Ensümaatiline hüdrolüüs töötati välja vastavate toidukvaliteediga kaubanduslike ensüümide jaoks

Palun võtke ühendustoscar.xiao@wecistanche.comrohkem informatsiooni

2.2. Ultrafiltratsiooni mõju kollageeni hüdrolüsaadi omadustele

Ultrafiltreerimisprotsess võib olla kasulik, tööstuslikult soodne meetod soovitud molekuli suuruse ja kõrge bioaktiivsusega väikeste peptiidifraktsioonide tootmiseks, olenevalt lähtehüdrolüsaadi koostisest ja uuritavast aktiivsusest [19]. Näidatud on lahustuvus, vabade aminorühmade sisaldus ja CH-de saagis pärast lüofiliseerimist (tabel 1). Kontrolli lahustuvus ja vabade aminorühmade sisaldus olid vastavalt 11,95 protsenti ja 0,79 protsenti. Pärast ensümaatilist hüdrolüüsi ja ultrafiltreerimist 3 kDa molekulmassi piirväärtusega täheldati CH-alkalaasil suurimat lahustuvust (21,17 protsenti) ja vabade aminorühmade sisaldust (14,17 protsenti).<3 kda.="" however,=""><3 kda="" was="" the="" lowest="" yield="" (12.42%)observed.="" therefore,="" although="" ultrafiltration="" is="" useful="" in="" separating="" chs="" with="" a="" low="" molecular="" weight="" it="" may="" cause="" a="" reduction="" in="">

Valguhüdrolüsaatide keskmine molekulmass on oluline tegur, mis määrab nende bioloogilised omadused [19]. Üldiselt MW-ga keskmine murdosa<3 kda="" represents="" a="" collagen="" hydrolysate;="" an="" average="" fraction="" with="" mw="">50 kDa represents gelatin, and an average fraction with MW>300 kDa tähistab kollageeni [20,21]. Kontrolli (eeltöötlusproovi), CH-Alcalase ja CH-Alcalase suhteline molekulmassi jaotus<3 kda="" is="" depicted="" in="" figure="" 4.="" the="" molecular="" weight="" distribution="" was="" over="" 20,100="" da="" for="" the="" control,="" which="" did="" not="" include="" the="" collagen="" hydrolysate=""><3 kda).="" this="" could="" not="" be="" numerically="" provided="" in="" this="" study,="" as="" the="" detection="" limit="" of="" the="" index="" detector="" system="" only="" ranged="" from="" 106="" to="" 20,100="" da.="" however,="" ch-alcalase="" showed="" detectable="" values="" in="" a="" higher="" range="" of="" relative="" molecular="" weight="" distribution,="" which="" ranged="" from="" 20,100="" da="" to="" 4270="" da="" (maximum="" peak:12,600="" da).="" in=""><3 kda,="" the="" molecular="" weight="" distribution="" mainly="" showed="" three="" peaks:="" one="" with="" an="" mw="" of="" approximately="" 4270="" da="" (maximum="" peak),="" one="" with="" an="" mw="" of="" approximately="" 424="" da,="" and="" one="" with="" an="" mw="" of="" approximately="" 222="" da="" and="" 102="" da.="" ultrafiltration="" is="" an="" effective="" purification="" method="" used="" to="" obtain="" low="" molecular="" weight="" peptides="" from="" crude="" hydrolysates.="" results="" indicated="" that="" enzymatic="" hydrolysis="" by="" alcalase="" clearly="" reduced="" the="" high="" mw="" of="" the="" control="" (either="" collagen="" or="" gelatin),="" and="" that="" ultrafiltration="" was="" an="" effective="" purification="" method="" that="" can="" be="" used="" to="" obtain="" low="" molecular="" weight=""><3 kda)="" from="" crude="" collagen="" hydrolysates.="" reportedly,="" low="" molecular="" weight="" peptides="" (2-20="" amino="" acids)="" are="" more="" biologically="" active="" compared="" to="" their="" parent="" polypeptide/proteins,="" which="" are="" larger="">

Lisateabe saamiseks klõpsake siin

CH-de aminohapete koostis on näidatud (tabel 2). Erinevate proteaaside CHS-il oli erinev aminohappeline koostis ja antioksüdantsed omadused [23]. Kollageeni aminohappeline koostis oli rikas glütsiini (Gly), proliini (Pro) ja glutamiinhappe (Glu) poolest. CH-de aminohapete sisaldus (CH-Alcalase ja CH-Alcalase<3 kda)="" increased="" more="" than="" that="" of="" the="" control,="" following="" enzymatic="" hydrolysis="" with="" or="" without="" ultrafiltration.="" in="" particular,="" the="" content="" of="" gly,="" pro,="" and="" glu="" was="" much="" higher="" in=""><3 kda(gly="" 218="" mg/g,="" pro="" 152="" mg/g,="" and="" glu="" 120="" mg/g)="" than="" ch-alcalase(gly149="" mg/g,="" pro="" 95="" mg/g,="" and="" glu78="" mg/g).="" an="" increase="" in="" the="" content="" of="" these="" amino="" acids="" is="" strongly="" related="" to="" enhanced="" antioxidant="" capabilities="" [16,20].="" gly="" and="" pro="" contain="" hydrophobic="" amino="" acid="" groups,="" and="" glu="" contains="" negatively="" charged="" amino="" acid="" groups.="">cistanche varsOn teatatud, et need aminohapped suurendavad antioksüdantset aktiivsust nende suurenenud lahustuvuse tõttu lipiidides või vabade radikaalide reaktsioonide kaudu [1, 24].

2.3. Kollageeni hüdrolüsaatide antioksüdant ja vananemisvastane toime

CH-de antioksüdantset aktiivsust mõõdeti 2,2'- ja bis-(3-etüülbensotiasoliin-6-sulfoonhappe) (ABTS) radikaali püüdva aktiivsuse testi ja redutseeriva võimsuse testiga. Kontrolli (kollageeni suspensiooni), CH-alkalaasi ja CH-alkalaasi ABTS-i radikaale püüdev aktiivsus<3 kda="" at="" different="" concentrations="" is="" shown="" (figure="" 5a).abts="" radical="" scavenging="" activity="" of="" peptides="" assay="" is="" important="" to="" exclusively="" measure="" the="" ability="" of="" an="" antioxidant="" peptide="" to="" induce="" a="" hydrogen="" atom="" transfer="" [25].="" abts="" radical-scavenging="" effects="" of="" all="" treatments="" increased="" in="" a="" concentration-dependent="" manner=""><0.05). ch-alcalase="" and=""><3 kda="" showed="" much="" higher="" abts="" radical-scavenging="" activity="" values,="" with="" 41.4%-88.2%="" compared="" to="" the=""><8.5%. both="" ch-alcalase="" and=""><3 kda="" had="" high="" abtsradical-scavenging="" abilities="" of="" ~60%="" when="" concentrations="" were="" greater="" than="" 2.5="" mg/ml.=""><3 kda="" showed="" a="" significantly="" higher="" abts="" radical-scavenging="" activity="" value="" than="" ch-alcalase.="">cistanche salsa ekstraktÜldiselt võivad peptiidide antioksüdantset aktiivsust mõjutada nende aminohappejärjestused, vabade aminohapete arv, hüdrolüüsi aste ja peptiidide molekulmass [26,27]. Eelkõige olid madala molekulmassiga hüdrolüsaatidel tugevamad antioksüdantsed omadused võrreldes suure molekulmassiga hüdrolüsaatidega [2, 26].

Joonis 5. Kollageeni hüdrolüsaatide (CH) antioksüdantne aktiivsus 2,2'- ja bis-(3-etüülbensotiasoliin-6-sulfoonhappes) (ABTS) radikaalide püüdmine (A) ja redutseerimisvõime (B) analüüsid. Erinevate tähtedega (ac) tähistatud andmed näitavad statistiliselt olulisi erinevusi sõltuvalt erinevatest raviviisidest (lk<0.05).>cistanche tubulosa eelised ja kõrvaltoimedErinevate tähtedega (AD) tähistatud andmed näitavad statistiliselt olulisi erinevusi sõltuvalt kontsentratsioonist (p < 0,05).

Cistanche on vananemisvastane toime

Juhtseadme CH-Alcalase ja CH-Alcalase redutseerivad võimsused<3 kda="" are="" shown="" (figure="" 5b).="" the="" reducing="" power="" of="" peptides="" may="" also="" serve="" as="" a="" significant="" indicator="" of="" their="" antioxidant="" potential="" [28,29].="" the="" reducing="" power="" of="" chs="" ranged="" from="" 0.074="" to="" 0.424="" in="" a="" dose-dependent="" manner=""><0.05). the="" control="" group="" had="" the="" lowest="" reducing="" power,="" which="" did="" not="" change="" significantly="" with="" increasing="" concentrations="" of="" the="" control.="" in="" contrast="" to="" abts="" radical-scavenging="" activity,="" the="" reducing="" power="" of="" ch-alcalase="" was="" higher="" than="" that="" of=""><3 kda.="">cistanche tubulosa ekstraktSarnased tähelepanekud näitasid, et kollageeni toorhüdrolüsaat võib võimsust vähendada tõhusamalt kui ultrafiltreeritud kollageenpeptiidid [30].

Nende in vitro vananemisvastase toime kontrollimiseks kasutati türosinaasi, kollagenaasi ja elastaasi aktiivsuse inhibeerimist [20]. Kontrollrühma CH-Alcalase ja CH-Alcalase türosinaasi, kollagenaasi ja elastaasi aktiivsuse inhibeerimise tulemused<3 kda="" are="" summarized="" (table="" 3).="" tyrosinase,="" collagenase,="" and="" elastase="" inhibitors="" have="" been="" used="" as="" important="" ingredients="" of="" cosmetics="" for="" skin="" whitening,="" anti-aging,="" and="" anti-wrinkling,="" respectively.="" collagenase="" and="" elastase,="" especially,="" are="" known="" to="" be="" major="" enzymes="" responsible="" for="" dehydration="" and="" wrinkle="" formation="" on="" the="" skin="" surface[31].="" the="" results="" indicated="" that="" the="" tyrosinase="" inhibition="" effect="" of="" vitamin="" c(95.50%,1="" mg/ml,="" positive="" control)="" was="" higher="" than="" that="" of="" the="" other="" treatments(table="" 4).="" tyrosinase="" inhibition="" effects="" of="" control,="" ch-alcalase,="" and=""><3 kda="" groups="" were="" 28.21%,="" 15.44%,="" and="" 30.20%,="" respectively.="" thus,="" the="" chs="" did="" not="" show="" a="" better="" skin="" whitening="" effect="" compared="" to="" the="" control.="" collagenase="" inhibition="" by="" the="" control,="" ch-alcalase,="" and=""><3 kda="" groups="" were="" 6.45%,54.37%,="" and="" 61.90%,="" respectively.="" in="" addition,="" ch-alcalase="" and=""><3 kda="" inhibition="" of="" collagenase="" corresponded="" to="" that="" of="" vitamin="" cat="" 1="" mg/ml.="" thus,="" chs="" obtained="" from="" this="" study="" may="" be="" effective="" collagenase="" inhibitors="" that="" may="" possibly="" play="" an="" important="" role="" in="" anti-aging="" activities.="" however,="" all="" collagen="" samples="" did="" not="" display="" elastase="" inhibition="" effects,="" which="" may="" result="" from="" a="" lack="" of="" skin="" elasticity.="" overall,="" vitamin="" c(1="" mg/ml)="" inhibited="" various="" activities="" of="" the="" enzymes="" in="" the="" following="" order:="" tyrosinase(95.50%)="">collagenase(48.09)> elastase(2/.00%o).CH-Alcalase(5 mg/mL)inhibited various activities of the enzymes in the following order: collagenase (54.37%)> tyrosinase (15.44%)>elastaas (aktiivsus puudub). CH-Alcalase<3 kda="" (5="" mg/ml)="" inhibited="" these="" activities="" in="" the="" following="" order:="" collagenase="" (61.90%)="">tyrosinase (30.20%)>elastaas (aktiivsus puudub). Teises uuringus kirjeldatud sarnased suundumused näitasid, et kollageeni hüdrolüsaadid võivad toimida vananemisvastaste ainete ja kollagenaasi inhibiitoritena [20].

3. Materjalid ja meetodid

3.1. Sigade naha eeltöötlus

Seanahk osteti kohalikult tarnijalt (Soul, Korea) ning kõik nähtavad sea naha rasv- ja sidekoed eemaldati žiletitera abil. Selles uuringus kasutatud seanahk saadi ühelt sealt, et minimeerida bioloogilist varieerumist. Kärbitud sea nahka pesti 90-kraadises vees 1 minuti jooksul neli korda, et eemaldada rasv ja jääkained. Seejärel lõigati nahk 1 cm suurusteks ruutudeks ja pulbristati destilleeritud vees 3 minutit, kasutades nelja tiivaga segistit (CNHR-26, Bosch, Hongkong, Hiina). Pulbriseeritud seanahk homogeniseeriti suurel kiirusel (25, 000 pööret minutis) 5 minutit, kasutades Ultra Turraxi (T25, IKA Labotechnik, Staufen, Saksamaa). Ligikaudu 100 g seanaha segu (lõplik tahke aine sisaldus 50%) pakendati vaakumpakendisse ja külmutati -20 kraadini ning säilitati kasutamiseks 1 kuu jooksul.

3.2. Kaubanduslikud proteaasid ja reaktiivid

Alcalase, Flavorzyme, Neutrase ja Protamex osteti ettevõttelt Novozymes (Bagsvaerd, Taani). Bromelain ja papain osteti firmalt Daesong Sangsa (Soul, Korea). Kõik antioksüdantide ja vananemisvastaste testide kemikaalid osteti ettevõttest Sigma-Aldrich Chemical Company (St. Louis, MS, USA). Kõik teised selles uuringus kasutatud reaktiivid ja lahustid olid analüütilise kvaliteediga.

3.3. Ensüümi hüdrolüüs

Ensümaatiline hüdrolüüs töötati välja vastavate kasutatud toidukvaliteediga kaubanduslike ensüümide jaoks (tootja soovituste alusel; tabel 4). Valmistatud seanaha segu lahjendati destilleeritud veega kuni tahke aine lõpliku sisalduseni 5 protsenti. See kontsentratsioon valiti voolavuse tagamiseks selle madala viskoossuse tõttu. 5-protsendilist seanaha segu nimetati kollageenisuspensiooniks (või kontrolliks). Kollageeni suspensioon hüdrolüüsiti reaktorites, kasutades kuut toidukvaliteediga kaubanduslikku ensüümi ensüümi ja substraadi suhtega 1:100. Proovi alikvoodid (5 ml) võeti hüdrolüüsi 1, 3, 6, 12 ja 24 h järel ja kuumutati kohe 100 kraadi juures 10 minutit, et ensüüm inaktiveerida, millele järgnes jahutamine 0 kraadini jääveega. Proovide võtmise ajal kontrolliti pH-d, kasutades vastavalt vajadusele 1 M NaOH. Pärast jahutamist tsentrifuugiti proove 4000 x g juures 15 minutit ja supernatant (kollageeni hüdrolüsaat; CH) koguti. CH kontsentreeriti täiendavalt ultrafiltrimise teel, kasutades AmiconStirred Cells süsteemi (katalooginumber UFSC 20001, EMD Millipore Corporation, Burlington, MA, USA) 3 kDa molekulmassi piirväärtusega (MWCO) (UltracelMembrane, EMD Millipore Corporation, Burlington, MA, USA) 60 psi gaasilise lämmastiku juures 20 kraadi juures.cistanche tubulosa ülevaatedValmistatud CH külmkuivatati ja hoiti kuni analüüsimiseni õhukindlates anumates 20 kraadi juures.

3.4. PH, valgu saagise, lahustuvusvaba aminorühma sisalduse ja tootmissaagise määramine Proovide (kontroll ja CHs) pH määrati pH-meetriga (mudel S220, Mettler Toledo GmbH, Columbus, OH, USA). Valgu taastumine või lahustuvus määrati valgusisalduse hindamisega, kasutades bitsinhoniinhappe (BCA) valguanalüüsi vastavalt tootja juhistele (Sigma-Aldrich, St. Louis, MS, USA), kasutades standardina seerumi albumiini. Vaba aminorühma sisaldus määrati 2,4,6-trinitrobenseensulfoonhappe (TNBSA) testiga vastavalt tootja juhistele (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA), kasutades standardina L-leutsiini. Tootmisvälja arvutamiseks mõõdeti nii märg- kui ka kuivmassi.

3.5. Molekulmassi jaotus

3.5.1. Naatriumdodetsüülsulfaat-polüakrüülamiidi geelelektroforees (SDS-PAGE)

Proovide (kontroll ja CH) SDS-PAGE mustreid mõõdeti vastavalt eelnevalt teatatud meetodile [10]. Proove lahjendati 8 M uureaga (valgu lõppkontsentratsioon, 4 mg/ml). Iga proov segati ühe osa KTG 020 proovipuhvriga (10 protsenti glütserooli, 2 protsenti SDS-i, 0,003 protsenti bromofenoolsinist, 5 protsenti merkaptoetanooli ja 63 mM Tris-HCl, pH 6,8) firmalt KOMA Biotech Inc. ., (Soul, Korea) ja keedeti 2 minutit. Proovisegu (20 μL) laaditi EzWayTM PAG 6% akrüülamiidgeelidesse (KOMA Biotech Inc., Seoul, Korea). Pärast elektroforeesi geel fikseeriti, värviti ja värvist eemaldati. Molekulmassid määrati laiaulatuslike molekulmassistandardite abil vahemikus 10 kuni 210 kDa.

3.5.2. Geelkromatograafia (GPC)

Proovide molekulmassi jaotus määrati eelnevalt kirjeldatud meetodil [3]. Geelkromatograafia (GPC) viidi läbi YL9100 kõrgsurvevedelikkromatograafia (HPLC) süsteemiga (YL9100, Youngling Instrument Co., Ltd, Gyeonggi-do, Korea), mis oli varustatud kolme Ultrahydrogel TM 120 kolonniga ( 7,8 × 3000 mm) Watersist (Milford, MA, USA). Liikuv faas oli destilleeritud/deioniseeritud vesi voolukiirusel 1,0 ml/min ja kollageenpeptiidide molekulmassi jaotust jälgiti YL 9100 murdumisnäitaja detektoriga 40 kraadi juures. Standardina kasutati molekulmassi standardite komplekti (106-67,500 Da, Polymer Standards Service, Mainz, Saksamaa).

3.6.Amiin0 Happeline koostis

Proovide aminohappelist koostist analüüsiti derivatiseerimise teel {{0}}fluorenüületoksükarbonüül- (FMOC)-kloriidi ja o-ftaaldialdehüüdiga (OPA) Ultimate 3000 HPLC süsteemis ( Dionex, Idstein, Saksamaa), mis on varustatud kahe detektoriga (fluorestsentsdetektor ja UV-detektor) ning VDSpher 100 C18-E (4,6 mm × 150 mm, osakeste suurus 3,5 μm, VDS Optilab, Berliin, Saksamaa). Süstimismaht oli 1,0 l ja liikuv faas koosnes kahest eluendist: 40 mM kahealuselisest naatriumfosfaadist (pH 7) ja 45% (o/v) atsetonitriili/45% (maht/maht) metanooli lahusest. UV-detektori ja fluorestsentsdetektori ühendamisel tuvastati ultraviolettkiired lainepikkusel 338 nm, OPA derivaat 450 nm emissioonilainepikkusel ja 340 nm ergastuslainepikkusel, FMOC derivaat 305 nm ja 26 emissioonilainepikkusel. nm ergastuse lainepikkust. Kalibreerimiseks kasutati aminohapete segu (1,0 nmol ml-I iga aminohappe kohta).

kus atotalaminohappe sisaldus oli pärast hüdrolüüsi 6 M HCl-ga (130 kraadi juures 24 tundi) ja vaba aminohappe sisaldus pärast destilleeritud vees lahustamist.

3.7. Antioksüdantide aktiivsuse hindamine

3.7.1.2,2'-asino-bis-(3-etüülbensotiasoliin-6-sulfoonhape) (ABTS) radikaali eemaldav aktiivsus

CH ABTS-i radikaale püüdvat aktiivsust mõõdeti eelnevalt teatatud meetodil [20]. ABTSradikaali katioon genereeriti ABTS põhilahuse (70 mM) segamisel kaaliumpersulfaadiga (2,45 mM) ja saadud segu inkubeerimisel pimedas toatemperatuuril üleöö. ABTS-i radikaali lahus lahjendati 50 mM fosfaatpuhverdatud soolalahuses (pH 7,4) neeldumistasemeni 0,70±0,02 734 nm juures. Üks ml lahjendatud ABTS-i radikaali lahust segati 1 ml iga prooviga. Kümme minutit hiljem mõõdeti proovi (A proov koos prooviga) ja kontrolli (A kontroll ilma proovita) neeldumised lainepikkusel 734 nm. ABTS-i radikaalide püüdmise aktiivsus (protsent) arvutati järgmiselt:

3.7.2.Vähendusvõimsus

CH redutseerimisvõimet mõõdeti eelnevalt kirjeldatud meetodil [20]. Üks ml igast proovist segati 1 ml 0,2 M fosfaatpuhvriga (pH 6,6) ja 1 ml 1% kaaliumferritsüaniidiga. Segu inkubeeriti temperatuuril 5{16}} 20 minutit ja seejärel lisati 1 ml 10% trikloroäädikhapet. 2 ml alikvoot sellest inkubeerimissegust segati 2 ml destilleeritud vee ja 0,4 ml 0,1 protsendilise raudkloriidiga. 10 minuti pärast mõõdeti saadud lahuse neeldumist 700 nm juures spektrofotomeetril (OPTIZEN, Mecasys Co., Daejeon, Korea).

3.8. Vananemisvastase toime hindamine

3.8.1. Türosinaasi aktiivsuse inhibeerimine

Türosinaasi inhibeerimine määrati eelnevalt kirjeldatud meetodiga [20]. Eelsegu lahus, mis sisaldab 70 μL 0,1 M fosfaatpuhvrit (pH 6,8), 30 ul seente türosinaasi (167 U/mL); Sigma-Aldrich, USA) ja 20 liitrit proovi inkubeeriti 5 minutit 30 kraadi juures. Seejärel lisati ensümaatilise reaktsiooni käivitamiseks ligikaudu 100 µl 34-dihüdroksüfenüül-L-alaniini (L-DOPA). L-DOPA moodustumise jälgimiseks mõõdeti neeldumist 492 nm juures 20 minutit. Askorbiinhape (1 mg/ml) toimis positiivse kontrollina, mida kasutati võrdluseks. Inhibeerimissuhe arvutati järgmiselt:

kus A oli segu türosinaasiga ilma proovita; B oli segu ilma proovi ja türosinaasita; C oli segu proovi ja türosinaasiga ning D oli segu prooviga, kuid ilma türosinaasita.

3.8.2. Kollagenaasi aktiivsuse inhibeerimine

Kollagenaasi inhibeerimine määrati eelnevalt kirjeldatud meetodiga [20]. Lühidalt, valmistati 50 mM tritsiinipuhver (pH 7,5), mis sisaldas 10 mM kaltsiumkloriidi ja 400 mM naatriumkloriidi. Seejärel 50 ml 1,0 mM N-[3-(2-furüül)akrüloüül]-Leu-Gly-Pro-Ala lahust ja 0,2 mg/ml kollagenaasi (Clostridium histolyticum, tüüp IA, 0. {19}} FALGPA U/mg tahket ainet; Sigma-Aldrich, USA) lisati proovide juuresolekul ja puudumisel. Reaktsioon peatati sidrunhappe (6 protsenti) lisamisega. Reaktsioonisegu eraldati etüülatsetaadi lisamisega. Supernatandi neeldumist mõõdeti 345 nm juures. Positiivse kontrollina kasutati askorbiinhapet (1 mg/ml) ja seda kasutati võrdluseks. Inhibeerimise protsent arvutati järgmiselt:

kus A oli segu kollagenaasiga ilma proovita; B oli segu ilma proovi ja kollagenaasita; C oli segu proovi ja kollagenaasiga ning D oli segu prooviga, kuid ilma kollagenaasita.

3.8.3.Elastaasi aktiivsuse pärssimine

Elastaasi inhibeerimine määrati eelnevalt kirjeldatud meetodiga [20]. Substraadina toimis N-suktsinüül-Ala-Ala-Ala-p-nitroaniliid (Suc-Ala-Ala-Ala-pNA) ja p-nitroaniliini vabanemist jälgiti 2{{20}} min 25 kraadi juures. Osa (1 ug) IV tüüpi sea pankrease elastaasi (PPE) lahustati 1 ml 0,2 M Tris-HCl puhvris (pH 8.{27}}). reaktsioonisegu sisaldas 0,2 M Tris-HCl puhvrit (pH 8,0), 1 ppm PPE-d, 0,8 mM Suc-Ala-Ala-Ala-pNA-d, proovi ja ülalmainitud substraati. Mõõdeti neeldumine 214 nm juures. Võrdluseks kasutatud positiivse kontrollina kasutati askorbiinhapet (1 mg/ml). Inhibeerimissuhe arvutati järgmiselt:

kus A oli segu elastaasiga ja ilma proovita; B oli segu ilma proovi ja elastaasita; C oli segu proovi ja elastaasiga ning D oli segu prooviga, kuid ilma elastaasita.

3.9.Statistiline analüüs

Andmed on esitatud kui keskmine ± standardhälve (SD). Rühmadevaheliste erinevuste olulisust hinnati mitme võrdluse ja dispersioonanalüüsi (ANOVA) abil, millele järgnes Tukey ausa olulise erinevuse (HSD) test. Erinevusi p väärtustega alla 0,05 peeti statistiliselt olulisteks.

4. Järeldused

Selles uuringus toodeti ensümaatilise hüdrolüüsi abil edukalt kollageeni hüdrolüsaate, funktsionaalset toidu koostisosa, millele järgnes ultrafiltreerimine ja puhastamine. Testiti mitmesuguseid kaubanduslikke proteaase nende potentsiaalse kasulikkuse osas õigete kollageeni hüdrolüsaatide valmistamisel. Alcalase poolt hüdrolüüsitud CHS oli kõige tõhusamalt hüdrolüüsitud CH-d ja ultrafiltreerimine, millele järgnes puhastamine, oli efektiivne madala molekulmassiga aktiivsete peptiidide genereerimiseks. Tulemused näitasid, et CH-del oli suurepärane antioksüdant ja kollagenaasi inhibeeriv toime. Seetõttu võib selle uuringuga saadud CH-sid kasutada toidu-, kosmeetika- või farmaatsiatööstuses loodusliku lisandina, millel on antioksüdatiivsed ja vananemisvastased omadused. Täiendavad uuringud, mis hõlmavad aktiivsete peptiidide vananemisaktiivsuse hindamist inimese nahas, võivad osutuda kasulikuks.

See artikkel on välja võetud ajakirjast Molecules 2019, 24, 1104; doi:10.3390/molecules24061104 www.mdpi.com/journal/molecules