Cistanche glükosiid reguleerib Bmi1 ja soodustab hiire spermatogooniliste tüvirakkude levikut Akt signaaliraja kaudu

Eesmärk: uurida Cistanche glükosiidide soodustavat toimet ja sellega seotud mehhanisme hiire spermatogooniliste tüvirakkude proliferatsioonile. Meetod: Cistanche glükosiidi mõju tuvastamiseks hiire spermatogonaalsete tüvirakkude proliferatsioonivõimele kasutati MTT testi ja EdU rakkude proliferatsiooni testi; Western blot meetodit kasutati Bmi1, p-Akt ja Akt valkude ekspressiooni tuvastamiseks cistanche glükosiidiga; RT-PCR katse tuvastas seotud geenide ekspressioonitulemused ja näitas lõpuks p-Akt ja Bmi1 valkude vahelist üles- ja allavoolu regulatiivset seost inhibiitorite ja siRNA kaudu. Tulemus: Võrreldes kontrollrühmaga, 0.5-1 µM Cistanche glükosiid soodustas hiire spermatogonaalsete tüvirakkude proliferatsiooni (P<0.05); Compared with the control group, the expression levels of p-Akt and Bmi1 proteins in the 0.5-1 µ M Cistanche glycoside treated group increased (P<0.05); Akt inhibitors downregulated the levels of p-Akt and Bmi proteins (P<0.05); SiBmi1 had no significant effect on Akt mRNA levels (P>0.05). Järeldus: Cistanche glükosiid aktiveerib Akt signaaliraja ja reguleerib üles Bmi1 ekspressiooni, soodustades hiire spermatogonaalsete tüvirakkude proliferatsiooni.

Märksõnad: tsistanche glükosiid; Hiire spermatogoonilised tüvirakud; Bmi1; rakkude proliferatsioon

Viljatus on muutunud ülemaailmseks probleemiks, mis takistab inimühiskonna arengut [1-2]. Epidemioloogilise statistika kohaselt kannatab ligikaudu 15 protsenti -20 protsenti paaridest kogu maailmas viljatushaiguste all, kusjuures meeste düsfunktsioon põhjustab enam kui 50 protsenti viljatuse sümptomitest [3]. Seetõttu on meeste viljatuse tõhusate ravimeetodite leidmine muutunud reproduktiivtervise valdkonna kuumaks uurimisteemaks nii kodu- kui ka rahvusvaheliselt.

Cistanche meessoost eelised – toniseerivad neerud

Cistanche neeruhaiguste toodete vaatamiseks klõpsake siin

【Küsi lisa】 E-post:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Polükombivalgu inhibeeriv kompleks 1 (PRC1), mis koosneb B-raku spetsiifilisest Moroni hiire leukeemiaviiruse integratsioonikohast 1 (Bmi1), võib ennetada enneaegset vananemist ja säilitada tüvirakkude iseeneslikku uuenemisvõimet [4]. Proteiini kinaas B (Akt) osaleb rakkude proliferatsioonis ja diferentseerumises [5] ning aktiveeritud Akt osaleb erinevates olulistes bioloogilistes tegevustes [6-7].

Cistanche glükosiid I (C27H30O11, molekulmass: 530,52) on Hiina traditsioonilisest meditsiinist eraldatud Cistanche glükosiidi hüdrolüsaat, millel on erinevad farmakoloogilised ja bioloogilised toimed [8-9]. Aruannete kohaselt võib Cistanche glükosiidil olla teatav terapeutiline toime osteoporoosile [10]. Cistanche glükosiid I mõju meeste reproduktiivfunktsioonile ei ole siiski veel selge. Spermatogeensed tüvirakud (SSC) on kõige primitiivsem spermarühm, millel on võime ise uueneda ja diferentseeruda, mängides asendamatut rolli meeste reproduktiivse funktsiooni säilitamisel. Seetõttu kasutati selles uuringus hiire SSC-sid in vitro mudelina, et uurida Cistanche glükosiidi mõju hiire SSC-de proliferatsioonivõimele ja nende toimemehhanismile.

Kõrbe ženšenn-Toniseeriv neer

1 Materjalid ja meetodid

1.1 Rakukultuur

Selles uuringus kasutati hiire spermatogoonilisi tüvirakke (C18-4). Rakud pärinesid professor He Zupingi uurimisrühmast ning need eraldati, puhastati ja tuvastati vastavalt spetsifikatsioonidele. Hiire spermatogoonilistele tüvirakkudele lisati 10 protsenti veise loote seerumit (Gibco) ja 1 protsenti penitsilliini/streptomütsiini lahuses DMEM/F12 (Gibco) ning kultiveeriti söötmes (37 kraadi, 5 protsenti CO2).

1.2 MTT eksperiment

Inokuleerige C18-4 koguses 5000 rakku süvendi kohta 96-süvendiga plaadile, et tagada rakkude ühtlane nakatamine. Pärast rakkude adhesiooni valige ravi jaoks vajalikud ravimid ja ravimi kontsentratsioonid. Pärast 72-tunnist uimastisõltuvust lisati süvendisse, kuhu rakud inokuleeriti, 50 µl valmistatud tiasoolsinist (MTT) ja 96 süvendiga plaadid pandi 4-5 tunniks rakuinkubaatorisse. Pärast inkubeerimist visake kultuurilahus 96 süvendiga plaatidelt ära, lisage igasse süvendisse 150 µl dimetüülsulfoksiidi (DMSO) ja lõpuks mõõtke neelduvus, kasutades ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsi (Biotek) lainepikkusel 490 nm.

Tistanche pulber - Toniseeriv neeru

1.3 Edu rakkude proliferatsioon

Inokuleerige rakud ühtlaselt {{0}}süvendiga plaadile (6,0 × 103 süvendi kohta), pärast rakkude kleepumist seina külge, lisage 24 tunni jooksul ravimeid vastavalt katsevajadustele ja seejärel kasutage 100 μ LDMEM/ F12 sisaldab algse kultiveerimissöötme asendajana 20 µL EdU-d ja seejärel testitakse rakkude proliferatsioonipotentsiaali vastavalt EdU testikomplekti juhistele.

1.4 Western blot

Eelsalvestatud rakuvalgu proov jaotati SDS PAGE geeliga ja kanti seejärel pärast elektroforeesi PVDF membraanile. See suleti 5-protsendilise lõssisisaldusega 1 tund. See kombineeriti spetsiifiliste primaarsete antikehadega temperatuuril 4 kraadi üleöö: küüliku anti-hiire p-Akt antikeha (1 ∶ 2000) (CST), Akt antikeha (1 ∶ 1000) (CST), GAPDH (1 ∶ 5000) (Abcam), Bmi1 (1 ∶ 5000) (Abcam). Teisel päeval siduda küüliku sekundaarse antikehaga toatemperatuuril 1 tund. Vastavad valgud tuvastati Chemiluminescence Liquid (ECL) komplekti (Bio-Rad) abil ja lõpuks jälgiti antigeen-antikeha reaktsiooni ChemiDoc süsteemi (Bio-Rad) abil.

1,5 RT-PCR

Kogu RNA ekstraheerimise protsessis kasutatav reagent on TRIzol reagent (Invitrogen) ja cDNA saadakse vastavalt esimese ahela cDNA pöördtranskriptsiooni komplekti (Vazyme) juhistele. RT PCR viidi läbi TaqMan geeniekspressiooni Master Mix (Bio-Rad) abil vastavalt juhistele, kasutades ΔΔ. Ct meetod arvutab mRNA ekspressiooni suhteliste kordajate muutuse väärtusega 2 − ΔΔ Ct. Praimeri järjestuste tabel (tabel 1)

1.6 siRNA transfektsioon

Bmi 1 mRNA siRNA osteti ettevõttest Ribobio ja järjestuste loend on tabelis 2. Kasutati transfektsioonireaktiivi Lipofectamine 6000 (Invitrogen). Rakke (2,0 × 105 süvendi kohta) kultiveeriti üle öö DMEM/F 12-s, millele oli lisatud 10 protsenti veise loote seerumit 6-süvendiga plaadil. Vastavalt tootja juhistele segati Lipofectamine 6000 põhjalikult vastavalt kontroll-siRNA ja Bmi1 siRNA-ga ning transfekteeriti 5 tundi ilma veise loote seerumita kultiveerimissöötmes. Pärast pesemist PBS-ga asendati algne sööde 10% veise loote seerumiga DMEM/F12. 24 tunni pärast koguti rakud, et tuvastada erinevate vastavate valkude ja geenide ekspressioonimuutused.

Tabel 1 RT PCR amplifitseeritud praimeri järjestused

Tabel 2 siRNA Bmi1 järjestus

1.7 Statistiline analüüs

Kõiki andmeid analüüsiti SPSS 16.{1}} ja GraphPad Prism 8 tarkvara abil. Kahe või enama rühma keskmiste väärtuste erinevuste põhjal valiti võrdlemiseks Studenti t-test ja ühesuunaline ANOVA test. Erinevus P<0.05 was considered statistically significant.

2 tulemust

2.1 Cistanche glükosiidide mõju spermatogoonilistele tüvirakkudele

Selleks et teha kindlaks, kas epimeediumglükosiid I avaldab proliferatiivset toimet hiire spermatogoonilistele tüvirakkudele, leidsime MTT katsetega, et Cistanche glükosiid I võib soodustada hiire spermatogonaalsete tüvirakkude proliferatsiooni kontsentratsioonidel {{0}}.5 ja 1 uM (joonis 1A). Järgmiseks, et täiendavalt kontrollida Cistanche glükosiid I proliferatiivset toimet hiire spermatogonaalsetele tüvirakkudele, kinnitasime EdU rakkude proliferatsioonikatsetega, et Cistanche glükosiid I võib samuti soodustada hiire spermatogooniliste tüvirakkude proliferatsiooni kontsentratsioonides 0,5 ja 1 µM. (Joonis 1B).

Kõrbe elus tsistanche-Toniseeriv neer

2.2 Cistanche glükosiid reguleerib üles Bmi1 ekspressiooni

Varasemad laboriuuringud on näidanud, et Bmi1 ekspresseerub teiste organite kudedega võrreldes tugevalt munandikoes ja seda ekspresseeritakse peamiselt hiire spermatogooniliste tüvirakkude tuumas. Hiljutised uuringud on näidanud, et Bmi1 on spermatogooniliste tüvirakkude proliferatsiooni säilitamisel väga oluline [12]. Seetõttu oletame, et Cistanche glükosiid I omab Bmi1-le regulatiivset toimet, soodustades seeläbi hiire spermatogooniliste tüvirakkude proliferatsiooni. Western blot tulemused näitasid, et Cistanche glükosiid I reguleeris oluliselt Bmi1 valgu ekspressiooni (joonis 2).

2.3 Tistanche glükosiid aktiveerib Akt signaaliraja

Aruannete kohaselt on fosforüülitud Akt tihedalt seotud rakkude proliferatsiooni ja diferentseerumisega [13]. Seetõttu uurisime icariin I mõju Akt fosforüülimisele. Leidsime, et Cistanche glükosiidid reguleerisid oluliselt Akt fosforüülimise ekspressiooni kontsentratsioonidel 0,5 ja 1 µM (joonis 3).

2.4 Bmi1 Akt allareguleerimise pärssimine

Varasemate uurimisaruannete kohaselt [14] valisime Akt inhibiitori (MK-2206) kontsentratsiooniga 10 (µM) ja leidsime, et p-Akt inhibeerimine inhibeeris oluliselt Bmi1. See tulemus näitab, et Bmi1 ekspressiooni reguleerib Akt (joonis 4)

Joonis 1: Cistanche glükosiidi I mõju hiire spermatogoonilistele tüvirakkudele

A. MTT testi kasutati Cistanche glükosiid I-ga 3-päevase ravi mõju tuvastamiseks hiire spermatogooniliste tüvirakkude elujõulisusele; B. EdU rakkude proliferatsiooni katset kasutati hiire spermatogooniliste tüvirakkude proliferatsiooni tuvastamiseks pärast 3-päevast ravi Cistanche glükosiididega, samuti statistilise analüüsi diagrammi; *P<0.05, * * P<0.01 compared to the control group, n=3.

Joonis 2: Cistanche glükosiidi I mõju Bmi1 valgule

Cistanche deserticola glükosiid I ravi mõju Bmi1 ekspressioonile hiire spermatogoonilistes tüvirakkudes 24 tunni pärast tuvastamiseks kasutati Western blot analüüsi ning esitati ka statistiline kaart* P<0.05, compared to the control group, n=3.

Joonis 3: Cistanche glükosiidi I mõju Akt signaalirajale

Western blot analüüsi kasutati Akt ja Akt fosforüülimise ekspressiooni tuvastamiseks hiire spermatogoonilistes tüvirakkudes pärast 24-tunnist töötlemist Cistanche Cistanche glükosiid I-ga ning esitati ka statistiline kaart** P<0.01, compared to the control group, n=3.

Joonis 4: Akt inhibiitori mõju Bmi1-le. Fosforüülitud Akt ja Bmi1 ekspressiooni tuvastamiseks hiire spermatogoonilistes tüvirakkudes kasutati Western blot katset pärast 24-tunnist ravi Akt inhibiitoriga ning esitati statistiline diagramm* P<0.05 * * P<0.01, compared to the control group, n=3.

2.5 Bmi1 vaikimine ei mõjuta Akt ekspressiooni

Bmi1 ja Akt vahelise üles-allavoolu seose edasiseks kinnitamiseks vaigistasime Bmi1 ja täheldasime muutusi raku Akt ekspressioonis. Esiteks transfekteeriti Bmi1 erinevate järjestuste siRNA-d hiirerakkudesse, et uurida nende transfektsiooni efektiivsust. RT PCR katse tulemused näitasid, et siBmi1-1, siBmi1-2 ja siBmi1-3 vähendasid märkimisväärselt Bmi1 ekspressiooni, siBmi1-2 ja siBmi1-3 millel on parem mõju (joonis 5A). Western blot kinnitas veelgi, et nii siBmi1-2 kui ka siBmi1-3 võivad märkimisväärselt vähendada Bmi1 valgu taset (joonis 5B), seega valisime järgnevateks uuringuteks siBmi1-2 ja siBmi1-3. Huvitaval kombel näitas RT-PCR, et Bmi1 vaigistamine ei mõjutanud Akt ekspressiooni (joonis 5C). Ülaltoodud tulemused näitavad, et Akt asub Bmi1-st ülesvoolu.

Joonis 5: Bmi1 vaigistamise mõju Akt

A. RT-PCR analüüs kolme vaigistava järjestuse mõju kohta Bmi1 geeni ekspressioonile; B. Western blot katse abil tuvastati kolme erineva siRNA järjestuse mõju Bmi1 valgu vaigistamisele võrreldes siCtrl-ga ja viidi läbi statistiline analüüs; C. RT-PCR analüüs Bmi1 vaigistamise mõju kohta Akt geenile** P<0.01, * * * P<0.001 compared to the control group, n=3.

3 Arutelu

Viljatus takistab tõsiselt inimühiskonna jätkusuutlikku arengut – meeste viljatus moodustab 50 protsenti viljatushaigetest. Meditsiinitehnoloogia pideva arenguga on oluliselt paranenud meeste viljatuse kliinilise ravi tase. Olemasolevatel kirurgilistel ravimeetoditel, nagu abistav reproduktiivtehnoloogia, on aga puudusi, nagu kõrge hind ja madal edukus ning kasusaajate hulk. Need sobivad patsientidele, kellel on munandite mikrosperma võtmise ajal täielik asoospermia, kellel on selged geneetilised haigused ja kes ei soovi erinevatel põhjustel ravi saada [16]. Seetõttu on tehtud nii kodu- kui ka rahvusvahelisi jõupingutusi ohutumate ja usaldusväärsemate meeste viljatuse ravimeetodite väljatöötamiseks ning medikamentoossest ravist on saanud meeste viljatuse valdkonna uurimistöö [17]. Olemasolev kliiniline praktika on näidanud, et Hiina traditsioonilisel hiina meditsiinil on meeste viljatuse ravimisel hea tõhusus ja ohutus [18].

Cistanche deserticola efektiivsus – toniseeriv neeru

Tsistanche glükosiid on viimastel aastatel Hiina traditsioonilises meditsiinis meeste viljatuse ravis kuum teema. Selle põhikomponendil, Cistanche glükosiidil, on mitmesugused farmakoloogilised toimed, sealhulgas immuunfunktsiooni tugevdamine [19], meeste reproduktiivfunktsiooni tugevdamine [20], antioksüdandid [21] ja osteoporoosivastane toime [22]. Cistanche glükosiidi toimemehhanismi edasiseks selgitamiseks pärast inimkehasse sattumist valiti selles uuringus Cistanche glükosiidi, Cistanche glükosiidi hüdrolüsaadi, uurimisobjektiks, et uurida spetsiifilist mehhanismi, mille abil hüdrolüsaat avaldab oma farmakoloogilist toimet. Esiteks leidsime, et Cistanche glükosiid I võib soodustada hiire spermatogooniliste tüvirakkude proliferatsiooni. Väärib märkimist, et Cistanche glükosiid I ei soodustanud hiire spermatogooniliste tüvirakkude proliferatsiooni kontsentratsioonist sõltuval viisil, mis näitab, et Cistanche glükosiid I on annuse suhtes ohutu. Järgmisena avastasime, et Cistanche glükosiid I reguleeris märkimisväärselt Bmi1 valgu ekspressioonitaset, mis on tihedalt seotud meeste reproduktiivfunktsiooniga. Hiljuti leidsid teadlased, et Bmi1 puudumine võib tõsiselt mõjutada isaste hiirte reproduktiivfunktsiooni, mis avaldub peamiselt oligospermia ja munandite suurenemises [23]. Vahepeal kinnitas ka meie uurimisrühma teine ​​​​uuring, et Bmi1 inhibeerimine võib tõsiselt mõjutada spermatogooniliste tüvirakkude proliferatsioonivõimet. Seetõttu oletame, et Cistanche glükosiid I, mis soodustab hiire spermatogooniliste tüvirakkude proliferatsiooni, võib olla seotud Bmi1 ekspressiooni reguleerimisega. Aruannete kohaselt on p-Akt tihedalt seotud rakkude proliferatsiooni ja diferentseerumisega [14]. Seetõttu testisime Cistanche glükosiid I poolt põhjustatud muutusi p-Akt valgus ja leidsime, et Cistanche glükosiid I reguleeris ka p-Akt. Lõpuks uurisime üles- ja allavoolu suhet Akt ja Bmi1 vahel. Väärib märkimist, et erinevate laborite poolt saadud Bmi1 ja Akt üles- ja allavoolu seoste uurimistulemustes on erinevusi [24-25]. Selle uuringu tulemused näitavad, et Akt-spetsiifilised inhibiitorid reguleerivad Bmi1 alla, samal ajal kui Bmi1 vaigistamine ei mõjuta Akt mRNA taset, mis näitab, et Akt võib olla Bmi1-st ülesvoolu, mida reguleerib Akt. Uurides Bmi1 vaigistamise mõju Aktile, uurisime seda ainult mRNA tasemel. Kuna Bmi1 on transkriptsiooni inhibiitor, oletame, et Bmi1 valgu ja Akt valgu vahel võib esineda koostoime. Praegu puuduvad aga täielikud tõendid, mis kinnitaksid üles- ja allavoolu seost Akt ja Bmi1 vahel. Seetõttu täiendame ja täiustame seda edaspidi.

Cistanche-toniseeriva neeru toime

Kokkuvõttes leiti selles uuringus esimest korda, et Cistanche glükosiid I soodustab spermatogooniliste tüvirakkude vohamist, paljastades Cistanche glükosiid I uue mehhanismi, mis soodustab spermatogooniliste tüvirakkude proliferatsiooni raku tasandil, rikastades teoreetilist alust. Cistanche glükosiidi kasutamiseks meeste viljatuse kliinilises ravis.

viide

［1］ Dutta S, Biswas A, Sengupta P. Rasvumine, endokriinsüsteemi häired ja meeste viljatus ［J］. Asian Pac J Reprod, 2019, 8(5): 195.

［2］ Zhang F, Liu M, Gao J. Muutused sünaptonemaalse kompleksi kodeerivates geenides ja inimese viljatus ［J］. Int J Biol Sci, 2022, 18(5): 1933-1943.

［3］ Serrano R, Garcia-Marin LJ, Bragado MJ. Sperma fosfoproteoom: meeste viljatuse lahtiharutamine ［J］. Bioloogia (Basel), 2022, 11(5): 659.

［4］ Yang D, Liu peakorter, Yang Z jt. KMI1 südames: uudsed funktsioonid väljaspool tuumorigeneesi ［J］. EBioMedicine, 2021, 63: 103193.

［5］ Abeyrathna P, Su Y. Akt kriitiline roll kardiovaskulaarses funktsioonis ［J］. Vascul Pharmacol, 2015, 74: 38-48.

［6］ Peltier J, O'Neill A, Schaffer DV. PI3K/Akt ja CREB reguleerivad täiskasvanud neuraalse hipokampuse eellasrakkude proliferatsiooni ja diferentseerumist ［J］. Dev Neurobiol, 2007, 67(10): 1348-1361.

［7］ Rafalski VA, Brunet A. Energia metabolism täiskasvanu neuraalsete tüvirakkude saatuses ［J］. Prog Neurobiol, 2011, 93: 182–203.

［8］Liu Zichen, Xu Ying, Chen Shizhong Cistanche glükosiidi I farmakokineetika ja jaotus kudedes rottidel [J] Chinese Journal of Pharmacy, 2008 (11): 848-851

［9］Zi Hui, Li Keqiang, Shang Deyang jt. Tsistanche glükosiidi metabolismi ja jaotumine kudedes monomeerides ja liitühendites osteoporoosi mudelrottidel [J] Chinese Journal of Experimental Prescriptions, 2015, {{21) 4}}

［10］Zi Hui, Fan Ying, Jiang Ning jt Eksperimentaalne uuring roti luuüdi mesenhümaalsete tüvirakkude osteogeense diferentseerumise edendamiseks BMP/Runx2/Osx signaaliraja kaudu Cistanche glükosiid I ja Cistanche glükosiid II abil [J] Chinese Journal of Osteoporoos, 2019, 25 (05): 690-695

［11］ Zhou S, Dong J, Xiong M jt. UHRF1 interakteerub snRNA-dega ja reguleerib alternatiivset splaissimist hiire spermatogonaalsetes tüvirakkudes ［J］. Tüvirakkude aruanded, 2022, 17(8): 1859-1873.

［12］ Yu J, Shen C, Lin M jt. BMI1 soodustab spermatogooniliste tüvirakkude säilimist, represseerides epigeneetiliselt Wnt10b/-kateniini signaaliülekannet ［J］. Int J Biol Sci, 2022, 18(7): 2807-2820.

［13］ Chen Z, Li L, Wu W jt. Treening kaitseb proliferatiivseid lihassatelliitrakke kurnatuse eest Igfbp7-Akt-mTOR telje ［J］ kaudu. Theranostics, 2020, 10(14): 6448-6466.

［14］ Ma Y, Sender S, Sekora A jt. Inhibeeriv vastus PI3K/AKT raja inhibiitoritele MK-2206 ja buparlisiibile on seotud pankrease duktaalse adenokartsinoomi rakuliinide geneetiliste erinevustega ［J］. Int. J. Mol. Sci., 2022, 23(8): 4295.

［15］ Carson SA, Kallen AN. Viljatuse diagnoosimine ja ravi: ülevaade ［J］. JAMA, 2021, 326(1): 65-76.

［16］ Bosch E, De Vos M, Humaidan P. Assisted Reproductive Technologies külmsäilitamise tulevik ［J］. Front Endocrinol (Lausanne), 2020, 11:67.

［17］ Wang M, Wang Q, Du Y jt. Vitamiinid koos traditsioonilise Hiina meditsiiniga meeste viljatuse vastu: süstemaatiline ülevaade ja metaanalüüs ［J］. Androloogia, 2020, 8(5): 1038-1050.

［18］ Zhang Z, Yang J, Kong T jt. Traditsioonilise hiina meditsiini sündroomi meeste viljatuse elemendid, mis ilmnesid latentse puu mudeli analüüsiga ［J］. J Tradit Chin Med, 2018, 38(6): 926-935.

［19］Ji Xin Cistanche glükosiidide immunomoduleeriva toime uurimise edusammud [J] Hebei Pharmaceutical, 2016, 38 (05): 753-756

［20］Li Kangmei, Li Mingxing, Chen Minqi jt Cistanche glükosiidide reproduktiivsüsteemile avalduva mõju uurimine [J] Western Traditional Chinese Medicine, 2022, 35 (04): 143-146

［21］Zhang Pan, Shi Juan, Liu Li jt Uuring Cistanche glükosiidide ja nende derivaatide antioksüdantse toime kohta [J] China Food Additives, 2016, (02): 85-88

［22］Zhang Hao, Zheng Yuling, Ding Hui Teadustöö edusammud tsistanšglükosiidiga seotud radade kohta osteoporoosi ravis [J] Journal of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, 2022, 41 (04): 531-538

［23］ Dai X, Zhang Q, Yu Z jt. Bmi1 puudulikkusega hiirtel on isaste viljatus［J］. Int J Biol Sci, 2018, 14(3): 358-368.

［24］ Yang W, Wu Z, Yang K jt. BMI1 soodustab südamefibroosi isheemiast põhjustatud südamepuudulikkuse korral PTEN-PI3K/Akt-mTOR signaaliraja kaudu［J］. Am J Physiol Heart Circ Physiol, 2019, 316(1): H61-H69.

［25］ Su Z, Yang Z, Xu Y jt. Apoptoos, autofagia, nekroptoos ja vähi metastaasid［J］. Mol Cancer, 2015, 14:48.