Cistanche Tubulosa kutsub esile inimese primaarsete ja metastaatiliste käärsoolevähi rakkude reaktiivsete hapnikuliikide vahendatud apoptoosi

ABSTRAKTNE

Käärsoolevähk on maailmas levinuim vähivorm kolmas. Tavapärased ravimeetodid on näidanud mõõdukat efektiivsust koos tõsiste kõrvalmõjudega, mistõttu on tungiv vajadus ohutumate alternatiivide järele. Selles uuringus peeti Cistanche tubulosa't, kohalikku nimetust Thanoon, potentsiaalseks fütoterapeutiliseks strateegiaks, kuna sellel on teadaolevalt suur terapeutiline potentsiaal traditsioonilises meditsiinis ja laialdane arvukus Lähis-Ida piirkonnas. Bioaktiivsed ühendid ekstraheeriti pulbrilisest Cistanche tubulosast ja testiti nende vähivastaseid omadusi nelja käärsoolevähi rakuliini suhtes, millest kaks pärinevad primaarsest kasvajast (CaCo2 ja HCT116) ja kaks olid pärit metastaatilisest kohast (LoVo ja SW620).

Uuriti ka Cistanche tubulosa mõju apoptoosi ja raku redoks-homöostaasi esilekutsumisele. Cistanche tubulosa puhul ilmnes kõigi testitud vähirakuliinide kontsentratsioonist ja ajast sõltuv proliferatsiooni pärssimine enam kui 60 protsenti pärast 72-tunnist töötlemist 1 mg/ml toorekstraktiga. Proliferatsiooni pärssimist iseloomustas apoptoosi indutseerimine, rakusisese reaktiivse hapniku liikide tootmine ja mitokondriaalsed superoksiidid. Need andmed viitavad sellele, et Cistanche tubulosa on paljulubav kandidaat käärsoolevähi vastases ravis. See on esimene uuring, mis näitab Cistanche tubulosa vähivastast bioaktiivsust käärsoolevähi rakkude suhtes.

Tistanche taimeekstrakti toote kliki ravimteraapia

Lühendid:

7-AAD, 7-Amino-aktinomütsiin D; CTE, Cistanche tubulosa ekstrakt; EMEM, Eagle's Minimum Essential Medium; FBS, veiseloote seerum; DCF, 2,7-diklorofluorestseiin; DCFH-DA, 2,7- diklorodihüdrofluorestseiindiatsetaat; DMEM, Dulbecco modifitseeritud Eagle'i sööde; DMSO, dimetüülsulfoksiid; MTT, 3-[4,5-dimetüültiasool-2-üül]-2,5-difenüültetrasoolium; PE, fükoerütriin; RFU, suhtelised fluorestsentsi ühikud; ROS, reaktiivsed hapniku liigid

SISSEJUHATUS

Kolorektaalne vähk on üks levinumaid vähivorme kogu maailmas (Brenner et al., 2014) ja selle esinemissagedus kasvab pidevalt, hinnanguliselt 2,4 miljonit juhtu 2035. aastal, tänu kaasaegsele toitumisele ja elustiilile ning vähenenud kehalisele aktiivsusele. Praegused jõupingutused ei ole praeguse kolorektaalse vähi epideemiaga võitlemiseks piisavad ja seetõttu on tõhusaks ennetamiseks ja raviks vaja uudseid lähenemisviise, sealhulgas elustiili muutusi koos ohutumate alternatiivsete sekkumistega, nagu fütoteraapia (Weidner et al., 2015). Fütoteraapia, ravimtaimede kasutamine haiguste raviks, on olnud iidse inimkonna ajaloo vältimatu osa. Ravimtaimi on pikka aega kasutatud vähi alternatiivsete raviallikatena, mis moodustavad enam kui kuuekümne protsendi tavameditsiinis kasutatavatest vähivastastest ainetest (Balunas ja Kinghorn, 2005; Saibu et al., 2015). Mõned tuntumad näited hõlmavad Catharanthus roseus G. Doni ekstrakte. (Apocynaceae), Taxus baccata L. (Taxaceae) ja Camptotheca teravik Decne (Nyssaceae) (Cragg ja Newman, 2005; da Rocha et al., 2001). Näidati, et mitmed taimeekstraktid ja fütokemikaalid avaldavad kolorektaalse vähi korral kasvajavastast toimet, mis on tingitud reaktiivsete hapnikuliikide (ROS) tootmise indutseerimisest ja sellega seotud vähirakkude apoptoosist, nagu ka Melissa officinalis'e ekstraktide puhul (Weidner et al., 2015).

Fütoterapeutiliste kandidaatide hulgas on väärtuslikke raviomadusi tõestanud Cistanche tubulosa, Orobanchaceae parasiitkõrbetaim (Jiang et al., 2009), mis on laialt levinud Aafrika, Aasia ja Vahemere piirkonna kuivades ja poolkuivades piirkondades. Cistanche tubulosa on laialdaselt kasutatud traditsioonilises meditsiinis ja sellel on oletatavasti raviv toime neerupuudulikkuse, haigusliku leukorröa, metrorraagia, naiste viljatuse ja seniilse kõhukinnisuse korral (Jiang et al., 2009). Lisaks traditsioonilisele meditsiinilisele kasutamisele on oluline ravi Cistanche Tubulosa omadusi on viimase kümnendi jooksul intensiivselt uuritud, sealhulgas vasorelaksanti (Yoshikawa et al., 2006), hepatoprotektiivset (Morikawa et al., 2010), antihüperglükeemilist ja hüpolipideemilist toimet (Xiong et al., 2013). Cistanche Tubulosa soovitati ka kui tugevat immuunsüsteemi tugevdajat, luu moodustumise soodustajat ning vananemis- ja väsimusevastast ainet (Xu et al., 2014). Lisaks on näidatud, et Cistanche tubulosa ekstrakt blokeerib amüloidi ladestumist Alzheimeri tõve mudelis (Wu et al., 2015). Vaatamata erinevatele terapeutilistele kasutustele ei ole Cistanche Tubulosa kui võimaliku vähivastase ainena mõju veel uuritud.

Käesolevas töös oleme uurinud Cistanche Tubulosa vähivastast toimet kahele primaarsele ja kahele metastaatilisele käärsoolevähi rakuliinile ning selle mõju aluseks olevaid võimalikke mehhanisme.

MATERJALID JA MEETODID

Taimeekstrakti kogumine ja valmistamine, Cistanche tubulosa proovid koguti 2014. aastal Katari kõrbealalt ja taime ehtsust kinnitas herboloog. Vautšeri näidised on arhiveeritud ADLQ toksikoloogia ja mitmeotstarbelise osakonna osakonnas. Päikesekuivatatud taimeproovid jahvatati Retsch Knife Mill Grindomix GM300 peeneks pulbriks. Kakskümmend grammi pulbrit ekstraheeriti 200 ml ülipuhta veega üleöö temperatuuril 37 kraadi pöörleval loksutil kiirusel 200 p/min. Cistanche tubulosa toorekstrakte (CTE) tsentrifuugiti 30 minutit kiirusel 8000 p/min, et sadestada lahustumatuid ühendeid, supernatant koguti ja külmkuivatati, kasutades Labconco Freezone 6 pluss Freeze kuivatit. Kuivatatud ekstrakt taastati Dulbecco modifitseeritud Eagle'i söötmes (DMEM, SIGMA, Saksamaa) kontsentratsioonini 20 mg/ml ja steriilselt filtreeriti läbi 0,{12}mikronilise membraanfiltri.

Rakuliinid ja rakkude hooldus

Inimese käärsoole kartsinoomi rakuliinid CaCo2, SW620 ja LoVo saadi ettevõttest Cell Lines Service (CLS, Eppelheim, Saksamaa), samas kui HCT 116 rakuliin oli Katari ülikooli bioloogia- ja keskkonnateaduste osakonna lahke kingitus. CaCo2 ja HCT11 saadi käärsoole kartsinoomi esmasest kohast, SW620 ja LoVo aga metastaatilisest kohast. SW620, HCT116 ja LoVo rakke kasvatati ja hoiti DME söötmes, CaCo2 rakke aga Eagle'i minimaalses olulises söötmes (EMEM, SIGMA, Saksamaa). Rakke kasvatati monokihina 37 kraadi juures vastavas söötmes, millele oli lisatud 10 protsenti veise loote seerumit (FBS, SIGMA, Saksamaa) ja 1 protsenti penitsilliini/streptomütsiini (SIGMA, Saksamaa), niisutatud atmosfääris, mis sisaldas 5 protsenti süsinikdioksiidi.

Rakkude elujõulisuse test

Tsütotoksilise aktiivsuse hindamiseks kasutati {{0}}[4,5-dimetüültiasool-2-üül]-2,5-difenüültetrasooliumi (MTT) testi. CTE sarnaselt varem kirjeldatule (Jaganjac et al., 2010). CaCo2, HCT116, SW620 ja LoVo rakkude külvitihedus, mida kasvatati 96-süvendiplaatidel, oli 104 rakku süvendi kohta. Rakud plaaditi 24 tundi enne töötlemist vastavasse söötmesse, millele oli lisatud 10 protsenti FBS-i. 24 tunni pärast sööde eemaldati ja rakke töödeldi 0, 0,25, 0,5, 1 ja 2 mg/ml CTE-ga 24, 48 ja 72 tundi temperatuuril 37 kraadi niisutatud atmosfääris, mis sisaldas 5 protsenti CO2. Pärast CTE-ga töötlemist sööde eemaldati ja igasse süvendisse lisati 40 µl MTT lahust (0,5 mg/ml).

Pärast 3-tunnist inkubeerimist eemaldati MTT lahus, formazaan lahustati dimetüülsulfoksiidis (DMSO, SIGMA, Saksamaa) ja neeldumist mõõdeti 590 nm juures mikroplaadilugejaga (Infinite 200 PRO NanoQuant, Tecan Trading AG, Šveits). .

Apoptoosi test

Apoptoos CaCo2, HCT116, SW620 ja LoVo rakkudes tuvastati, kasutades PE Annexin V Apoptosis Detection Kit I koos 7-Amino-Actinomycin D-ga (7-AAD) elutähtsa värvainena (Becton). Dickinson International, Belgia) vastavalt tootja juhistele. Lühidalt öeldes külvati rakud 24-süvendiplaatidele tihedusega 5 × 104 rakku süvendi kohta vastavas söötmes, millele oli lisatud 10 protsenti FBS-i, 24 tunniks enne CTE lisamist (0, 0,5). või 1 mg/ml). Pärast 24 CTE inkubeerimist rakud koguti, pesti kaks korda külma fosfaatpuhverdatud soolalahusega ja värviti fükoerütriini (PE) anneksiin V ja 7-AAD-ga 15 minutit toatemperatuuril pimedas. Värvitud rakke analüüsiti 1 tunni jooksul voolutsütomeetria abil, kasutades FACS-i. Aria III voolutsütomeeter ja FACSDiva tarkvara (Becton Dickinson) madala voolukiirusega minimaalselt 104 rakuga. Testi positiivse kontrollina kasutati rakkude töötlemist 4 tundi 6 uM kamptotetsiiniga (SIGMA).

Intratsellulaarne ROS tootmine

Intratsellulaarset ROS-i tootmist uuriti, kasutades 2,7- diklorodihüdrofluorestseiindiatsetaati (DCFH-DA, SIGMA, Saksamaa). DCFH-DA on mittefluorestseeruv sond, mis oksüdeeritakse intratsellulaarse ROS-iga fluorestseeruvaks ühendiks 2,7- diklorofluorestseiiniks (DCF) (Poljak-Blazi et al., 2011). DCFHDA test viidi läbi sarnaselt, nagu oleme varem kirjeldanud (Cindric et al., 2013; Poljak-Blazi et al., 2011). Lühidalt, 96-süvendi mustadel plaatidel kultiveeritud CaCo2, HCT116, SW620 ja LoVo rakkude külvitihedus oli 104 rakku süvendi kohta. Rakud plaaditi 24 tunniks vastavasse söötmesse, millele oli lisatud 10 protsenti FBS-i.

Enne töötlemist inkubeeriti rakke 10 uM DCFH-DA-ga 37 kraadi juures 30 minutit 5% CO2/95% õhus. Seejärel rakud pesti jatöödeldi {{0}}, 0,5 ja 1 mg/ml CTE-ga söötmes ilma fenoolpunaseta. Intratsellulaarset ROS-i moodustumist jälgiti pidevalt 25 tunni jooksul temperatuuril 37 kraadi ja 5% CO2, kasutades mikroplaadilugejat koos ülemise fluorestsentsi ja gaasi juhtimismooduliga (Infinite 200 PRO, Tecan Trading AG, Šveits). Fluorestsentsi intensiivsust mõõdeti ergastuslainepikkusel 500 nm ja emissiooni tuvastamisel lainepikkusel 529 nm. Suvalised ühikud, suhtelised fluorestsentsi ühikud (RFU), põhinesid otseselt fluorestsentsi intensiivsusel

Mitokondriaalse superoksiidi teke

CTE võimet indutseerida superoksiidi teket mitokondrite poolt hinnati raku läbilaskva mitokondritele suunatud MitoSOX Red sondi (Life Technologies) ja Hoechst 33342 abil tuumavärvimiseks (Life Technologies). CaCo2, HCT116, SW620 ja LoVo rakud külvati 96-süvendiplaatidele tihedusega 104 rakku süvendi kohta vastavas söötmes, millele oli lisatud 10 protsenti FBS-i, 24 tunniks . Seejärel laaditi rakud 20 minutiks 4 uM MitoSOX-i ja 2 uM Hoechst 33342-ga, pesti üleliigne värvaine ja süvendeid töödeldi 0, 0,5 ja 1 mg/ml CTE-ga 24 tundi temperatuuril 37 kraadi ja 5 protsenti CO2-ga. Fluorestsentsi intensiivsust mõõdeti ergastuse lainepikkusega 510 nm ja emissiooni tuvastamisega 580 nm MitoSOX ja ergastuse lainepikkusega 350 nm ja emissiooni tuvastamisega 461 nm Hoechst 33342 abil (Trading, Profinite fluorescence00 lugejaga PROfinite Tecan000 AG, Šveits)

Statistiline analüüs

Kirjeldav statistika näidati keskmisena pluss /− SD. Rühmadevaheliste erinevuste olulisust hinnati Studenti t-testi ja hii-ruuttesti abil. Kui võrreldi rohkem kui kahte rühma, kasutasime ühepoolset ANOVA-d koos sobiva post hoc testimisega. Kasutati Mircosoft Windowsi SPSS 11.{5}}1. Erinevusi P väärtusega alla 0,05 peeti statistiliselt olulisteks.

TULEMUSED

CTE mõju inimese käärsoolevähi rakuliinide proliferatsioonile on näidatud joonisel 1. Kõik testitud CTE kontsentratsioonid näitasid tugevat inhibeerivat toimet CaCo2 rakuliinile kontsentratsioonist ja ajast sõltuval viisil (joonis 1A). Seitsekümmend kaks tundi kestnud CTE-ravi pärssis CaCo2 rakkude kasvu rohkem kui 60 protsenti võrreldes kontrollrühmaga (p < 0,05 kõigi kontsentratsioonide puhul). CTE-ravi olulist mõju HCT116 rakkude kasvule tuvastati ka kõigi aegade kahe kõrgeima kontsentratsiooni juures (1 mg/ml ja 2 mg/ml), saavutades viimase kontsentratsiooni korral enam kui 70 protsendi vähenemise (joonis 1B, p). < 0,05).

Kuigi kaks madalamat CTE kontsentratsiooni ({{0}},25 ja 0,5 mg/ml) vähendasid oluliselt rakkude HCT116 kasvu 24 tunni pärast (p<0.05), 72="" they="" had="" no="" significant="" effect="" following="" hours="" of="" treatment="" compared="" to="" the="" control="" p="">{{0}}.{10}}5). Ajast ja kontsentratsioonist sõltuv proliferatsiooni pärssimine CTE-ga kinnitati LoVo rakkudes rohkem kui 60 protsenti kõrgeima kontsentratsiooni juures (p < 0.05) (joonis 1C) ja kõik neli testitud CTE kontsentratsiooni vähendasid SW620 rakkude kasvu 48 tunni pärast (joonis 1D, p < 0,05 kõigi jaoks). Pärast 72-tunnist ravi täheldati sama efekti ainult kahe kõrgeima kontsentratsiooni korral (p < 0,05), samas kui kontsentratsioonid 0,25 ja 0,5 mg/ml ei näidanud kontrolliga võrreldes olulist toimet (p > 0,05). 0,5 ja 1 mg/ml CTE-ravi mõju apoptoosi esilekutsumisele testiti täiendavalt kõigis neljas rakuliinis (joonis 2). HCT116 ja LoVo puhul tuvastati pärast 24-tunnist ravi 0,5 mg/ml (p<0.05, Figure 2B and 2C) and in all cell lines at 1 mg/mL (p<0.05). A significant increase in necrotic or late apoptotic cell number was further observed in CaCo2 and SW620 cell lines (p<0.05, Figure 2A and 2D).

CTE võimet indutseerida intratsellulaarset ROS-i tootmist on näidatud joonisel 3. Kolm tundi pärast CTE-ravi suurenes rakusisene ROS-i tootmine kõigis rakuliinides (p<0.05). The intracellular ROS production increased progressively throughout the 25 hours of treatment in a time and concentration-dependent manner. Furthermore, the staining of cells with a mitochondria-targeted probe revealed a strong impact of CTE on mitochondrial superoxide production in a concentration-dependent manner (Figure 4). The highest increase in superoxide production by mitochondria was observed in HCT116 (69%, Figure 4B) and LoVo cells (82%, Figure 4C) following 24 hours of treatment with 1 mg/mL of CTE.

Joonis 1:

Cistanche tubulosa mõju käärsoolevähi rakuliinide elujõulisusele. Rakkude elujõulisus, mõõdetuna (A) CaCo2, (B) HCT116, (C) LoVo ja (D) SW620 rakkude MTT testiga, on esitatud protsendina ravimata käärsoolevähi kontrollrakuliinist. Keskmised väärtused (± SD) on antud representatiivse katse 5 korduse kohta: (*) olulisus p<0.05 in comparison to control untreated respective cells.

Joonis 2:

Cistanche tubulosa veeekstrakt indutseerib inimese käärsoolevähi rakkudes apoptoosi. (A) CaCo2, (B) HCT116, (C) LoVo ja (D) SW620 rakkude anneksiin-V-FITC voolutsütomeetria analüüsid on esitatud protsendina ravimata käärsoolevähi kontrollrakuliinist. Keskmised väärtused (± SD) on antud representatiivse katse 3 korduse kohta: (*) olulisus p<0.05 in comparison to control untreated respective cells.

Joonis 3:

Cistanche tubulosa veeekstrakt kutsub esile rakusisese ROS-i tootmise ajast ja annusest sõltuvalt. DCFH-DA testiga mõõdetud ROS-i produktsioon (A) CaCo2, (B) HCT116, (C) LoVo ja (D) SW620 rakkudes on esitatud keskmiste RFU väärtustena (± SD) vastavate 5-korduste jaoks. esinduslik eksperiment. (*) Tähendus lk<0.05 in comparison to control untreated colon cancer cells.

Joonis 4:

Cistanche tubulosa veeekstrakt kutsub esile mitokondriaalse superoksiidi tootmise inimese käärsoolevähi rakkudes. Mitokondritele suunatud MitoSOX Red sondi fluorestsentsi intensiivsus A) CaCo2, (B) HCT116, (C) LoVo ja (D) SW620 rakkudes on esitatud protsendina töötlemata käärsoolevähi kontrollrakuliinist. Keskmised väärtused (± SD) on antud representatiivse katse 5 korduse kohta: (*) olulisus p<0.05 in comparison to control untreated colon cancer cells.

ARUTELU

Kuigi varasemad uuringud on teatanud paljudest Cistanche tubulosa raviomadustest, on see esimene teade selle proliferatsioonivastasest toimest pahaloomulistes rakkudes. Väga polaarse lahusti veega ekstraheeritud Cistanche tubulosa bioaktiivsed ühendid näitasid tugevat vähivastast bioaktiivsust. Oleme varem võrrelnud vees lahustatud Cistanche tubulosa efektiivsust teiste lahustitega, nagu metanool ja etüülatsetaat, kuid veeekstraktidel oli kõige lootustandvam vähivastane toime (andmeid pole näidatud).

Oleme näidanud CTE võimet kontsentratsioonides 1 mg/ml ja 2 mg/ml pärssida 60 protsenti nii primaarsete kui metastaatilise käärsoolevähi rakuliinide kasvust, mis näitab Cistanche tubulosa potentsiaalselt olulist rolli käärsoolevähi ravis. Võrreldes normaalsete rakkudega iseloomustab vähirakke üldiselt redoks-homöostaasi häire ja praeguste vähivastaste ravimeetodite ühine strateegia on suurendada raku oksüdatiivset stressi (Yang et al, 2013). Kuigi ROS-i füsioloogiliselt madalal tasemel on signaalmolekulidena oluline roll, võib liigne ROS-i tootmine kaasa aidata vähi ebastabiilsusele ja pahaloomulisusele (Liou ja Storz, 2010). Paradoksaalselt muudab see raku redoks-homöostaasi tasakaalustamatus vähirakud ROS-indutseeritud rakusurma suhtes haavatavamaks (Jaganjac et al., 2008; Nogueira ja Hay, 2013). Selles uuringus kirjeldatud CTE antiproliferatiivset toimet võivad vahendada ekstraktis sisalduvate teadaolevate ja tundmatute ühendite erinevad rakuvälised ja intratsellulaarsed mehhanismid, mis on suunatud mitmetele radadele, millel on apoptoosis oluline roll. Erinevate rakusurma viiside eristamiseks uurisime potentsiaalset mehhanismi, mis vastutab täheldatud CTE-indutseeritud tsütotoksilisuse eest

Meie andmed näitavad, et CTE suurendab rakusisest ROS-i tootmist ja sellest tulenevalt ROS-indutseeritud rakusurma. Raku redoksseisund mängib samuti otsustavat rolli apoptoosi reguleerimisel ja mitokondriaalne elektronide transpordiahel on raku ROS-i tekke üks peamisi kohti (Trachootham et al., 2008). Lisaks võib rakusisene ROS põhjustada raku apoptoosi nii mitokondritest sõltuvate kui ka sõltumatute radade kaudu (Sinha et al., 2013). Tõepoolest, meie andmed näitavad ka seda, et CTE-indutseeritud fosfatidüülseriini eksternaliseerimine on nii primaarsete kui ka metastaatiliste vähirakuliinide apoptoosi tavaline toime, mis viitab sellele, et CTE-indutseeritud surma mehhanismi vahendab pigem apoptoos kui nekroos. Apoptoosi aktiveerimine vähirakkudes on korrigeeriv strateegia ja paljud vähivastased ravimid võivad avaldada vähirakkudes apoptootilist toimet.

Seetõttu on vähirakkudes apoptootilise toimega ühendid või ekstraktid potentsiaalselt kasulikud vähivastaste ravimite uuringutes (Wong, 2011). Et teha kindlaks, kas CTE-indutseeritud pro-apoptootilist toimet vahendab mitokondrite poolt indutseeritud ROS-mehhanism, mõõtsime CTE-ga töödeldud rakkudes mitokondritele suunatud fluorestsentssondi abil superoksiidi tootmist. Meie andmed näitavad selgelt, et CTE stimuleerib mitokondriaalse superoksiidi tootmist, mis viitab sellele, et Cistanche tubulosa vähivastane aktiivsus on vähemalt osaliselt vahendatud mitokondrite poolt indutseeritud ROS-mehhanismi kaudu.

JÄRELDUSED

Kokkuvõtteks võib öelda, et meie andmed viitavad sellele, et kõrbetaime Cistanche tubulosa veeekstrakt võib olla paljutõotav kandidaat vähivastaseks lähenemisviisiks koos teiste tavapäraste käärsoolevähi ennetamise ja ravi ravimeetoditega. Samuti demonstreerime, et taimeekstrakti toksilisust vähirakkude vastu vahendab suurenenud rakusisene ROS-i tootmine ja vähemalt osaliselt mitokondriaalsest sõltuvast apoptoosist. Täiendavad uuringud käivad vähivastase toime eest vastutavate üksikute bioloogiliselt aktiivsete koostisosade eraldamiseks ja iseloomustamiseks.

Vaja on rohkem uuringuid, et hinnata selle ekstrakti potentsiaalset kasutamist tõhusa kemopreventiivse ainena ja mõista käärsoolevähi rakkude toimemehhanisme molekulaarsel tasemel. Samuti on vaja täiendavaid prekliinilisi ja kliinilisi uuringuid, et kinnitada Cistanche tubulosa täheldatud kasulikke tervisemõjusid vähi ennetamisel.

TUNNUSTUS

Rahaline toetus ja sponsorlus: seda uuringut toetas Qatari antidopingu labor.

Huvide konflikt: autorid ei kinnita huvide konflikti.

VIITED

Balunas MJ, Kinghorn, AD. Ravimite avastamine ravimtaimedest. Life Sci. 2005;78:431-41.

Brenner H, Kloor M, Pox CP. Pärasoolevähk. Lancet 2014;383, 1490-502.

Cindric M, Cipak A, Zapletal E, Jaganjac M, Milkovic L, Waeg G, Stolc S, Zarkovic N, Suzana Borovic S. Stobadiin nõrgendab 4-hüdroksünonenaali põhjustatud soolebarjääri mudeli kahjustust. Toksikool In vitro. 2013;27:426-32.

Cragg GM, Newmani DJ. Taimed vähivastaste ainete allikana.JEthnopharmacol. 2005;100:72-9.

da Rocha AB, Lopes RM, Schwartsmann G. Looduslikud tooted vähivastases ravis. CurrOpinPharmacol. 2001;1:364-9. Jaganjac M, Matijevic T, Cindric M, Cipak A, Mrakovcic L, Gubisch W, Zarkovic N. CMV{3}} promootori induktsioon 4-hüdroksü-2- nominaalväärtusega inimese embrüonaalsetes neerurakkudes. Acta Biochim Pol. 2010;57:179-83.

Jaganjac M, Poljak-Blazi M, Zarkovic K, Schaur RJ, Zarkovic N. Granulotsüütide osalus Walker 256 kartsinoomi spontaanses regressioonis. Cancer Lett. 2008;260:180-6

Jiang Y, Tu PF. Cistanche liikide keemiliste koostisosade analüüs. J Chromatogr A. 2009;1216:1970-9.

Liou GY, Storz P. Reaktiivsed hapniku liigid vähi korral. Vaba Radic Res. 2010;44:479-96.

Morikawa T, Pan Y, Ninomiya K, Imura K, Matsuda H, Yoshikawa M, Yuan D, Muraoka O. Hepatoprotektiivse toimega atsüülitud fenüületanoidaminoglükosiidid kõrbetaimest Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chem. 2010;18:1882-90.

Nogueira V, Hay N. Molekulaarsed rajad: reaktiivsete hapnikuliikide homöostaas vähirakkudes ja mõju vähiravile. Clin Cancer Res. 2013;19:4309-14.

Poljak-Blazi M, Jaganjac M, Sabol I, Mihaljevic B, Matovina M, Grce M. Raua ioonide mõju reaktiivsete hapnikuliikide moodustumisele, emakakaelavähi rakuliinide kasvule ja E6/E7 onkogeeni ekspressioonile. Toxicol Vitro. 2011;25:160-6.

Saibu GM, Katerere DR, Rees DJG, Meyer M. Tulbaghia violacea lehtede ja sibulate veeekstraktide in vitro tsütotoksiline ja pro-apoptootiline toime. J Etnopharmacol. 2015;164:203-9.

Sinha K, Das J, Pal PB, Sil PC. Oksüdatiivne stress: mitokondritest sõltuvad ja mitokondritest sõltumatud apoptoosi teed. Arch Toxicol.2013; 87:1157-80. Trachootham D, Lu W, Ogasawara MA, Nilsa RD, Huang P. Rakkude ellujäämise redoksregulatsioon. Antioksiidi redokssignaal. 2008;10:1343- 74.

Weidner C, Rousseau M, Plauth A, Wowro SJ, Fischer C, Abdel-Aziz H, Sauer S. Melissa officinalis'e ekstrakt kutsub esile apoptoosi ja pärsib proliferatsiooni käärsoolevähi rakkudes reaktiivsete hapnikuliikide moodustumise kaudu. Fütomeditsiin. 2015;22:262-70.

Wong RS. Apoptoos vähi korral: patogeneesist ravini. J ExpClin Cancer Res. 2011;30:87.

Wu SH, Chou FP, Chyau CC, Chen JH, Tu SF, Lin HH. Wasabia japonica ekstrakti vähivastane toime Hep3B maksavähirakkudes ROS-i akumulatsiooni, DNA kahjustuse ja p73-vahendatud apoptoosi kaudu. J Function Foods. 2015;14:445-55.

Xiong WT, Gu L, Wang C, Sun HX, Liu X. Cistanche tubulosa antihüperglükeemiline ja hüpolipideemiline toime II tüüpi diabeetilistel db/db hiirtel. J Etnopharmacol. 2013;150:935-45.

Xu R, Sun S, Zhu W, Xu C, Liu Y, Shen L, Shi Y, Chen J. Erinevate Cistanche liikide etanooli ekstraktide mitmeastmelised infrapuna-makro-sõrmejälje omadused kombineerituna HPLC sõrmejäljega. J Moli struktuur. 2014;1069:236-244.

Yang Y, Karakhanova S, Werner J, Bazhin AV. Reaktiivsed hapnikuliigid vähibioloogias ja vähivastases ravis. Curr Med Chem. 2013;20:3677-92.

Yoshikawa M, Matsuda H, Morikawa T, Xie H, Nakamura S, Muraoka O. Cistanche tubulosa vasorelakseeriva toimega fenüületanoidaminoglükosiidid ja atsüülitud oligosuhkrud. Bioorg Med Chem. 2006;14:7468-75.

For more information:1950477648nn@gmail.com