Cistanche mõju kopsude, maksa ja harknääre funktsionaalsetele kahjustustele sepsisega rottidel

Abstraktne

Eesmärk: uurida Cistanche ekstrakti mõju ägedatelemaksseptilise šokiga rottide kopsu- ja harknääre funktsiooni kahjustusi ning uurida septilise šoki ravi.

Meetodid: kasutage septilise šoki mudeli replikatsiooniks umbsoole ligeerimist ja perforatsiooni (CLP), jälgige patoloogilisi muutusimaks, kopsu- ja harknääre kude ning määrata ägeda maksa-, kopsu- ja harknääre kahjustuse bioloogilised näitajad ja mõjuCistancheväljavõte.

Tulemused: Pärast CLP-d rottidel vähenes normaalse soolalahuse rühma hepatotsüütide mitokondriaalne seisund III, P/O suhe ja respiratoorse kontrolli määr ning mitokondriaalse membraani naatrium-kaalium kaltsium-magneesium-ATPaasi aktiivsus oluliselt vähenes; kopsude märja ja kuiva massi suhe, alveolaarside läbilaskvusindeks, kopsukapillaaride läbilaskvus ja kopsukoe malondialdehüüd suurenesid oluliselt ning superoksiidi dismutaas vähenes oluliselt; tümotsüütide apoptoosi ja DNA fragmentatsiooni protsent suurenes oluliselt. AastalCistanchemanustamisrühmas paranesid ülaltoodud näitajad võrreldes tavalise soolalahuse rühmaga oluliselt, jõudes või lähenedes tehiskirurgia rühma tasemele.

Järeldus:Cistancheon hea kaitsva toimega ägedalemaks, kopsud jaharknääre vigastusseptilise šokiga rottidel. Selle mehhanismiks võib olla hapniku vabade radikaalide kahjustuste vähendamine kudedele, rakumembraanide funktsiooni parandamine ning organismi immuunfunktsiooni ja stressivõime parandamine.

Märksõnad:

taimeekstraktid/farmakoloogiaCistanchedeserticola/farmakoloogia sepsis/tüsistused šokk, sepsis/Hiina meditsiini teraapia rotid.

Selles uuringus täheldati mõjuCistancheägeda kopsuga septilise šoki mudelrottidel,maksning harknääre ja muude organite kahjustused, püüdes kaitsta raku funktsiooni läbimurdena, uurida selle mõju ja mehhanismi.Cistanchesepsise korral, et töötada välja tõhusad sepsise kaitsvad ravimid. Tehke kasulikke uuringuid.

Lisateabe saamiseks võtke ühendust:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanche tubulosa hoiab ära neeruhaiguse, proovi saamiseks klõpsake siin

1 . materjalid ja meetodid

1.1 Ravimid, reaktiivid ja instrumentravimid:

Naatriumpentobarbitaal (China National Pharmaceutical Group Shanghai Chemical Reagent Company), malondialdehüüdi (MDA) komplekt, superoksiidi dismutaasi (SOD) komplekt, ATPaasi reaktiiv (Nanjing Jianchengi bioloogilise tehnika instituut),CistancheHinnanud dr Wang Chizhi, Three Gorges University traditsioonilise hiina meditsiini osakonnast) Veekeetmine, Evans Blue. Instrument: Hitachi H-600 ülekandeelektronmikroskoop, voolutsütomeeter (EPICS, Beckman Coulter), 721 tüüpi spektrofotomeeter.

1.2 Cistanche deserticola ekstrakti valmistamine

VäljavõteCistanche\ valmistati leostusmeetodil. Võtke 200 g kuivaine massistCistanche, pane see keeduklaasi, lisa destilleeritud vesi vahekorras 1:1O, leota 30min kuni 1h, kuumuta elektripliidil 1h, filtreeri ja korda protsessi kaks korda. Kogutud filtraati kuumutati aurustumiseni ja kontsentreeriti kontsentratsioonini 1 g/ml, seejärel suleti ja säilitati külmikus 4 kraadi juures hilisemaks kasutamiseks.

1.3 Loomad ja septitseemia loomamudelid

Terved isased SD-rotid (pakkunud Huazhongi teadus- ja tehnoloogiaülikooli katseloomade keskus, kaaluga 200 25 og. Loomad jaotati juhuslikult kolme rühma, võltsoperatsiooni rühma (, z-8), tavaline soolalahuse kontrollrühm (, z-8) ja aCistanchedeserticolarühm (üks 8). Näidisoperatsiooni rühmale ja kontrollrühmale manustati sondiga tavalist soolalahust (10 ml/kg) ja manustamisrühmale 1 g/ml (manustamisannus 200 mg/kg)Cistanchesondiga, ld 2 korda ja toidetakse 15 päeva füsioloogiaga. Soolalahuse kontrollrühm jaCistanche deserticolarühm kasutas sepsise mudeli replikatsiooniks pimesoole ligeerimist ja perforatsiooni. Enne operatsiooni oli loomadel tasuta joogivesi ja 12-tunnine paastumine.

1.4 Roti maksa mitokondriaalse ATPaasi aktiivsuse ja maksa mitokondriaalse hingamisfunktsiooni mõõtmine

16 tundi pärast operatsiooni 6g rottimakspandi kiiresti {{0}}-kraadisesse eralduskeskkonda (250mmol sahharoosi, 2mmol etoksüetüülpiperasiini 2-etüülsulfoonhapet, 0,1mmol etüleendiamiintetraäädikhapet, pH 7.4), kasutades diferentsiaalkiirust Roti mitokondrid valmistati madala temperatuuriga tsentrifugaaleraldamisega. ATPaasi aktiivsuse mõõtmiseks kasutage fosfori määramise meetodit [2. Clarki hapnikuelektroodi meetodit [3] kasutati mitokondriaalse redoksreaktsiooni kõvera registreerimiseks JYD-IA lahustunud hapniku mõõturiga ning III ja IV etapi hingamissageduse, hingamise kontrollsageduse (RCR) ja fosfori-hapniku suhte ( ADlP/0) arvutati.

1.5 Roti kopsude histoloogia ja kopsufunktsiooni mõõtmine

16 tunni pärast avati rindkere ja võeti välja vasak kopsusagara. Pärast märgkaalu kaalumist küpsetati seda ahjus (80 kraadi, 20 tundi), kuni kaal oli konstantne, ja arvutati kuivkaal. Valgusisalduse jaoks arvutage kopsude läbilaskvuse indeks (alveolaarse loputusvedeliku valk/ga plasmavalk, LPI). Zhou jt poolt kasutusele võetud intravenoosse süstimise Evansi sinise meetodi kohaselt. [4], mõõdeti muutusi roti kopsuveresoonkonna läbilaskvuses (PVP). Malondialdehüüdi (MDA) aktiivsuse määramiseks roti kopsukoes kasutati tiobarbituurhappe (TBA) meetodit Ls. Ksantiinoksüdaasi meetodi kasutamine [6 SOD aktiivsuse määramiseks.

1.6 Harknääre kude

Füüsiline uurimine ja raku apoptoosi määra määramine Igas rühmas surmati 2 kuni 3 rotti vastaval ajal pärast operatsiooni, intaktne harknääre eraldati ja tehti rutiinsed parafiinilõigud, HE värviti ja vaadeldi valgusmikroskoobiga; 2.5 glutaaraldehüüdi fikseerimine, Tehke elektronmikroskoobi lõige ja jälgige seda transmissioonielektronmikroskoobiga. Teine tümotsüütide suspensiooni preparaat, apoptootilises tsoonis paiknevate rakkude arvu voolutsütomeetria tuvastamine, saate apoptootiliste rakkude protsendi. Vastavalt Burtoni jt. L7] meetodil (difenüülamiini meetod), tuvastab ja arvutab mikroplaadilugeja tümotsüütide genoomse DNA fragmentatsiooni protsendi.

1.7 Statistiline töötlemine

Katseandmed on väljendatud keskmisena ± standardhälbe ± s). SPSS-tarkvara teostab ühesuunalist dispersioon- ja korrelatsioonianalüüsi. P<0.05 indicates="" a="" statistical="">

2. Tulemus

2.1 Muutused maksa mitokondrite Ⅲ olekus, RCR ja P/O suhte kontrollrühmas

III seisundi hingamissagedus oli oluliselt madalam kui võltsoperatsiooni rühmal (P<0.01). the="" breathing="" rate="" of="" state="" iv="" was="" not="" significantly="" changed="" compared="" with="" that="" of="" the="" sham="" operation="" group.="" as="" a="" result,="" the="" rcr="" of="" the="" control="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" of="" the="" sham="" operation="" group=""><0.01). the="" rcr="" in="" the="">Cistancheravirühm oli lähemal fiktiivse operatsiooni rühmale. ADP/0 suhe kontrollrühmas vähenes ja Cistanche'i ravirühma suhe taastus. Võrreldes võltsoperatsiooni rühmaga oli oluline erinevus (P<>

2.2 Cistanche mõju mitokondriaalse ATPaasi aktiivsusele

Hepatotsüütide mitokondriaalse membraani kaltsium-ATPaasi, naatrium-kaalium-ATPaasi, magneesium-ATPaasi ja kaltsium-magneesium-ATPaasi aktiivsus kontrollrühmas oli oluliselt madalam kui võltsoperatsiooni rühmas. Ensüümide aktiivsusCistancheravirühmas olid oluliselt kõrgemad kui vastavas kontrollrühmas, jõudes fiktiivse operatsiooni rühma tasemele.

2.3 Cistanche mõju tümotsüütide apoptoosile

Voolutsütomeetria tulemused näitasid, et võrreldes võltsoperatsiooni rühmaga suurenes kontrollrühma tümotsüütide apoptoos pärast operatsiooni oluliselt, samas kuiCistanchedeserticola ekstrakt võib tõhusalt vähendada apoptoosi kiirust ja DNA fragmentatsiooni protsent oli sarnane voolutsütomeetria abil tuvastatule. Tulemused on põhimõtteliselt samad (tabel 4).

2.4 Cistanche toime tüümuse histoloogilistele muutustele

Tüümuse parafiinilõike vaatlus võltsoperatsiooni rühmas ei näidanud ilmseid patoloogilisi muutusi. Tümotsüüdid olid tihedalt jaotunud tüümuse ajukoores, tuum oli ümmargune, tumesinine värvunud ja vähem tsütoplasma; pärast medullale üleminekut muutus tuum järk-järgult suuremaks ja domineerivad heledamalt määrdunud Epiteeli retikulaarrakud. Kontrollrühmas koosnes loomade tüümuse ajukoor rakkudest hõredalt, lümfotsüüdid vähenesid ja makrofaagid suurenesid. Lokaalselt nähti fokaalset nekroosi ja hajutatud rakufragmente. Harknääre medulla rakud oluliselt ei vähenenud ja rakud paiknesid tihedamalt kui kortikaalne piirkond, moodustades nn kortikaalse-medullaarse inversiooni nähtuse. Loomade tümotsüütide fragmendidCistanche-manustatud rühmas vähenes oluliselt ning ka "koore ja pulbi inversiooni" nähtus paranes oluliselt.

Kontrollrühma elektronmikroskoopiline vaatlus näitas, et suurem osa raku mahust vähenes, raku pind kahanes, tekkis vill, kromatiin aglomeerunud, osa rakke olid poolkuu kujulised, tekkisid apoptootilised kehad, sagedased olid rakkude nekroos ja lüüs. AastalCistancheravirühmas vähenesid muutused rakkude morfoloogias oluliselt ning rakkude nekroosi ja lüüsi nähtus paranes oluliselt.

3. Arutelu

Mitme organi düsfunktsiooni sündroomid on septilise šoki hilises staadiumis pöördumatu seisundi ja kõrge suremuse peamine põhjus. Elundite funktsiooni kaitsmine on septilise šoki kõrge kliinilise suremuse vähendamisel väga oluline. Cistanche on meie riigi traditsiooniline Hiina taimne ravim. See avaldati esmakordselt ajakirjas "Shenlong Materia Medica". See on üks kuulsamaid traditsioonilisi Hiina ravimeid essentsi ja vere toitmiseks, neerude toitmiseks ja yangi tugevdamiseks. Kaasaegsed farmakoloogilised uuringud on näidanud, et see võib parandada organismi immuunfunktsiooni ja stressi, soodustada DNA sünteesi, seista vastu kiirgusele, seista vastu vananemisele, suurendada raku DNA sünteesi kiirust ja kaitsta koerakke. Peamised selles sisalduvad koostisosad on Cistanche polüsahhariid (cDPS) ja D-mannitool, mis võivad tõhusalt eemaldada vabu radikaale.Cistanchepolüsahhariidid võivad samuti soodustada T- ja B-lümfotsüütide proliferatsiooni ning võivad sünergistlikult stimuleerida hiire tümotsüütide proliferatsiooni ConA ja PHA-ga. See katse põhineb septilise šoki korral oluliste elutähtsate elundite funktsiooni parandamise ja kaitsmise põhipunktil ning ideel, et TCM tugevdab keha, kasutades objektiivseid ja tundlikke tuvastamismeetodeid, et jälgida septilise šoki mõju.CistancheⅢ osariigismaksmitokondrid septilise šoki rottidel, hingamiskontrolli kiirus (RCR), P / O suhe, membraani ATPaasi ja kopsude läbilaskvuse indeks, kopsuveresoonte läbilaskvus, kopsukoe MDA, SOD aktiivsus, tümotsüütide apoptoos. Eksperimentaalsed tulemused näitavad sedaCistanchevõib suurenedamaksmitokondriaalne RCR, P/O suhe, suurendamaksmitokondriaalne hingamisfunktsioon, kiirendab elektronide ülekannet mitokondriaalses hingamisahelas, suurendab oksüdatiivse fosforüülimise ja membraani ATPaasi aktiivsuse sidumise astet ning suurendab rakusisest ATP sünteesi. Cistanche'i manustamise rühmas vähenesid oluliselt kopsude läbilaskvuse indeks ja kopsuveresoonte läbilaskvus, kopsukoe malondialdehüüdi aktiivsus ja superoksiidi dismutaasi aktiivsus suurenes oluliselt. Arvatakse, et Cistanche võib oma antioksüdantse toime kaudu vähendada hapniku vabade radikaalide kahjustusi kopsukoe rakkudele ja omab head kopsukahjustuste kaitset. Septilise šoki korral võivad tümotsüüdid, eriti ebaküpsed T-lümfotsüüdid, suur hulk apoptoosi põhjustada küpsete lümfotsüütide vabanemise perifeersetesse lümfoidorganitesse vähenemist ja seejärel kahjustada otseselt või kaudselt organismi immuunfunktsiooni. Ebanormaalse tümotsüütide apoptoosi korrigeerimine septilise šoki korral on kasulik organismi immuunsuse parandamiseks. See eksperimentaalne uuring leidis, etCistancheekstrakt võib oluliselt parandada tümotsüütide apoptoosi ja sellel on märkimisväärne kaitsev toime septitseemiaga loomade tümotsüütidele. Lisaks suurendab see organismi immuunsust nakkusprotsessi ajal ja vähendab võõrtoksiinide kahjustusi olulistele organitele. Samuti leidsime, et ravimirühma vererõhk paranes oluliselt ja suremus vähenes oluliselt. Cistanche ja Cistanche suurendasid maksa- ja kopsurakkude funktsiooni ning vähendasid tümotsüütide apoptoosi. Sellele viitab märkimisväärne positiivne korrelatsioonCistanchevõib parandada organismi elutähtsate organite talitlust ja tugevdada organismi immuunsust, võib olla Cistanche'i oluline farmakoloogiline alus septilise šoki ravis.

Cistanchesellel on märkimisväärne kaitsev toime ägeda elundikahjustuse korral ja selle mehhanism võib olla: ① vastupanu membraani estri peroksüdatsioonile, suurendab membraani stabiilsust ja vähendab vabade radikaalide kahjustusi membraani struktuurile. ② Edendada koe nukleiinhappe sünteesi ja aeglustada nukleiinhappe lagunemist ja hävitamist, soodustada valgusünteesi ning kiirendada koerakkude paranemist ja regenereerimist. ③Tugevdada organismi immuunfunktsiooni ja vähendada patogeensete tegurite poolt põhjustatud organismikahjustusi. ④ Inhibeerib koerakkude liigset apoptoosi. ⑤Parandage organismi mikrotsirkulatsiooni ja tagage elutähtsate organite verevarustus.

Viited

[1] Jin Huiming, sepsise mudel pärast pimesoole ligeerimist ja perforatsiooni [J]. China Disease Journal of Physiology, 1990, 6(2):126.

[2]3 Wang Qian, Zhu Xiaofeng, Zhao Xilong. Kaasaegsed meditsiinilised katsemeetodid [M]. Põhja-Peking: People's Health Publishing House, l997:342.

[3] Wang Qian, Zhu Xiaofeng, Zhao Xilong. Kaasaegsed meditsiinilised katsemeetodid [M3. Põhja-Peking: People's Health Press, 1997: 508-510.

[4] Zhang Xiuming, Li Jianzhai, Wei Mingjing jt. Kaasaegne kliiniline biokeemiline uuring

[5]. Peking: People's Army Medical Press, 2001: 896-899.

[6] He Weijing, Li Wei, Bi Zheng jne. Apoptoosi tuvastamine leukeemiarakkudes Difenüülamiini meetod [J]. Shanghai Journal of Medical Testing, 2001, 16(3): 160.