Cistanche parandab süsteemse erütematoosluupuse tõttu neeruinfektsiooni

Tuuma antigeeniga reaktiivne CD4^plussrakud laienevad aktiivses süsteemses erütematoosluupuses, toodavad efektortsütokiine ja nakatavad neere

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Dimas Abdirama, Sebastian Tesch jne

Süsteemneluupuserütematooson süsteemne ja krooniline autoimmuunhaigus, mida iseloomustab tolerantsuse kaotus autoreaktiivse CD4-ga tuumaantigeenide suhtes^plussT-rakud, mis on seotud haiguse patogeneesiga. Kuid pärast inimese autoantigeenispetsiifilise CD4 tuvastamist on nende retseptori spetsiifilisusest väga vähe teada^plussT-rakud on olnud äärmiselt keerulised. Siin esitame CD4 analüüsi^pluss Tuuma antigeenide suhtes reaktiivsed T-rakud, kasutades kahte komplementaarset meetodit: T-raku raamatukogud ja antigeeniga reaktiivsete T-rakkude rikastamine. Tuuma antigeenispetsiifilise CD4 sagedused^pluss T-rakud korreleerusid haiguse tõsidusega. Need autoreaktiivsed T-rakud toodavad efektortsütokiine, nagu interferoon-g, interleukiin-17 ja interleukiin-10. Võrreldes verega olid need rakud aktiivse luupusnefriidiga patsientide uriinis rikastatud, mis viitab nakatunud inimese infiltratsioonile.neerud. Seega toetavad need varem tundmatud omadused tuumaantigeenispetsiifilise A CD4 rolli^plussT-rakud sissesüsteemneluupuserütematoos.

Autoriõigus ª 2020, International Society of Nephrology. Väljaandja Elsevier Inc. See on avatud juurdepääsuga artikkel CC BY-NC-ND litsentsi alusel

MÄRKSÕNAD: luupuserütematoos, neer,

Süsteemneluupuserütematooson süsteemne ja krooniline autoimmuunhaigus, mida iseloomustab tolerantsuse kaotus tuumaantigeenide suhtes bioloogiliste jäätmete, nagu ribonukleoproteiine ja nukleosoome sisaldava apoptootilise materjali, puuduliku kõrvaldamise tõttu.1 Tuumaantigeenide vastu suunatud autoantikehad on iseloomulikudsüsteemneluupuserütematoosja esineb tavaliselt enne ilmset haigust. Lisaks autoreaktiivne CD4^plussT-rakud on seotud patogeneesigasüsteemneluupuserütematoossoodustades autoantikehade tootmist B-rakkude poolt ja levitades otseselt elundikahjustusi nakatunud sihtorganites. Kuigi tuumaantigeeniga reaktiivsete T-rakkude tuvastamisest on varem teatatud, on tõendid nende olemasolu kohta siiani ümbermõõdulised ja praegu on ebaselge, kuidas need patogeneesis omavahel toimivad. Nende rakkude autoimmuunsuses osalemise mõistmine on tõhusa ravi kavandamisel kriitilise tähtsusega.

Autoantigeenispetsiifiliste T-rakkude tuvastamist takistab nende erakordselt madal sagedus ringlevas veres. Varasemad uuringud inimese naiivse CD4 kohta^plussT-rakkude repertuaarides on kasutatud tetrameeril põhinevat tehnoloogiat, et pakkuda tõhusalt täpset teavet T-rakkude vastuste kohta spetsiifilistele antigeeniepitoopidele; see meetod nõuab aga eelnevaid teadmisi doonori inimese leukotsüütide antigeeni tüüpide kohta. Alternatiivsed meetodid erinevate antigeenide suhtes reaktiivsete haruldaste T-rakkude populatsioonide samaaegseks tuvastamiseks ja loendamiseks ilma eelnevate teadmisteta inimese leukotsüütide antigeeni tüüpidest töötati välja, kasutades amplifitseeritud polüklonaalsete T-rakkude raamatukogusid ja rikastades pärast stimulatsiooni CD154-ekspresseerivaid T-rakke. antigeeniga, mida nimetatakse ARTE-ks (antigen-reactive Tcell enrichment).

Süsteemneluupuserütematooson kahjulikneerud, kuid cistanche võib paranedaneerudfunktsioonid.

CD4^pluss T-rakud täidavad oma funktsiooni peamiselt tsütokiinide sekretsiooni kaudu antigeense aktiveerimise korral16 ja koepõletiku, näiteksluupusnefriitmis on üks tõsisemaid tüsistusisüsteemneluupuserütematoos. Selles sisalduva T-rakkude repertuaari analüüsneerudpatsientide biopsiadluupusnefriitilmnes oligoklonaalsusneerud-infiltreeruv CD4^pluss T-rakud, mis näitavad antigeenispetsiifiliste T-rakkude kuhjumist nakatunud organismisneerud. Meie eelmine uuring näitas uriini T-rakke aktiivsetel patsientidelluupus nefriittäpse biomarkerina, mis sarnaneb intrarenaalsete rakkude fenotüübiga. Kuigi need rakud on rikastatud CXC kemokiini retseptori 3 ja CC kemokiini retseptori 5 suhtes, mis ekspresseerivad T-rakke, mis viitavad T-abistajaraku 1 (Th1) rakupopulatsioonile ja sisaldavad CD154^plussT-rakud, mis viitavad hiljutisele antigeeniga kokkupuutele, on nende antigeeni spetsiifilisus tuumaantigeenide suhtes ebaselge.

Selles uuringus esitame CD4 analüüsi^pluss Tuumaantigeenidele reageerivad T-rakud kokku 17 tervel inimesel, 12 mitteaktiivsel isikulsüsteemneluupuserütematoosja 20 aktiivset subjektisüsteemneluupuserütematooskasutades T-raku raamatukogusid ja ARTE tehnikaid autoreaktiivse CD4 sageduste analüüsimiseks^pluss T-rakud perifeerses veres ja uriinis patsientidel, kellel onluupusnefriitsamuti tsütokiinide tootmine.

TULEMUSED

Tuuma antigeeniga reaktiivne CD4^plussT-rakud on paisutatud inaktiivne süsteemne erütematoosluupus, mis on määratud T-raku raamatukogu ja ARTE abil

aktiivsegasüsteemneluupuserütematoos. Need rakud olid tuvastatavad ka 5-l 6-st inaktiivsest patsiendistsüsteemneluupuserütematoos, samas kui ainult 3 kuuest tervest kontrollist olid ringlemasautoreaktiivneT rakud. Huvitav on see, et patsiendid, kellel on aktiivnesüsteemneluupuserütematoosnäitas ka laiemat valikut autoreaktiivseid T-raku vastuseid, kusjuures igal patsiendil oli reaktiivseid T-rakke vähemalt 3 tuumaantigeeni vastu. Võrdluseks oli mitteaktiivsete patsientide sihtportfell vähem varieeruvsüsteemneluupuserütematoosja terved kontrollid. Kokkuvõttes ei ole tsirkuleerivad tuuma antigeeni suhtes reaktiivsed T-rakud ainult nende jaokssüsteemneluupuserütematoos, kuid mitteaktiivnesüsteemneluupuserütematoos, on nende arv suurem ja nende sihtstruktuurid varieeruvamad.

Kuna autoreaktiivsed T-rakud mängivad rolli autoimmuunvastuste levitamisel, võrdlesime autoreaktiivsete T-rakkude arvu haiguse raskusastmega, mida hinnatisüsteemneluupuserütematooshaiguse aktiivsuse indeks (süsteemneluupuserütematoosDAI) skoor. Ainult CD4 sagedused^plussRNP70, Ro ja La suhtes reageerivad T-rakud korreleerusid positiivseltsüsteemneluupuserütematoosDAI (RNP70: P ¼ 0.04, r ¼ 0.4865; Ro: P ¼ 0.005 , r ¼ 0,6299; La: P ¼ 0,01, r ¼ 0,5651) (joonis 1d). Seevastu transtüretiini suhtes reaktiivsete T-rakkude sagedus leiti kõigis kolmes rühmas üsna sarnasel tasemel (joonis 1e), lükates seega kõrvale võimaliku eksperimentaalse kõrvalekalde, mis on tingitud üldisest mitteantigeenispetsiifilise T-rakkude hüperreaktiivsuse mitteaktiivsest.süsteemneluupuserütematoos.

T-raku raamatukogud pakuvad mitmeid eeliseid, sealhulgas suurt tundlikkust väga haruldaste rakkude tuvastamiseks väikeses arvus sisendrakkudes. Kuid see meetod tugineb rakkude laienemisele, mis võib muuta raku koostist ja annab ainult piiratud võimaluse reaktiivsete rakkude fenotüübiliseks iseloomustamiseks. Seetõttu kinnitasime oma tähelepanekud ARTE meetodiga. ARTE-protokoll nõuab suuremaid sisendrakke, mis on eriti keeruline patsientidel, kellel onsüsteemneluupuserütematooskellel on sageli lümfopeenia ja aneemia. Selle piirangu tõttu ja ka reaktiivsete rakkude eeldatava näidu suurendamiseks ühendasime kõik 5 kanoonilist tuumaantigeeni ja kasutasime seda kogumit perifeerse vere mononukleaarsete rakkude (PBMC) stimuleerimiseks enne CD154-ekspresseerivate rakkude (n ¼ 15) rikastamist. patsientidelsüsteemneluupuserütematoos; n ¼ 6 tervet kontrolli). Kasutades pinnamarkerite CD154 ja CD69 kombinatsiooni, reageerivad T-rakudsüsteemneluupuserütematoos-seotud tuumaantigeene saab tuvastada taustpopulatsioonis (joonis 1f). Kuigi CD154 ja CD69 taustaekspressiooni täheldati rohkesti kõigil inimestel, patsientidel, kellel oli aktiivnesüsteemneluupuserütematoosoli tuumaantigeenidega stimuleerimisel oluliselt suurenenud CD154 pluss CD69 pluss T-rakkude esinemissagedus võrreldes tauststimulatsiooniga (P ¼ 0,008), samas kui tervetel inimestel ja mitteaktiivsetel patsientidelsüsteemneluupuserütematoosantigeeniga stimuleeritud ja mittestimuleeritud rakkude vahel olid sarnased sagedused (terved isikud: P ¼ 0,44; mitteaktiivsed patsiendidsüsteemneluupuserütematoos: P ¼ {{0}},56) (joonis 1g). Lisaks oli taustsageduste lahutamisel tuumaantigeeniga reaktiivsete T-rakkude sagedus aktiivse haigusega patsientidel kõrgem kui tervetel inimestel ja mitteaktiivse haigusega patsientidel (P ¼ 0.02 ja P ¼ 0.11) (joonis 1h). Fooniga lahutatud tuuma antigeeniga reaktiivsete T-rakkude sagedus korreleerus seega positiivselt haiguse aktiivsusega (P ¼ 0,004, r ¼ 0,5978), mis viitab nende potentsiaalsele rollilesüsteemneluupuserütematoos.

T-raku raamatukogud pakuvad mitmeid eeliseid, sealhulgas suurt tundlikkust väga haruldaste rakkude tuvastamiseks väikeses arvus sisendrakkudes. Kuid see meetod tugineb rakkude laienemisele, mis võib muuta raku koostist ja annab ainult piiratud võimaluse reaktiivsete rakkude fenotüübiliseks iseloomustamiseks. Seetõttu kinnitasime oma tähelepanekud ARTE meetodiga. ARTE-protokoll nõuab suuremaid sisendrakke, mis on eriti keeruline süsteemse haigusega patsientidelluupuserütematooskellel on sageli lümfopeenia ja aneemia. Selle piirangu tõttu ja ka reaktiivsete rakkude eeldatava näidu suurendamiseks ühendasime kõik 5 kanoonilist tuumaantigeeni ja kasutasime seda kogumit perifeerse vere mononukleaarsete rakkude (PBMC) stimuleerimiseks enne CD154-ekspresseerivate rakkude (n ¼ 15) rikastamist. patsientidelsüsteemneluupuserütematoos; n ¼ 6 tervet kontrolli). Kasutades pinnamarkerite CD154 ja CD69 kombinatsiooni, reageerivad T-rakudsüsteemneluupuserütematoos-seotud tuumaantigeene saab tuvastada taustpopulatsioonis (joonis 1f). Kuigi CD154 ja CD69 taustaekspressiooni täheldati rohkesti kõigil inimestel, patsientidel, kellel oli aktiivnesüsteemneluupuserütematoosoli oluliselt suurenenud CD154 sagedus^plussCD69^plussT-rakud, kui neid stimuleeriti tuumaantigeenidega võrreldes tauststimulatsiooniga (P ¼ 0,008), samas kui terved inimesed ja mitteaktiivsed patsiendidsüsteemneluupuserütematoosantigeeniga stimuleeritud ja mittestimuleeritud rakkude vahel olid sarnased sagedused (terved isikud: P ¼ 0,44; mitteaktiivsed patsiendidsüsteemneluupuserütematoos: P ¼ {{0}},56) (joonis 1g). Lisaks oli taustsageduste lahutamisel tuumaantigeeniga reaktiivsete T-rakkude sagedus aktiivse haigusega patsientidel kõrgem kui tervetel inimestel ja mitteaktiivse haigusega patsientidel (P ¼ 0.02 ja P ¼ 0.11) (joonis 1h). Fooniga lahutatud tuuma antigeeniga reaktiivsete T-rakkude sagedus korreleerus seega positiivselt haiguse aktiivsusega (P ¼ 0,004, r ¼ 0,5978), mis viitab nende potentsiaalsele rollilesüsteemneluupuserütematoospatogenees (joonis 1i). Lisaks CD4^plussT-rakud, mis reageerivad tagasikutsumise antigeenile Candida albicans MP65, näitasid doonorite vahel sarnast sagedust (joonis 1j), välistades võimaluse, et aktiivsete patsientide puhul võib antigeeniga reaktiivsete T-rakkude sagedus olla suurem.süsteemneluupuserütematoos.

Meie T-raku raamatukogu ja ARTE meetodite abil genereeritud andmed näitavad ühiselt autoantigeenispetsiifilise CD4 laienemist.^plussT-rakud aktiivsetel patsientidelsüsteemneluupuserütematoos. Mõlemad tehnikad on võrreldavad, nagu näitavad sarnased keskmised stimulatsiooniindeksi väärtused antigeeniga stimuleeritud ja mittestimuleeritud T-raku vastuste vahel (mediaan stimulatsiooniindeksi T-raku raamatukogu: 1,857; ARTE: 1,614; P ¼ 0,33), kuigi ARTE tehnika näitas tuumaantigeeniga reaktiivse CD4 kõrgemaid sagedusi^pluss T-rakud kui T-rakkude raamatukogu tehnika (joonis 1k).

Cistanchevõib parandada põletikkuneerud.

Tuuma antigeeniga reageerivad T-rakud tervetel inimestel on bona fife autoreaktiivne CD4^plussT-rakud

Nii T-raku raamatukogu kui ka ARTE tehnikad näitasid tuvastamistautoreaktiivneT rakudtervetel inimestel, mis kujutavad endast inimese autoimmuunsuse arengu võimalikku päritolu. Kuid nende arv ei erinenud oluliselt taustsagedustest, mistõttu ei olnud kindel, kas terved katsealused peavad tõepoolest ringlema tuumaantigeeni suhtes reaktiivset CD4.^plussT-rakud. Autoreaktiivsete T-rakkude antigeenispetsiifilisuse selgitamiseks tervetel isikutel genereerisime CD154-st üksikud T-raku kloonid^plussCD69^plussCD4^plussTervetelt isikutelt eraldatud T-rakkude prekursorid pärast PBMC-de stimuleerimist üksikute tuumaantigeenide ja Aspergillus fumigatus'e lüsaadist saadud kontrollantigeeniga. Märkimisväärne hulksüsteemneluupuserütematoos-seotud autoantigeenispetsiifilised T-raku kloonid reageerisid nende vastavatele antigeenidele pärast antigeeni taasstimulatsiooni, nagu näitas IFN-g koosekspressioon CD154-ga (spetsiifiliste kloonide arv – Aspergillus fumigatus: 5/5; SmD1: 4/8; RNP70: 3). 11-st; histoon: 5-st 5-st; Ro: 4-st 9-st; La: 5-st 7-st) (täiendav joonis S2A ja B). Veelgi enam, antigeeni vastus (esinduslikult näidatud SmD1 jaoks) oli annusest sõltuv, rõhutades, et tervetel inimestel on tuuma antigeeni suhtes reageerivad T-rakud heas mõttes autoreaktiivsed CD4^plussT-rakud (täiendav joonis S2C). Seega kinnitasime tuumaantigeeniga reaktiivsete T-rakkude olemasolu tervetel isikutel rakendatud tuvastamismeetodite taustsignaalis.

Tuuma antigeeniga reaktiivsete CD4 pluss T-rakkude tsütokiinide tootmine

Järgmisena uurisime tuumaantigeeniga reaktiivse CD4 tsütokiinide tootmist^plussT-rakud. CD154-ekspresseerivad rakud värviti intratsellulaarselt efektortsütokiinide, nagu IFN-g, interleukiin (IL)-17, IL-4 ja IL-10 jaoks pärast stimulatsiooni kogumigasüsteemneluupuserütematoos-seotud tuumaantigeenid (joonis 2a). IFN-g–, IL-17– ja IL-10– tootvate CD154 sagedused^plussCD4^plussT-rakud suurenesid märkimisväärselt aktiivsetel patsientidelsüsteemneluupuserütematoos(kõik tsütokiinid: P ¼ {{0}},004), samas kui IL-4-d tootvate autoreaktiivsete T-rakkude sagedus jäi taustasagedusest eristamatuks (P ¼ 0,125) (joonis 2b). Veelgi enam, IFN-g- ja IL-10-tootvate autoreaktiivsete T-rakkude absoluutarv oli aktiivsete patsientide puhul suurem.süsteemneluupuserütematooskui tervetel inimestel ja mitteaktiivsetel patsientidelsüsteemneluupuserütematoos(Joonis 2b). Taustsageduste lahutamisel saavad aktiivsed patsiendidsüsteemneluupus erütematoosoli IFN-g- ja IL-10-tootvate autoreaktiivsete T-rakkude sagedus oluliselt suurem kui tervetel inimestel (IFN-g: P ¼ 0.003; IL{{5} }: P ¼ 0,004), samuti IFN-g-, IL-17- ja IL-10-tootvaid autoreaktiivseid T-rakke kui mitteaktiivsete patsientide puhulsüsteemneluupuserütematoos(IFN-g: P ¼ 0.002; IL-17: P ¼ 0.00 2; IL-10: P ¼ 0.005) (joonis 2c). Lisaks korreleerus IFN-g- ja IL-10-, kuid mitte IL-17- ja IL-4-tootvate tuumaantigeenidele reageerivate T-rakkude sagedus haiguse aktiivsusega. Kuid ainult IL-4-tootvate rakkude sagedus näitas vähem korrelatsiooni haiguse aktiivsusega (IFN-g: P < 0.0001,="" r="" ¼="" 0,7574;="" il{{20}="" }:="" p="" ¼="" 0,005,="" r="" ¼="" 0,5889;="" il-4:="" p="" ¼="" 0,14,="" r="" ¼="" 0,3717;="" il-="" 10:="" p="" ¼="" 0,0004,="" r="" ¼="" 0,6977)="" (joonis="" 2d).="" otsustatuna="" ifn-g="" tootjate="" sageduse="" järgi,="" antigeenireaktiivne="">^plussT-rakud olid peamiselt Th1 liini. Seevastu IL-17 ja IL-10 tootjad tuvastati ainult madalamatel sagedustel.26 Võrreldes autoantikehade tasemetega, on tsütokiini tootva CD4 sagedused.^plussT-rakud ei olnud korrelatsioonis kaheahelalise DNA kontsentratsiooni ja antinukleaarsete antikehade seerumi tiitriga (täiendav joonis S3A ja B). Tuuma antigeeni-reaktiivse CD4 vahel pole muud korrelatsiooni^plussTäheldati T-rakke ja autoantikehi, välja arvatud La-reaktiivne CD4^plussT-rakud La autoantikehade suunas (täiendav joonis S3C).

Tuuma antigeeni suhtes reaktiivsete CD4 pluss T-rakkude tuvastamine aktiivse süsteemse erütematoosluupuse ja luupusnefriidiga patsientide uriinis

Tuuma antigeeniga reaktiivsete Th1-rakkude populatsioon kahtlustatakse tungimistneerudkude, kus nad võivad kohata oma peaaegu kõikjal esinevat sugulasantigeeni. Uurides CD4 T-raku retseptori (TCR)-b repertuaari^plussPerifeersest verest eraldatud T-rakud võrreldes 5 patsiendi uriinist eraldatud T-rakkudegasüsteemneluupuserütematoosja aktiivneluupusnefriit, täheldasime uriinist pärinevate rakkude oligoklonaalset kallutatud TCR-i repertuaari (joonis 3a). 20 kõige rikkalikuma T-raku klooni kumulatiivne sagedus oli uriinis oluliselt kõrgem, mis vastab madalamale mitmekesisuse indeksile (täiendav joonis S4A). Et testida, kas need rakud näitavad ka reaktiivsust teatud komplekti suhtessüsteemneluupuserütematoos-seotud tuumaantigeenid, genereerisime raamatukogud, mis koosnesid uriini CD4-st^plussT-rakud, mis on eraldatud 3 patsiendist, kellel onsüsteemneluupuserütematoosja aktiivneluupusnefriit(täiendav joonis S4B). Kuseteede CD4^pluss T cells were metabolically and functionally active cells indicated by the ability to proliferate upon stimulation with SEB but with signs of exhaustion shown by a reduced proliferation capacity after polyclonal activation (Supplementary Figure S4C and D). Because of these circumstances, only microcultures with a SEB stimulation index of >4 lisati uriini CD4 loendamiseks^plussT-rakud, mis on spetsiifilised üksiku tuumaantigeeni suhtes. Paralleelselt uriini CD4-ga^plussT-rakud, tuumaantigeeniga reaktiivse CD4 sagedus^plussMäärati perifeerses veres T-rakud, mis võimaldas samade isikute vastavaid sagedusi otseselt võrrelda (joonis 3b). Leidsime, et see on passiivneluupusnefriit, uriini tuumaantigeeniga reaktiivse CD4 sagedused^plussT-rakud olid kõrgemad kui perifeerses veres. Selle tähelepaneku kinnitamiseks märgistasime 4 aktiivsest eraldatud uriinirakudluupusnefriitdoonorid karboksüfluorestseiini suktsiinimidüülestriga ja segasid märgistatud rakud doonoriga sobitatud PBMC-dega, et võimaldada antigeeniga reaktiivsete rakkude otsest võrdlust ühes testis, kasutades ARTE tehnikat. CD154 sagedus^plussCD69^plussDoonoriga sobitatud uriini ja perifeersete vererakkude stimuleeritud ja mittestimuleeritud proovides olevaid T-rakke kasutati selleks, et hinnata, kas tuuma antigeeni suhtes reaktiivsed T-rakud on uriiniga rikastatud.neerudstimuleerimisindeksi arvutamisega (joonis 3c). Kuigi uriini T-rakkude raamatukogu ja ARTE meetodid erinesid tuumaantigeenide stimulatsiooni keskmise indeksi poolest (stimulatsiooniindeks – uriini T-rakkude raamatukogu: 17; ARTE: 2,79; P ¼ 0,4) (joonis 3d) , perifeerse ja uriini CD4 autoreaktiivsuse analüüs^pluss Mõlema meetodi T-rakud (kokku n ¼ 7) näitasid suurenenud tuumaantigeenispetsiifilise stimulatsiooni indeksit uriinis (P ¼ 0.0156) (joonis 3e). Need tähelepanekud viitavad sellele, et tuuma antigeeni suhtes reaktiivne CD4^plussT-rakud tungivad sisse ja akumuleeruvadnakatunudneerud. Seega lokaalne koepõletik sissesüsteemneluupuserütematoosvõib olla antigeenispetsiifiline nähtus ja seda otseselt moduleerib infiltratsioonautoreaktiivneT rakud.

Jätkamiseks 2. osa jaoks klõpsake siin.