Cistanche glükosiidide mõju sünaptilisele morfoloogilisele plastilisusele vananemisega kiirendatud hiirtel
Mar 11, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com
LIAN Juanqi1, WANG Lu2, ZHAO Fujun3, LIN Shuai3, YAN Xusheng4, JIA Jianxin4, CAI Zhiping4
(1. Baotou meditsiinikolledži Graduate Schooli 2014. aasta klass, Baotou 014060, Hiina)
(2. Baotou meditsiinikolledži 2015. aasta klassi kliinilise meditsiini 12. klass)
(3. Baotou meditsiinikolledži 2013. aasta kohtumeditsiini 1. klass)
(4. Baotou meditsiinikolledži inimese anatoomia osakond)
ABSTRAKTNE
Eesmärk: mõju uurimiseksglükosiididcistanche (GC) hipokampuse neuronite sünaptilise plastilisuse kohta vananemiskiirenenud hiirtel, kellel on kalduvus 8 (SAMP8).meetodid: 40 hiirt jagati juhuslikult kontrollrühma, vehiiklirühma, väikese annusega rühma (manustatud GC-sid 2,5 mg / kg ·d), keskmise annuse rühma (manustatud GC-sid 50 mg / kg). • d) ja suure annuse rühm (manustatud GC-sid 10,0 mg/kg · d). Kontrollrühma hiirtele ei sekkutud; manustatud rühmades ja vehiiklirühmas manustati intraperitoneaalselt (GC-d / soolalahus) või soolalahust 30 päeva jooksul. Normaalsete püramiidsete neuronite arv hipokampuse CA1 piirkonnas loendati Nissl värvimisega; sünapsides olevate dendriitsete selgroogude arv loendati Golgi värvimisega ja PSD{11}} valgu ekspressioon kvantifitseeriti immunohistokeemia abil.Tulemused: Võrreldes kontrollrühma omadega suurendasid GC-d märkimisväärselt normaalsete püramiidsete neuronite arvu hipokampuse CA1 piirkonnas (P<0.05) and="" increased="" the="" number="" of="" dendritic="" spines="" in="" synapses="" (p=""><0.05). the="" expression="" levels="" of="" psd-95="" in="" administered="" groups="" were="" significantly="" higher="" than="" that="" in="" the="" control="" group="" (p=""><0.05), and="" the="" effect="" in="" the="" middle="" dose="" group="" was="" the="" most="" significant.="">Järeldus: GC-d võivad parandada hipokampuse püramiidrakkude ellujäämise määra ja parandada sünaptilist plastilisust.
MÄRKSÕNAD: Tistanche glükosiidid (GC-d); Vananemisega kiirendatud hiir; Dendriitne selg; PSD - 95
Seoses sotsiaalse elanikkonna vananemisega on üha tõsisemaks muutuv levimusAlzheimeri tõbi(AD) on järk-järgult suurenenud, mis on toonud patsientide peredele ja ühiskonnale raske koormuse
[1]. AD peamised kliinilised ilmingud on kognitiivsed häired ja mäluhäired ning peamisteks haigusjuhtude tunnusteks on seniilsed naastud, mis on moodustunud rakuvälistest amüloidiladestustest ja rakusisesest neurofibrillaarsest puntrast[2]. AD patogenees on endiselt ebaselge. Sünapside patoloogilisi muutusi peetakse AD-mälu ja kognitiivse düsfunktsiooni neurobioloogiliseks aluseks. Ebanormaalsed muutused sünapsides võivad olla AD patogeneesi põhilüliks. Senescence Accelerated Mouse (SAM) on sisearetusega vananev mudelhiir. Selle P8 alamliinil on ühtlased ja stabiilsed vananemispatoloogilised omadused, mis väljendub õppimise ja mälu ning äratundmise järkjärgulises languses kuude suurenemisega. Teadaolevad düsfunktsioonid ja patoloogilised ilmingud on sarnased AD patsientidega, seega on SAMP8 hiired ideaalne loommudel vananemisega seotud õppimise ja mäluhäirete mehhanismi uurimiseks.
Selle artikli eesmärk on analüüsida rakkude ellujäämise määra, mõõta dendriitide lülisamba tihedust ja tuvastada postsünaptilisi tihendusi, et uurida GC-de võimalikku mehhanismi.(glükosiididcistanche)mõjutab kiiresti vananevatel hiirtel hipokampuse neuronite sünaptilist morfoloogilist plastilisust, eesmärgiga ravida AD-ga seotudcistancheglükosiidid(GC) Ruumiline õppimine ja mäluhäired annavad teoreetilise ja eksperimentaalse aluse.
1 Materjal ja meetodid
1.1 Katseloomad ja rühmitamine 40 isast 10-kuust SAMP8 hiirt (ostetud Tianjini traditsioonilise hiina meditsiini ülikoolist), keda on kasvatatud puhtas keskkonnas, ümbritseva õhu temperatuuril (24.0 ±). 1.0) kraad , niiskus (50.0 ± 5,0) protsenti , tasuta toit ja vesi. Katse alustamiseks kasvatati loomad 11 kuu vanuseks. Loomad jagati juhuslikult 5 rühma (8 looma/rühm): tühikatse (kontroll) rühm, lahusti kontrollrühm (vehiikul)cistanche üldglükosiidid(GC-d) väikese annuse rühm [2,5 mg / (kg · d)], keskmise annuse rühm [5. 0 mg / (kg · d)], suure annuse rühm [10.0 mg / (kg · d)]. Kontrollrühma loomadele ei sekkutud. Väikese annuse rühma loomadele anti GC-sid 2,5 mg / (kg · d), keskmise annuse rühma loomadele GC-sid 5.0 mg / (kg · d) ja loomadele suure annusega rühmale anti GC-sid. 0 mg/(kg ·d), anti vehiiklirühma loomadele sama kogus tavalist soolalahust. Ravimite või füsioloogilise lahuse pidev intraperitoneaalne süstimine 30 päeva jooksul, 0,5 ml/päevas.
1.2 Proovide ettevalmistamine ja töötlemine Loomad surmati 24 tundi pärast viimast manustamist, tuimestati ja kael surmati. Lõigake rindkere, et paljastada süda, lõigake parempoolne kodade lisand, et veri välja lasta, ja sisestage perfusiooninõel vasakusse vatsakesse. Pärast 100 ml tavalise soolalahuse infundeerimist jätkati 4-protsendilise paraformaldehüüdi infundeerimist, kuni hiirte jäsemed olid jäigad. Võtke aju ja asetage see 4% paraformaldehüüdi rohkem kui 24 tunniks.
1.3 Ravimid ja reaktiivid GC-d (glükosiididcistanche) osteti Hiina traditsioonilise hiina meditsiini akadeemiast, postsünaptiline tihedus –95, PSD –95 osteti ettevõttelt Epitomic, Coomassie Brilliant Blue CBBG 250 komplekt osteti ettevõttelt Nanjing Jiancheng Biotechnology Co., Ltd. Engineering Institute, DAB komplekt osteti ettevõttest Immunohistochemistry Pekingi Zhongshan Jinqiao biotehnoloogiaettevõte.
1.4 Nissl-värvimine ja rakkude arv 4-protsendiline ajukoe fikseerimine paraformaldehüüdiga üle 24 tunni, trimmimine ja dehüdratsioon gradientalkoholiga, läbipaistva ksüleeniga, vahakastmine, tavapärane parafiini sisestamine, 5 μm paksune jadalõik. Lõigake viilud ja vahatage vette, värvige 1% toluidiinsinisega 37 kraadi juures 60 minutit, peske 5 min × 3 korda, eristage 95% alkoholiga, 100% alkoholiga. Dehüdreerige, läbipaistev ksüleen, kinnitage neutraalse kummiga, jälgige all. mikroskoop. Iga rühma sama hipokampuse lõigu CA1 ala valiti juhuslikult 3 vaatlusvälja hulgast (×100), loendati normaalsete püramiidrakkude arv 1 mm piires ja analüüsiks võeti keskmine.
1.5 Modifitseeritud Golgi värvimine Asetage parandatud ajukude Golgi-Coxi värvimislahusesse, kaitske valguse eest 14 päeva ja vahetage lahust iga 2 päeva järel; asetage ajukude 30% sahharoosi sisse ja asetage see külmkappi 4 kraadini. Kude saab lõigata pärast põhja vajumist; vibreeriv mikrotoom lõikamiseks ja värvimiseks; fiksaatori lahendus arenduseks; paigaldusplaadi kuivatamine, jälgimine ja loendamine mikroskoobi all. Jälgige iga hiirte rühma hipokampuse CA1 ja CA3 neuronaalse tipu dendriitselgroo muutusi ja arvutage dendriitide lülisamba tihedus.
1.6 Immunohistokeemilised lõigud deparafineeriti veega, inkubeeriti endogeense peroksidaasi aktiivsuse kõrvaldamiseks 3% H2O2-ga 1 0 minutit, pesti destilleeritud veega 5 minutit × 3 korda, parandati kõrgsurve mikrolaineahjus, pesti PBS-iga 5 minutit × 3 korda, kitse seerum blokeeriti 30 min toatemperatuuril, lisati tilkhaaval küüliku anti-hiire PSD-95 primaarne antikeha üleöö temperatuuril 4 kraadi, pesti PBS-iga 5 minutit × 3 korda lisati tilkhaaval biotiiniga märgistatud sekundaarne antikeha, inkubeeriti 37 kraadi juures 2 tundi, pesti PBS-ga 5 min x 3 korda, tilgutati mädarõika peroksidaasiga märgistatud streptavidiini, pesti PBS-ga 5 min x 3 korda, pesti DAB 2 minutit, värvige hematoksüliiniga, veetustatud gradientalkoholiga, läbipaistev ksüleeniga ja kinnitage. 1.7 Pilditöötlus ja statistiline analüüs. Vaatluseks valiti iga rühma samad hipokampuse ristlõiked. CA1 piirkonnas valiti juhuslikult kolm vaatevälja (×100), et loendada normaalsete püramiidrakkude arv 1 mm piires, ja analüüsiti keskmist. Immunohistokeemia tulemusi mõõdeti IPP 7.0 pildianalüüsi tarkvaraga. Eksperimentaalseid andmeid analüüsiti tarkvaraga SPSS 17.0 ja mitme valimi keskmiste paaridevaheliseks võrdlemiseks kasutati ühesuunalist ANOVA-d. P<0.05 was="" considered="" statistically="">
Alzheimeri tõve vastane
2 tulemust
2.1 Üldglükosiidide mõjucistanchenormaalsete püramiidrakkude arvust SAMP8 hiirte hipokampuses Nissl värvimine Nissl värvimise tulemused näitasid, et kontrollrühma CA1 piirkonnas vähenes neuronite arv, paigutus oli korrast ära ja enamus rakkudest olid morfoloogiliselt ebanormaalsed ning lüüs ja nekroos. GC-de rakkude morfoloogia(glükosiididcistanche)rühm oli suhteliselt selge ja terviklik, nähtaval oli suur hulk eendeid, Nissl keha oli lilla, tuumad olid sügavalt määrdunud, selged ja tsentreeritud ning tuumad ei olnud värvunud. Vehiikulirühma rakumorfoloogia on sarnane kontrollrühma omaga. Rakkude arv näitas, et normaalsete püramiidsete neuronite arv manustamisrühma CA1 piirkonnas suurenes (P<0.05); the="" difference="" between="" the="" medium="" and="" high="" dose="" groups="" was="" not="" statistically="" significant="" (p="">0.05), the number of normal pyramidal neurons To a certain extent, it shows an upward trend with increasing dose. There was no significant difference in the number of normal pyramidal cells between the vehicle group and the control group (P>0.05). Vaata tabelit 1.
Tabel 1 Tistanche glükosiidide mõju SAMP8 hiire hipokampuse nisa värvumisele, normaalsele püramiidrakkude arvule ja dendriitsete okste arvule (tk)
a võrreldakse kontrollrühmaga t=0.193, P=0.582; b võrreldakse kontrollrühmaga t=13.621, P=0.008; c võrreldakse kontrollrühmaga t=21.798 , P=0.005; d võrreldakse kontrollrühmaga t=18.326, P=0.006; e võrreldakse kontrollrühmaga t=0.244, P=0.463; f on võrreldud kontrollrühmaga Võrreldes t-ga=10.903, P=0.010; g võrreldakse kontrollrühmaga t=21.817, P=0.005; h võrreldakse kontrollrühmaga t=15.572, P=0. 007.
2.2kogu glükosiidide mõjucistanche dendriitsete ogade tiheduse kohta SAMP8 hiirtel Golgi värvimine näitas, et kontrollrühmas vähenes dendriitsete selgroogude arv ja vähenes tihedus. Pärast loomadele GC-de andmist suurenes dendriitide arv ja tihedus ning ilmnes suur hulk eendiid (P=0.048). Statistiliselt olulist erinevust keskmise annuse ja suure annuse rühma vahel ei olnud (P=0,853). Dendriitselgroo arv ja tihedus Kraad näitab tõusutendentsi koos annuse suurenemisega. vehiikulirühm ja kontroll
Dendriitselgede arv ja tihedus rühmas ei oma statistilist tähtsust (P=0,764). Vaata tabelit 1.
2.3 MõjuCistancheglükosiidid PSD-95 ekspressioonile SAMP8 hiirtel PSD-95 immunohistokeemiline kvalitatiivne tuvastamine näitas, et kontrollrühmas oli PSD-95 ekspressioon väiksem, raku keha värvumine oli heledam ja positiivne ekspressioonimäär oli madalam. Pärast GC-de lisamist in vitro värvus raku keha sügavamalt ning PSD-95 ekspressioon ja positiivne määr suurenes (t=5.751, P<0.05). there="" was="" no="" significant="" difference="" between="" the="" middle-dose="" group="" and="" the="" high-dose="" group="" (t="1.077," p="">0.05). Teatud määral näitas PSD-95 ekspressioon annuste suurenedes tõusutrendi. sõidukit
There was no statistically significant difference in PSD-95 expression between the control group and the control group (t = 0.585, P>0.05).
3 Arutelu
PSD-95 on postsünaptika põhikomponent ja on seotud mitmesuguste sünaptiliste funktsioonidega, mis hõlmavad ioonkanaleid, sünaptilist aktiivsust, rakusisest signaaliülekande radasid jne [3]. PSD-95 koondab seotud valgud NMDA retseptori signaalirajasse, moodustades retseptorit signaali andva molekuli reguleeriva molekuli sihtmärgiga molekulikompleksi [4], mis mängib võtmerolli signaaliülekande rajas. NMDA retseptorid osalevad hipokampuse CA1 piirkonnas pikaajalise potentsiatsiooni (LTP) esilekutsumisel ning õppimis- ja mäluprotsessis [5]. PSD{10}} mängib selles protsessis olulist reguleerivat rolli ja selle valgusisaldust saab kasutada teise molekulaarse markerina sünaptilise plastilisuse mõõtmiseks. Varasemates uuringutes oleme tõestanud, et GC-d(glükosiididcistanche)võib parandada õppimist ja kognitiivseid häireid SAMP8 hiirtel, kuid me ei ole selgitanud selle võimalikku rakumorfoloogilist mehhanismi. Selle katse eesmärk on uurida selle võimalikku rakumorfoloogilist mehhanismi.
Selles katses parandati püramiidrakkude ellujäämise määra ja sünaptilist plastilisust GC-des(glükosiididcistanche)rühm oli parem kui kandjarühma ja kontrollrühma oma. On näha, et GC-d parandasid püramiidrakkude morfoloogiat oluliselt. Katsetulemused näitavad, et GC-de suuremad annused võivad avaldada paremat mõju. Keskmise annuse rühma ja suure annuse rühma võrdlusest on näha, et mõju ei muutu oluliselt, kui annus saavutab teatud kontsentratsiooni. Seetõttu tuleks GC-de kasutamisel raiskamise ja GC-de kõrvalmõjude vältimiseks valida sobivaim kontsentratsioon [6].
Varasemad uuringud on näidanud, et GC-d(glükosiididcistanche)võib parandada SAMP8 hiirte õppimis- ja kognitiivseid häireid, parandades püramiidrakkude ellujäämise määra [7]. Samuti on andmeid, mis näitavad, et GC-d võivad parandada neurodegeneratiivseid haigusi, soodustades närvi tüvirakkude proliferatsiooni ja diferentseerumist [8-10]. Autor usub, et GC-de mehhanismi AD parandamiseks võib saavutada sünaptilise morfoloogia plastilisuse parandamise ja püramiidrakkude arvu säilitamisega, mis paneb aluse GC-de lõplikule kasutamisele kliinilise AD ennetamisel ja ravis.
Viited
[1] Chen Juluo, Chen Xingui, Hu Panpan jne. Alzheimeri tõvega patsiendid kasutavad funktsioone Esialgsed uuringud [J]. Chinese Journal of Behavioral Medicine and Brain Science, 2013, 22 (10): 889-891.
[2] Jin Chunhui, Liu Xiaowei, Yuan Jianmin jt. Sorting Retseptor 1 Gene Single Nucleoside Korrelatsioon happe polümorfismi ja juhusliku Alzheimeri tõve vahel［J］. Chinese Journal of Behavioral Medicine and Brain Science, 2014, 23 (5): 427-429.
[3] Schliebs R, Arendt T. Kolinergilise süsteemi tähtsus ajus vananemise ja Alzheimeri tõve korral (J］). Neural Transm, 2006, 113 (11): 1625-1644.
[4] Soriano FX. Surmaeelsete NMDA retseptori signaalide spetsiifiline sihtimine, mis sõltuvad erinevalt NR2B PDZ ligandist［J］． J Neurosci, 2008, 28 (42): 10696-10710.
[5] Selkoe DJ. Amüloid-beetavalgu lahustuvad oligomeerid kahjustavad sünaptilist plastilisust ja käitumist ［J］． Behav Brain Res, 2008, 192 (1): 106 -113.
[6] Huang Zonghui, Chen Guanmin, Zhao Kangtao jt. Cistanche ［J］ toksilisuse uuring. China Journal of Hygiene Inspection, 2014, 24 (8): 1098 -1100.
[7] Jia Jianxin, Song Wei, Yan Xusheng jt. Tistanche glükosiidide koguhulk mõjutab SAMP8 hiirt. Omavahelise õppimise ja mälu mõju ja mehhanism［J］. Journal of Baotou Medical College, 2014, 30 (6): 6-8.
[8] Xiao Q, Yan P, Ma X jt. Astrotsüütide lüsosoomi biogeneesi tõhustamine hõlbustab A kliirensit ja nõrgendab amüloidnaastude patogeneesi［J］． J Neurosci, 2014, 34 (29): 9607-9620.
[9] Li QJ, Tang YM, Liu J jt. Parkinsoni tõve ravi NURR1 üleekspresseerivate C172 neuraalsete tüvirakkudega rekombineeritud vabariigi-defitsiidi adenoviirusega, mis sisaldab NURR1 geeni［J］. Synapse, 2007, 61 (12): 971-977.
[10] Qin Wei, Wei Wei, Xu Qian jt. Cistanche C172 neuraalsete tüvirakkude proliferatsiooni kohta [J] mõju. Strait Pharmacy, 2015, 27 (12): 263-265.