Gam-COVID-vaktsiiniga vaktsineeritud isikute antikehareaktsioonide lahkamine viitab väljaspool RBD-d olevate epitoopide kaasamisele SARS-CoV-2 neutraliseerimisele

Abstraktne: Miljoneid inimesi on vaktsineeritud Gam-COVID-Vaciga, kuid indutseeritud antikehade täpseid spetsiifilisi omadusi ei ole täielikult uuritud. Plasma 12 varem mittesaanud ja 10 2019. aasta koronaviirushaigust (COVID{5}}) põdenud patsiendilt saadi enne ja pärast kahte Gam-COVID-Vac immuniseerimist. Antikehade reaktsioonivõimet plasmaproovides (n=44) ​​uuriti mikrokiibitud rekombinantsete volditud ja lahtivolditud raske ägeda respiratoorse sündroomi koroonaviiruse 2 (SARS-CoV-2) valkude ja 46 peptiidi paneelil. valgu (S) ja immunoglobuliin G (IgG) alamklassi ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsi (ELISA) abil. Gam-COVID-Vac-indutseeritud antikehade võimet inhibeerida retseptorit siduva domeeni (RBD) seondumist selle retseptori angiotensiini konverteeriva ensüümiga 2 (ACE2) uuriti molekulaarse interaktsiooni testiga (MIA). Antikehade viirust neutraliseerivat võimet uuriti Wuhan-Hu-1 ja Omicroni pseudotüüpi viiruse neutraliseerimise testiga (pVNT). Leidsime, et Gam-COVID-Vac vaktsineerimine indutseeris IgG1, kuid mitte teiste IgG alamklasside märkimisväärset suurenemist volditud S-i, spike-valgu subühiku 1 (S1), piigivalgu subühiku 2 (S2) ja RBD-ga võrreldaval viisil naiivsetel ja taastuvatel patsientidel. teemasid. Viiruse neutraliseerimine oli tugevas korrelatsioonis volditud RBD ja uue peptiidi (st peptiidi 12) suhtes spetsiifiliste vaktsineerimisest põhjustatud antikehadega. Peptiid 12 asus RBD lähedal S1 N-terminaalses osas ja võib potentsiaalselt olla seotud teravikvalgu fusioonieelse ja -järgse konformatsiooni üleminekuga. Kokkuvõttes indutseeris Gam-COVID-Vac vaktsineerimine S-spetsiifilisi IgG1 antikehi naiivsetel ja tervenevatel isikutel võrreldaval viisil. Lisaks RBD suhtes spetsiifilistele antikehadele seostati viiruse neutraliseerimisega ka RBD N-otsa lähedal asuva peptiidi vastu indutseeritud antikehi.

Märksõnad: SARS-CoV-2; COVID-19; Gam-COVID-Vac; epitoop; antikehad; viiruse neutraliseerimine; molekulaarse interaktsiooni analüüs; Omikron

cistanche toidulisandi eelised - suurendavad immuunsust

Cistanche Enhance Immunity toodete vaatamiseks klõpsake siin

【Küsi lisa】 E-post:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

1. Sissejuhatus

Pärast esimesi nakatumise juhtumeid raske ägeda respiratoorse sündroomiga koroonaviirus 2 (SARS-CoV-2) 2019. aasta lõpus Hiinas Wuhanis levis uudne koroonaviirushaigus (COVID-19) kiiresti kõikjale. maailmas ja kasvas üleilmseks pandeemiaks [1–4]. COVID-19 vaktsiinide kiiret arengut ja ülemaailmsete vaktsineerimisprogrammide kasutuselevõttu koos vähem patogeensete SARS-CoV-2 variantide ilmnemisega peetakse COVID{10}}seotud surmajuhtumite vähendamise olulisteks teguriteks. ja pandeemia tõsidus [1,5]. Esimesed kättesaadavaks tehtud vaktsiinid olid geneetilised vaktsiinid, mis põhinesid SARS-CoV-2 pinnavalku S kodeeriva geeni adenoviiruse poolt vahendatud ülekandel [6–8]. SARS-CoV-2 S-valk koosneb S1-subühikust, mis sisaldab retseptorit siduvat domeeni (RBD), mis kinnitub selle retseptoriga ACE2 inimese rakkudes ja S2-subühikust, mis tagab viiruse kinnitumise peremeesraku membraanile proteolüütilise lõhustamise teel. fusioonpeptiid (FP) viirusnakkuse ajal [9]. Teatud adenoviirusepõhistes vaktsiinides (nt COVID-19 Vaccine Janssen) geeniülekandeks kasutatavat S-geeni võib valgu stabiliseerimiseks ja selle lõhustumise mõjutamiseks modifitseerida, kuid teiste puhul see nii ei ole [10]. Inimese rakud, mis on nakatunud S-kodeerivat geeni sisaldavate adenoviirustega, toodavad erinevas koguses S-antigeeni, mis vabaneb ja esitleb II klassi peamise histo-ühilduvuskompleksi (MHC) poolt T-rakkudele, mille tulemuseks on CD{28}} T-rakkude abi. S-spetsiifiliste antikehade tootmiseks. Transfekteeritud rakkude poolt ekspresseeritud S-valku esitleb nakatunud raku pinnal ka MHC klass I ja see käivitab S-spetsiifiliste tsütotoksiliste CD8+ T-rakkude aktiveerimise, mis suudavad ära tunda S-antigeeni tootvaid rakke ja neid hävitada. Vaktsineerimise põhimõte, st S-kodeeriva geneetilise teabe sisestamine peremeesrakkudesse ja sellele järgnev S-antigeeni tootmine nakatunud rakkude poolt, on sarnane ribonukleiinhappe (mRNA) vaktsiinidega, kuigi geeniülekande tehnoloogia erineb adenoviirusest. -põhised vaktsiinid. Seega jäljendavad "geneetilised vaktsiinid" mingil määral loomulikku SARS-CoV{36}} nakkust. Viiruse neutraliseerimises osalevate vaktsineeritud isikute antikehade poolt äratuntavate epitoopide tuvastamine on ülioluline mitte ainult olemasolevate vaktsiinide toimemehhanismi mõistmiseks, vaid ka COVID-i vastase rafineeritud aktiivse vaktsineerimise ja passiivse immuniseerimise strateegiate väljatöötamiseks-19 [11 ,12]. Enamik praegustest vaktsiinidest on keskendunud S-spetsiifilise antikeha vastuse saavutamisele, pöörates erilist tähelepanu RBD-spetsiifiliste antikehade vastusele, sest on näha, et RBD-spetsiifilised antikehad on korrelatsioonis kõrge neutraliseeriva toimega SARS-CoV vastu-2 [ 13–15]. Siiski näitab iga uue probleemivariandi (VOC) omandatud mutatsioonide arv, kui oluline on tuvastada epitoobid, mis on konserveerunud lenduvate orgaaniliste ühendite hulgas, mille sihtmärgiks on neutraliseerivad antikehad, mis ei paikne mitte ainult veekogus, vaid ka väljaspool seda [16]. Tegelikult on uuringuid, mis näitavad neutraliseerivate epitoopide olemasolu väljaspool RBD-d, mida pärast immuniseerimist tuvastavad antikehad [17–20]. 2020. aastal sai vektoripõhine vaktsiin Gam-COVID-Vac, mida nimetatakse ka Sputnik-V-ks, kättesaadavaks kliinilises praktikas ja praegu on see heaks kiidetud kasutamiseks enam kui 70 riigis (https://sputnikvaccine.com/about-vaccine / (vaadatud 17. jaanuaril 2023)). Ressursi Our World In Data (OWID) andmetel sai Venemaal 79 miljonit inimest vähemalt ühe vaktsiinisüsti ja 72 miljonit on täielikult vaktsineeritud (https://ourworldindata.org/covid-vaccinations?country{62}} RUS (vaadatud 22. märtsil 2022)). Gam-COVID-Vac koosneb kahest vaktsiinitüübist, mis põhinevad kahel erineval inimese adenoviiruse vektoril (hAd26 ja hAd5), mis kannavad Wuhan-Hu-1 tüve SARS-CoV{{ S-valgu natiivset vormi. 73}}. Sputnik-V sisaldab kahte süsti, millest ühes on hAd26 ja teises hAd5 ja Sputnik valgusega, ainult hAd26-ga. Kaht erinevat adenoviiruse vektorit kasutatakse esimese ja teise immuniseerimise jaoks, et vähendada võimalust, et vaktsineeritud subjektid tekitavad S-valgu suhtes immuunsuse adenoviiruse vastu. Tegelikult piiravad adenoviiruse-spetsiifilised antikehad revaktsineerimise efektiivsust adenoviiruse vektori kandja neutraliseerimisega. Seetõttu viiakse 21. päeval pärast rAd26-ga vaktsiini esimese annuse manustamist läbi rAd5 vektoriga korduv antigeeni manustamine [8,21]. Vähesed uuringud on märkimisväärselt uurinud S- ja RBD-spetsiifiliste antikehade vastuseid ja viiruse neutraliseerimise aktiivsust Gam-COVID-Vac vaktsiinide seerumites [10, 22, 23]. On teatatud RBD-spetsiifiliste IgG antikehade suurenemisest kolm kuud pärast Gam-COVID-Vac manustamist ja on näidatud, et antikehad reageerivad ristreageerivad probleemsete alfa-, beeta-, delta- ja omikronivariantidega [24–26]. Gam-COVID-Vaci on võrreldud ka mitme teise litsentseeritud SARS-CoV-vastase vaktsiiniga, mis näitasid kõrget viiruse neutraliseerimist ja kõrget efektiivsust COVID-iga seotud suremuse vastu Sputnik-V puhul, kuigi need olid veidi halvemad. mõnede mRNA vaktsiinide puhul leiti viiruse neutraliseerimist [24]. Lõpuks on näidatud, et inimese immuunpuudulikkuse viirus-positiivsete (HIV+) retroviirusevastase ravi (ART-ravi) patsientide immuniseerimine Gam-COVID-Vac-ga näitab epidemioloogilist efektiivsust SARS-CoV algse metsiktüübi ja Delta variandi vastu. 113}} [27]. Seni ei ole aga üksikasjalikku analüüsi epitoobi tuvastamise kohta antikehade poolt Gam-COVID-Vac vaktsineeritud isikutel ning vaja on andmeid immunoglobuliini isotüübi ja IgG alamklassi vastuste mõistmiseks Gam-COVID-vaktsiiniga vaktsineeritud isikutel. Siin uurisime kahte Gam-COVID-Vac'iga vaktsineeritud isikute rühma, ühte, kellel oli varem olnud SARS-CoV{122}} infektsioon, ja teist rühma SARS-CoV{124}} varem mittesaanud isikuid. Tegime indutseeritud antikehade epitoobi spetsiifilisuse põhjaliku analüüsi, kasutades mikrokiibitud SARS-CoV{127}}tuletatud volditud ja voltimata valke ja peptiide, mis hõlmavad täielikku S-valku, sealhulgas RBD-d. Lisaks analüüsiti IgG alamklassi vastuseid. Meie uuring näitab, et Gam-COVID-Vac vaktsineeritud katsealused monteerivad RBD-spetsiifilisi antikehi, mis on võimelised blokeerima RBD-ACE2 interaktsiooni. Huvitaval kombel avastasime, et viiruse neutraliseerimine oli seotud ka antikehadega, mis olid suunatud väljaspool RBD-d asuva peptiidi vastu, mis võivad olla seotud spike-valgu pre-fusioonijärgse konformatsiooni üleminekuga.

cistanche tubulosa - parandab immuunsüsteemi

2. Tulemused

2.1. Gam-COVID-Vac-vaktsineeritud subjektide hulka kuuluvad COVID{5}} naiivsed ja taastuvad isikud

Tervenevad isikud olid nakatunud Wuhan-Hu-1 tüvega vastavalt selle levimuse ja järjestuse andmetele, mis saadi nakatumise ajal Moskva piirkonnas. Naiivsetel katsealustel puudusid COVID-19 sümptomid ja neil puudusid värbamise ajal SARS-CoV-2-spetsiifilised antikehad. Uuringus osalejad hõlmasid 15 naist ja 7 meest, kelle keskmine vanus oli 60 (st 25–70 aastat) (tabel 1).

Tabel 1. Uuritavate demograafilised, kliinilised ja seroloogilised omadused.

Plasmaproov võeti igalt katsealuselt ajahetkel 0 (st baasjoon) (joonis 1A), seejärel vaktsineeriti iga subjekt Sputnik-V-ga umbes 21-päevase intervalliga esimese ja teise katse vahel. süstimine (ajapunktid 1 ja 2). Ajapunktil 3 koguti teine ​​plasmaproov, et määrata vaktsiinist indutseeritud antikehavastused (joonis 1A). Katsealuseid jälgiti veel 120 päeva. 110. päeval pärast viimast vaktsineerimist oli ühel katsealusel (st subjektil 22) COVID-19, samas kui teistel ei ilmnenud COVID-19 sümptomeid (tabel 1).

Joonis 1. Uuringu ülesehitus ja SARS-CoV-2-spetsiifilised antikehavastused enne ja pärast Sputnik-V-ga vaktsineerimist. (A) Uuringu ülesehitus. Plasmaproovid saadi COVID-19-naiivsetelt (n=12) ja taastuvatelt isikutelt (n=10) ajahetkel 0 (alustase), seejärel said katsealused kaks Sputnik-V-d vaktsineerimised vastavalt ajapunktidel 1 ja 2 ning plasmaproov võeti ajahetkel 3 (st päeval 80–85 pärast esimest vaktsineerimist). (B) Nukleokapsiidispetsiifiliste IgG antikehade tasemed (y-telg: ISU) varem ravi mittesaanud ja taastuvatel isikutel (x-telg) algtasemel. Horisontaalne joon näitab positiivsuse piiri. (C) IgG antikehade tasemed (y-teljed: ISU), mis on spetsiifilised RBD, S, S1 ja S2 jaoks isikutel ajahetkel 0 ja 3 (x-teljed). (D) Vasakult paremale IgG1 , IgG2 , IgG3 ja IgG4 antikehade tasemed (y-teljed: optilise tiheduse OD väärtused) kuni S (ülemine osa) ja RBD (alumine osa) ajapunktides 0 ja 3 ( x-teljed). Näidatud on Wilcoxoni testiga määratud rühmadevahelised olulised erinevused: ** p < 0.01, *** p < 0,001, **** p < 0,0001, ns – mitteoluline.

2.2. Gam-COVID-Vac vaktsineerimine kutsub esile laiaulatuslikud IgG vastused S-le, sealhulgas S1, RBD ja S2

cistanche toidulisandi eelised - suurendavad immuunsust

Tegime üksikasjaliku analüüsi antikehade reaktsioonide kohta suure paneeli mikrokiibitud volditud ja voltimata SARS-CoV-2 valkude ja S-valku hõlmavate peptiidide suhtes SARS-CoV-2-naiivsetelt ja taastuvatelt isikutelt saadud plasmaproovides. pärast täielikku immuniseerimiskuuri Gam-COVID-Vaciga (joonis 1A, B; tabel 1). Kui võrrelda plasmaproove ajapunktist 0 ja ajapunktist 3 pärast vaktsineerimist, leiti IgG vastuste märkimisväärne esilekutsumine volditud, kuid mitte voltimata RBD, S, S1 ja S2 vastu (joonis 1C). Kolm kuud pärast vaktsineerimist ilmnes katsealustel RBD-spetsiifiliste IgG antikehade 21-kordne tõus (p < 0.{{20}}001) ja {{ 18}}-kordne S-spetsiifiliste IgG antikehade suurenemine (st ajahetk 0: mediaan 0,291, ajapunkt 3: mediaan 5,778) (p < 0,0001). S1 vastaste IgG antikehade arv suurenes 37- korda (p=0,0023) ja S2 vastaste IgG antikehade arv 28- korda (p=0,0094) (joonis 1C ). Vaktsineerimine Gam-COVID-Vaciga kutsus naiivsetel ja taastuvatel isikutel esile peamiselt IgG vastused volditud S-le, S1-le ja RBD-le (joonised 1C, S2 ja S3), mis näitab, et seda saab kasutada SARS-CoV-i võimendamiseks{46}} spetsiifilised antikehavastused ka taastuvatel isikutel. RBD, S ja S1 vastaste IgG antikehade märkimisväärset suurenemist täheldati naiivsetel ja taastuvatel isikutel (joonis S2) ning naiivsetel ja taastuvatel isikutel ei olnud ajahetkel 3 olulisi erinevusi IgG tasemete osas RBD, S, S1 ja S2 suhtes. (Joonis S3).

2.3. Gam-COVID-Vac vaktsineerimine kutsub esile peamiselt IgG1 alamklassi vastuse S-le ja RBD-le

On teatatud, et allergeenispetsiifiline immunoteraapia (AIT) kutsub esile peamiselt allergeenispetsiifilised IgG1 ja IgG4 vastused, mis erinevad mitte ainult nende efektorfunktsioonide poolest (IgG1 võib vahendada antikehast sõltuvat rakulist tsütotoksilisust (ADCC) ja komplemendi aktivatsiooni, samas kui IgG4-l need puuduvad efektorfunktsioonid), vaid ka nende kineetika osas (IgG1: kiire algus ja varajane langus: IgG4: aeglane algus, kuid püsiv tase) [28–30]. Seetõttu uurisime Sputnik-V-ga vaktsineeritud isikutel IgG alamklassi (st IgG1-IgG4) vastuseid S-le ja RBD-le. Joonis 1D näitab, et vaktsineerimine kutsus esile peaaegu eranditult IgG1 alamklassi vastuse S-le ja RBD-le. Pärast vaktsineerimist leiti S- ja RBD-spetsiifiliste IgG1 tasemete oluline tõus (vastavalt p=0,0002 ja p=0,0071). Siiski ei olnud võimalik tuvastada olulisi IgG2, IgG3 või IgG4 alamklassi vastuseid, mis oleksid spetsiifilised S ja RBD jaoks (joonis 1D).

2.4. Viirust neutraliseerivate antikehade ja RBD-ACE2 interaktsiooni inhibeerivate antikehade esilekutsumine Gam-COVID-Vac vaktsineerimisega

Viirust neutraliseerivate antikehade tuvastamiseks kasutasime pVNT testi, kus viirusesarnased osakesed pseudotüüpiti algse Wuhan-Hu-1 tüve S-valguga ja hiljuti kirjeldatud VOC Omicroniga. Wuhan Hu{4}} tüve neutraliseeriva toimega antikehi leiti kõigil peale ühel (st subjektil 22) 22-st isikust (joonis 2A, tabel 2), samas kui Omicroni neutraliseerivate antikehade tiitrid olid oluliselt madalamad (joonis 2B) ja leiti ainult 17 katsealusel 20-st (joonis 2A, tabel 2). Isikute 6, 7, 10, 11, 15 puhul asjakohast neutraliseerimist ei leitud (joonis 2A, tabel 2). Omicroni viiruse neutraliseerimise tiitrid olid 25 korda madalamad kui WT puhul (mediaan 141,9 ja 5,7 Wuhan-Hu-1 ja Omicroni puhul) (joonis 2B).

Joonis 2. Viirust neutraliseeriv aktiivsus plasmas 3 kuud pärast Sputnik-V vaktsineerimist ja seos IgG antikehade vastustega RBD ja S-st pärinevate peptiidide suhtes. (A) Viiruse neutraliseerimine (ID50) (y-telg) Wuhan-hu-1 tüve (roheline) ja Omicroni (oranž) vastu saadi naiivse (sinine) ja taastuva (punane) plasmaga. õppeained (x-teljed). (B) Viiruse neutraliseerimise võrdlus (y-telg: ID50, mis saadi testitud isikute plasma kohta, tulbad tähistavad mediaane kvartiilsete vahemikega (IQR) Wuhan Hu-1 (roheline) ja Omicron (oranž) Horisontaalne joon tähistab tulemusi, mis saadi terve, nakatumata kontrollsubjekti plasmaga (terve kontroll, HC). Olulised erinevused tüvede vahel määrati Mann-Whitney testiga: **** p < 0. {{30}}001. (C) RBD ja peptiidide lokaliseerimine korreleerus viiruse neutraliseerimisega skeemil S (S1, S2). (D) Korrelatsioonid viiruse neutraliseerimise tiitrite vahel Wuhan-Hu{19 }} (WT) või Omicron (y-teljed) ja IgG tasemed, mis on spetsiifilised RBD ja naastudest pärinevate peptiidide 12, 32 ja 46A jaoks (x-teljed: ISU). Sinised ja punased sümbolid tähistavad vastavalt naiivseid ja taastuvaid subjekte. Tärnid näitavad olulisi korrelatsioone mitteparameetrilise Spearmani testi järgi, * p < 0,05, ** p < 0,01, *** p < 0,001 **** p < 0,0001, ns=ei ole oluline.

Tabel 2. S-, S1-, S2- ja RBD-spetsiifiliste IgG tasemete võrdlus, mõõdetuna mikrokiibi abil koos ACE2-ga seondumise inhibeerimisega ja viiruse neutraliseerimise tiitritega (Wuhan-Hu-1, Omicron), mis on määratud plasma jaoks uuritud teemad. Kuumuse kaardistamine viidi läbi iga parameetri jaoks eraldi Exceli abil. Kõrgeimat taset peeti tumepunaseks ja madalaimaks valgeks.

Asjaolu, et kõigil peale ühe katsealuse (st subjekti 22) viirust neutraliseerivate antikehade hulk pärast vaktsineerimist suurenes, näitab, et need indutseeriti vaktsineerimisega (tabel 2). Uuritav 21 näitas juba RBD-ACE2 interaktsiooni tugevat blokeerimist MIA korral ja viiruse kõrget neutraliseerimist algtasemel (tabel 2). Nimelt olid Gam-COVID-Vac vaktsineeritud taastuvate patsientide plasmaproovid, kellel oli mõõdukas haigus (nr 1, 2, 17, 18, 21), kõrgemad viiruse neutraliseerimise tiitrid kui nendel taastuvatel isikutel, kellel oli kerge haigus (nr 22) või kellel puudusid sümptomid (#4, 5, 7, 9) (tabelid 1 ja 2). Peamine järeldus oli aga see, et RBD seondumise inhibeerimine ACE2-ga ja viiruse neutraliseerimine ei olnud alati seotud. Rohkem kui 25% RBD Wuhan Hu-1 ACE2-ga seondumise pärssimine ilmnes ainult 6 katsealusel, kellel oli vaktsineerimise tõttu inhibeeritud ka viiruse neutraliseerimise testi (st katsealused 1, 2, 3, 17, 18). ja 19) (tabel 2). Huvitaval kombel täheldati viirust neutraliseerivat aktiivsust (50% infektsioosne annus (ID50) > 100) 6 katsealuse puhul, kuigi nad ei inhibeerinud RBD seondumist ACE2-ga või inhibeerisid seda halvasti (tabel 2: katsealused 6, 10, 12, 13, 16, 20). .

2.5. Viiruse neutraliseerimine Gam-COVID-Vac'iga vaktsineeritud subjektidel on tugevas korrelatsioonis IgG vastustega RBD-le ja S-st tuletatud peptiidile 12

Nagu eelnevalt märgitud, näitas mitme Gam-COVID-Vac vaktsineeritud subjekti plasma (nt katsealustel 6, 10, 12, 13, 16, 20; tabel 2) viirust neutraliseerivat toimet, kuid ei inhibeerinud RBD-ACE2 interaktsiooni. Seetõttu analüüsisime IgG antikehade reaktiivsust S-valku hõlmavate peptiidide suhtes mikrokiibipõhise kiibi analüüsiga [13] (joonis S4 ja joonis 2C) ning korreleerisime peptiidispetsiifilisi IgG vastuseid Wuhan-Hu viiruse neutraliseerimisega.{19} } tüvi ja Omicron (joonis 2D). IgG vastused kolmele peptiidile (st peptiidid 12, 32, 46A), nagu IgG vastused volditud RBD-le, korreleerusid oluliselt Wuhan-Hu-1 tüve neutraliseerimisega (joonis 2C, D). Peptiid 12 paistis silma, kuna Gam-COVID Vac võimendas naiivsetel isikutel märkimisväärselt antikeha vastuseid voltimata peptiidile 12 (joonis S1), kuid mitte voltimata peptiididele 32 ja 46A (joonis 3A) ning korreleerus oluliselt ka Omicroni neutraliseerimisega (joonis 2D). ). Taastuvatel isikutel peptiidide 12, 32 või 46A puhul olulist võimendust ei täheldatud (joonis 3A). Peptiidi 12 järjestus on SARS-CoV-2 tüvede hulgas väga konserveerunud (joonis 4) ja asub S1-s RBD N-otsa lähedal ning tähistab seega piirkonda, mis võib olla oluline eel- S-valgu liitmisjärgsele konformatsioonile (joonis 3B).

Joonis 3. Keskmine IgG antikehade tase (y-teljed: ISU) S-st pärinevate peptiidide (P12, P32, P46A) suhtes varem vaktsineeritud ja taastunud isikutel ajapunktidel 0 ja 3 (x-telg) (A) . Näidatud on Wilcoxoni testiga määratud rühmadevahelised olulised erinevused: * p < 0.05, ns=ei ole oluline. (F) (B) Joonis 3. S-st pärinevate peptiidide (P12, P32, P46A) keskmised IgG antikehade tasemed (y-teljed: ISU) varem vaktsineerimata ja taastunud isikutel ajapunktidel 0 ja 3 (x -teljed) (A). Näidatud on Wilcoxoni testiga määratud rühmadevahelised olulised erinevused: * p < 0,05, ns=ei ole oluline. (B) Peptiidide 12, 32 ja 46A visualiseerimine PyMOL-iga genereeritud SARS-CoV-2 spike-valgu trimeeri pinnal (külgvaade, liitmiseelne konformatsioon). Peptiid 12 on S-trimeeri mudelis esile tõstetud punasega, peptiid 32 sinisega ja 46A oranžiga. Süsivesikud on näidatud helehallina.

Joonis 4. SARS-CoV-2 S-valgu Wuhan-Hu-1 (ülemine) ja Omicron (all) valgujärjestuse joondamine. RBD on värvitud helekollase värviga ja peptiidid 12, 22, 25, 32, 33, 46A ja 47 on alla joonitud. Wuhani S-valgu järjestus vastab WA1 isolaadile (GeneBank juurdepääsunumber: BCN86353.1), Omicroni S-valgu järjestus Omicron on klade GRA, põlvnemine B.1.1.529 BA.1 põhineb GISAID andmebaasil ( https://www.gisaid.org/ (kasutatud 15. märtsil 2022)). Aminohappeasendused on värvikoodiga vastavalt nende hüdropaatia- ja laenguomadustele (roosa=hüdrofoobne, roheline=neutraalne, helesinine=aluseline hüdrofiilne ja helepunane=happeline hüdrofiilne).

3. Arutelu

Vektoripõhine vaktsiin Gam-COVID-Vac, mida nimetatakse ka Sputnik-V-ks, oli üks esimesi SARS-CoV{5}} vaktsiine, mis sai kliinilises praktikas kasutamiseks kättesaadavaks. Siiski on suhteliselt vähe teavet COVID-i vastu vaktsineeritud isikute antikehareaktsioonide täpsete spetsiifiliste kohta-19. Selles uuringus analüüsisime üksikasjalikult antikehade vastuseid mikrokiibitud volditud ja voltimata SARS-CoV-2 valkude ja S-valku hõlmavate peptiidide suhtes SARS CoV-2-naiivsetelt ja taastuvatelt isikutelt saadud plasmaproovides pärast seda. täielik vaktsineerimiskuur Gam COVID-Vaciga. Gam-COVID-Vac indutseeris naiivsetel ja taastuvatel isikutel võrreldaval viisil peamiselt IgG1, kuid mitte muid IgG alamklassi vastuseid volditud S-le, S1-le, S2-le ja RBD-le, mis näitab, et seda saab kasutada SARS-CoV võimendamiseks.{19}} spetsiifilised antikehavastused ka taastuvatel isikutel. Sarnaselt teistele geneetilistele vaktsiinidele oli Gam-COVID-Vac-indutseeritud antikehavastus peamiselt IgG1 alamklassis, millel on lühem poolväärtusaeg võrreldes IgG4 alamklassi vastusega, mis on jätkusuutlikum. Näiteks spetsiifilised IgG4 alamklassi vastused on seotud pikaajalise kaitsega allergeenispetsiifilise immunoteraapia ajal, samas kui spetsiifilised IgG1 vastused tekivad kiiresti, kuid kaovad mõne kuu pärast [28–30]. Sellest tulenevalt on vaja sagedasi Gam-COVID-Vaci ja teiste geneetiliste vaktsiinide kordussüste, et hoida neutraliseerivate antikehade vastust kõrgel tasemel. Gam-COVID-Vac vaktsineerimine kutsub esile antikehareaktsiooni, mis jäljendab suurel määral seda, mis leiti pärast loomulikku nakatumist SARS-CoV-ga-2 [13]. Lisaks kuuluvad loomuliku infektsiooni järgsed antikehavastused peamiselt IgG1 alamklassi ja on suunatud volditud S, S1, S2 ja RBD vastu [13]. Meie uuringu uudne ja huvitav leid oli see, et mitme Gam-COVID-Vac vaktsineeritud isikute plasma (nt katsealustel 6, 10, 12, 13, 16, 20; tabel 2) näitas viirust neutraliseerivat toimet, kuid ei inhibeerinud RBD-ACE2 interaktsioon. Seetõttu analüüsisime IgG antikehade reaktiivsust täielikku S-valku hõlmavate peptiidide suhtes mikrokiibipõhise kiibi analüüsiga [13] (joonised 2D ja S4) ning korreleerisime peptiidispetsiifilisi IgG vastuseid Wuhan-Hu viiruse neutraliseerimisega.{62} } tüvi ja Omicron BA.1 (joonis 2D). IgG vastused kolmele peptiidile (st peptiidid 12, 32, 46A), nagu IgG vastused RBD-le, korreleerusid oluliselt Wuhan-Hu{69}} tüve neutraliseerimisega (joonis 2C, D). Kuid peptiid 12 oli ainulaadne, kuna vaktsineerimine suurendas märkimisväärselt antikehade vastuseid ainult peptiidile 12, kuid mitte peptiididele 32 ja 46A (joonis 3A) ning korreleerus oluliselt ka Omicroni neutraliseerimisega (joonis 2D). Vaktsiini poolt indutseeritud IgG vastuste võimendamine peptiidile 12 oli tagasihoidlik, kuid märkimisväärne varem mittesaanud isikutel ja üsna võrreldav S-le ja S1-le suunatud IgG antikehade võimendamisega. Siiski võivad eraldatud voldimata peptiidi vastased IgG antikehad (joonis S1) esindada ainult osa volditud valgus peptiidi 12 vastu suunatud antikehadest. Lisaks ei ole oluline mitte ainult antikehade tase, vaid ka aviidsus. Peptiidide 12 järjestus on Wuhan-Hu-1 tüve ja BA.1 Omicron lenduvate orgaaniliste ühendite hulgas väga konserveerunud (joonis 4) ning pärineb piirkonnast, mis võib olla oluline prefusioonijärgseks üleminekuks. S-valgu konformatsioon (joonis 3B). Veelgi enam, Omicroni uute mutantsete variantide (BA.1, BA.2, BA.4/5, BA.2.12.1, BA.2.75, BQ.1) võrdlus näitab, et peptiid 12 (284–313 aa. ) jääb aminohappejärjestuse osas muutumatuks, erinevalt näiteks peptiidist 32 (https://covariants.org/shared-mutations, (kasutatud 28. novembril 2022)). Eelkõige on kirjeldatud viirust neutraliseeriva võimega monoklonaalseid antikehi, mis on suunatud N-terminaalse domeeni (NTD) piirkonda, mille osaks on peptiid 12 [31] ja teatati, et ka teised vaktsiinid võivad esile kutsuda selle piirkonna vastu suunatud antikehavastuse. [18–20,32], mis näitab, et peptiidiga 12 määratletud piirkond võib olla oluline neutraliseerivate antikehade esilekutsumiseks. Seetõttu võib eeldada, et Gam-COVID-Vac vaktsineerimisega indutseeritud antikehad suudavad SARS-CoV{117}} neutraliseerida kahe mehhanismi abil, millest üks lihtsalt pärsib RBD-ACE2 interaktsiooni ja teine ​​sihib piirkonda, mis sisaldab S-peptiidi 12. valk, mis võib olla seotud struktuurimuutustega (st eelfusiooni üleminekuga S liitkonformatsiooniks). Meie uuringul on piirangud. Näiteks kasutasime pseudo-tüüpi lentiviirustel põhinevat neutraliseerimisanalüüsi, kuid need testid on laialdaselt kasutatavad ja usaldusväärsed [33]. Samuti piirab meie uuringut see, et meie mikrokiibil olevad peptiidid olid lahtivolditud ja seega võisid tuvastada ainult murdosa neutraliseerivatest antikehadest, mis tundsid ära voltimata peptiidid, samas kui veelgi suurem osa antikehadest võis olla seotud tuvastatud konformatsiooniliste epitoopidega. piirkond. Lisaks on meie uuringu piiranguks see, et analüüsisime ainult väikest hulka subjekte. Kuid meie uuring näitab selgelt, et erineva epitoobi spetsiifilisusega antikehad võivad kaasa aidata Gam COVID-Vac vaktsineerimise kaitsvale toimele. Lisaks näitab uuring vastust potentsiaalselt konserveerunud peptiidile, mida saab kasutada laialdaselt neutraliseerivate antikehade loomiseks.

Tistanche toidulisandi eelised - kuidas tugevdada immuunsüsteemi

4. Materjalid ja meetodid

4.1. Uuringu rahvastiku ja eetika avaldus

Terved isikud, kellel oli (n {0}}) või ilma (n=12) varasema SARS-CoV-2 infektsiooniga, kaasati uuringusse 2020. aasta detsembris riikliku uurimiskeskuse instituudis. Venemaa föderaalse meditsiinibioloogiaagentuuri immunoloogia (eetikanumber: #12-1, 29. detsember 2020). Kõik osalejad andsid kirjaliku teadliku nõusoleku. Eelmist SARS-CoV-2 nakatumist kinnitas kas varasem positiivne PCR-test ja COVID{10}} sümptomid või SARS-CoV-2-spetsiifilised antikehad, mis on suunatud nukleokapsiidi antigeenile ja/või RBD ja/või S antigeen, nagu on kirjeldatud [13]. Kõiki katsealuseid immuniseeriti intramuskulaarselt kahe Sputnik-V annusega (Gam-COVID-Vac, Biocard, Moskva, Venemaa) kolmenädalase intervalliga. Vereproovid võeti üks päev enne esimest vaktsineerimist (T0, joonis 1A) ja 80 kuni 85 päeva pärast esimest vaktsineerimist (T3, joonis 1A).

4.2. SARS-CoV-2-spetsiifiliste antikehareaktsioonide tuvastamine

Naise ja COVID{{0}} taastuvate isikute immunoglobuliinivastust hinnati plasmaproovides enne ja pärast immuniseerimist Sputnik-V-ga (joonis 1A). S-valku hõlmava SARS-CoV-2 valkude ja 46 peptiidi (25–30 meeri) spetsiifilist IgG-d mõõdeti 1:50 lahjendatud plasmaproovides mikrokiibi tehnoloogia abil nagu varem. kirjeldatud [13]. Mikrokiibil olevate sünteetiliste peptiidide aminohappejärjestused, aminohapete arv ja molekulmass on esitatud tabelis 3. Peptiidid 12 ja 32 ning Escherichia colis (E. coli) ekspresseeritud RBD (voldimata) ja Human Embryonic Kidney 293 (HEK293) rakkudes (volditud) on esitatud tsirkulaarse dikroismi (CD) spektrid (joonis S1). Peptiidid 12 ja 32 ei näidanud spetsiifilist sekundaarset struktuuri, nagu on määratud ringikujulise dikroismiga (CD), nagu on näidatud joonisel S1. Üksikasjalikult aktiveeriti epoksüraamiga ümbritsetud mikrokiipe (Paul Marienfeld GmbH & Co. KG, Lauda-Königshofen, Saksamaa) sisaldavad slaidid amiinireaktiivse kompleksse orgaanilise polümeeriga MCP-2 (Lucidant Polymers, Sunnyvale, CA) , USA), et hõlbustada valkude ja peptiidide seondumist. SARS-CoV-2 antigeenid/peptiidid määrati kolmes korduses kontsentratsiooniga 0,5–1 mg/ml lahuses (75 mM Na2HPO4, pH=8,4), kasutades SciFlexArrayer S12 (Scienion AG, Berliin, Saksamaa) [13]. Valkude ekspressiooni ja puhastamist ning peptiidide sünteesi kirjeldatakse artiklis [13]. IgG antikehade reaktiivsust mikrokiibitud antigeenide suhtes mõõdeti, pestes esmalt mikrokiipe 5 minutit fosfaatpuhverdatud soolalahusega 0,5% Tween 20-ga (PBST) ja kuivatades neid tsentrifuugimisega, kasutades Sigma 2–7 tsentrifuugi ja MTP-d.{45}} rootor (mõlemad Sigma Laborzentrifugen GmbH, Osterode am Harz, Saksamaa). Seejärel lisati 35 µl alikvoodid 1:50 lahjendatud plasmaproovidest (proovilahjendi, Thermofisher, Waltham, MA, USA) ja inkubeeriti 2 tundi 22 °C juures. Pärast järjekordset pesemisetappi kanti peale 30 µl sekundaarseid antikehi (DyLight 550 (Pierce, Rockford, IL, USA) märgistatud anti-inimese IgG (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA, USA)) ja inkubeeriti 30 minutit 22 °C juures. C RT. Seejärel kiipe pesti, kuivatati ja seejärel skaneeriti konfokaalse laserskanneriga (Tecan, Männedorf, Šveits). Kujutise analüüs viidi läbi MAPIX mikrokiibi kujutiste hankimise ja analüüsi tarkvaraga (Innopsys, Carbonne, Prantsusmaa) ning mõõdetud fluorestsentsühikute teisendamine ISAC standardühikuteks (ISU) viidi läbi vastavalt kirjeldusele [13]. Spetsiifiliste antikehade tasemeid väljendatakse ISAC standardühikutes (ISU). S- ja RBD-spetsiifiliste IgG1–4 antikehade vastuseid mõõdeti plasmaproovides (lahjendatud 1:50) duplikaatidena ELISA meetodil, nagu eelnevalt kirjeldatud [13] variatsiooniga<5% for their average values.

Tabel 3. Sünteetilised SARS-CoV-2 spike-valgust pärinevad peptiidid §.

4.3. Kaug-UV ringdikroismi (CD) spektrid

Peptiidide, P12 ja P32, samuti E. coli ja HEK293 rakkudes ekspresseeritud RBD puhul viidi CD analüüs läbi eelnevalt kirjeldatud Jasco J-180 spektropolarimeetriga (Japan Spectroscopic Co., Tokyo, Jaapan) [34]. Peptiidide ja valkude CD-spektrid (joonis S1) mõõdeti kontsentratsioonil 0,1 mg/ml 10 mM NaH2PO4-s (pH 8,0), mida kasutati antigeenide määramiseks.

4.4. Pseudoviirusepõhine viiruse neutraliseerimise test (PVT)

Viiruse neutraliseerimise aktiivsus plasmaproovides määrati pseudoviirusepõhise viiruse neutraliseerimise testiga, nagu eelnevalt kirjeldatud [35]. SARS-CoV-2 spike virus-like osakeste (VLP-de) tootmiseks transfekteeriti HEK293T rakke koos kolme plasmiidiga: lentiviiruse pakendamisplasmiid pCMV∆8.2R (Addgene, Teddington, UK), pUCHR-GFP ja pCAGGS-S∆19 plasmiid, mis kodeerib metsiktüüpi SARS-CoV-2 spike-valku (identne viite Wuhan-Hu-1 ja WA1 isolaatidega) või pCAGGS-S∆19-Om plasmiidi kodeerib SARS-CoV-2 Omicron spike-valku (lahke kingitus Andrei Gortšakovilt, Immunogeneetika labor, Molekulaar- ja Rakubioloogia Instituut, Venemaa Teaduste Akadeemia Siberi filiaal, Novosibirsk, Venemaa). Enne pVNT-s kasutamist tiitriti VLP-sid piirava lahjendusega ja inkubeeriti 4 päeva hACE{26}}transfekteeritud HEK293T rakkudega. Katses kasutamiseks valiti annus viirusosakesi, mis andsid 50% rohelist fluorestseeruvat valku (GFP) positiivseid rakke. pVNT puhul inaktiveeriti kõik plasmaproovid enne kasutamist kuumusega 30 minutit temperatuuril 56 ◦C. 4. päeval suspendeeriti nakatamisjärgsed rakud uuesti ja GFP-positiivsete rakkude protsent mõõdeti voolutsütomeetria abil. ID50 väärtused arvutati sigmoidkõvera (GraphPad Prism 9.2.0 tarkvara, Sigmoidal, 4PL) abil, mis rekonstrueeriti neutraliseerimise protsendi järgi erinevate näidatud plasmakontsentratsioonide juures.

4.5. Molecular Interaction Assay (MIA)

Et tuvastada COVID{{0}} taastuvate või varem mittesaanud isikute plasmaproovide võimet (tabel 1) enne ja pärast Sputnik-V immuniseerimist inhibeerida 50 ng/ml RBD-hu-1 ACE2 retseptoriga viidi läbi molekulaarse interaktsiooni test (MIA), nagu on kirjeldatud [13,36–39]. Selle testiga saab mõõta märgistatud RBD inhibeerimist ELISA plaadiga seotud ACE2 suhtes antikehade poolt või muu ühendiga RBD-ACE2 interaktsiooni inhibeerimist [38]. Lühidalt, rekombinantne ACE-2 (GenScript, Piscataway, NJ, USA) kaeti (2 µg/ml) üleöö NUNC Maxisorb 96 süvendiga plaatidele (Thermofisher). Seejärel viidi läbi kolm pesutsüklit pesupuhvriga ja seejärel blokeeriti plaadid 3 tunniks toatemperatuuril blokeerimispuhvriga. Seerumiproovid lahjendati 1:2 PBS-s, 0,05% Tween 20-s, 1% BSA-s ja eelinkubeeriti 2 tundi 50 ng His-märgistatud rekombinantse RBD-ga (GenScript). Seejärel lisati ACE{30}} sisaldavatele plaatidele 3 tunniks eelinkubeeritud seerumiproovid ning plaate pesti ja inkubeeriti üleöö 1:1000 lahjendatud hiire monoklonaalse anti-His-märgise antikehaga (Dianova, Hamburg, Saksamaa). . Pärast 3 pesemisetappi lisati 2 tunniks 1:1000 lahjendatud HRP-seotud hiirevastane IgG1 antikeha (GE Healthcare, Chicago, IL, USA) ja tuvastamine viidi läbi ABTS-iga. Seotud RBD-le vastavad keskmised optilise tiheduse (OD) väärtused mõõdeti lainepikkustel 405 nm ja 492 nm (võrdlus) TECAN Infinite F5 ELISA lugejas koos integreeritud tarkvaraga i-control 2.0 (Tecan Group Ltd., Männedorf, Šveits). Igast tulemusest lahutati puhvri kontroll (ülekate ilma RBDta). Määramised viidi läbi kahes korduses ja tulemused on näidatud keskmiste väärtustena variatsiooniga<5%.

Tistanche toidulisandi eelised - kuidas tugevdada immuunsüsteemi

4.6. Peptiidide visualiseerimine spike-valgu struktuuris

SARS-CoV-2 spike-valgu pinnaesitus loodi PyMOL-is (PyMOL Molecular Graphics System, versioon 2.5.0a0, Schrödinger, LLC, New York, NY, USA) esialgse eelarveprojekti kande 6XR8 kohta.

4.7. Statistiline analüüs

Statistiline analüüs viidi läbi GraphPad Prismi (versioon 9.2.{2}} GraphPad Software, La Jolla California) abil. Kahe või mitme rühma võrdlemiseks kasutati Wilcoxoni testi (joonised 1C, D ja 3A), Mann-Whitney testi (joonised 2B ja S3) ja Friedmani testi (joonis S2). p < 0.05 peeti statistiliselt oluliseks. Kahe rühma vaheline korrelatsioon määrati Spearmani järgu testiga (joonis 2D). Normaliseeritud mittelineaarne regressioon viidi läbi GraphPad Prism tarkvara (Sigmoidal 4PL) abil. Andmed on esitatud mediaanina ± IQR. Tärnid tähistavad olulisi erinevusi rühmade vahel, * p < 0.05, ** p < 0,01, *** p < 0,001, **** p < 0,0001, ns – pole oluline.

5. Kokkuvõtted

Kokkuvõtlikult võib öelda, et meie uuring on esimene, mis uurib põhjalikult Gam-COVID-Vac poolt indutseeritud antikehade epitoobi ja IgG alamklassi spetsiifilisust ning paljastab erinevad mehhanismid Gam-COVID-Vac-indutseeritud viiruse neutraliseerimiseks antikehade poolt. Eelkõige saime tõendeid selle kohta, et S1 N-terminaalses osas RBD lähedal, kuid sellest väljaspool paikneva peptiidi (st peptiidi 12) vastu suunatud antikehad on seotud viiruse neutraliseerimisega. Peptiidspetsiifiliste antikehade potentsiaalne viirust neutraliseeriv aktiivsus võib olla tingitud nende võimest häirida spike-valgu liitmiseelse konformatsiooni üleminekut liitumisjärgsele konformatsioonile. Soovitame kaaluda peptiidiga 12 määratletud piirkonna lisamist immunogeensesse vormi vaktsiinidesse, et kutsuda esile selle epitoobipiirkonna vastased antikehad ja testida selliste vaktsiinide poolt indutseeritud antikehi viiruse neutraliseerimiseks. Juhul, kui vaktsiinide viiruse neutraliseerimist saab tõhustada, võib immunogeense peptiidi 12 epitoobi kaasamine COVID-19 vaktsiinide tõhusust parandada. Lisaks võib passiivseks immuniseerimiseks kaaluda antikehade väljatöötamist peptiidi 12-määratletud epitoobi vastu. Kuna peptiidi 12-määratletud epitoop on praegu teadaolevates SARS-CoV-2 variantides konserveeritud, pakuvad peptiidile suunatud vaktsiinid ja antikehad 12. mai ristkaitset SARS-CoV-2 variantide eest. Seega pakume uudseid teadmisi, mis võivad olla abiks uudsete aktiivsete ja passiivsete COVID-i vastu vaktsineerimisstrateegiate väljatöötamisel-19.

Viited

1. Rodriguez-Coira, J.; Sokolowska, M. SARS-CoV-2 kandidaatvaktsiinid – koostis, toimemehhanismid ja kliinilise arengu etapid. Allergia 2021, 76, 1922–1924. [CrossRef] [PubMed]

2. Sharma, A.; Ahmad, FI; Lal, SK COVID-19: ülevaade uudse koroonaviiruse haiguse arengust, edasikandmisest, tuvastamisest, tõrjest ja ennetamisest. Viirused 2021, 13, 202. [CrossRef] [PubMed]

3. Arshad, B.; Iqbal, T.; Bhatti, KP Review – ülevaade off-label ravistrateegiatest kerge ja raske COVID-19 infektsiooni vastu. Pak. J. Pharm. Sci. 2021, 34, 1469–1484. [CrossRef] [PubMed]

4. Zaman, W.; Saqib, S.; Ullah, F. COVID-19: Fülogeneetilised lähenemisviisid võivad aidata leida ressursse looduslikuks raviks. Phytother. Res. 2020, 34, 2783–2785. [CrossRef]

5. Rubio-Casillas, A.; Redwan, EM; Uversky, VN SARS-CoV-2 Vahelduv virulentsus loodusliku valiku tulemusena. COVID 2022, 2, 1089–1101. [CrossRef]

6. Logunov, DY; Dolžikova, IV; Zubkova, OV rAd26 ja rAd5 vektoril põhineva heteroloogse prime-boost COVID-19 vaktsiini ohutus ja immunogeensus kahes ravimvormis: kaks avatud, mitte-randomiseeritud 1./2. faasi uuringut Venemaalt. Lancet 2020, 396, 887–897, parandus Lancet 2021, 397, 98. [CrossRef]

7. Folegatti, PM; Ewer, KJ; Aley, PK SARS-CoV-2 vastase ChAdOx1 nCoV-19 vaktsiini ohutus ja immunogeensus: esialgne aruanne 1./2. faasi, ühepimeda, randomiseeritud kontrollitud uuringu kohta. Lancet 2020, 396, 467–478, parandus Lancet 2020, 396, 1884. [CrossRef]

8. Logunov, DY; Dolžikova, IV; Shchebljakov, DV. rAd26 ja rAd5 vektoril põhineva heteroloogse prime-boost COVID-19 vaktsiini ohutus ja efektiivsus: Venemaal läbiviidud randomiseeritud kontrollitud 3. faasi uuringu vaheanalüüs. Lancet 2021, 397, 671–681, parandus Lancet 2021, 397, 670. [CrossRef]

9. Jackson, CB; Farzan, M.; Chen, B.; Choe, H. SARS-CoV-2 rakkudesse sisenemise mehhanismid. Nat. Rev Mol. Cell Biol. 2022, 23, 3–20. [CrossRef]

10. Heinz, FX; Stiasny, K. Praeguste COVID{1}} vaktsiinide eristavad tunnused: teadaolevad ja tundmatud antigeeni esitlus ja toimeviisid. NPJ Vaccines 2021, 6, 104. [CrossRef]

11. Lim, HX; Masomian, M.; Khalid, K.; Kumar, AU; MacAry, PA; Poh, CL B-raku epitoopide tuvastamine SARS-CoV-2 Spike Proteiini vastaste neutraliseerivate antikehade esilekutsumiseks bioinformaatika ja monoklonaalsete antikehade sihtimise kaudu. Int. J. Mol. Sci. 2022, 23, 4341. [CrossRef]

12. Moroy, G.; Tuffery, P. Peptiidipõhised strateegiad SARS-CoV vastu-2 Rünnak: uuendatud in Silico perspektiiv. Esiosa. Ravim. Discov. 2022, 2, 899477. [CrossRef]

13. Gattinger, P.; Niespodziana, K.; Stiasny, K. SARS-CoV-2 neutraliseerimiseks on vaja antikehi konformatsioonilise retseptorit siduva domeeni epitoopide vastu. Allergia 2022, 77, 230–242. [CrossRef]

14. Niu, L.; Wittrock, KN; Clabaugh, GC SARS-CoV vastaste neutraliseerivate antikehade struktuurne maastik-2 retseptori sidumisdomeen. Esiosa. Immunol. 2021, 12, 647934. [CrossRef]

15. Shan, S.; Mok, CK; Zhang, S. Tugev ja kaitsev inimese neutraliseeriv antikeha SARS-CoV-2 variantide vastu. Esiosa. Immunol. 2021, 12, 766821. [CrossRef]

16. Bajpai, P.; Singh, V.; Chandele, A. SARS-CoV antikehade laiaulatuslik neutraliseerimine-2 Annab uudse ülevaate variantide ja teiste inimese koroonaviiruste neutraliseerimisest. Esiosa. Kamber. Nakata. Microbiol. 2022, 12, 928279. [CrossRef]

17. Vishwakarma, P.; Yadav, N.; Rizvi, ZA Raske äge respiratoorse sündroomi koroonaviiruse 2 piigivalgul põhinevad uudsed epitoobid kutsuvad esile tugevaid immuunvastuseid in vivo ja inhibeerivad viiruse replikatsiooni in vitro. Esiosa. Immunol. 2021, 12, 613045. [CrossRef]

18. Garrett, ME; Galloway, JG; Wolf, C. SARS-CoV-2 antikehade vastuste põhjalik iseloomustus Spike'i valk leiab lisaks kerge infektsiooni korral täiendavaid vaktsiinist põhjustatud epitoope. eLife 2022, 11, e73490. [CrossRef]

19. Peng, M.; Dou, X.; Zhang, X. Immunosignatuuride abil tuvastatud kaitsvad antigeensed epitoobid pärast kolme inaktiveeritud SARS-CoV-2 vaktsiini annust. Esiosa. Immunol. 2022, 13, 938378. [CrossRef]

20. Polvere, I.; Parrella, A.; Zerillo, L. Humoraalne immuunvastuse mitmekesisus erinevatele COVID{1}} vaktsiinidele: mõju rohelise passi poliitikale. Esiosa. Immunol. 2022, 13, 833085. [CrossRef]

21. Tukhvatulin, AI; Dolžikova, IV; Shchebljakov, DV Avatud, mitte-randomiseeritud, 1./2. faasi uuring üheannuselise vaktsiini "Sputnik Light" ohutuse, talutavuse ja immunogeensuse kohta koronaviiruse nakkuse ennetamiseks tervetel täiskasvanutel. Lancet Reg. Tervis Eur. 2021, 11, 100241. [CrossRef] [PubMed]

22. Gonzalez, S.; Olszevicki, S.; Salazar, M. Gam-COVID-Vac (Sputnik V) esimese komponendi efektiivsus SARS-CoV-2 kinnitatud nakkuste, haiglaravi ja suremuse vähendamisel 60–79-aastastel patsientidel: retrospektiivne kohortuuring Argentinas. EClinicalMedicine 2021, 40, 101126. [CrossRef] [PubMed]

23. Guštšin, VA; Dolžikova, IV; Shchetinin, AM neutraliseeriv aktiivsus Sputnik V-vaktsineeritud inimeste seerumite vastu muret tekitavate variantide vastu (VOC: B.1.1.7, B.1.351, P.1, B.1.617.2, B.1.617.3) ja Moskva endeemilise SARSi vastu -CoV-2 variandid. Vaktsiinid 2021, 9, 779. [CrossRef] [PubMed]

25. Voko, Z.; Suudlus, Z.; Surjan, G. Viie SARS-CoV-2 vaktsiini üleriigiline tõhusus Ungaris – HUN-VE uuring. Clin. Microbiol. Nakata. 2022, 28, 398–404. [CrossRef] [PubMed]

25. Jeewandara, C.; Fernando, S.; Pushpakumara, PD Immuunvastused pärast Sputnik V (Gam-COVID-Vac) esimest annust. Sci. Rep. 2022, 12, 1727. [CrossRef]

26. Ikegame, S.; Siddiquey, MNA; Hung, CT Sputnik V vaktsiiniseerumi neutraliseeriv toime SARS-CoV-2 variantide vastu. Nat. Commun. 2021, 12, 4598. [CrossRef]

27. Guštšin, VA; Tsyganova, EV; Ogarkova, DA Sputnik V kaitse COVID-i eest-19 HIV-nakkusega inimestel, kes saavad retroviirusevastast ravi. EClinicalMedicine 2022, 46, 101360. [CrossRef]

28. Shamji, MH; Valenta, R.; Jardetzky, T. Allergeenispetsiifilise IgE, IgG ja IgA roll allergilise haiguse korral. Allergia 2021, 76, 3627–3641. [CrossRef]

29. Eckl-Dorna, J.; Weber, M.; Stanek, V. Kaks aastat kestnud ravi rekombinantse rohu õietolmu allergiavaktsiiniga BM32 kutsub esile pidevalt suureneva allergeenispetsiifilise IgG4 vastuse. EBioMedicine 2019, 50, 421–432. [CrossRef]

30. Shamji, MH; Kappen, JH; Akdis, M. Biomarkerid allergeeni immunoteraapia kliinilise efektiivsuse jälgimiseks allergilise rinokonjunktiviidi ja allergilise astma korral: EAACI seisukoht. Allergia 2017, 72, 1156–1173. [CrossRef]

31. Tortorici, MA; Beltramello, M.; Lempp, FA Ultrapotentsed inimese antikehad kaitsevad SARS-CoV-2 nakatumise eest mitme mehhanismi kaudu. Teadus 2020, 370, 950–957. [CrossRef]

32. Cia, G.; Pucci, F.; Rooman, M. Avatud või suletud SARS-CoV-2 Spike Protein Conformatsioonidele suunatud antikehade neutraliseeriva aktiivsuse analüüs. Int. J. Mol. Sci. 2022, 23, 2078. [CrossRef]

33. Meng, B.; Datir, R.; Choi, J. SARS-CoV-2 spike N-terminaalne domeen moduleerib TMPRSS2-sõltuvat viiruse sisenemist ja fusogeensust. Cell Rep. 2022, 40, 111220. [CrossRef]

34. Resch, Y.; Weghofer, M.; Seiberler, S. Der p 10 molekulaarne iseloomustus: diagnostiline marker laia sensibiliseerimiseks kodutolmulesta allergia korral. Clin. Exp. Allergia 2011, 41, 1468–1477. [CrossRef]

35. Byazrova, M.; Yusubalieva, G.; Spiridonova, A. Ringleva SARS-CoV-2-spetsiifiliste antikehade sekretsiooni ja mälu B-rakkude tekke muster ägeda COVID-ga patsientidel-19. Clin. Tõlk. Immunol. 2021, 10, e1245. [CrossRef]

36. Gattinger, P.; Borochova, K.; Dorofeeva, Y. Antikehad kerge COVID-i-19 järgselt taastuvate patsientide seerumis ei takista alati viiruse retseptoritega seondumist. Allergia 2021, 76, 878–883. [CrossRef]

37. Gattinger, P.; Tulaeva, I.; Borochova, K. Omicron: SARS-CoV-2 tõelist muret tekitav variant. Allergia 2022, 77, 1616–1620. [CrossRef]

38. Gattinger, P.; Ohradanova-Repic, A.; Valenta, R. SARS-CoV-2 neutraliseerivaid antikehi mõõtvate testide tähtsus, rakendused ja omadused. Int. J. Mol. Sci. 2023, 24, 5352. [CrossRef]

39. Gattinger, P.; Kratzer, B.; Tulaeva, I.; Niespodziana, K.; Ohradanova-Repic, A.; Gebetsberger, L.; Borochova, K.; Garner-Spitzer, E.; Trapin, D.; Hofer, G.; et al. Vaktsiin, mis põhineb volditud retseptorit siduval domeeni-PreS sulandvalgul, mis võib tekitada steriliseeriva immuunsuse SARS-CoV-2 variantide suhtes. Allergia 2022, 77, 2431–2445. [CrossRef]