Tsütokiini geenide seosed hommikuse ja õhtuse väsimuse enesehinnangutega onkoloogilistel patsientidel ja nende peres hooldajatel

Abstraktne

Eesmärgid:Kasvatatud metsikultcistanche(cWG), kutsusRoucongrong, on kliiniliselt kasutatud patsientidel, kellel onkrooniline väsimusKoreas. Selle mõju kohta on vähe teadaacistanchetoodetud destilleeritud (lenduvad) komponendidaurustumise ajal. Hiljuti tuvastasime esmakordselt ühecWG destilleeritud ekstrakti põhikomponent, panaxydol, kasutades massispektromeetriat. Siiski funktsionaalnecWG destilleeritud ekstrakti ja panaksidooli omadused säilivadtabamatu. Seetõttu hinnati käesolevas uuringuscWG destilleeritud ekstrakti või panaksidooli mõju treeningule-indutseeritudväsimusrottidel.

Meetodid: Väsimuspõhjustas sunnitud ujumineja liikumatusaega analüüsiti meestelSprague-Dawley rotid. Loomad said intraperitoneaalseltkas vehiik, cWG destilleeritud ekstrakt või panaxydol 10 min enne sundujumise algusttest (FST) üks kord päevas 5 päeva jooksul. Pärast FST 5. päevalanalüüsisime ka väsimusega seotud biokeemilisi tasemeid, sealhulgasvere uurea lämmastik (BUN), laktaathape (LAC),ja laktaatdehüdrogenaas (LDH) seerumis ja tasemetesglükogeeni sisaldus maksas ja tallalihastes.

Tulemused:Sunnitud ujumisaeg cWG-s destilleeritudekstraktiga (0,6 ml/kg) töödeldud rühmas oli märkimisväärseltkauem kui kontrollrühmal 4. päeval ja5. Panaksüdooliga (0,1 ja 0,25 mg/kg) töödeldud rühmadnäitas märkimisväärselt paremat jõudlustsundujumine, võrreldes kontrollrühmaga. Lisaks aaastal leiti seerumi LDH taseme oluline languspanaksüdooliga ravitud rühmas, samas kui muutusi ei esinenudseerumi BUN ja LAC ning glükogeeni tasemetesmaks või tallalihas.

Järeldus:Käesolev uuring näitas cWG-ddestilleeritud ekstraktil ja selle aktiivsel komponendil panaxydol onfunktsioonväsimuse vastane.  

Cistanche väsimusvastase funktsiooni kohta lisateabe saamiseks klõpsake siin

1. Sissejuhatus

Väsimuson äärmise füüsilise või vaimse väsimuse tunneja kurnatus kui üks levinumaid füsioloogilisireaktsioonid, mis tulenevad tugevast stressist, raskest füüsilisest võivaimne töö. Väsimus võib olla seotud paljude häiretegaja seda põhjustab peamiselt energiaallikate ammenduminemis hõlmavad lõpptoodete kogunemistväsimus, maksa glükogeeni tarbimise vähenemine [1].Eelkõige on füüsiline väsimus mööduv võimetuslihas, et säilitada optimaalne füüsiline jõudlus ja onintensiivse füüsilise koormuse põhjustatud põhjustab sageli asooritusvõime halvenemine, mis põhjustab lihaste vähenemistjõudu ja vastupidavust ning vaimsetes funktsioonides [2].cistancheon tuntud ravimtaim ja on olnudkasutatakse traditsiooniliselt kasvajavastase ravimina [3], antioksüdandina[4], põletikuvastane [5] ja hüpoglükeemilineomadused [6]. parandamiseks on kasutatud ka cistanche'ifüüsiline tugevus, eriti kannatanud patsientideltugevast väsimusest [7, 8] ja vähiga seotud väsimusest [9].Tistanche komponendid, näiteks tsitanche polüsahhariididvõi Panaxist eraldatud väikese molekuliga oligopeptiididcistancheon näidanud väsimusevastast toimet ja mõjuväsimuse füsioloogilistel biomarkeritel [10] ja toodetakseVäsimusevastane toime, suurendades sundujumistaeg ja laktaatdehüdrogenaasi (LDH) suurendamineja glükogeeni tase hiirte maksas [11].Tsüstanšide tüübina on korea metsikud tsitanšid (SanSam,mountain cistanche) on looduslikult kasvanud sügavates mägedesja Koreas üsna haruldane ja kallis. Et matkidalooduslikult kasvatatud tsistanše, kultiveeritakse sageli tsitanšesügavates mägedes ja klassifitseeritakse SanYangSami (cistanchekasvatatakse mägedes) ja SanYangSanSam (metsikcistanchekasvatatakse mägedes või kultiveeritakse metsikus tsistansis,cWG), olenevalt cistanche seemnete tüüpidest. Toores võicWG destilleeritud ekstraktid (nimetatakse SanYangSanSamiks)teatati, et neil on kasvajavastane või vähivastane toime [12,13]. Eriti on olnud cWG destilleeritud ekstraktidkasutatakse kliiniliselt süstimiseks nõelravi punktidesseKorea [13] ja on näidanud, et see vähendab ka põletikkulipopolüsahhariidi (LPS) indutseeritud rotimudel [14] ja oksüdatiivnerasvunud rottide stress [15]. Kuigi eelmine eksperimentaalneuuringud on toetanud cWG tõhusustdestilleeritud ekstrakt, cWG aktiivsed komponendid destilleeritudekstrakt ja nende bioloogiline toime on suures osas teadmata.Hiljuti vedelikkromatograafia-tandemmassi abilspektromeetria ja kvadrupoolne ortogonaalne kiirendusLennuaja massispektromeetria abil leidsime, et cWG destilleeritudekstrakt sisaldas peamise komponendina panaksidoolija panaksüdooli tase oli umbes 30 korda kõrgem kuimägedes kasvatatud cistanche (SanYangSam)[16]. Kuna cWG destilleeritud ekstrakti on kliiniliselt kasutatud pikka aegaVähihaigete füüsilise energia suurendamiseksväsimuse all, cWG destilleeritud ekstrakt ja selle peaminekomponent panaksüdool võib mängida rolli väsimuse vähendamisel.Seega oli käesolev uuring mõeldud väsimuse vähendamisekscWG destilleeritud ekstrakti ja selle toimeaine omadusedkomponent panaxydol rottidel sooritades sunnitudujumistesti ja väsimusega seotud biomarkerite mõõtmist[17] nagu vere uurea lämmastik (BUN), piimhape (LAC),LDH ja glükogeen rottide maksas ja lihastes.

2. Materjalid ja meetodid

2.1. Loomad

Isased Sprague-Dawley rotid osteti firmalt Daehan animal Co. (Soul, Lõuna-Korea) kaaluga 270-320 gja neid hoiti rühmades, kus on 2-3 looma puuri kohta atoatemperatuur 22 ± 2 kraadi 12-tunnise valguse-pimeduse tsükligaja sai ad libitum toitu ja vett. Kõik eksperimentaalsedprotseduurid viidi läbi vastavalt riiklikuleTerviseinstituutide juhised labori hooldamiseks ja kasutamiseksloomad ja institutsioonilise looma poolt heaks kiidetudHooldus- ja kasutuskomitee Daegu Haany Ülikoolis jaDaejeoni ülikool.

2.2. Eksperimentaalsed kujundused

Selle testimiseks viidi läbi kaks eraldi katsethüpotees, et cWG väsimusvastased omadused on destilleeritudekstrakt ja selle aktiivne komponent panaxydol rottidel pooltsundujumise testi sooritamine ja väsimuse mõõtmineseotud biomarkerid nagu BUN, LAC, LDH jaglükogeen rottide maksas ja lihastes. Esimene katsetusviidi läbi, et teha kindlaks, kas cWG destilleeritud ekstraktmõjutab sunnitud ujumisaega ja glükogeeni taset maksasja tallalihas. Seega jagati rotid kaheks eksperimentaalseksrühmad: soolalahusega töödeldud rühm (n=6) ja cWG disharitud ekstraktiga töödeldud rühm (n=6). Teine katseviidi läbi, et näha, kas panaksüdool on aktiivne komponentcWG, muudab sunnitud ujumisaega, biokeemilinetasemed nagu BUN, LAC ja LDH seerumis ja taseglükogeen maksas ja tallalihastes. Selle katse jaoksrotid jagati kolme katserühma: vehiikul(n {0}}), panaksidooliga (0,1 mg/kg) töödeldud (n=5) ja panaxigaydol (0,25 mg/kg) saanud (n=5) rühmad.

2.3. Narkootikumid ja kemikaalid

Kultiveeritud metsik tsitanche (cWG, ChonBangNongSan Inc.,Kasutati Chungnam, Korea), umbes 8–10 aastat vana. Thepuutumata cWG pesti, kuivatati ja purustati ülipeenekspulber (osakeste keskmine suurus 7,5 μm), kasutades turboveskit. Destilleeritudväljavõte cWC-st (SanYangSanSam, 20 ml/viaal)tehti Korea farmakopunktuuri uurimisinstituudis(KPRI) nagu eelnevalt kirjeldatud [16] 16]. Voucheri näidised(#CWG-2015-03-DE) on hoiule antudKPRI. Lühidalt öeldes pesti metsikut tsistanši destilleeritudvett prahi ja saasteainete eemaldamiseks. Neli grammikuivatatud metsik tsitanche segati 250 ml destilleeritud veegaümmarguses kolvis ja kuumutatakse suletud ahela kaudu temperatuuril 80 °Cekstraheerimissüsteem (KyungSeo Machinery Com., Incheon,Korea) (joonis 1A). 24-tunnise kuumutamise ajal aur kondenseerusjahutades suletud ahela süsteemis ja cWG destilleeritudsaadi umbes 200 ml ekstrakti. Panadol oliostetud firmalt Chengdu Biopurify Phytochemicals Ltd(Chengdu, Hiina). BUN, LDH, LAC ja glükogeeni tasemäärati IDEXX VetTest Chemistry ana abillüzer (IDEXX Laboratories, Westbrook, Maine, USA). muudkemikaalid osteti firmalt Sigma Aldrich (St. Louis,MO, USA). Panaxydol lahustati 100% etanoolis jaseejärel lahjendatakse enne kasutamist soolalahuseks. Vehicle, cWG destilleeritud ekstrakt({0}},6 ml/kg) või panaksüdooli (0,1 ja 0,25 mg/kg üks kord päevas)päeval) manustati intraperitoneaalselt (ip) 10 minutit ennesunnitud ujumise testi (FST) alguseni 5 päeva jooksul.

2.4. Sunnitud ujumise test

Jõu ujumise test (FST) viidi läbi vastavalt kirjelduselevarem [1] . Lühidalt, rotid paigutati individuaalseltveega täidetud plastnõusse (30 x 30 x 80 cm).(25 ± 5 kraadi) 60 cm sügavusele. Klaasist riba (10 protsenti roti kehastkaal) kinnitati roti saba proksimaalsele osale.Ujumisaeg koguti kirja, kui füüsilineroti jõud oli ammendunud ja ta ei suutnud tõustapinnale kauem kui 10 sekundit.

2.5. Vere biokeemiline mõõtmineparameetrid

Pärast viimast FST-d 5. päeval koguti vereproovid (500 µl).isofluraananesteesia all kõhuaordist(2 protsenti) ja viidi hepariniseeritud tuubidesse. Seerumsaadi tsentrifuugimisel kiirusel 3000 pööret minutis 4 kraadi juures 10 kraadimin ja hoiti kuni edasise analüüsini temperatuuril -80 kraadi. Tasemedseerumi BUN, LAC ja LDH määrati 562 nm juureskasutades kuiva slaidi keemiaanalüsaatorit (VetTest 8008 seerumkeemianalüsaator ja VetTest reaktiivi objektiklaasid, IDEXX LaboratoriesInc, Westbrook,. Maine, USA) vastavalttootja juhised.

2.6. Kudede glükogeenisisalduse mõõtmine

Rotid surmati 4–5-protsendilise isofluraananesteesia allpärast vereproovide võtmist (2 protsenti isofluraani).maksa ja talla lihaskoed. Glükogeeni tase maksasmeetodi abil mõõdeti tallalihaseideelnevalt kirjeldatud [18] Lühidalt, pärast ohverdamistverevõtt, maks ja tallalihased lõigati kiiresti lahtivälja, külmutatakse vedelas lämmastikus ja hoitakse temperatuuril -80 kraadikuni kasutamiseni. Iga proovi (20 mg koe kohta) keedeti 2,0-sM HCl 100 kraadi juures 1 tund ja homogeniseeriti. Pärast tsentrifuugimist, proovid neutraliseeriti 2.0 M NaOH jatsentrifuugiti uuesti kiirusel 3000 p/min 10 minutit. Glükogeeni tasemäärati 562 nm juures, kasutades keemiaanalüsaatoritVetTest 8008.

2.7. Statistiline analüüs

Andmed saadi kasutades SigmaStat 3 tarkvara (Systat Software, Inc, San Jose, CA, USA) ja esitleti kuikeskmine ± SEM (keskmise standardviga). Statistiline analüüsanalüüsiti t-testi, ühe- või kahesuunalise kordusanalüüsigadispersioon (ANOVA), millele järgneb post hoc test kasutadesTukey meetod. Statistilist olulisust arvestati kell(*) P< 0.05 ja (**)P< 0.01. 

3. Tulemused

3.1. CWG destilleeritud ekstrakti mõjusunnitud ujumise test rottidel

CWG destilleeritud ekstrakti mõju sunnitud ujumiselerottide aeg on näidatud joonisel 1. Sunnitud ujuminecWG destilleeritud ekstraktiga töödeldud rühma aeg 4. päevalja 5 oli oluliselt pikem kui soolalahuse kontrollrühm (joonis 1B, korduv t-test; raviF(1,20) = 10.384, P  = 0.023; aegaF(4,20) = 20.165, P< 0.001;=""> F(4,20) =  2.609, P = 0.066).  3.2. CWG destilleeritud ekstrakti mõju glükogeenilerottide maksas või tallalihastes.Et hinnata, kas cWG destilleeritud ekstrakti mõjusundujumisel seostatakse glükogeeni tasemega,glükogeeni taset hinnati maksas ja tallalihastesrottidel pärast FST-d päeval 5. Nagu on näidatud joonistel 2A ja 2B,cWG destilleeritud ekstrakt ei mõjutanud glükogeeni tasetmaks (joonis 2A: t- test,F(1,10) = 0.056, P= 0.82) või tallalihas

3.3. Panaksydooli mõju sunnitudujumiskatse rottidel

 Testisime panaxydooli, polüatsetüleenkommi, toimetaastal leitud naelPanax cistanche, FST kohta rottidel. Nagu näidatudjoonisel 3B panaksüdooliga töödeldud rühmad (0,1 või 0,25 mg/kg)võrreldes oluliselt suurenenud sunnitud ujumisaegvehiikli kontrollrühmale 4. ja 5. päeval (kahesuunaline, raviment F(2,32){{0}},997, P < 0,001;="" aeg="">(4,32)= 120.756, P <0.001; interaktsioon F(8,32) = 1.531, P = 0.186). 3.4. Panaxydol mõju seerumi biorottide keemilised parameetridVäsimusega seotud seerumi biomarkerite tase, BUN, LAC,ja LDH mõõdeti pärast viimast FST-d. Panaxydol oliei mõjuta seerumi BUN taset (joonis 4A; ühesuunaline, F(2,12) =  0.5842, P=0.0573) või LAC (joonis 4B; ühesuunaline, F(2,12) = 0.6488,  P=0.5401). Kuid LDH tase tõusis sunniviisiliseltujumine, mida maius oluliselt nõrgendaspanaksüdooliga annuses 0,1 mg/kg 5 päeva jooksul (joonis fig.4C; ühesuunaline, F(2,10) {{0}},65, P=0,003, P < 0,01 vs. sõiduk).

3.5. Panaksüdooli mõju glükogeenisisalduseletelk maksa- ja tallalihaskoes pärastsunnitud ujumineMõõtsime ka glükogeeni taset maksas ja merikeelesus rottide lihastes pärast FST 5. päeval. Nagu on näidatud joonisel fig.Nagu on näidatud joonistel fig 5A ja 5B, ei avaldanud panaksüdool olulist mõju tasemeleglükogeen maksas (joonis 5A: ühesuunaline, F(2,12) = 0.256, P = 0.78)  või tallalihas (joonis 5B: ühesuunaline, F(2,12) = 0.715, P = 0.51) võrreldes vehiikli kontrollrühmaga.

4. Arutelu

cistanche'il on erinevad farmatseutilised omadused, näitekskasvajavastane [3], antioksüdant [4] ja põletikuvastane toime[5] ja kahjustatud mälu taastamine [19]. Panaxidol, tsistanche'ist eraldatud ploatsetüleeni ühend,on näidanud potentsiaalset vähivastast ainet [20], kaitsetmõju neurodegeneratsioonile kortikaalsetes neuronites [21] jaa jäljendavad närvikasvufaktori toimet PC 12 rakkudes[22] . Mitmed uuringud on samuti tõestanud selle tõhusustcistanchevõi cistanche peamised aktiivsed komponendid, naguginsenosiidid Rb1 ja väikese molekuliga oligopeptiididtreeningväsimus või vähiga seotud väsimus [11, 23, 24]. Enamikvarasemates uuringutes on kasutatud ekstrakti tsitanche vesilahustekstraheerimise/kondenseerimise teel kogutud toorekstraktidetapid: tsistanši juured leotatakse vees või metanoolis,filtreeritakse ja kondenseeritakse, eemaldades all oleva liigse veetolmuimejad. Teisest küljest on efektide kohta vähe teadatsistanche destilleeritud (lenduvate) komponentide toodetud kesaurustumist.Käesolev uuring näitab meile teadaolevalt esimest korda, mis destilleeritud ekstraktist tsitanche'ist ja selle aktiivsest komponendistpanaksidoolil oli roti FST-s väsimusvastane toimemudel. Väsimus on üks levinumaid füsioloogilisireaktsioonid tekkisid treeningust, depressioonist, vananemisest, vähist, hulgiskleroos ja Parkinsoni tõbi. FST onkõige kehtivam väsimusvastase toime hindamise mudelpaljudest toiduainetest või taimsetest ühenditest [2, 25-27] 25-27]. Kooskõlas eelmise uuringuga [28] 28] on meie tulemusedselgus, et cWG destilleeritud ekstrakt suurendas sunnitudujumisaeg võrreldes soolalahuse kontrollrühmaga. Kuulutusessuurenes ka cWG põhikomponent panaksidoolsunnitud ujumisaeg. See tulemus näitabmillega võib seostada cistanche’i väsimusevastast toimetpanaksidooli aktiivsus sunnitud ujumisest põhjustatudväsimus.Treeningutest tingitud väsimus, näiteks sundujuminehinnata biokeemiliste näitajatega, sealhulgas BUN,LAC ja LDH tase veres. Seega mõõtsime tasetseerumi BUN, LAC ja LDH rottidel, kellele manustati sunnitudujumine ja panaxydol ravi. Vere uurea lämmastikon valkude ja aminohapete ainevahetusprodukt, mida kasutatakseoluline näitaja treeningvastupidavuse hindamiselja väsimusseisund [29]. Laktaathapet peetakse peamisekslihaste väsimuse näitaja. Intensiivne treening viib kogunemisenilaktaadi sisaldus, mille tulemusena langeb vere pHja lihased ning sellest tulenev väsimuse teke [30] 30].Laktaatdehüdrogenaas on lihaskahjustuse indeks jakatalüüsib püruvaadi ja NADH plussi vastastikust konversiooniL-laktaat lihasrakkudes. Meie praeguses uuringus korratiravi panaksüdooliga annuses 0,1 mg/kg oluliseltnõrgendas seerumi LDH suurenenud taset (peamineensüüm laktaadi tootmiseks) sunnitud ujumisrottidelsamas kui seerumi BUN või LAC taset ei muudetud. Seevõib viidata sundujumise parema jõudluse saavutamiseleon seotud LDH-ga. Siiski on nõutavuurige, kuidas panaksüdool võib vähendada LDH aktiivsust jalihaste kahjustus. Glükogeen, mis on peamine säilitusvormglükoosisisaldus maksas või lihastes on samuti väsimuse indeks [31]31]. Maksa glükogeen täiendab tarbimistvere glükoosisisaldus vere glükoosisisalduse säilitamiseks füsioloogilises seisundisvahemik ja väsimus tekib siis, kui maksa glükogeeni on enamastitarbitud [32, 33]. Meie praeguses uuringus on glükogeeni tasecWG- või panaxydol-ravi saanud rottide maks või tallalihasolid muutmata. Kokkuvõttes viitavad need leiud sellelepanaxydol võib vähendada füüsilist väsimust, reguleeridesseerumi LDH tase sunnitud ujumisrottidel.Teise võimaliku mehhanismina onväsimuse vastanemõjupanaksüdool võib reguleerida oksüdatiivse stressi nõrgenemise kaudu.On teada, et oksüdatiivne stress tekib pärast FST javõib hiljem põhjustada patoloogiat ja kliinilisi sümptomeidväsimusest [34-36]. Bao L et al., on näidanud, et cistancheparandas mitokondriaalseid funktsioone ja pärsiboksüdatiivne stress hiirte skeletilihastes pärast FST-dmis võib olla selle tegevusteeväsimuse vastanemõjusid[11]. Seetõttu võib panaksüdoolil olla väsimusevastane toimevähendades oksüdatiivse stressi näitajate taset nagusuperoksiiddismutaasina või malondialdehüüdina sunnitudujumismudel. Täiendavad uuringud tuleks läbi viiakinnitada selle aluseks olevad mehhanismidväsimuse vastanemõjupanaxydol sunnitud ujumisest põhjustatud väsimuse korral.

5. Järeldus

Käesolevas uuringus on sunnitud ujumisaeg cWG disharitud ekstraktiga töödeldud rühm oli oluliselt pikem kuikontrollrühma oma 4. ja 5. päeval. Panaxydol-ravirühmad näitasid oluliselt paremat tulemuslikkustsunnitud ujumine, võrreldes kontrolliga. Lisaks märkimisväärneseerumi LDH taseme langus leiti panadoolis-ravitud rühm, samas kui levseerumi BUN ja LAC ning glükogeeni sisaldus maksas või tallaslihasesse. Võttes need tulemused, destilleeritud ekstrakti kultiveeritudmetsik tsistanš ja selle aktiivne komponent panaxydol toodavadväsimusevastane toime, vähendades LDH aktiivsust rottidelsunnitud ujumismudel. mõned pentatsüklilised triterpenoidid.