Cistanche Deserticola toorpolüsahhariidi mõju suu- ja sõrataudi viiruse vaktsiini antikehade ja T-rakkude alarühmale

Kontakt: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com

ZHANG Ai-Lian; BA Xue-li; WANG Dan-yang; ZHAO Bing

Suu- ja sõrataud (FMD)on haigus, mis on põhjustatudsuu- ja sõrataudi viirus (FMDV)mis levib sõraliste seas, ohustades tõsiselt kariloomade tervist ja põhjustades suuri majanduslikke kahjusid. Vaktsineerimist kasutatakse laialdaselt tõhusa vahendina suu- ja sõrataudi ennetamiseks ning see on saavutanud märkimisväärseid tulemusi. Suu- ja sõrataudiviiruse inaktiveeritud antigeeni nõrga immunogeensuse tõttu on sageli vaja selle rolli täitmiseks lisada adjuvanti [1-2]. Praegu on kaubanduslikes suu- ja sõrataudivaktsiinides tavaliselt kasutatav adjuvant ISA-206 õliemulsioon, mis on rakkude aktivaator ja võib samuti tugevdada humoraalset immuunvastust, kuid selle kõrvalmõjud on suhteliselt suured. Kuigi adjuvante on palju, nagu tavaliselt kasutatavad adjuvandid (alumiiniumsoola adjuvandid, õli-vee emulsioonid jne) ja uued abiained (MF59, taimsed polüsahhariidid jne), kasutatakse suu- ja sõrataudi vaktsiinides kasutatavaid adjuvante. on endiselt piiratud, sealhulgas peamiselt alumiiniumhüdroksiid, Span, kerge mineraalõli jne, kõigil on erinevad vead, näiteks ebarahuldav immuunmõju või väga toksiline ja kõrvaltoimed [3-4]. Seetõttu on tungiv vajadus suu- ja sõrataudi vaktsiinide jaoks välja töötada kõrge efektiivsusega ja madala toksilisusega uued adjuvandid, et parandada vaktsiini immuunkaitset, mis on vaktsiini jaoks positiivse tähtsusega.suu- ja sõrataudi ennetamine ja ravi.

Hiina meditsiintaimne omab laialdasi kasutusvõimalusi nakkushaiguste ennetamisel ja ravis. Hiina taimsel meditsiinil on inimeste ja loomade haiguste ravimisel pikk ajalugu. Vaktsiini adjuvantide uurimise valdkonnas on kodu- ja välismaised teadlased ekstraheerinud polüsahhariide erinevatest Hiina taimsetest ravimitest, et uurida nende adjuvantseid toimeid, nagu ženšenni polüsahhariidid, astragaluse polüsahhariidid, tuckahoe polüsahhariidid, epimeediumi polüsahhariidid jne, ning leidnud, et neil on immuunfunktsioonid inimestele ja loomadele. Sellel on hea reklaamiefekt ja sellest saab uus kandidaatadjuvant [5-7].

Cistanche (Cistanche deserticola YCMa)on Dangi perekonna taim. See on laialdaselt kasutatav toitev Hiina taimne ravim ja seda on inimesed kasutanud toitva toiduna pikaajaliseks tarbimiseks. Viimastel aastatel on teadlased teinud palju uurimistööd Cistanche päritolu polüsahhariidi keemilise struktuuri ja farmakoloogilise aktiivsuse kohta ning leidnud, et selle toimeainete hulka kuuluvad peamiselt polüsahhariidid, üldfenüületanoidglükosiidid, alkaloidid jne, mille hulgas on polüsahhariidide sisaldus. suhteliselt kõrge ja seda saab reguleerida. Immuunsüsteemil on oksüdatsiooni- ja vananemisvastane toime [8-9].

Cistanche (Cistanche deserticola YCMa)

Esialgsed uuringud näitasid, et toortsistanche kõrbe polüsahhariidi ja OVA-ga immuniseeritud hiirte kombinatsioon tõstis oluliselt OVA-spetsiifiliste antikehade taset ning ühilduvus gripivaktsiiniga võib tõsta gripivaktsiini antikehade taset [10-11]. Seda silmas pidades kasutati selles uuringus Cistanche deserticola toorpolüsahhariidi inaktiveeritud suu- ja sõrataudivaktsiini kandidaatadjuvandina ning vees lahustuvaid adjuvante, millel on märkimisväärne immuunsust tugevdav toime ja väikesed kõrvaltoimed, nii etCistanche deserticola toorpolüsahhariidi saab tõhusalt kasutada suu- ja sõrataudi vaktsiinide uue adjuvandina.

Agendi ettevalmistamine

Selles uuringusCistanche deserticola (CDCP) toorpolüsahhariidoli kombineeritudsuu- ja sõrataudi viirusvaktsiinide valmistamiseks. ICR-hiiri immuniseeriti lihaste kaudu. Tuvastati immuniseerimise mõju hiirte humoraalsele ja rakulisele immuunvastusele ning vaadeldi nende ohutust. Suu- ja sõrataudi vaktsiini uue ohutu adjuvandi väljatöötamine annab võrdlusaluse.

Cistanche deserticola toorpolüsahhariid

Cistanche deserticola (CDCP) toorpolüsahhariidi mõju FMDV-spetsiifiliste antikehade tasemele seerumis

Seerumi IgG tase näitas järk-järgult tõusutendentsi 14 päeva, 21 päeva ja 28 päeva pärast esialgset epideemiat (joonis 1). 14 ja 21 päeva pärast esialgset immuniseerimist oli FMDV Ag/CDCP rühma antikehade tase oluliselt kõrgem kui FMDV-Ag adjuvandivaba rühmas (P<0.05), and="" there="" was="" no="" significant="" difference="" from="" the="" fmdv="" group="" (p="">0.05). 28 päeva pärast esialgset immuniseerimist, võrreldes FMDV-Ag-ga ilma adjuvandita, tõusis FMDV-Ag/CDCP IgG antikehade tase oluliselt (P<0.05), but="" it="" was="" extremely="" significantly="" lower="" than="" that="" of="" the="" fmdv/isa-206="" group=""><0.01). the="" antibody="" level="" of="" the="" fmdv-ag="" adjuvant-free="" group="" was="" significantly="" different="" from="" that="" of="" the="" 0.9%="" nacl="" control="" group=""><>

Cistanche deserticola (CDCP) toorpolüsahhariid põrna lümfotsüütide proliferatsiooni kohta

21 päeva pärast esialgset immuniseerimist kasutati MTT meetodit, et tuvastada Cistanche deserticola toorpolüsahhariidi proliferatsiooniefekti põrna lümfotsüütidele. Nagu on näidatud joonisel 2, oli pärast FMDV-Ag stimuleeritud põrna lümfotsüüte in vitro lümfotsüütide stimulatsiooni indeks FMDV-Ag/CDCP rühmas oluliselt kõrgem kui FMDV-Ag ilma adjuvandita rühmal (P<0.05), and="" compared="" with="" fmdv/isa-206="" there="" was="" no="" significant="" difference="" between="" the="" groups="" (p="">0.05). Pärast ConA ja LPS-i stimuleerimist võib see oluliselt suurendada põrna lümfotsüütide proliferatsiooni (P<>

Cistanche deserticola (CDCP) toorpolüsahhariidi mõju CD4 pluss ja CD8 pluss T-rakkude ekspressioonile

21 päeva pärast esialgset immuniseerimist testiti CDCP ja FMDV-Ag mõju CD4 pluss ja CD8 pluss T-rakkudele hiirte põrnas. Tulemused on näidatud joonisel 3-A D. CD3 pluss, CD4 pluss, CD3 pluss, CD8 pluss T-rakkude alamhulkade suhe FMDV-Ag/CDCP rühmas oli oluliselt kõrgem kui FMDV-Ag adjuvandil. -vaba rühm (P<0.05), and="" compared="" with="" fmdv/isa-="" the="" difference="" between="" the="" 206="" groups="" was="" not="" significant="" (p="">0.05). FMDV-Ag adjuvandivaba rühm ei suurendanud CD4 pluss ja CD8 pluss T-rakkude ekspressiooni.

Cistanche deserticola (CDCP) toorpolüsahhariidi mõju CD4 pluss, CD44 pluss ja CD8 pluss CD44 pluss efektor-T-rakkude alamhulkadele

Et jälgida Cistanche deserticola toorpolüsahhariidi mõju efektor-T-rakkudele, kasutati voolutsütomeetriat CD4 pluss, CD44 plus ja CD8 pluss, CD44 plus ekspressiooni tuvastamiseks hiirte põrnarakkudes pärast immuniseerimist. Tulemused on näidatud joonisel 4-AD. CD4 plus , CD44 plus ja CD8 plus , CD44 plus protsendid FMDV Ag/CDCP rühmas olid oluliselt kõrgemad kui FMDV-Ag adjuvandivaba rühmas (P<0.05), and="" were="" different="" from="" the="" fmdv/isa-206="" group="" not="" significant="" (p="">0.05).

Cistanche deserticola (CDCP) toorpolüsahhariidi mõju hiirte kasvule

After immunizing animals with Crude Polysaccharide from Cistanche deserticola through the muscle route, the growth of the mice was observed during the entire immunization period and the body weight was weighed weekly to observe the granuloma at the injection site (Table 1). After the immunization, the mice did not have hair loss or refusal to eat. The weight of each group of mice increased normally at 14 d, 21 d, and 28 d after immunization, and there was no significant change in body weight between the groups (P>0.05). FMDV Ag/CDCP rühma hiirtel ei olnud süstekohas granuloome ja hiirtelsuu- ja sõrataudi viirusISA 206 õliadjuvanti sisaldaval vaktsiinirühmal olid süstekohas granuloomid.

Adjuvante on erinevates vaktsiinides kasutatud pikka aega, need võivad aidata vaktsiinidel avaldada immuunsüsteemi tugevdavat toimet, vähendada vaktsiiniannuseid ning mängida väga olulist rolli nakkushaiguste ennetamisel ja epideemias [3]. Uute vaktsiinide väljatöötamisega, olgu siis veterinaarvaktsiiniuuringute või inimeste vaktsiiniuuringute vallas, muutuvad nõuded vaktsiiniadjuvantide kvantiteedile ja kvaliteedile aina kõrgemaks. Ideaalne uus adjuvant peaks avaldama tõhusat stimuleerivat toimet organismi raku- või humoraalsele immuunsusele, omama kauakestvat ja stabiilset toimet, vähendama immuniseerimiste arvu, omama vähem kõrvaltoimeid ning olema kergesti valmistatav ja kergesti süstitav [13]. .

sissesuu- ja sõrataudi viirusinaktiveeritud vaktsiinidele lisatakse tavaliselt vaktsiini immuunsuse suurendamiseks õliadjuvante, kuid on ka puudusi, näiteks kõrge immuunstress. Võrreldes õliadjuvantidega on veeadjuvante lihtne kasutada, need võivad seguneda mis tahes vahekorras vaktsiini antigeenidega, ei vaja emulgeerimist ja neid on lihtne süstida. Seetõttu on veeadjuvantidel suu- ja sõrataudi vaktsiinides head kasutusvõimalused. Hiina taimsetel polüsahhariididel on hea immunomoduleeriv toime koos nende eelistega ohutuses, pleiotroopsuses ja sõltumatuses ning neist on saanud kuum koht uute vaktsiiniadjuvantide uurimisel [14]. FMDV vaktsiini adjuvantide uurimise valdkonnas kasutatakse uute adjuvantide uurimisel mõningaid Hiina taimseid polüsahhariide. Näiteks astragaluse polüsahhariide kasutatakse FMDV vaktsiinide adjuvantidena. Suukaudne immuniseerimine võib suurendada humoraalset ja rakulist immuunsust ning väikesed annused võivad pärssida dendriitrakkude küpsemist, suured annused võivad soodustada nende küpsust.

Teadlased on kasutanud ka Baizu polüsahhariide ja päritolu polüsahhariideEucommiaadjuvantidenasuu- ja sõrataudi viirusvaktsiini, et uurida nende immuunsüsteemi tugevdavat toimet [15-17]. Erinevate Hiina taimsete ravimite toimeainete sisalduse suurte erinevuste tõttu on ulatuslikul immunoloogilise toimega Hiina taimsete ravimite sõeluuringul sobivate adjuvantide leidmiseks suur tähtsus haiguste ennetamisele ja inimeste tervisele ning see on ka uurimistöö keskuseks vaktsinoloogia. Selles katses aCistanche deserticola toorpolüsahhariidvaliti kandidaat-adjuvandikssuu- ja sõrataudi viirusvaktsiini ja viidi läbi eksperimentaalne uuring adjuvandi toime kohta. Nakkushaiguste ennetamine ja ravi sõltuvad peamiselt B-lümfotsüütide vahendatud humoraalsest immuunvastusest ja T-lümfotsüütide poolt vahendatud rakulisest immuunvastusest [18-20].

Kunasuu- ja sõrataudi viirusvaktsiin kasutab tootmises tegelikult lihaste immuniseerimist, katses kasutatakse hiirte immuniseerimiseks lihaste rada ning CDCP immuunsüsteemi tugevdavat toimet hinnatakse, hinnates CDCP mõju antikehade tootmisele ja T-rakkude alamhulkadele ning hinnatakse selle ohutust. Esialgsed tähelepanekud. Uuringu tulemused näitasid, et Cistanche cistanche toorpolüsahhariid võib 14 ja 21 päeva pärast immuniseerimist tõsta FMDV-le spetsiifiliste antikehade taset ning ISA-206 adjuvandi toime ja taseme vahel ei ole olulist erinevust. ; antikehade tase 28 päeva pärast immuniseerimist on madalam kui ISA-206 õliadjuvandil, mis näitab, etCistanche deserticola toorpolüsahhariid võib tõsta humoraalset immuunsustteatud aja jooksul pärast immuniseerimist. Lümfotsüütide proliferatsiooni kiirus on positiivses korrelatsioonis stimulatsiooniindeksi tasemega. MTT katsesCistanche deserticola toorpolüsahhariid võib soodustada lümfotsüütide proliferatsioonimida stimuleerib FMDV antigeen, ConA ja LPS. T-rakkude alarühma eksperimendis ei saa CDCP mitte ainult suurendada CD4 pluss ja CD8 pluss T-rakkude ekspressiooni, vaid suurendab ka CD4 plus, CD44 plus ja CD8 plus, CD44 plus efektor-T-rakkude taset ning olulist erinevust pole. ISA-206 adjuvantide rühmast; ohutuses Seksuaalkatsetes leiti, et ISA-206 sisaldava vaktsiinirühma hiirtel olid süstekohas granuloomid, samas kui CDCP vesiadjuvanti sisaldav vaktsiinirühm ei leidnud granuloome, mis näitas esialgselt, etCistanche deserticola toorpolüsahhariidil on hea ohutus. Edasise ohutuse tagamiseks tuleb selle kinnitamiseks läbi viia asjakohased katsed.

Cistanche deserticola toorpolüsahhariidmitte ainult ei suurendanud humoraalset immuunvastust, vaid suurendas ka lümfotsüütide proliferatsiooni taset, soodustas CD4 pluss ja CD8 pluss T-rakkude alamhulkade taset, aktiveeris efektor-T-rakke ja pärast süstimist ei leitud süstekohas granuloome. Hiired kasvavad normaalselt ja neil ei ole ebanormaalset käitumist. Need uurimistulemused annavad aluse edasiseks uurimiseksCistanche deserticola toorpolüsahhariiduue adjuvandinasuu- ja sõrataudi viirusvaktsiin ja on ka kasulik viide polüsahhariidadjuvantide kasutamiseks teistes vaktsiinides.

Viide

［1］Diaz-san Segundo F, Median GN, Steinfeldt C jt. Suu- ja sõrataudi vaktsiinid［J］. Vet Microbiol, 2017, 206:102-112.

［2］Park JH. Nõuded suu- ja sõrataudi epideemiate vastastele täiustatud vaktsiinidele［J］. Clin Exp Vaccine Res, 2013, 2(1): 8-18.

［3］Cao Y. Adjuvandid suu- ja sõrataudiviiruse vaktsiinide jaoks: hiljutised edusammud［J］. Expert Rev Vaccines, 2014, 13 (11):1377-1385.

［4］Parid AS. Vaktsineerimine suu- ja sõrataudi viiruse vastu: strateegiad ja tõhusus［J］. Expert Rev Vaccines, 2009, 8:347-365.

［5］Licciardi PV, Underwood JR. Taimsed ravimid: uudne immunoloogiliste adjuvantide klass ［J］. Int Immunopharmacol, 2011, 11(3):390-398.

［6］Sun B, Yu S, Zhao D jt. Polüsahhariidid vaktsiini adjuvantidena［J］. Vaktsiin, 2018, 36:5226-5234.

［7］Meng XY, Chu ZF, Zhang JJ jt. Ginkgo biloba immunomoduleerivad funktsioonid vvIBDV vaktsiinil［J］ jätab polüsahhariidi. ChinaJ Vet Sci, 2019, 39(4):640-645.

［8］Tu PF, Jiang Y, Guo YH jt. Cistanche［J］ teadusuuringud ja tööstusarendus. Chin Pharm J, 2011, 46(12):882-887.

［9］Zhang W, Huang J, Wei W jt. Cistanche tubulosa［J］ polüsahhariidide ekstraheerimine, puhastamine, iseloomustamine ja antioksüdantne toime. Int J Biol Macromol, 2016, 93:448-458.