Litchi Chinensis Sonn seemnest pärineva saponiini mõju TGF-ile- 1, FN-ile ja SOCS-ile-1 neerutorukeste epiteelirakkudes kõrge glükoosisisaldusega

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Hai-Yang Nie, Rui Chen, Hong-Na Zhang, Zhi Pan

1 Changchuni Hiina Meditsiini Ülikool, Changchun, Hiina.

2 Pekingi Hiina meditsiini haigla Shunyi haigla, Peking, Hiina.

Esiletõstmised

Litchi chinensis Sonn seemnest pärinev saponiin vähendab neerutuubulite epiteelirakkude apoptoosi ning TGF{0}} ja FN sekretsiooni.

Abstraktne

Eesmärk: uurida Litchi chinensis Sonn (SLS) seemnest pärineva saponiini mõju rakkude kasvule ja apoptoosile.inimeneneerudepiteelirakud (HKC), mida kasvatatakse kõrge glükoosisisaldusega. Meetodid: HKC-d kultiveeriti DMEM/F12 söötmes, millele oli lisatud 30 mmol/l glükoosi, ja töödeldi SLS-iga või ilma. Normaalses rühmas lisati isomeetriline DMEM/F12 sööde 5,5 mmol/l glükoosiga. TGF- 1 ja fibronektiini (FN) sekretsioon tuvastati ELISA abil. Rakkude apoptoos tuvastati anneksiin V-FITC/PI topeltvärvimise meetodil. Tsütokiinide signaaliülekande -1 (SOCS-1) ​​supressori taseme tuvastamiseks kasutati Western blot analüüsi.

Tulemused: ELISA tulemus näitas, et TGF{{0}} ja FN sekretsioon vähenes SLS-i rühmades võrreldes 30 mmol/L glükoosiga ravitud rühmadega (P < {{="" 9}}.{12}}5).="" 30="" mmol/l="" glükoosiga="" ravitud="" rühmas="" esines="" rohkem="" rakkude="" apoptoosi="" kui="" normaalses="" rühmas="" (p="">< 0,01).="" võrreldes="" 30="" mmol/l="" glükoosiga="" töödeldud="" rühmaga,="" vähenes="" hkc="" apoptoos="" sls-rühmades="" oluliselt="" (p=""><0,01). western="" blot="" näitas,="" et="" kõrge="" glükoosisisaldusega="" ja="" sls-i="" rühmas="" oli="" socs-1="" tase="" madalam="" (p="">< 0,01),="" võrreldes="" kõrge="" glükoosisisaldusega="">

Järeldus: SLS võib vähendada TGF- 1 ja FN sekretsiooni HKC-s, vähendades rakuvälise maatriksi ladestumist. SLS vähendas oluliselt ka HKC apoptoosi, pärssides SOCS-i-1 taset. Need tulemused viitavad SLS-i rollile glomerulaarskleroosi progresseerumise ennetamisel.

Märksõnad: Saponiin, Litchi chinensis Sonni seeme, glükoos,Neerepiteelirakud, TGF{0}}, fibronektiin, apoptoos

cistanchesaab ravidaneeruhaigusparandadaneerufunktsioon

Taust

Diabeetiline nefropaatia (DN) on suhkurtõve üks tõsisemaid tüsistusi, mille esinemissagedus ja letaalsus, mida iseloomustavad glomerulaarskleroos ja neerude interstitsiaalne fibroos. Inimeneneerudepiteelirakud (HKC) on DN-i peamised sihtmärgid ja nad eritavad suurt hulka tsütokiine, nagu TGF{0}} ja fibronektiin (FN), mis põhjustavad glomeruloskleroosi ja neerude interstitsiaalset fibroosi. Vahepeal on teatatud, et kõrge glükoosisisaldus võib kiirendada HKC apoptoosi, suurendades tsütokiinide signaaliülekande -1(SOCS-1)[1,2] supressori taset. Seetõttu on TGF- 1, FN ja SOCS-1 taseme inhibeerimine oluline glomerulaarskleroosi progresseerumise vältimiseks. Litchi chinensis Somm (SLS) seeme on Hiina ürt, mida levitatakse peamiselt Guangdongis. Hiina Fujiani ja Guangxi provintsid registreeriti esmakordselt Bencaogangmus Hiina Mingi dünastia ajal (1518 pKr-1593 pKr). Saponiin on Litchi chinensis Sony seemne toimeaine. Meie eelmise uuringu põhjal uuritakse selles uuringus täiendavalt SLS-i mõju TGF- 1 ja FN tasemele kõrge glükoosisisaldusega kultiveeritud HKC-s, HKC apoptoosi ning glomeruloskleroosi ennetamise ja ravi aluseks olevat mehhanismi. 3].

cistanchesaab ravidaäge neerupuudulikkus

Materjalid ja meetodid Materjalid

SLS puhtusega üle 98 protsendi osteti ettevõttelt Xianqingle Biological Co., LTD (Xi'an, Hiina). HKC osteti ettevõttelt Shanghai Fuxiang Biotechnology Co., Ltd (Shanghai, Hiina). DMEM/F12 sööde, standardne loote veise seerum ja trüpsiin olid firmalt Hyclone (USA). Dimetüül-alamperekond pärines Sigmast (USA). ELISA komplekt osteti ettevõttelt Shanghai Longton Biotechnology Company (Shanghai, Hiina). Anneksiin V-FITC/PI apoptoosi tuvastamise komplekt pärineb ettevõttelt Nanjing Kaiji Biotechnology Co., Ltd (Nanjing, Hiina).

Rakukultuur

HKC-d hoiti DMEM/F12-s 10 protsendi vasika loote seerumiga ja kultiveeriti 37 kraadi juures niisutatud atmosfääris, kus õhku sisaldas 95 protsenti ja CO sisaldus 5 protsenti. Rakud seediti 0,25 protsenti trüpsiiniga pärast 2-3 päevad kasutamiseks.

Ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs

HKC jagati kuueks rühmaks, sealhulgas kontrollrühm (DMEM 5,5 mmol/l glükoosiga), kõrge glükoosisisaldusega rühm (DMEM 30 mmol/l glükoosiga), SLS-i väikese annuse rühm (5 mg/ml, S1 pluss 30 mmol/l glükoosiga), SLS keskmise annuse rühm (10 mg/ml, S2 pluss 30 mmol/l glükoosi), SLS suure annuse rühm (20 mg/ml, S3 pluss 30 mmol/Lglükoos) ja tühja tooni rühm (DMEM ilma rakkudeta).

48 tundi hiljem koguti iga rühma supernatant ning ELISA abil tuvastati TGF- 1 ja FN sisaldus. Operatsioon viidi läbi vastavalt juhendile. OD väärtust loeti 450 nm juures mikroplaadilugejaga. TGF- 1 ja FN kontsentratsioonid määrati standardkõvera järgi.

akteosiidsissecistancheavaldavad head mõjuneerud

Voolutsütomeetria

Katserühmad olid samad, mis eespool. Apoptoosirakud tuvastati voolutsütomeetria abil anneksiin V-FITC/PI topeltvärvimisega. Ülemine vasak kvadrant esindas nekrootiliste rakkude protsenti, ülemine parem kvadrant tähistas hilise apoptoosi rakkude protsenti, alumine vasak kvadrant esindas elujõuliste rakkude protsenti ja alumine parem kvadrant esindas varajase apoptoosi rakkude protsenti.

Western blot analüüs

HKC-d töödeldi 10* mol/l angiotensiooniga (Ang)Ⅱ, 20 mg/l Lof SLS ja 10* mol/l AngⅡ, DMEM/F12 söötmega, 20 mg/l SLS-iga ja 25 mmol/l glükoosiga ja 25 mmol/l glükoosiga. , vastavalt.

Rakulüsaadi valgud lahutati naatriumdodetsüülsulfaat-polüakrüülamiidi geelelektroforeesil ja kanti üle PVDF membraanidele. Iga membraani inkubeeriti monoklonaalse antikehaga, millele järgnes inkubeerimine peroksidaasiga konjugeeritud sekundaarsete antikehadega ja kemoluminestsentsi tuvastamine.

Statistiline analüüs

Kõik statistilised analüüsid viidi läbi, kasutades SPSS-i versiooni 19.0. Eksperimentaalsete andmerühmade erinevust analüüsiti ühesuunalise ANOVA abil ja rühmade vahel kasutati kõige vähem olulist erinevust. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" statistical="">

Tulemused

SLS-i mõju TGF-B1 ja FN sekretsioonile Võrreldes kõrge glükoosisisaldusega rühmaga võib SLS inhibeerida TGF-B1 ja FN taset HKC-s (P<0.01 or=""><0.05)(figure 1,="" figure="">

Võrreldes kõrge glükoosisisaldusega rühmaga: * P<0.05, **=""><0.01. control="" group:="" dmem="" with="" 5.5mmol/l="" glucose,="" high="" glucose="" group:="" dmem="" with="" 30mmol/l="" glucose,="" s1="" group:="" 5mg/ml="" sls+30mmol/l="" glucose,="" s2="" group:="" 10mg/ml="" sls+30mmol/l="" glucose,="" s3="" group:="" 20mg="" l="" sls+30mmol/l="" glucose.="" sls,="" seed="" of="" litchi="" chinensis="">

SLS-i mõju HKC apoptoosile Voolutsütomeetria tulemus näitas, et kõrge glükoosisisaldusega rühmas oli apoptoos oluliselt kõrgem kui normaalsel rühmal (P < {0}},01).="" võrreldes="" kõrge="" glükoosisisaldusega="" rühmaga="" oli="" hkc="" apoptoosi="" määr="" negatiivses="" korrelatsioonis="" sls-i="" kontsentratsioonidega="" (p=""><0, 01)="" (joonis="">

SLS-i mõju SOCS{{0}} tasemele SOCS-1 valgu tase AngII rühmas oli oluliselt kõrgem kui normaalses rühmas (P < 0.{101}="" {8}}1).="" socs-1="" tase="" angii="" pluss="" sls="" rühmas="" oli="" madalam="" kui="" angii="" rühmas,="" kuid="" siiski="" kõrgem="" kui="" kontrollrühmas="" (p="">< 0.01).="" võrreldes="" normaalse="" rühmaga="" oli="" kõrge="" glükoosisisaldusega="" rühmas="" socs-1="" valgu="" tase="" tõusnud="" (p="">< 0,01).="" võrreldes="" kõrge="" glükoosisisaldusega="" rühmaga,="" vähenes="" kõrge="" glükoosisisaldusega="" ja="" sls-i="" rühma="" valgu="" tase="" (p="">< 0,="" 01)="" (joonis="">

Joonis 4 SLS-i mõju SOCS-i-1 väljendusele a. AngII rühm: 10-6 mol/L Angiotensioon Ⅱ, b. AngII pluss SLS rühm: 20mg/L SLS ja 10-6 mol/L AngⅡ, c. Kontrollrühm: DMEM/F12 sööde, d. Kõrge glükoosisisaldusega pluss SLS rühm: 20mg/l SLS pluss 25mmol/l glükoosi, e. Kontrollrühm: DMEM/F12 sööde, f. Kõrge glükoosisisaldusega rühm: 25 mmol/l glükoosi. SOCS-1, tsütokiinide signaalimise supressor-1. SLS, Litchi chinensis Sonn seeme.

Arutelu

Ekstratsellulaarse maatriksi ladestumine ja neerutorukeste epiteeli apoptoos on peamised patoloogilised muutused DN-i arengus. Tavaolukorras jäi HKC morfoloogia ja arv suhteliselt stabiilseks. Kuid mitmesuguste stimuleerivate tegurite, näiteks põletiku korral, võib HKC märkimisväärselt vohada [4]. Kõrge glükoosisisaldus põhjustab HKC TGF- 1 ja FN kõrge sekretsiooni ning kiirendab HKC apoptoosi, mis on otsene tegur DN esinemise soodustamisel. Selles katses kasutati stiimulina kõrget glükoosisisaldust. Leiti, et SLS võib pärssida TGF- 1, FN sekretsiooni ja vähendada HKC apoptoosi, vähendades SOCS-1 taset.

Litchi chinensis Sonn levitatakse peamiselt Hiina Guangdongi, Fujiani ja Guangxi provintsides. Teatati, et SLS-il on antihüperglükeemiline, antihüperlipideemiline, trombotsüütidevastane ja viirusevastane toime [5]. Vastavalt Bencaogangmu kohta Hiina Mingi dünastia ajal (1518 pKr - 1593 pKr) võib SLS "leevendada janu". Viimastel aastatel on paljud teadlased teinud palju uuringuid selle farmakoloogilise toime ja keemilise koostise kohta. SLS-i peamised keemilised komponendid on sellised ühendid nagu litši saponiinid, flavonoidid, polüfenoolid, peitlid, aminohapped, rasvhapped ja lenduvad komponendid. SLS on peamine toimeaine. SLS-i kasutatakse laialdaselt diabeedi ja diabeetilise nefropaatia korral, millel on hüpoglükeemiline, hüpolipideemiline ja immuunsüsteemi põletikuliste toimete pärssimine [6]. Kaasaegsed eksperimentaalsed uuringud on samuti kinnitanud, et SLS-il on hüpoglükeemiline toime [7]. Selle mõju mehhanism pole aga selge.

Selles uuringus tõusis TGF- 1 ja FN tase HKC-s pärast kõrge glükoosisisaldusega stimuleerimist oluliselt ning TGF- 1 ja FN tase langes pärast SLS-ravi annusest sõltuval viisil oluliselt. . SOCS-1 valgu tase langes pärast SLS-ravi oluliselt. See uuring andis teoreetilise aluse SLS-i kliiniliseks rakendamiseks.

Cistanchevõib leevendadaneeruhaigus

Viited

1 Zhang AH, Huang SM, Ding GX jt. JNK-c-Jun/AP-1 Signaalitee reguleeritud angiotensiinⅡ-indutseeritud inimese mesangiaalsete rakkude proliferatsioon. Acta Nanjing Med Univ 2004, 24(1): 4-8.

2. Nishimoto N, Kishimoto T, Yoshizakik. Interleukiin6 retseptori vastaste antikehade ravi reumaatiliste haiguste korral. Ann Rheum Dis 2000, 59 (nn 1): 121.

3. Lou ZM, Tian XJ, Wang WX jt. Litsi südamikust kogu saponiini ekstrakti mõju diabeetiliste hiirte veresuhkru tasemele. Zhejiang Med J 2007, 29(6): 548-550.

4. Kolset SO, Reinholt FP, Jenssen T. Diabeetiline nefropaatia ja ekstratsellulaarne maatriks. J Histochem Cytochem 2012, 60(12): 976-986.

5. Li JW. Hiina meditsiini sõnaraamat (teine ​​väljaanne). Beijing: People's Med Publishing House 2013, 1184. 6. Zhang YJ, Zhang C. Litšiseemnete edenemine peamiste toimeainete ja farmakoloogiliste mõjude osas. J Guangdongi Pharm Univ 2014, 30(6):792-797. 7. Jiang ZG, Ren K, Lin Z jt. Uuring Litchi chinensise vere glükoosisisaldust vähendava tõhusa osa kohta. J Changchun Univ Tradit Chin Med 2011, 27(1):14-16.