitmete nahahaiguste, nagu psoriaas ja vitiligo, patogenees [42]. Huvitaval kombel on näidatud, et Salvia haenkei ekstrakt vähendab ROS-i taset põhitingimustes, oksüdatiivse stressi tingimustes ja UVB-kiirgusest põhjustatud stressitingimustes, mis näitab potentsiaalset kaitsvat toimet ROS-i vahendatud muutuste vastu [22].

Salvia hankie varem täheldatud vananemisvastase toime toetuseks tõestasime selles töös SH ekstrakti võimet vähendada UVB-kiirguse poolt stimuleeritud keratinotsüütide vananemist. Tulemused näitavad, et SH on võimeline vähendama p21 ja p27 vananemismarkerite geeniekspressiooni, mida stimuleerib UVB-kiirgus. Huvitaval kombel näitab SH-ekstrakt paljutõotavat aktiivsust põletikulise reaktsiooni vähendamisel, mida soodustab rakkude fotokahjustus, vähendades interleukiinide transkriptsiooni. Lisaks oleme intrigeerivalt näidanud, et Salvia haenkei ekstrakt indutseeris Sirtuinli valgu ekspressiooni mitte ainult pärast stressi, vaid ka põhitingimustes, näidates paljulubavat aktiivsust vananemisprotsesside aeglustamisel. Sirtuiinide perekond ja eriti SIRT1 on näidanud oma rolli vananemises ja pildistamises, eriti MMP-de pärssimise ja sellele järgneva kollageeni lagunemise kaudu; mitmed uuringud rõhutasid selle kaitsvat rolli UVB-vahendatud fotovananemises. On näidatud, et looduslikud ühendid nagu jugloon (5-hüdroksü-1,4-naftalendioon) taastavad SIRT1 normaalse taseme pärast UVB-ravi, mis viitab sellele, et SIRTI võib mängida rolli UVB-indutseeritud kantserogeneesi ennetamisel. [29]. Meie tulemused näitavad ka sirtuiinide võimalikku kaasamist UVB-stressijärgsesse paranemisprotsessi ja nende rolli epidermise homöostaasi säilitamisel.

Tavalistel põletikulistel nahahaigustel, nagu atoopiline dermatiit ja psoriaas, samuti vananemisprotsessid, on barjäärifunktsiooni langus ning epidermise rakkude reaktsioon barjääri katkemisele võib selliseid seisundeid süvendada, säilitada või isegi esile kutsuda. Selle töö tulemused näitasid SH tugevat võimet taastada naha barjääri terviklikkus, moduleerides mitmeid nendes protsessides osalevaid valke. Eelkõige täheldati okludiini ja filaggriini transkriptsiooni stimuleerimist, mis näitas tugevdavat toimet rakkudevahelistele adhesioonidele. Pärilik ja omandatud filagriini puudulikkus mõjutab epidermise barjääri, muutes selle korraldust

tsütoskeleti keratiinfilamentid ja naha korniseeritud ümbrise struktuur [43]. Lisaks põhjustavad FLG ekspressiooni defektid keratohüaliini graanulite arvu vähenemist, loodusliku niisutusfaktori (NMF) kontsentratsiooni märkimisväärset langust ja naha pH leelistamist [44]. Lisaks on vananemisprotsesside osas hästi kirjeldatud muutusi klaudiinides ja okludiinivalkudes, mis kuuluvad TJ-de (Tight junctions) valkude hulka. TJ-d vastutavad epiteelirakkude vahelise rakkudevahelise ruumi sulgemise eest, moodustades funktsionaalse barjääri ning osalevad rakkude proliferatsioonis ja diferentseerumises [45]. On näidatud, et Salvia haenkei ekstrakt parandab filaggriini ekspressiooni ja säilitab okludiini lokalisatsiooni rakumembraanidel, mida UVB-kiirgus kahjustab. SH-ekstrakti täiendav aktiivsus terve naha säilitamisel on tõendatud selle võimega vähendada UVB-kiirguse poolt stimuleeritud maatriksi metalloproteinaaside 2 (MMP-2) transkriptsiooni. MMP-de ülesreguleerimine soodustab vananemist ja nahapatoloogiaid, lagundades kollageeni ja elastiini, põhjustades rakuvälise maatriksi (ECM) kahjustusi [33, 38], seega on nende proteinaaside vähendamine naha vananemise kontekstis kasulik.

Selles uuringus täheldatud SH-ravi positiivset mõju kõige levinumatele naha molekulaarsetele parameetritele kinnitas ka hiljutine kliiniline uuring, mis viidi läbi viiekümnest 45–60-aastasest kaukaasia naisest koosnevas rühmas [46]. Salvia hankie on manustatud kreemi kujul ja mitmeid parameetreid, nagu naha punetus ja elastsus, kortsude sügavus ja antioksüdantide potentsiaal, hinnati nii kliiniliste kui instrumentaalsete hinnangute ning katsealuste enesehinnanguga. Selle uuringu tulemused näitavad SH efektiivsust naha languse leevendamisel, kui seda kasutatakse igapäevaselt mõõduka naha vananemise kontekstis. Tegelikult muutus naiste nahk pärast 84-päevast pealekandmist elastsemaks ja sellel oli vähem punaseid alasid ja madalamaid kortse. Lisaks näitab uuring naha antioksüdantide võime järkjärgulist suurenemist pärast igapäevast kreemi kasutamist [46].

Keha kaitsva varjualusena väliskeskkonna eest on nahk pidevalt avatud võimalikele vigastustele ja seega on haavade paranemine kõigi organismide ellujäämiseks hädavajalik protsess. Arvestades SH tõestatud võimet säilitada terve ja puhas nahk, eeldasime, et see ekstrakt võib aidata kaasa ka naha taastumisele, olles kasulik nahakahjustuste parandamisel. Seega kaaluti lõpuks SH aktiivsust keratinotsüütide migratsioonil, mis on vigastuste järgse nahabarjääri taastamise peamine samm. SH-ekstraktiga töötlemine näitas huvitavat tegevust, mis suudab suurendada HaCaT migratsiooni kiirust, näidates tugevat mõju epiteelikahjustuse taastamisele pärast kahjustusi. Kuna migratsioon on haavade paranemise protsessis kriitiline element, näitavad meie andmed, võttes arvesse ka ekstrakti mittehüperproliferatiivset aktiivsust, SH-ekstraktide potentsiaalset toimet nahabarjääri vigastuse kiiremale neutraliseerimisele, vähendades sellega haigestumise riski. infektsioonid.

Meie andmed näitavad, et Salvia haenkei ekstrakt on kasulik ühend, mis aitab kaasa barjääri taastamisele või epidermise stressireaktsiooni summutamisele. Samaaegselt hiljutise inimestega tehtud uuringuga annab see töö täiendava ülevaate mehhanismidest, mis on seotud ekstrakti positiivse mõjuga naha vananemisele.

See töö, mis toetab eelmisi töid [18, 46], tuvastab omapärasemal viisil molekulaarse mehhanismi, mis on seotud Salvia neeli efektiivsusega naha parameetrite moduleerimisel, rõhutades Salvia neeli olulisust ahvatleva vananemisvastase ainena. ja vananemisega seotud nahahaigused.

MATERJALID JA MEETODID Rakukultuur ja UVB kiiritamine

HaCaT rakke (inimese spontaanselt immortaliseeritud keratinotsüüdid) kasvatati kõrge glükoosisisaldusega Dulbecco modifitseeritud Eagle söötmes (DMEM), millele oli lisatud 10 protsenti veise loote seerumit (Life-Technologies, Waltham, MA, USA), 2 mM glutamiini, 100 U/ml 100 penitsilliini. ug/ml streptomütsiin (Lonza, Basilea, Šveits). Rakke hoiti niisutatud atmosfääris 5% CO2 õhus ja inkubeeriti 37 kraadi juures.

Katseprotokolli nõudmisel eksponeeriti rakke 30 KJ/m² UVB-kiirgusele, mida varustas Philipsi meditsiiniline kitsaribaline UVB PL-S lamp. Valguse neeldumise vältimiseks koekultuuri söötmes eemaldati see enne kiiritamist ja asendati kiiritusprotokolli järgides DMEM FBS-iga ja punase fenoolivabaga [47]. Pärast UVB kiiritamist toideti rakke värske kasvusöötmega või kasutati protokolli järgivates katsetes.

Rakkude elujõulisuse – trüpaansinise välistamise test 35 x 10³ rakku kanti 12 süvendiga plaatidele ja pärast üleöö inkubeerimist eksponeeriti neid vastavalt katseprotokollidele Salvia haenkei hüdroetanooli ekstrakti erinevates kontsentratsioonides. Ekstrakti pakkus lahkelt IBSA Farmaceutici Italia (Lodi, Itaalia) ja selle markerrosmariinhappe sisaldus on HPLC järgi 0,6 massiprotsenti. Pärast töötlemist rakud pesti, eraldati 0,25% trüpsiini-0,2% EDTA-ga ja suspendeeriti trüpaansinises (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) vahekorras l:I keskmises lahuses. Rakud loendati kamber Burkeri hemotsütomeetriga.

ROS fluorestsentsanalüüs

ROS-i kvantifitseerimiseks kasutati 2',7'-diklorofluorestseiindiatsetaati (Hz-DCF-DA, Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA), nagu eelnevalt kirjeldatud [48]. Lühidalt, rakud (5x10') külvati 96-süvendiplaatidele, lasti üleöö kleepuda ja seejärel eksponeeriti SH ekstraktiga 3 või 24 tundi. Positiivse kontrollina kasutati N-atsetüültsüsteiini 5 mM (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA).

Oksüdatiivse stressi korral mõõdeti ROS-i taset pärast 50 μM Hz-DCF-DA lisamist H2Oz puudumisel või juuresolekul [48]. DCF fluorestsentsi intensiivsust mõõdeti ergastuse 485 nm – emissiooni 535 nm juures, kasutades Multilabel Plate Reader VICTOR X3 (PerkinElmer, Waltham, MA, USA).

ROS taseme hindamiseks UVB stressitingimustes muudeti protokolli veidi, inkubeerides rakke SH-ga töötlemisel - 50 μM Hz-DCF-DA lahuses PBS-is. Pärast 25-minutilist inkubeerimist 37 kraadi juures eksponeeriti plaat UVB-kiirgusega ja DCF fluorestsentsi intensiivsus mõõdeti kohe ergastuse 485 nm juures – emissioon 535 nm, kasutades Multilabel Plate Reader VICTOR X3 (PerkinElmer, Waltham, MA, USA).

Immunofluorestsentsmikroskoopia

10x104 rakku külvati klaaskatteklaasidele, mis olid eelnevalt kollageeniga kaetud 24-süvendiplaatidele, lasti üleöö kinnituda ja töödeldi vastavalt protokollile SH ekstraktiga. Kateniini ja okludiini valkude tuvastamiseks eksponeeriti rakud UVB-kiirgusele, nagu on kirjeldatud ülaltoodud protokollis. Pärast kiiritamist toideti rakke värske kasvusöötmega või kasutati katseteks vastavalt protokollile. Immunofluorestsentsanalüüsi jaoks pesti rakke 4 tundi pärast UVB kiiritamist, fikseeriti 4% formaldehüüdiga, permeabiliseeriti 0,1% Triton X-100 lahusega PBS-is ja värviti 1 tund 37 kraadi juures erinevate valkude spetsiifiliste antikehadega: hiire monoklonaalne anti-okludiin (Invitrogen Life Technologies, Waltham, MA, USA), hiire anti-filaggrin (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA). Pärast PBS-i pesemist inkubeeriti rakke sekundaarsete antikehade/fluorestseiini isotiotsüanaadiga (Alexa Fluor 488 hiirevastane või Alexa Fluor 536 küülikuvastane immunoglobuliin G, Molecular Probes, Invitrogen Life Technologies, Waltham, MA, USA) ja 1 tund falloidiga toatemperatuuril. Pärast 10-minutilist töötlemist RNaasiga paigaldati katteklaasid slaididele, kasutades Mowioli 40-88 (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) ja lisati propiidiumjodiidi. Pildid saadi konfokaalse mikroskoobi LSM 800, suurendusega 60X, tarkvara ZN 2.1 blue Edition (Carl Zeiss, Jena, Saksamaa) abil ja kvantifitseeriti ImageJ tarkvara abil.

Statistiline analüüs

Statistiline analüüs viidi läbi GraphPad Prism versiooniga 7.02 Windowsi jaoks (GraphPad Software, San Diego, CA, USA). Kui pole öeldud teisiti, esitatakse tulemused keskmisena pluss SEM. Kasutati Studenti t-testi ja p väärtusi<0.05 were="" considered="" statistically="">

Lühendid

AJ:adherens ristmik; ECM: ekstratsellulaarne maatriks; FLG: filagriin; Hz-DCF-DA: 2',7'-diklorofluorestseiindiatsetaat; H2Oz: vesinikperoksiid; MMP: maatriksi metalloproteinaas; NAC: N-atsetüültsüsteiin; NMF: tegur; ROS: reaktiivne hapnikuga looduslik niisutav

liigid; SIRTl: Sirtuinl; SH: Salvia salve; TJ: tihe ristmik; UVB: ultraviolettkiirgus B.

See artikkel on välja võetud saidilt www.aging-us.com