Flavonoidide ekstraheerimisprotsessi optimeerimine Panax notoginseng varrelehest ning antioksüdantide aktiivsuse ja selle mõju uuring hiire melanoomi B16 rakkudele
Mar 22, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com
Chun-Yan Dai 1,2,3,4,†, Peng-Fei Liu 1,2,3,4,†, Pei-Ran Liao 1,2,3,4, Yuan Qu 1,2,3,4 ID ,Cheng-Xiao Wang 1,2,3,4, Ye Yang 1,2,3,4,* ja Xiu-Ming Cui 1,2,3,4,*
Abstraktne:ThePanax notoginseng(P. notoginseng) varreleht on rikasflavonoidid. Kuid kuna puuduvad uuringud flavonoidide ekstraheerimisprotsessi ja P. notoginsengstem lehe funktsionaalse arengu kohta, visatakse need osad põllumajandusjäätmetena ära. Seetõttu kavatseme selles uuringus optimeerida ekstraheerimisprotsessi ja arendada P. notoginseng varre lehtede ekstraktide nahka valgendavaid funktsioone. P. notoginseng flavonoidi (SLPF) varre ja lehtede ekstraheerimisprotsess on optimeeritud Box-Behnkeni disaini (BBD) ja reageerimispinna metoodika (RSM) alusel. SLPF-i optimaalsed ekstraheerimistingimused on järgmised: ekstraheerimisaeg, etanooli kontsentratsioon, naatriumdodetsüülsulfaadi (SDS) sisaldus ja vedela materjali suhe (v/w, mis on 52 min, 48,7%, 1,9% ja 20% :1. Optimaalsete ekstraheerimistingimuste korral on keskmine SLPF-i kogusisaldus 2,10 protsenti.antioksüdanthiire B16 rakkude melaniini aktiivsus ja ladestumise vastane toimeP. notoginsenguuritakse varrelehtede ekstrakte. Tulemused näitavad, et redutseeriva aktiivsuse EC50 väärtused, 2,2-difenüül-1-pikrüülhüdrasüüli (DPPH) vabade radikaalide püüdmise aktiivsus, superoksiidianiooni eemaldamise võime ja 2,{{5} }asino-bis-3-etüülbenstiasoliin-6-sulfoonhappe (ABTS) vabade radikaalide eemaldamise võime on vastavalt 7,212, 2,893, 2,949 ja 0,855 mg/ml. Türosinaasi ja melaniini sünteesi ekstraktide IC50 väärtused on vastavalt 0,045 ja 0,046 mg/ml. Seetõttu ei suurenda selles uuringus saadud SLPF-i optimaalne töötlemistehnoloogia mitte ainult selle kasutusmäära, vaid vähendab ka materjalikulusid. P. notoginseng varrelehtede ekstrakte võib valmistada toidu- või ilutoodetena.
Märksõnad: antioksüdant; flavonoidid; hiire melanoomi B16 rakud; Panax notoginseng; pindaktiivset ainet
1. Sissejuhatus
Panax notoginseng(P. notoginseng) (Burk.) FH Chen on mitmeaastane taim, mis kuulub sugukonda Araliaceae. Sellel on maa-alused juured, mis kuivatatakse ravimina kasutamiseks ja mis lisati Hiina farmakopöasse. P. notoginseng varrelehel on samasugune raviväärtus kui juurel. Pents'ao Kang Mu's on teatatud, et varreleht sobib luumurdude, verevalumite ja verejooksude raviks. Kaasaegsed uuringud on samuti kinnitanud, et P. notoginseng varrelehtedel on veresüsteemi, südame-veresoonkonna, närvisüsteemi ja metaboolse süsteemi jaoks sarnane raviväärtus [1]. Levinud P. notoginseng varrelehest valmistatud toodete hulka kuuluvad QiyeShen'an Pian, Jiang Zhi Ling kapslid ja Qiye Shen'an kapslid.
Kuigi P. notoginseng'i varreleht on selle kõrge toiteväärtuse ja kõrgete meditsiiniliste väärtuste tõttu ametlikult sertifitseeritud toiduna (DBS 53/024-2017) [2], on nende taimeosade toiduks reklaamimisele pööratud vähe tähelepanu. Esialgne statistika on näidanud, et P. notoginseng'i varrelehe aastane toodang on 1500 tonni ja sellest kogusest kasutatakse ära vaid 5 protsenti [3]. Seetõttu võib P. notoginseng'i varrelehtede ressursside arendamise soodustamine oluliselt suurendadaP. notoginsengkeskkonnareostust, suurendades seeläbi sotsiaal-majanduslikku kasu.
Kõige tõhusamad P. notoginseng'i varrelehest ekstraheeritud toimeained on kogusaponiinid ja flavonoidglükosiidid, mis moodustavad vastavalt 4–6 protsenti ja 0,54–2,49 protsenti [4]. Flavonoidid on olulised, kuna nende täpselt määratletud farmakoloogilised tegevused, mis hõlmavadantioksüdant, maksa kaitsev ja kasvajavastane toime [5]. Kõige sagedamini kasutatavad orgaanilised lahustid flavonoidide ekstraheerimiseks on etanool ja metanool [6]. Näiteks Uysal et al. [7] metanooli abil edukalt ekstraheeriti flavonoide sisaldavad komponendid Cotoneaster integerrimusest. Wang et al. [8] kasutas ekstraheerimiseks 70 protsenti etanooliflavonoididacer truncatum'i lehtedest. Ekstraheerimise kiirus oli suurem ning ekstrakti oli kergem kontsentreerida ja kuivatada. Arvatakse, et etanooliga ekstraheerimine on parem ekstraheerimismeetod. Praegu on ainult Zhang et al. [4,9] ekstraheeriti SLPF-i amikrolaineahjus leeliselise vee meetodil ja kuumkastmismeetodil. Ultrahelimeetod võib aga muuta ekstrakti jätkuvalt šokeerivaks, aidata kaasa lahustunud ainete difusioonile, lühendada oluliselt ekstraheerimisaega ning parandada kogu flavonoidide ekstraheerimiskiirust ja toorainete kasutamist, mis on flavonoidide ekstraheerimiseks suhteliselt uus meetod [6]. Seetõttu on SLPF-i tõhus ekstraheerimine ja selle toote kosmeetikas ja tervishoius kasutamise uuringud selle tööstuse edasise arengu jaoks väga olulised.
Pindaktiivseid aineid kasutatakse laialdaselt abiainetena aktiivsete komponentide ekstraheerimisel; need suurendavad ekstraheerimise efektiivsust, lühendavad ekstraheerimisaega ja suurendavad vees lahustumatute aktiivsete koostisosade lahustuvust vees. Lisaks vähendab pindaktiivsete ainete kasutamine orgaaniliste lahustite kasutamist ja nende maksumust, optimeerib sihtkomponente ekstraheerimisprotsessi ajal ja parandab toimeainete puhtust. Enamik ekstraheerimiseks kasutatavatest pindaktiivsetest ainetest on mittetoksilised. Naatriumdodetsüülsulfaat (SDS), Triton X-100, Tween-20, Tween-80 ja Span-20 on tavaliselt kasutatavad pindaktiivsed ained, mis võivad märkimisväärselt suurendada rakkude ekstraheerimiskiirust.flavonoidid[10–13]. Reaktsioonipinna metoodikat (RSM) on laialdaselt kasutatud protsesside optimeerimiseks ja Box-Behnkeni disain (BBD) on üks vastuse pinna kujundamise meetodite statistiline mudel. BBD esindab sõltumatut ruutkujulist kujundust, mis ei sisalda manustatud faktoriaalset või murdosafaktorilist kujundust. Võrreldes teiste projekteerimismeetoditega on BBD-d lihtne kujundada ja statistiliselt analüüsida; Seetõttu kasutatakse seda laialdaselt flavonoidide ekstraheerimisprotsessi optimeerimisel [14]. Näiteks optimeeriti mikrolainetega ekstraheerimise muutujaid RSM-i abil, et kogu flavonoidide sisaldust optimaalselt taastada [15]. Lisaks saavutasid mõned teadlased paremad tehnoloogilised tingimused flavoonide ekstraheerimiseks Flos Populi [16] ja Coriandrum sativum seemnetest [17], kasutades RSM-i aBBD-d.
Varem on flavonoidide ekstraheerimismeetodeid kirjeldatud [18], kuid seni pole SLPF-i ekstraheerimisprotsessi veel välja kujunenud. Selles uuringus optimeeriti SLPF-i ultraheli abil ekstraheerimisprotsessi, kasutades BBD-d kogusisalduse määramiseks.flavonoididindeksina esimest korda. Sõltumatud muutujad, st pindaktiivse aine tüüp, annus, vedela materjali suhe (maht/mass, ekstraheerimisaeg ja etanooli kontsentratsioon) on seatud üksikute teguritena, mistõttu käesoleva töö eesmärgid olid (i) optimeerida ultraheli- kogu flavonoidide ekstraheerimise protsess; (ii) hinnataantioksüdantekstraktide aktiivsus; (iii) hinnata ekstraktide mõju B16 rakkude aktiivsusele; (iv) uurida SLPF-i kasutamise teostatavust kosmeetikas, tervishoiutoodetes ja farmaatsiatööstuses; (v) anda viide selle väljatöötamiseksP. notoginsengvarreleheekstrakti tooteid ja vähendada põllumajandusjäätmete sattumist keskkonda.
antioksüdantne cistanche
2. Tulemused ja arutelu
2.1. Pindaktiivsete ainete liikide mõju SLPF-i ekstraheerimise efektiivsusele
Lisaks kontrollrühmale (CK) (pindaktiivsete ainete asemel vesi) kasutati teistes rühmades erinevat tüüpi pindaktiivseid aineid (1,5 protsenti), säilitades vedela materjali suhte (maht/mass 15:1 ja kasutades 40-protsendilist etanooli kontsentratsiooni). Flavonoidide kogusisaldus määrati pärast ultraheliga ekstraheerimist temperatuuril 80 ◦C 40 minutit, tulemused on näidatud joonisel 1. On näha, et pindaktiivsed ained parandasid SLPF-i ekstraheerimistõhusust ja kõrgeima sisalduse saadi SDS-i abil. SDS-i kasutav sisaldus suurenes CK-ga võrreldes 12,8 protsenti. Seetõttu kasutati järgmistes katsetes SDS-i.
2.2. Ühe teguri katsed
Tulemus näitas, et SLPF-i ekstraheerimise efektiivsus suurenes koos ekstraheerimisaja pikenemisega; vedela materjali suhte (v/w) 15:1 juures oli etanooli kontsentratsioon 40 protsenti ja SDS-i sisaldus 1,5 protsenti (joonis 2A). SLPF-i sisalduse saagis vähenes, kui ekstraheerimisaeg oli pikem kui 40 min. SLPF-i sisaldus suurenes, kui etanooli kontsentratsioon tõusis 30 protsendilt 50 protsendile, kuid vähenes järk-järgult, kui etanooli kontsentratsioon oli üle 50 protsendi. SLPF-i sisalduse suurim saagis oli 23,1 protsenti 40-minutilise ekstraheerimisajaga, vedela materjali suhe (v/w) 15:1 ja SDS-i sisaldus 1,5 protsenti (joonis 2B). Kui ekstraheerimisaeg oli 40 minutit, vedeliku suhe (v/w) oli 15:1 ja etanooli kontsentratsioon oli 40 protsenti, siis SLPF-i sisaldus jätkas SDS-i sisalduse suurenemist 0,5 protsendilt 2 protsendini. Kui SDS-i sisaldust suurendati 0,5 protsendilt 2 protsendile, suurendati SLPF-i sisaldust 10 protsenti (joonis 2C). Flavonoidide kogusisaldus oli kõrgeim, kui vedela materjali suhe (v/w) oli 20:1, ekstraheerimisaeg oli 40 minutit, etanooli kontsentratsioon oli 40 protsenti ja SDS-i sisaldus oli 1,5 protsenti (joonis 2D). SLPF-i sisaldus oli 1,5 korda suurem kui vedela materjali suhte (v/w) 5:1 kasutamisel ja vähenes, kui vedela materjali suhe oli suurem kui 20:1. Seetõttu on järgnevate BBD katsete puhul ekstraheerimisaeg vahemikus 40 kuni 60 minutit, etanooli kontsentratsioon vahemikus 40 kuni 60 protsenti, SDS-i sisaldus vahemikus 1,5 kuni 2,5 protsenti ja vedeliku suhe (v/w) vahemikus 15: Kasutati 1 kuni 25:1.
2.3. SLPF-i mudeli sobitamine ja optimeerimine
2.3.1. Mudeli sobitamine
Disainitud maatriks, dispersioonanalüüsi tulemused ning mudelite adekvaatsus ja sobivus on toodud tabelis 1. Mitmekordne regressioonanalüüs viidi läbi tarkvara Design-Expert abil. Vastuse muutuja (SLPF-i sisu) ja sõltumatute muutujate vahelist seost väljendati järgmise teist järku polünoomvõrrandiga:
Y {{0}} −30,678 pluss 0.487A pluss 0.304B pluss 4,596C pluss 0 .853D − 0.001AB − 0.020AC − 0.005AD pluss 0,010 eKr − 0,001BD − 0,076 CD − 0,003A2 − 0,002B2 − 0,683C2 − 0,010D2(1)
kus Y on SLPF-i sisaldus; A, B, C ja D tähistavad vastavalt ekstraheerimisaega, etanooli kontsentratsiooni, SDS-i sisaldust ja vedela materjali suhet.
2.3.2. Vastuspinna analüüs
Vastuse pinna optimeerimise mudeli jääkanalüüs viidi läbi graafilise analüüsi tööriista abil. Oluline on testida mudeli vea dispersiooni ühtsust. Kui tulemused sobivad hästi prognoositud väärtustega, on eksperimentaalsete ja prognoositud väärtuste sobitatud kõver lineaarne. Lisaks on mudeli täpsuse määramisel oluline hinnata, kas jääkide jaotus on normaalne. Kui jäägid on normaaljaotusega, on jääkide sobitatud kõver lineaarne [19]. Lisaks, kui jääkide ennustavad väärtused on juhusliku jaotusega, on jääkvariatsiooni homogeensus kooskõlas optimeerimisnõuetega [20]. Selles uuringus sobis ruutmudel andmete jaoks kõige paremini (R2 väärtus 0,9818) (joonis 3A) [21].Lisaks kasutati mudeli adekvaatsuse kinnitamiseks jääkide tavalist tõenäosusgraafikut (joonis 3B) ja jääkide ja prognoositud vastuse graafikut (joonis 3C). . Andmed näitasid, et tavalise graafiku punktid moodustasid sirge (joonis 3B). See näitas, et andmed ei näidanud normaalsusest kõrvalekaldeid. Lisaks näitas jääkide ja prognoositud vastuse graafik juhuslikku jaotust, mis näitas, et mudel oli adekvaatne ega rikkunud sõltumatuse ega konstantse dispersiooni eeldust (joonis 3C) [22].
Tulemused näitasid, et suur osa kogu dispersioonist oli seletatav ruutregressioonimudeliga (R2 0.982), mis näitab, et mudel sobib ekstraheerimisparameetrite optimeerimiseks [23]. R2Adj 0.964 oli suhteliselt lähedal R2Pred väärtusele 0.902, mis kinnitab, et mudel on oluline [14]. Signaali-müra suhte (RSN) väärtus oli 24,553, mis oli tunduvalt kõrgem kui 4. Tulemus näitas, et seda mudelit saab kasutada disainiruumi jaoks. Veelgi enam, variatsioonikoefitsient (CV) oli madal (2,657 protsenti), mis näitab, et mudel sobitus eksperimentaalsete andmetega rahuldavalt ja seda saab kasutada tulemuste ennustamiseks andmete vahemikus. Regressioonikoefitsiendid on loetletud tabelis 2. SLPF mudelis olid A, B, C, AB, AC, AD, BC, CD, A2, B2, C2 ja D2 oluliselt erinevad (p < 0.05)="" ,="" kuid="" d="" ja="" bd="" ei="" erinenud="" oluliselt="" (p=""> 0,05).
Lõplikust mudelist koostati kahe testitud muutuja flavonoidide kogusisalduse ja kontuurikõvera (joonis 4A2–D2) 3D pinnagraafik (joonis 4A1–D1), et kirjeldada sõltumatute muutujate ja optimaalsete protsessiparameetrite vahelisi koostoimeid. Iga graafik viidi lõpule tingimusel, et teisi tegureid hoiti iga kord nende vastavatel nulltasemetel [24]. Kui kontuurgraafikul on ümmargune kuju, on vastavate tegurite vastastikmõjud tühised. Kontuurigraafiku elliptiline kuju näitab, et muutujate vahelised vastasmõjud aitavad kaasa kogusumma sisule.flavonoididolulisel tasemel [25]. Tabelis 2 ja joonisel 4 toodud andmete põhjal oli SLPF mudelis sõltumatute muutujate vahelise interaktsiooniefekti järjestus kõrgest madalani CD–AD–AB–AC. C (SDS-i sisaldus) ja D (vedeliku materjali suhe (v/w)) mõju SLPF-i sisaldusele näidati 3D-ploki ja sellega seotud kontuurigraafikuna. Kontuurigraafiku elliptiline kuju näitas olulist (p < 0.0001)="" korrelatsiooni="" c="" ja="" d="" vahel,="" mis="" aitas="" kaasa="" erinevale="" slpf-i="" sisule="" (tabel="" 2;="" joonis="" 4d1,="" d2).="" slpf-i="" sisaldus="" suurenes="" (2,13="" protsenti),="" kui="" sds-i="" sisaldust="" suurendati="" 1,5="" protsendilt="" 2,0="" protsendile="" ja="" vedela="" materjali="" suhet="" (maht/mass)="" 15:1-lt="" 20:1-le="" (joonis="" 4d1,="" d2).="" on="" oluline,="" et="" ekstraheerimisprotsess="" oleks="" ökonoomne="" ja="" teostatav="" ning="" modelleerimismeetod="" hõlbustaks="" tulevase="" masstootmise="" kulude="" ja="" aja="">
antioksüdantne cistanche ekstrakt
2.3.3. Mudeli valideerimine
Kavandatud mudeli kinnitamiseks valiti muutujate vahemikust erinevad reaktsioonitingimused (tabel 3). Võrrandiga (1) saadud kõrge flavonoidide üldsisalduse saamiseks olid optimaalsed protsessiparameetrid ekstraheerimisaeg 51,84 minutit, etanooli kontsentratsioon 48,68%, SDS-i sisaldus 1,88% ja vedela materjali suhe (maht/mass) 19,81:1; selle tulemuseks oli flavonoidide kogusisaldus 2,13 protsenti. Mudeli täpsust kinnitati kolme optimaalsetes tingimustes tehtud analüüsi põhjal. Keskmine flavonoidide kogusisaldus oli 2,10 protsenti, mis ei näidanud olulist erinevust prognoositud väärtusest. See näitas, et katseväärtus oli prognoositule väga lähedane, mis tõestas, et tulemused olid mõistlikud ja usaldusväärsed; võrrandi (1) mudelit peeti SLPF-i sisalduse ennustamiseks rahuldavaks ja täpseks. See lähenemisviis mitte ainult ei paranda ekstraheerimise efektiivsust, vaid suurendab ka P kasutusmäära.notoginsengvarre leht.
2.4. P. notoginseng varre lehtede ekstraktide antioksüdantne toime
P. notoginseng varre lehtede ekstraktide vähenenud võime on positiivselt seotud selleantioksüdantne aktiivsus; seetõttu saab seda kasutada antioksüdandi aktiivsuse olulise hindamisindeksina [26]. Ekstraktide ja askorbiinhappe redutseerimisvõime suurenes koos kontsentratsiooniga ja näitas olulist positiivset korrelatsiooni kontsentratsiooniga (joonis 5A). Ekstraktide ja askorbiinhappe EC50 olid vastavalt 7,212 ja 0,0287 mg/ml. Need tulemused viitasid selleleP. notoginsengekstraktid on tõhusad elektronidoonorid, mis on võimelised reageerima vabade radikaalidega, muutes need stabiilsemateks toodeteks. DPPH-radikaal on suhteliselt stabiilne vaba radikaal ja suudab vastu võtta elektrone või vesinikuaatomeid, et moodustada stabiilseid molekule. Hüdroksüülradikaalidel on kõrgeim oksüdatsioonivõime ja need võivad kahjustada bioloogilisi molekule. Seetõttu on DPPH-d ja hüdroksüülradikaale laialdaselt kasutatud antioksüdandi aktiivsuse olulise hindamisindeksina [27]. DPPH radikaalide eemaldamise aktiivsus suurenes koos ekstraktide ja askorbiinhappe kontsentratsiooniga ning need kõik näitasid kontsentratsiooniga olulist positiivset korrelatsiooni. Ekstraktide ja askorbiinhappe EC50 väärtused olid vastavalt 2,893 ja 0,0938 mg/ml (joonis 5B). Ekstraktide või askorbiinhappe töötlemisel oli hüdroksüülradikaalide eemaldamise aktiivsus sarnane DPPH-radikaaliga ning ekstraktide ja askorbiinhappe EC50 väärtused olid vastavalt 1,514 ja 0,0902 mg/ml (joonis 5C). Need tulemused näitasid, et P. notogenšenni ekstraktidel on kõrge DPPH- või hüdroksüülradikaalide eemaldamise võime.
Superoksiidi anioonid võivad põhjustada peroksiidide esinemist plasmamembraanis [28]. Seetõttu on superoksiidi anioonide eemaldamise võime antioksüdandi jaoks äärmiselt oluline. Selles uuringus suurenes superoksiidi anioonide eemaldamise kiirus koos ekstraktide ja askorbiinhappe kontsentratsiooniga ning eemaldamise kiirus oli samuti korrelatsioonis kontsentratsiooniga (joonis 5D). Ekstraktide ja askorbiinhappe EC50 väärtused olid vastavalt 2,949 ja 0,140 mg/ml ning kõrgeimad eemaldamismäärad olid vastavalt 94,90% ja 93,73%.antioksüdantekstraktide aktiivsus peegeldub üldiselt võimes eemaldada ABTS ja vabad radikaalid [29]. Ekstraktide ja askorbiinhappe puhastav toime ABTS-ile ja vabadele radikaalidele suurenes kontsentratsiooniga (joonis 5E) ning puhastuskiiruse ja ekstraktide või askorbiinhappe kontsentratsiooni vahel oli positiivne korrelatsioon. P EC50 väärtused. notogenšenni ekstraktid ja askorbiinhape olid vastavalt 0,855 ja 0,205 mg/ml.
Paljud uuringud on seda leidnudflavonoididomama headantioksüdantomadused. Farombi jt tulemused. [30] näitas, et Garcinia kola seemnete ekstraktil oli kontsentratsioonil 1 mg/ml superoksiidi puhastav toime 57 protsenti, vesinikperoksiidi puhastav toime 85 protsenti kontsentratsiooni 1,5 mg/ml korral ja 89-protsendiline puhastav toime DPPH-le kontsentratsioonil 2 mg/ml. Srisawat et al. [31] näitasid riisiekstraktide EC50 väärtuste superoksiidi anioonide radikaale püüdvat toimet vahemikus 0,6–5 mg/ml, mis oli sarnane selle uuringu tulemustega. Üldiselt näitas see uuring ka, etP. notoginsengvarrelehtede ekstraktidel on tugev antioksüdantne toime.
2.5. Ekstraktide mõju B16 rakkude aktiivsusele
OhutusP. notoginsengvarrelehtede ekstraktid on äärmiselt olulised rakkude elujõulisuse, raku türosinaasi aktiivsuse ja melaniini taseme uurimisel B16 melanoomirakkudes. Tulemused näitasid, et rakkude elujõulisus oli umbes 85 protsenti kontsentratsioonis 0.032 mg/mL ja et rakkude elujõulisuse IC50 väärtus oli {{2{{22} }}},405 mg/ml (joonis 6A). P. notoginseng varre lehtede ekstraktid ei olnud eriti tsütotoksilised B16 rakkudele. Seetõttu kasutati järgmiste katsete tegemiseks ekstrakti kontsentratsioone alla 0,032 mg/ml. Türosinaas on kiirust piirav reguleeriv melanogeenne ensüüm, mis osaleb melaniini sünteesi rajas [32]. Tulemused näitasid, et ekstraktid vähendasid oluliselt türosinaasi aktiivsust ja melaniini tootmist hiirerakkudes annusest sõltuval viisil (joonis 6B). Ekstraheeritud sisu ja türosinaasi või melaniini sünteesi inhibeerimissuhte vahel esines positiivne korrelatsioon (R2=0.9162 ja R2=0.9118). Türosinaasi ja melaniini sünteesi inhibeerimise suhte IC50 väärtused olid vastavalt 0,045 mg/ml ja 0,046 mg/mL (joonis 6B). Melaniinil on nahavärvis otsustav roll. Melaniini moodustumist reguleerib türosinaas, mis on peamine kiirust piirav ensüüm, mida reguleerivad vabad radikaalid. Üksikasjalikud uuringud on näidanud,flavonoididon üsna tugevad inhibiitorid ja võivad otseselt inhibeerida türosinaasi ja toimida melanogeneesi oksüdatiivse raja distaalses osas [33]. Meie tulemused näitasid, et P. notoginseng varre lehtede ekstraktid näitasid häid tulemusi türosinaasi aktiivsuse ja melaniini tootmise vähendamisel. On ilmne, et P. notoginseng varrelehtede ekstraktidel võib olla tervisetoidu ja kosmeetikatootena suured väljavaated tänu oma suurepärasele toimele pigmendi ladestumisel.
3. Materjalid ja meetodid
3.1. Taimsed materjalid
Värske varrelehtP. notoginsengosteti 2017. aasta oktoobris Yunnani provintsis Wenshangi P. notoginsengi rahvusvahelisest kaubanduskeskusest, pesti seejärel destilleeritud vees ja pinnavesi eemaldati. P. notoginseng'i värske varreleht kuivatati 60 ◦C juures konstantse massini ja pesti edasiseks kasutamiseks pulbriks.
cistanche ekstrakti eelised:pigmendi ladestumise vastane
3.2. Kemikaalid ja reaktiivid
Na2HPO4, NaH2PO4, TCA (trikloroäädikhape), FeCl3, FeSO4, askorbiinhape, pürogallool, H2O2 saadi ettevõttest Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. (Shanghai, Hiina) DPPH (2,2-difenüül 1- pikrüülhüdrasüül), ABTS, -MSH, L-DOPA ja MTT osteti firmalt Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA), PBS (Biological Industries, Beit-Haemek, Iisrael), Dulbecco Modifed EagleMedium (DMEM) kultuur ja veise loote seerum (FBS; Gibco, NY, USA) ja trüpsiin saadi ettevõttest Biological Industries, Iisrael. DMSO ja Triton X-100 saadi vastavalt firmadest MP Biomedicals ja Amresco USA-st. Kõik teised reaktiivid olid analüütiliselt puhtad. Ülipuhas vesi saadi Millipore'i süsteemist (Bedford, MA, USA).
3.3. Ekstraheerimistingimuste valiku optimeerimine
Ultraheli abil kogumahu ekstraheerimineflavonoididalatesP. notoginsengvarrelehte optimeeris RSM. SLPF-i sisu määrati ekstraheerimistingimuste hindamiseks indeksiks. Ekstraheerimistehnoloogia kohaselt on võtmetegurid pindaktiivsed ained, ekstraheerimisaeg, etanooli kontsentratsioon, SDS-i sisaldus ja vedelate materjalide suhe. Katsete kõrgeimad väärtused olid SLPF-i sisalduse optimaalsed keskväärtused. Seejärel kasutati neid SLPF-i parima ekstraheerimisprotsessi tehnoloogia uurimiseks RSM-i meetodil. Ühe faktoriga töötlemine oli järgmine: P. notoginseng varreleht (1) ekstraheeriti erinevate pindaktiivsete ainete abil (tabel 4), ultraheliga ekstraheerimine 40 min, säilitades vedela materjali suhte (15:1, maht/mass). ja 40% etanooli kontsentratsioon; (2) ekstraheeriti ultraheliga 10, 20, 30, 40, 50 ja 60 minutit, kui vedela materjali suhe oli 15:1 (maht/mass), etanooli kontsentratsioon oli 40 protsenti ja SDS sisaldus 1,5 protsenti; (3) ekstraheeriti 30-, 40-, 50-, 60-, 70-, 80- ja 90-protsendilise etanooliga 40 minutit, kui vedela materjali suhe oli 15:1 (maht/mass) ja SDS-i sisaldus oli 1,5 protsenti; (4) ekstraheeriti 0,5-, 1-, 1,5-, 2-, 2,5- ja 3-protsendilise SDS-iga 40 minutit, kui vedela materjali suhe oli 15:1 ja etanoolisisaldus oli 40 protsenti; (5) ekstraheeriti erinevate vedelate materjalide vahekordadega (5:1, 10:1, 15:1, 20:1, 25:1 ja 30:1; maht/mass) 40 minutit, hoides etanooli kontsentratsiooni 40 protsenti. ja SDS-i sisaldus oli 1,5 protsenti. Seejärel määrati SLPF-i väljavõtete sisaldus.
3.4. RSM-i eksperimentaalne disain
Tuginedes ühefaktoriliste katsete tulemuste analüüsile, on SLPF-i ekstraktsioonitingimus alatesP. notoginsengvarreleht töötati välja ja optimeeriti kolmetasemelise nelja teguriga BBD abil koos RSM-iga (Design-Expert Software, prooviversioon 8.1.0; Stat-Ease Inc., Minneapolis, MN, USA). Iga sõltumatu muutuja kodeeriti kolmel tasemel vahemikus –1 kuni pluss 1, kus aeg (A);etanooli kontsentratsioon (B); SDS-i sisu (C); ja vedela materjali suhet (D) muudeti tabelis 5 näidatud vahemikes. SLPF-i sisaldus oli vastuse muutuja. Statistilisteks arvutusteks kasutati teist järku ruutvõrrandit järgmiselt: [34].
Y= 0 pluss 4∑i=1 iXi pluss 4∑i=1 iiX2i pluss 3∑i=1.4∑j=i pluss 1 ijXiXj pluss 4 ∑i=1 iiiX3i(2)
kus Y on ennustatud vastus, 0 on lõikekoefitsient, i on lineaarsed liikmed, ii on ruuduliikmed, ij on interaktsiooniliikmed ning Xi ja Xj esindavad sõltumatute muutujate kodeeritud tasemeid
3.5. Flavonoidide koguanalüüs
Kogusumma sisuflavonoididmäärati väljakujunenud meetodi põhjal koos mõningate muudatustega ja etalonstandardiks valiti rutiin [35]. Kuivatatud rutiini kaaluti täpselt 10 mg, lahustati 20 ml etanooliga ja kanti 100 ml mõõtekolbi, lisades vett skaalani. Rutiini standardlahused vahemikus 0.0–6,0 ml kanti täpselt üle 25 ml mõõtekolbidesse. Seejärel lisati 1 ml 5% NaNO2; 6 minuti pärast lisati 1,0 ml 10% Al(NO3)3 ja lahust hoiti 6 minutit toatemperatuuril; Mõõtekolbidesse lisati 10 ml 4% NaOH-d. See lahus lahjendati seejärel vesilahusega 25 ml-ni ja hoiti 15 minutit toatemperatuuril. Rutiinita (A) tühiproovi neeldumist mõõdeti lainepikkusel 510 nm, kasutades UV-2600 spektrofotomeetrit (ShanghaiYuanxi Instruments Co. Ltd., Shanghai, Hiina), et saada lineaarne reaktsioon (A {{25}). }.6971B − 0.0072,R2=0.9992). B oli flavonoidide kogusisaldus (mg) lainepikkusel 510 nm. Proovide 0,1 ml alikvoot lahjendati metanooliga 50 ml-ni ja seejärel määrati spektrofotomeetriga flavonoidide kogukontsentratsioon. Flavonoidide kogusisaldus arvutati järgmise võrrandi järgi: y=m × VM × 100 protsenti (3)
3.6. Statistiline analüüs
Kõiki katseandmeid töödeldi Microsoft Exceli tarkvaraga 2010 ja kõverad paigaldati Origin 8.0-ga. Statistiline analüüs viidi läbi SPSS 19.0 abil.
4. Järeldused
Ultraheli abil ekstraheerimine suurendas kogu ekstraheerimise efektiivsustflavonoididSLPF-i optimaalsed ekstraheerimistingimused olid: ekstraheerimisaeg ultraheliga 52 minutit, etanooli kontsentratsioon 48,7%, pindaktiivse aine SDS sisaldus 1,9% ja vedela materjali suhe (v/wof 20:1; tulemuseks oli 2,10). Tootjatel soovitati kohandada neid andmeid SLPF-i eraldamiseks konkreetsete tingimuste alusel, et saavutada ulatuslik ja tõhus tootmine.P. notoginsengvarre lehtede ekstraktid näitasid tugevatantioksüdantaktiivsus ja indutseeriti melaniini sünteesi vähenemine, inhibeerides türosinaasi aktiivsust. Meie tulemused soodustavad P kasutamist. kosmeetiliste preparaatide ja toidu jaoks mõeldud notoginseng varrelehtede ekstraktid on nahka valgendav aine.
antioksüdant: cistanche etract