Cistanche Deserticola polüsahhariididel on neuroprotektiivne toime

lisateabe saamiseks:Ali.ma@wecistanche.com

Yue Liu et al

Abstraktne:

Isheemiline insult on kõrge haigestumuse ja suremusega haigus.Cistanchedeserticolapolüsahhariidid(CDP) omab laia valikut kasulikke toimeid, sealhulgas hepatokaitset ja immuunsüsteemi homöostaasi. Niipalju kui me teame, on CDP kaitsev toime(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)hapniku-glükoosi puudusest/reperfusioonist (OGD/RP) vigastatud neuronitel ei ole uuritud. Selles uuringus vigastas OGD/RP PC12 rakumudelit. Lühidalt CDP(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)({0}},05, 0,5 ja 5 ug/ml) manustati enne reperfusiooni. CDP kaitsev toime(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)Seejärel hinnati rakkude elujõulisuse, laktaatdehüdrogenaasi (LDH) lekke, [Ca2 pluss] I, mitokondriaalse membraani potentsiaali (MMP) ja raku apoptoosi alusel ning andredoksseisundit pärast reperfusiooni hinnati reaktiivsete hapnikuliikide (ROS), katalaasi ( CAT), glutatioonperoksüdaas (GSH-Px) ja kogu antioksüdantne võime. Põhineb asjaolul, et Parkinsoni tõvega seotud valk DJ-1 osaleb endogeenses antioksüdatsioonis ja täidabneuroprotektiivnemõju pärast isheemiatõbe, uurisime CDP vahelist koostoimet(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)ja DJ{{0}}. DJ-1 ekspressioon tuvastati ELISA ja Western blot analüüsiga ning DJ-1 translokatsiooni hinnati immunofluorestsentsi abil. Tulemused näitasid, et CDP (0,05, 0,5 ja 5 ug/ml) nõrgendas PC12 rakusurma, säilitas MMP ja kaltsiumi homöostaasi; pärssis oksüdatiivset stressi ja vähendas raku apoptoosi. Lisaks stimuleeris CDP (5 ug/ml) märkimisväärselt DJ{10}} sekretsiooni ja ekspressiooni. Üldiselt näitasid tulemused, et CDP(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)avaldab aneuroprotektiivnetoime OGD/RP-indutseeritud vigastuste vastu, inhibeerides oksüdatiivset stressi ja reguleerides DJ-1 rada

Märksõnad:Cistanche deserticola, polüsahhariidid, neuroprotektiivne, hapnikuvaegus/-glükoosi reperfusioon, oksüdatiivne stressDJ-1

Klõpsake Cistanche UK toodete vaatamiseks

1. Sissejuhatus

Isheemiline insult on maailmas teisel kohal suremuse ja pikaajalise puude peamine põhjus [1]. Insuldist põhjustatud surmajuhtumite arv kasvab 2030. aastal 7,8 miljonini [2]. Hiinas sureb igal aastal insulti 58–142 inimest 100000 kohta. Seega tuleb välja töötada tõhusad strateegiad isheemia-reperfusioonikahjustuse ümberpööramiseks. Laialdased tõendid kinnitavad, et oksüdatiivne stress on peamine tegur, mis soodustab ajuinfarkti teket ja progresseerumist reperfusiooni ajal [3,4]. Seetõttu avastades tõhusaneuroprotektiivneained, mis on võimelised vähendama ROS-i ja pärssida oksüdatiivset stressi, on äratanud märkimisväärset huvi uurimistöö vastu. Parkinsoni tõvega seotud proteiinDJ-1 vahendab neuroprotektsiooni, stimuleerides apoptootilist ja antioksüdatiivset geeniekspressiooni [4,5]. DJ-1 võib oksüdatiivse stressi ja mitogeeni stimuleerimise teel levida mitokondritesse ning seda saab sekreteerida rakuvälisesse maatriksisse patoloogilistes tingimustes, nagu rinnavähk, melanoom ja OGD/RP vigastus [6]. Lisaks on DJ-1 kasulik isheemilise neurodegeneratsiooni terapeutiliseks sihtimiseks, kuna tal on oluline roll antioksüdatsioonis [4,7]. Viimase 10 aasta jooksul on mitmed grupid kinnitanud, et DJ{12}} on seda teinudneuroprotektiivnemõju in vivofokaalsetele ajuisheemia mudelitele ja in vitro OGD/RP mudelitele [6–9]. Samal ajal tühistavad mõned ravimid, sealhulgas tsüklosporiin A ja naatriumfenüülbutüraat, neuronite rakusurma DJ-1 ülesreguleerimise isheemilise insuldi kaudu [9,10 ].

Cistanchedeserticola, lahutamatu kuivatatud taimCistanchedeserticolaYCMa ja Cistanche tubulosa Wighti toodetakse peamiselt Põhja- ja Loode-Hiina kõrbealadel [11]. C. deserticola on söödav ja seda on austatud kui "kõrbete ženšenni". Akupunkti retseptis kasutatakse seda kroonilise neeruhaiguse, seksuaalse impotentsuse, naiste viljatuse, leukorröa, metrorraagia ja seniilse kõhukinnisuse raviks [12].C. deserticola polüsahhariidid, mis on peamine aktiivne komponent, mis on eraldatudCistanche deserticola. CDP, moduleerib immuunfunktsiooni ja lipiidide tasakaalu ning pakub kaitset vananemise, oksüdatsiooni ja maksakahjustuste eest. Peale selle, CDP(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)hoiab ära isheemia-reperfusioonikahjustuse südames ja maksas [13,14]. Hiljutised uuringud teatasid, et CDP(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)on mittetoksilised[12,15,16] ja teised C. Deserticolast ekstraheeritud fütokemikaalid, sealhulgas ehhinakosiid, isoakteosiid, akteosiid ja salidrosiid, näitavadneuroprotektiivnemõju [11,12]. Siiski ei ole seni teatatud CDP võimalikust kasutamisest isheemilise insuldi kahjustuse leevendamiseks.

Käesolevas uuringus oletame, et CDP(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)pärsib oksüdatiivset stressi neuroprotektsiooniks. CDP võimalik kaitsev toime(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)iniskeemia insuldi kahjustusi uuriti OGD / RP vigastatud PC12 rakkude abil. Seejärel uuriti DJ-ga-1 seotud interaktsioone.

2. Meetodid

2.1. Rakukultuur ja OGD/RP mudel

PC12 rakke kultiveeriti RPMI 1640 söötmes, mis sisaldas 10 protsenti FBS-i, temperatuuril 37 kraadi normoksilises inkubaatoris, mis sisaldas 5 protsenti CO2. Söödet vahetati iga 48 tunni järel. OGD/RP mudel valmistati ette. PC12 rakke pesti ja eksponeeriti Earle'i tasakaalustatud soolalahusega. Seejärel viidi rakud 4 tunniks 37 kraadi juures 5% CO2 ja 95% N2 sisaldavasse anaeroobsesse kambrisse ja lasti seejärel uuesti hapnikuga rikastada. Selle etapi käigus lisati rakkudele sama kogus söödet. Pärast reoksüdeerimist pandi rakud 24 tunniks normoksilisse inkubaatorisse.

2.2. Ravimite manustamine

CDP(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)osteti ettevõttelt Yuanye Biological Technology Co., Shanghai, Hiina (C23J7Y18405, puhtus > 98 protsenti). Positiivse kontrollühendina kasutati nimodipiini, esmavaliku ravimit isheemia insuldi ennetamiseks [17–19]. Nimodipiini süstimine pärines firmalt Bayer Company. Rakud jagati juhuslikult kuueks rühmaks, nimelt kontroll, vehicle (OGD/RP), Nimo (5 ug/ml), CDP.(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)(0,05 ug/ml), CDP(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)(0,5 ug/ml) ja CDP (5 ug/ml). Nimodipiin ja CDP(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)lisati enne reperfusiooni. Kontrollrühma kultiveeriti normaalses söötmes ja inkubeeriti normoksilistes tingimustes.

2.3. Rakkude elujõulisus: MTT ja NRU testid

PC12 rakud (6 × 103 süvendi kohta) külvati 96-süvendiga kultuuriplaadile. Rakke töödeldi vastavalt iga rühma nõuetele. MTT (Solarbio, Hiina) lisati rakkudele kontsentratsioonis 5 mg/ml ja inkubeeriti 4 tundi 37 kraadi juures. Formataan on suktsinaatdehüdrogenaasi redutseerimisprodukt elusrakkudes [20]. Tekkinud sinise formatsaani lahustamiseks lisati DMSO. Neeldumine lainepikkusel 490 nm tuvastati Microplate Readeriga (Thermo, USA) pärast seda, kui rakke loksutati 10 minutit temperatuuril 25 °C. Rakkude elujõulisuse tulemused ilmnesid protsendina kontrollrühmast [21].

Neutraalse punase omastamise (NRU) test viidi läbi vastavalt eelnevalt avaldatud protokollile [22]. Kui reperfusiooniperioodid olid lõppenud, lisati rakkudele neutraalset punast (Solarbio, Hiina) kontsentratsiooniga 50 ug/ml. Segu inkubeeriti 3 tundi. Seejärel pesti rakud kiiresti maha lahusega, mis sisaldas 0,5 protsenti formaldehüüdi ja 1 protsenti kaltsiumkloriidi. Seejärel lisati rakud segule, mis sisaldas 1 protsenti etüülhapet ja 50 protsenti veevaba etanooli. Plaate loeti 540 nm neeldumise juures pärast seda, kui rakke loksutati 20 minutit 37 kraadi juures. Rakkude elujõulisuse tulemused ilmnesid protsendina kontrollrühmast.

Cistanche deserticola polüsahhariididon aNeuroprotektiivne toime

2.4. Tsütotoksilisuse hindamine

LDH on tsütoplasmaatiline ensüüm, mis katalüüsib laktaattopüruvaadi oksüdatsiooni. LDH vabaneb kiiresti rakuvälisesse vedelikku, kui rakumembraan on kahjustatud. Seetõttu tehakse LDH tuvastamine tavaliselt tsütotoksilisuse hindamiseks. [23]. Eksperimentaalne protseduur järgis LDH testikomplekti (Jiancheng, Hiina) tarnitud müügikomplekti juhiseid. Iga proovi neeldumine tuvastati mikroplaadilugejaga 440 nm juures. Rakusurma protsent arvutati järgmise valemi abil: elujõulisus (protsent)=(OD ravi – ODTreatment blank)/(OD max LDH aktiivsus – OD max LDH aktiivsus tühi) × 100 protsenti .

2.5. Intratsellulaarse Ca2 pluss kontsentratsiooni tuvastamine

Ca2 plussi rakusisest kontsentratsiooni mõõdeti Fluo-3/AM-ga [15]. PC12 rakke pesti kolm korda PBS-ga ja inkubeeriti seejärel 2 μM Fluo-3/AM-iga (Beyotime, Hiina) 30 minutit 37 kraadi juures pimedas. Seejärel pesti rakke kolm korda PBS-ga ekstratsellulaarse värvi eemaldamiseks. Fluo-3/AM fluorestsentsi intensiivsus määrati laserskaneeriva konfokaalse mikroskoobiga (Olympus, Jaapan). Hallskaala väärtuste arvutamiseks kasutati tarkvarapaketti Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer ja ImageJ

2.6. MMP mõõtmine

JC-1 (5,5′,6,6′-tetrakloro-1,1′,3,3′-tetraetüülimidakarbotsüaniin; Beyotime, Hiina) on mugav pingetundlik sond, mida tavaliselt kasutatakse värvimiseks rakud ja MMP hindamine [24]. PC12 rakke pesti kaks korda külma PBS-ga ja inkubeeriti seejärel seguga, mis sisaldas 50% söödet ja 50% töövedelikku, 15 minutit 37 kraadi juures pimedas. Seejärel visati segu ära ja asendati värske söötmega. Punased ja rohelised fluorestsentspildid jäädvustati laserskaneeriva konfokaalse mikroskoopia abil. MMP mõõtmiseks kasutati punaste ja roheliste fluorestsentssignaalide suhtelist osakaalu [25]. Hallskaala väärtuste arvutamiseks kasutati tarkvarapakettiOlympus FV10-ASW 4.1 Viewer ja ImageJ.

2.7. Apoptoosi tuvastamise test, Hoechest33342 ja voolutsütomeetria analüüs

Rakkude apoptoosi uurimiseks kasutati DNA-d siduvat värvi Hoechst33342 [26]. Pärast reperfusiooni pesti PC12 rakke kolm korda PBS-ga ja inkubeeriti Hoechst33342-ga (Beyotime, Hiina) kontsentratsiooniga 5 ug/ml 15 minutit 37 kraadi juures pimedas. Seejärel vaadeldi rakke laserskaneeriva konfokaalse mikroskoobi all. Apoptootilistel rakkudel ilmnes intensiivne sinine fluorestsents ja tuuma kondenseerumine. Iga värvimiskatse jaoks jäädvustati ja kvantifitseeriti kolm juhuslikku välja. Hallskaala väärtuste arvutamiseks kasutati Olympus FV10-ASW 4.1 Viewer ja ImageJ. Apoptootiliste rakkude protsendid arvutati järgmise valemi abil: apoptootiline kogus / üldkogus × 100 protsenti [27].

2.8. ROS generatsiooni mõõtmine

Fluorestseeruv sond 2', 7'-diklorofluorestseiindiatsetaat (DCFH-DA; Jiancheng, Hiina) võib tungida läbi rakumembraanide ja seda saab hüdrolüüsida mittefluorestseeruvaks DCFH-ks. DCFH oksüdeeritakse intratsellulaarse ROS-i poolt fluorestseeruvaks DCF-ks [29]. Pärast reperfusiooni pesti rakke kaks korda PBS-ga ja inkubeeriti seejärel DCFH-DA-ga lõppkontsentratsioonil 10 μM 45 minutit 37 kraadi juures pimedas. Fluorestsentsi jälgiti afluorestsentsspektrofotomeetriga, mille ergastuslainepikkus oli 485 nm ja emissioonilainepikkus 535 nm.

Cistanche deserticola polüsahhariididon aNeuroprotektiivne toime

2.9. Oksüdatiivse stressi näitajate määramine: CAT, GSH-Px ja T-AOC tasemed

Rakud kraabiti ja resuspendeeriti PBS-is. Saadud rakususpensioone töödeldi ultraheliga 45 korda jääl ja tsentrifuugiti kiirusel 1000 p/min 10 minutit 4 kraadi juures. Supernatandid jäeti alles ja neid kasutati tuvastamiseks [24]. Raku supernatandi koguvalgusisaldust mõõdeti BCA valguanalüüsi reaktiivikomplektiga (KeyGEN, Hiina). CAT, GSH-Px ja T-AOC tasemete aktiivsust mõõdeti vastavalt tootja juhistele (Jiancheng, Hiina). Iga proovi neeldumine tuvastati mikroplaadilugejaga.

2.10. Ekstratsellulaarse DJ-1 kontsentratsiooni mõõtmine

PC12 rakud (6 × 103 süvendi kohta) külvati 96-augukultuuriplaatidele. Pärast reperfusiooni koguti raku supernatant ja analüüsiti DJ-1/PARK-7 ELISA komplektiga (Raybio, USA). ) vastavalt tootja juhistele [9]. Iga proovi neeldumine tuvastati Microplate Readeriga kahe lainepikkusel 450 nm või 540 nm.

2.11. Western blot analüüs

Rakuvalgud ekstraheeriti jääkülma lüüsipuhvriga vastavalt tootja juhistele (KeyGEN, Hiina). Valgu kontsentratsioon määrati BCA valguanalüüsi reaktiivikomplektiga. Võrdsed kogused valgulüsaate (20 ug) igast rühmast lahustati 12% naatriumdodetsüülsulfaat-polüakrüülamiidi geelelektroforeesiga ja kanti seejärel nitrotselluloosmembraanile. Membraani inkubeeriti 2 tundi toatemperatuuril PBS-iga, mis sisaldas 5 protsenti kooritud piima, ja seejärel sondeeriti PARK7/DJ-1-vastaste antikehadega (ab76008, Abcam; lahjendus 1:1000) üleöö temperatuuril 4 °C. Seejärel pesti membraani kolm korda PBST-ga ja inkubeeriti sekundaarse antikehaga kitse küülikuvastase IgG-ga (SA00001-2, Proteintech Group; lahjendus 1:5000) toatemperatuuril 2 tundi. Kontrolliks peeti antikeha anti- -tubuliini (10759-1-AP, Proteintech Group; lahjendus 1:1000). Valguribad visualiseeriti täiustatud kemoluminestsentsreaktsiooni (ECL) reaktiividega. Ribatihedusi mõõdeti QuantityOne Analysis tarkvaraga v.4.6.9.

2.12. Immunotsütokeemia analüüs

PC12 rakud fikseeriti 4-protsendilises paraformaldehüüdis 15 minuti jooksul toatemperatuuril pärast reperfusioonitöötlust [9]. Pärast liigse paraformaldehüüdi eemaldamist inkubeeriti rakke 10 minutit toatemperatuuril PBS-is, mis sisaldas 0,3 protsenti Triton X-100. Seejärel pesti rakke kolm korda PBS-iga, enne kui neid inkubeeriti 5% normaalse kitse seerumiga 1 tund. Seejärel inkubeeriti rakke mitokondrite värvimiseks küüliku hiire monoklonaalse ATP-vastase süntaasi ahelaga (MABS1304, EMD Millipore, lahjendus 1:200) ja seejärel inkubeeriti PARK7/DJ-vastase antikehaga (lahjendus 1: 100) valgu DJ-1 sondeerimiseks. Rakke pesti ja inkubeeriti kitse küülikuvastase IgG-Alexa 488-ga (roheline; A11034, Invitrogen; lahjendus 1:1000) ja kitse hiirevastase IgG-Alexa 594-ga (punane; A11032; Invitrogen; lahjendus 1:19000). min. Lõpuks pesti rakke kolm korda PBS-ga ja paigaldati alusklaasidele DAPI-d sisaldava paigalduskeskkonnaga. Immunofluorestsentskujutised visualiseeriti laserskaneeriva konfokaalse mikroskoobi abil.

Cistanche deserticola polüsahhariididon aNeuroprotektiivne toime

2.13. Andmete/statistiline analüüs

Kõik väärtused näidati keskmisena ± SD. Olulisus määrati ühesuunalise dispersioonanalüüsi (ANOVA) abil, millele järgnes Dunnetti mitme võrdluse test. p < .05="" loeti="" statistiliseks="" olulisuseks.="" katseandmeid="" analüüsiti="" spss="" 17.0="" statistilise="" tarkvara="">

3. Tulemused

3.1. CDP(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)inhibeeris OGD/RP-indutseeritud rakukahjustusi

OGD/RP-ga kokku puutunud PC12 rakkude arv vähenes märkimisväärselt. Raku kuju muudeti ja rakumembraan purunes. MTT testis rakkude elujõulisus CDP-s(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)rühmades ({{0}},05, 0,5 ja 5 ug/ml) olid vastavalt 58,91 protsenti ± 5,40 protsenti, 61,13 protsenti ± 3,81 protsenti ja 68,57 protsenti ± 3,24 protsenti, p < 0,05="" (joonis="" 1a)="" ja="" sõidukiga="" oli="" see="" 51,68="" protsenti="" ±="" 3,89="" protsenti.="" need="" väärtused="" näitasid,="" et="">(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)kaitses rakke OGD / RP vigastuste ja rakusurma vähenemise eest. Lisaks oli rakkude elujõulisus Nimo rühmas 77,02 protsenti ± 5,22 protsenti, mis on peaaegu võrdne 5 ug/ml CDP omaga.(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)töödeldud rühm.

NRU testis rakkude elujõulisus CDP-s(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)rühmad ({{0}},05, 0,5 ja 5 ug/ml) olid vastavalt 52,03 protsenti ± 4,72 protsenti, 58,49 protsenti ± 2,50 protsenti ja 69,17 protsenti ± 3,91 protsenti (joonis 1B) ja et sõidukiga oli 47,14 protsenti ± 2,88 protsenti. Väärtused näitasid CDP kontsentratsioonist sõltuvat kaitsvat toimet.

Erinevalt kandjast (44,73 protsenti ± 3,30 protsenti) vähenes LDH vabanemine CDP-s oluliselt(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)rühmad. CDP-s(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)rühmades ({{0}},05, 0,5 ja 5 ug/ml), olid LDH lekkemäärad vastavalt 32,41 protsenti ± 3,70 protsenti, 27,13 ± 2,79 protsenti ja 23,13 protsenti ± 4,59 protsenti, p < ,01="" (joonis="" fig.="" 1c).="" lisaks="" oli="" ldh="" lekke="" määr="" nimo="" rühmas="" 21,99="" protsenti="" ±="" 4,02="" protsenti,="" mis="" oli="" peaaegu="" võrdne="" 5="" ug/ml="" cdp-ga="" töödeldud="" rühma="">

3.2. CDP(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)nõrgestatud OGD/RP-indutseeritud [Ca2 pluss] i suurenemine

Intratsellulaarne Ca2 pluss tase PC12 rakkudes tõusis pärast OGD/RP vigastust 4146,60 ± 195,97-ni, erinevalt kontrollrühmast (373,62 ± 75,69). CDP(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)rühmad ({{0}},05, 0,5 ja 5 ug/ml) võivad annusest sõltuvalt vähendada intratsellulaarset Ca2 plussi taset vastavalt 2921,25 ± 222,19, 2015,85 ± 230,53 ja 1768,43 ± 426,12 A (C) ). Lisaks vähenes Ca2 pluss tase 5 ug/ml CDP-ga töödeldud rühmas tasemeni, mis oli võrreldav Nimo rühma omaga (1591,19 ± 213,21).

3.3. CDP(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)nõrgestatud OGD / RP-indutseeritud MMP hajumine

Võrreldes kontrollrühmaga (1,67 ± 0,89) oli vehiiklirühmas (0,48 ± 0,10) rohkem roheline FL fluorestsents kui punane FL fluorestsents (joonis 2B ja D). Punase ja rohelise FL-fluorestsentsi vaheline suhe vähenes 0,5 ja 5 ug/ml CDP puhul 1,11 ± 0,26 ja 1,18 ± 0,16-ni.(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)vastavalt töödeldud rühmad, p < 0,01.="" rohelise="" fl="" fluorestsents="" vähenes="">

3.4. CDP(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)takistas OGD / RP-indutseeritud raku apoptoosi

Rakud, millel olid kondenseerunud kromatiinid või fragmenteeritud tuumad, hinnati apoptootilisteks rakkudeks [30]. Hoechst33342 testi tulemused näitasid kondenseerunud tuumade ilmnemist pärast OGD/RP-d (joonis 3A ja C). Vehiiklirühma tuumades täheldati suurt FL fluorestsentsi intensiivsust. Tuumade FL fluorestsentsi intensiivsus nõrgenes 5 ug/ml CDP korral(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)töödeldud rühm. Analüüsisime PC12 rakkude apoptootilist kiirust kaastsütomeetria abil, kasutades FITC-Annexin V/PI topeltvärvimist (joonis 3B ja D). Kontrollrühmal oli rakkude apoptootiline määr 4,16 protsenti ± 0,24 protsenti, samas kui kandjarühmas oli 22,98 protsenti ± 0,66 protsenti. 5 ug/ml CDP-ga töödeldud rühmas oli rakkude apoptoosi määr 786 protsenti ± 1,16 protsenti.

3.5. CDP(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)nõrgestatud OGD / RP-indutseeritud rakusisene ROS-i akumulatsioon ja säilinud redoksstaatus

CDP mõju(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)oksüdatiivse stressi kohta demonstreeriti ROS-i tekke, GSH-Px, CAT aktiivsuse ja T-AOC taseme põhjal. ROS-i tase OGD/RP-ga vigastatud PC12 rakkudes tõusis ja muutus oluliselt kõrgemaks kui kontrollrühmas (p < 0,01).="" samal="" ajal="" on="" ros="" tasemed="">(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)rühmades ({{0}},05, 0,5 ja 5 ug/ml) vähenesid annusest sõltuval viisil (p < 0,01;="" joonis="" 4a).="" lisaks="" suurendas="" cdp="" oluliselt="" ka="" t-aoc="" (p="">< 0,05;="" joonis="" 4b),="" cat="" (p="">< 0,05;="" joonis="" 4c)="" ja="" gsh-px="" (p="">< 0,05;="" joonis="" 4d)="" taset="" võrreldes="" sõidukiga="" grupp.="" endogeensete="" antioksüdantide="" aktiivsus="">(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)rühmad suurenesid.

3.6. CDP(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)stimuleeris DJ-de sekretsiooni-1 ja parandas DJ-de väljendust-1

Tuvastati DJ-1 kontsentratsiooni muutused raku supernatandis ja need näitasid võimalikku seost DJ-1 ja CDP vahel(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid). OGD/RP-ga vigastatud PC12 rakkudest täheldati DJ-1 vabanemist (joonis 5). DJ-1 oli 5 ug/ml CDP-s oluliselt ülesreguleeritud(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)-ravitud rühmas (38,66 ± 8,44 pg/ml) ja see tõusis oluliselt kui kandjarühmas (18,33 ± 3,80 pg/ml, p < 0,01) ja kontrollrühmas (9,67 ± 3,96 pg/ml, p < 0,01) .

CDP mõjude uurimiseks(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)DJ-1 rakusisese ekspressiooni kohta mõõtsime DJ-1 valgu taset Western blot meetodil. DJ-1 valgu ekspressioonitasemed tõusid oluliselt 24 tundi pärast reperfusiooni. Seevastu 5 ug/ml CDP järeltöötlus suurendas oluliselt DJ-1 üleekspressiooni võrreldes kandjarühmaga (p < 0,01,="" joonis="">

3.7. CDP(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)täiustatud DJ{0}} translokatsioon mitokondritesse

PC12 rakud värviti anti-PARK7/DJ-1 ja anti-ATP süntaasi ahela antikehadega (joonised 7 ja 8). Anti-ATP süntaas - ahelantikeha sidemed mitokondriaalse kompleksiga I ja siduv antigeen paiknesid mitokondriaalses sisemembraanis. Tulemused näitasid, et DJ{10}} siirdus pärast OGD/RP solvamist mitokondriaalsele sisemembraanile (joonis 8). Samal ajal näitasid DJ-1 ja mitokondrite topeltvärvimise tulemused, et CDP(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)hõlbustatud DJ- 1 mitokondriaalne translokatsioon ja kaaslokaliseerimine (joonis 8). Need tulemused näitasid otsest suhtlust DJ-1 janeuroprotektiivneCDP mõju(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)(joonis 9).

4. Arutelu

Selles uuringus teatasime vahetult, et CDP(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)vähendab tõhusalt OGD/RP-indutseeritud PC12 rakkude kahjustusi DJ-1 valgu ülesreguleerimise kaudu. CDP(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)paranenud rakkude elujõulisus, vähenenud rakumembraani kahjustused, säilinud intratsellulaarne Ca2 pluss homöostaas, takistatud MMP kadu, vähenenud raku apoptoos, allasurutud oksüdatiivne stress, soodustatud DJ-1 ekspressioon ja tõhustatud DJ-1 translokatsioon mitokondritesse. DJ-1 on hiljuti kaasatud reguleerimisseneuroprotektiivnemõju ja mitokondriaalne terviklikkus. Need tulemused andsid veenvaid tõendeid selle kohtaneuroprotektiivneCDP mõju(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)isheemia vastu. Lisaks mängib CDP ja DJ{0}} interaktsioon aneuroprotektiivneroll OGD / RP-indutseeritud PC12 rakukahjustuses. Ülaltoodud tulemused võivad arendada meie arusaamist CDP kasulikust mõjust ja anda kasulikku teavet insuldi raviks tulevikus.

Isheemilise insuldi põhjuseks on mitmed biokeemilised ja molekulaarsed mehhanismid, sealhulgas eksitotoksilisus, kaltsiumi ülekoormus ja oksüdatiivne stress [31]. OGD/RP-d kasutatakse laialdaselt isheemia-reperfusiooni in vitro mudelina ning seda kasutatakse neuroloogiliste ja biokeemiliste muutuste uurimiseks. PC12 rakuliin on tundlik OGD/RP vigastuste suhtes [2]. Sellel on mitmeid sümpaatiliste neuronite [32] omadusi ja omadusi ning seetõttu kasutatakse laialdaselt neuronaalseid rakuliine insuldist tingitud neuroloogiliste kahjustuste mehhanismidega seotud uuringutes [33, 34]. Paljud uuringud on näidanud, et oksüdatiivne stress mängib olulist rolli insuldi ja ajuisheemia kahjustuste korral [35–37]. Parkinsoni tõvega seotud valk DJ{10}} võib pärssida isheemilist neurodegeneratsiooni ja käitumuslikke düsfunktsioone, vähendades ROS-i vahendatud neuronaalseid kahjustusi [7]. Seetõttu kasutasime OGD / RP-vigastuse PC12 raku mudelit, et uuridaneuroprotektiivneCDP mõju(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid).

OGD/RP poolt indutseeritud PC12 rakkude kahjustuse astet hinnati MTT, NRU ja LDH vabanemisanalüüsidega. CDP administreerimine(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)({0}},05, 0,5 ja 5 ug/ml) parandas rakkude ellujäämist ja vähendas LDH vabanemist. CDP-ravi kasulikud mõjud hõlmasid ka rakusisese kaltsiumi ülekoormuse vähenemist ja MMP säilimist. Intratsellulaarse Ca2 pluss kontsentratsiooni kõrvalekaldeid, eriti mitokondriaalse kaltsiumi ülekoormust, on seostatud neuronaalse apoptoosi ja isheemiainsuldi põhjustatud surmaga [38]. MMP võib peegeldada elektronide transpordiahela efektiivsust ja seda on näidatud selle süsteemi patoloogilise häire indeksina [39]. Nii intratsellulaarse Ca2 pluss kontsentratsiooni tõus kui ka MMP kadu võivad põhjustada neuronite struktuuri destabiliseerumist ja lõpuks põhjustada rakukahjustusi või rakusurma [21, 40]. Selles uuringus näitasid tulemused, et CDP inhibeeris märkimisväärselt rakusisest Ca2 pluss ülekoormust ja suurendas MMP taset OGD / RP-kahjustusega PC12 rakkudes. Apoptoos mängib olulist rolli ajuisheemia-reperfusioonikahjustuse keerulises patofüsioloogias. Üha suurenevad andmed viitavad sellele, et apoptoos on seotud mitokondriaalse düsfunktsiooniga; MMP hajumine on varajane sündmus, mis põhjustab raku apoptoosi [8, 39]. Apoptoos on energiast sõltuv programmeeritud rakusurma protsess, mille käigus vabanevad üleliigsed rakud. Paljud isheemilise insuldi neuronid läbivad apoptoosi [41]. Selles uuringus viisime läbi Hoechst33342 ja anneksiin V-FITC/PI värvimise, et uurida CDP mõju apoptoosile [23,28]. Tulemused näitasid, et CDP säilitab tuuma terviklikkuse ja vähendab raku apoptoosi kiirust. Kõik need tulemused näitasid, et CDP apoptootiline aktiivsus aitas kaasa PC12 rakkude neuronaalsete vigastuste soodsale toimele.

Rakud, mis läbivad isheemiakahjustusi, mis on põhjustatud liigsest ROS-i akumulatsioonist, mis võib põhjustada lipiidide peroksüdatsiooni, rakumembraani kahjustusi, kaltsiumi ülekoormust ja mitokondriaalset düsfunktsiooni, mille tulemuseks on raku apoptoos ja surm [42]. Endogeensete antioksüdantide, nagu SOD, CAT ja GSH-Px tarbimine näitas samuti esinemist. Joonis 9. CDP kaitsva toime võimalikud mehhanismid(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)OGD/RP-indutseeritud PC12 rakukahjustuse vastu. CDP ravi pärsib oksüdatiivset stressi, stabiliseerib Ca2 pluss kontsentratsiooni ja MMP, suurendab DJ-1 ekspressiooni ja lokaliseerumist mitokondrites. Y. Liu et al. Biomedicine & Pharmacotherapy 99 (2018) 671–680 678oksüdatiivse stressi kohta isheemia-reperfusiooni ajal. Selles uuringus näitas OGD/RP rühmas ROS olulist suurenemist ning CAT, GSH-Px ja T-AOC vähenemist võrreldes 5 ug/ml CDP-ga töödeldud rühmaga. Siiski täheldasime CDP rühmades ROS-i tekke ja endogeensete antioksüdantide (CAT, GSH-Px ja T-AOC) tarbimise olulist vähenemist. 5 ug/ml CDP rühmas olid kasulikud mõjud lähedased Nimo rühma omadele. Tulemused näitasid, et CDP inhibeerib ROS-i teket ja taastab ensümaatilise antioksüdantide kaitse.

DJ-1 on redoks-reagentneuroprotektiivnevalk, mis on seotud insuldi oksüdatiivse stressi reguleerimisega. DJ{0}} üleekspressiooni kasulikud mõjud hõlmavad rakkude ellujäämist isheemia-reperfusioonist ning mitokondriaalse funktsiooni ja morfoloogia säilimist, näiteks mitokondrite läbilaskvuse ülemineku pooride avanemist [39,43]. Varasemad uuringud on näidanud, et DJ-1 kaitsev toime OGD/RP-ga kokkupuutuvates rakkudes on seotud selle antioksüdantsete omaduste ja mitokondrite translokatsiooniga [43–45]. DJ-1 teostab tõhusat endogeenset neuroprotektsiooni mitokondriaalsete defektide leevendamisel translokatsiooni kaudu [46]. Mitmed uuringud on näidanud, et DJ{10}} translokatsioon võib mõjutada mitokondriaalset liikumist, tõhustada raku ja raku vastastikmõju ja soodustada muid rakkude ellujäämist soodustavaid protsesse.

DJ-1 mõjutab nii in vitro kui ka in vivo mudelites mitmeid protsesse, näiteks rakkude migratsiooni ja adhesiooni, kemotaksist, proliferatsiooni ja apoptoosi [6,9,47,48]. Kasutades OGD / RP vigastatud PC12 rakkude insuldi mudelit, uurisime võimalikku seost CDP vahel(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)ja DJ-1. DJ- 1 üleekspressioon tuvastati ELISA ja Western blot analüüsiga. Koos selle funktsiooniga näitas üks katsete oluline leid, et DJ-1 märkimisväärne üleekspressioon toimus CDP(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)(5 ug/ml) manustati enne reperfusiooni. See viitas võimalikuleneuroprotektiivnemõju CDP ja DJ suhetele-1. Lisaks oleme täheldanud, et DJ-1, mis paikneb mitokondrites OGD/RP tingimustes ja DJ-1 rikkalikult, vähendas rakkude tundlikkust ROS-i suhtes ja pärssis oksüdatiivset stressi [45]. Tulemused viitasid sellele, et CDP reguleerib ja võimendab DJ-1, mis toimib molekulaarse seosena mitokondrite düsfunktsiooni ja oksüdatiivse stressi vahel ning tagab insuldile omase sekundaarse rakusurma progresseerumise [5,47,49–51]. Koos DJ-1 stabiliseerimisega mitokondrites, CDP(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)ravi suurendas rakkude ellujäämist, stabiliseeris Ca2 pluss homöostaasi, parandas MMP hajumist ja hoiab ära mitokondritega seotud apoptoosi [43]. Üldiselt näitasid meie tulemused, et CDP on uudneneuroprotektiivnemehhanism isheemilise insuldi ravis.

5. Järeldus

Meie tulemused näitasid, et CDP(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)kaitseb PC12 rakke OGD/RP-indutseeritud vigastuste eest tänu oma antioksüdantsele toimele, mis on osaliselt omistatud DJ-1 vahendatud rajale. Need mõjud hõlmavad rakumembraani kahjustuse kiiruse vähenemist, [Ca2 pluss] I homöostaasi säilimist, MMP hajumise leevendamist, raku apoptoosi pärssimist, rakusisese ROS-i nõrgenemist ja DJ-1 tasemete moduleerimist. Tulemused näitasid ka, et CDP ja DJ-1 vahelised interaktsioonid võimendavad neuroprotektsiooni ja säilitavad mitokondriaalse terviklikkuse. Seetõttu saab CDP-ga kaitsta haavatavaid neuroneid(Cistanchedeserticolapolüsahhariidid)DJ{0}} ekspressiooni parandamise kaudu isheemia insuldi ajal.

Tänuavaldused

Seda uuringut toetasid Hiina riiklik loodusteaduste sihtasutus (toetus 81360649), riiklik teaduse ja tehnoloogia võtmeprogramm (toetus 2015BAK45B01) ning Ningxia Hui autonoomse piirkonna teaduse ja tehnoloogia toetusprogramm (toetus 2016BZ07).

Cistanche deserticola polüsahhariididon a Neuroprotektiivne toime

Viited

[1] HD Tsai, JS Wu, MH Kao, JJ Chen, GY Sun, WY Ong, TN Lin, Clinacanthus nutans kaitsevad kortikaalseid neuroneid hüpoksiast põhjustatud toksilisuse eest, vähendades HDAC1/6, Neuromol. Med. 18 (2016) 274–282.

[2] J. Zhao, R. Liu, Stroke 1-2-0: kiirreageerimisprogramm insuldi korral Hiinas, Lancet Neurol. 16 (2017) 27–28.

[3] PM George, GK Steinberg, Uudsed insulditeraapiad: insuldi patofüsioloogia lahtiharutamine ja selle mõju kliinilistele ravimeetoditele, Neuron 87 (2015) 297–309.

[4] H. Yao, T. Ago, T. Kitazono, T. Nabika, NADPH oksüdaasiga seotud patofüsioloogia insuldi eksperimentaalsetes mudelites, Int. J. Mol. Sci. (2017) 18.

[5] J. Cao, M. Ying, N. Xie, G. Lin, R. Dong, J. Zhang, H. Yan, X. Yang, Q. He, B. Yang, DJ oksüdatsiooniseisundid{{ 1}} määravad raku saatuse vastusena oksüdatiivsele stressile, mille käivitab 4-hpr: autofagia või apoptoos? Antioksiidi redoksmärk. 21 (2014) 1443–1459.

[6] Y. Kaneko, H. Shojo, J. Burns, M. Staples, N. Tajiri, CV Borlongan, DJ-1 leevendab isheemilist rakusurma in vitro, võib-olla mitokondriaalse raja kaudu, Neurobiol, Dis. 62 (2014) 56–61.

[7] D. Yanagisawa, Y. Kitamura, M. Indian, K. Takata, T. Taniguchi, S. Morikawa, M. Morita, T. Inubushi, I. Tooyama, T. Taira jt, DJ{{ 1}} kaitseb fokaalsest ajuisheemiast ja reperfusioonist põhjustatud neurodegeneratsiooni eest rottidel, J. Cereb. Vere voolamine. Kohtusime. 28 (2008) 563–578.

[8] Y. Kaneko, N. Tajiri, H. Shojo, CV Borlongan, hapnikust ilma jäänud roti primaarsed närvirakud näitavad DJ-1 translokatsiooni tervetesse mitokondritesse: tugev insuldi terapeutiline sihtmärk, CNS Neurosci. Seal. 20 (2014) 275–281.

[9] N. Tajiri, CV Borlongan, Y. Kaneko, Tsüklosporiin A ravi tühistab isheemiast põhjustatud neuronite rakusurma, säilitades mitokondriaalse terviklikkuse Parkinsoni tõvega seotud valgu DJ-1, CNS Neurosci ülesreguleerimise kaudu. Seal. 22 (2016) 602–610.

[10] RX Yang, J. Lei, BD Wang, DY Feng, L. Huang, YQ Li, T. Li, G. Zhu, C. Li, FF Lu jt, Eeltöötlus naatriumfenüülbutüraadiga Leevendab ajuisheemiat/ reperfusioonikahjustus DJ-1 valgu ülesreguleerimise tõttu, Front. Neurol. 8 (2017) 256.

[11] C. Gu, X. Yang, L. Huang, Cistanches Herba. Neurofarmakoloogia ülevaade, Front. Pharmacol. 7 (2016) 289.

[12] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao, CM Tzeng, Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): Üks traditsioonilise hiina meditsiini parimaid farmaatsiakingitusi, Front. Pharmacol. 7 (2016) 41.

[13] Q. Liu, J. Li, J. Wang, J. Li, JS Janicki, D. Fan, Hiina ravimtaimede mõjud ja mehhanismid müokardi isheemia-reperfusioonikahjustuse parandamisel, Evid.- Based Compl. Alt. (2013) (2013) 925625.

[14] HS Wong, KM Ko, Herba Cistanches stimuleerib rakkude glutatiooni redokstsüklit H9c2 kardiomüotsüütide mitokondriaalsel hingamisel tekkivate reaktiivsete hapnikuliikide poolt, Pharm. Biol. 51 (2013) 64–73.

[15] T. Wang, X. Zhang, W. Xie,Cistanchedeserticola YC Ma, "Kõrbe ženšenn": ülevaade, Am. J. Chin. Med. 40 (2012) 1123–1141.

[16] L. Gu, WT Xiong, C. Wang, HX Sun, GF Li, X. Liu,CistanchedeserticolaKeetmine leevendab hüdroksüuurea poolt põhjustatud munanditoksilisust isastel hiirtel, Aasia J. Androl. 15 (2013) 838–840.

[17] E. Herzfeld, C. Strauss, S. Simmermacher, K. Bork, R. Horstkorte, F. Dehghani, C. Scheller, Uurimineneuroprotektiivnenimodipiini mõju Neuro2a rakkudele operatsioonilaadse stressimudeli abil, Int. J. Mol. Sci. 15 (2014) 18453–18465.

[18] G. Vahabzadeh, N. Rahbar-Roshandel, SA Ebrahimi, M. Mahmoudian,Neuroprotektiivnenoskapiini mõju aju hapniku-glükoosipuuduse kahjustusele, Pharmacol. Rep 67 (2015) 281–288.

[19] CP Wang, LZ Zhang, GC Li, YW Shi, JL Li, XC Zhang, ZW Wang, F. Ding, XM Liang, Mulberroside A kaitseb isheemilise kahjustuse eest roti kortikaalsete neuronite primaarses kultuuris pärast hapniku-glükoosi puudust. reperfusiooni teel, J. Neurosci. Res. 92 (2014) 944–954.

[20] X. Qi, R. Zhou, Y. Liu, J. Wang, WN Zhang, HR Tan, Y. Niu, T. Sun, YX Li, JQ Yu, trans-cinnamaldehüüd kaitsesid PC12 rakke hapniku- ja glükoosipuuduse eest /reperfusioonist (OGD/R) põhjustatud vigastus apoptoosi ja antioksüdatiivse stressi kaudu, Mol. Cell Biochem. 421 (2016) 67–74.

[21] R. Chang, R. Zhou, X. Qi, J. Wang, F. Wu, W. Yang, W. Zhang, T. Sun, Y. Li, J. Yu, Protective effects of aloiin ​​on hapniku ja glükoosipuudusest põhjustatud vigastus PC12 rakkudes, Brain Res. Bull. 121 (2016) 75–83.

[22] M. Agrawal, V. Kumar, AK Singh, MP Kashyap, VK Khanna, MA Siddiqui, AB Pant, Trans-resveratrool kaitseb isheemilisi PC12 rakke, inhibeerides hüpoksiaga seotud transkriptsioonifaktoreid ja suurendades antioksüdantide kaitseensüümide (ACS) taset Chem. Neurosci. 4 (2013) 285–294.

[23] KW Zeng, LX Liao, MB Zhao, FJ Song, Q. Yu, Y. Jiang, PF Tu, Protosappanin B kaitseb PC12 rakke hapniku-glükoosipuudusest põhjustatud neuronite surma eest, säilitades mitokondriaalse homöostaasi ubikvitiinist sõltuva indutseerimise kaudu p53 valgu lagunemine, Eur. J. Pharmacol. 751 (2015) 13–23.

[24] NT Ma, R. Zhou, RY Chang, YJ Hao, L. Ma, SJ Jin, J. Du, J. Zheng, CJ Zhao, Y. Niu jt, Protective effffects of aloperine on neonatal rot ensisijaised kultiveeritud hipokampuse neuronid, mis on vigastatud hapniku-glükoosi deprivatsiooni ja reperfusiooni tõttu, J. Nat. Med. 69 (2015) 575–583.

[25] Y. Wang, W. Ma, A. Jia, Q. Guo, Parekoksiib kaitseb hiire kortikaalseid neuroneid OGD/R-indutseeritud neurotoksilisuse eest, reguleerides Bcl-2 üles, Neurochem. Res. 40 (2015) 1294–1302.

[26] MP Ponnusamy, P. Seshacharyulu, A. Vaz, P. Dey, SK Batra, MUC4 stabiliseerib HER2 ekspressiooni ja säilitab vähi tüvirakkude populatsiooni munasarjavähirakkudes, J. Ovarian Res. 4 (2011) 7.

[27] R. Wang, L. Peng, J. Zhao, L. Zhang, C. Guo, W. Zheng, H. Chen, A. Gardenamide, kaitseb RGC-5 rakke H(2)O( 2) indutseeritud oksüdatiivse stressi solvangud, aktiveerides PI3K/Akt/eNOS signaaliraja, Int. J. Mol. Sci. 16 (2015) 22350–22367.

[28] LP Sun, X. Xu, HH Hwang, X. Wang, KY Su, YL Chen, taruvaigu diklorometaanekstraktid kaitsevad rakku hapniku-glükoosi puudusest põhjustatud oksüdatiivse stressi eest Y. Liu et al. Biomedicine & Pharmacotherapy 99 (2018) 671–680 679apoptoosi vähendamise kaudu, Food Nutr. Res. 60 (2016) 30081.

[29] L. Wang, Y. Zhang, T. Asakawa, W. Li, S. Han, Q. Li, B. Xiao, H. Namba, C. Lu, Q. Dong,Neuroprotektiivneneuroserpiini toime hapniku-glükoosipuuduse ja reoksüdatsiooniga töödeldud roti astrotsüütidele in vitro, PLoS One. 10 (2015) e0123932.

[30] Z. Zhiwen, W. Haitao, S. Fu, Z. Lihua, JL Peter, Q. Remi, Z. Wenhua, Liitiumioonid nõrgendavad seerumi puudusest põhjustatud apoptoosi PC12 rakkudes Akt/FoxO1 signaaliülekande reguleerimise kaudu rajad, Psychopharmacology (Berl) 12 (2015) 625–633.

[31] EJB Dariush Mozaffffarian, S. Alan jt, 2016. aasta südamehaiguste ja insuldi statistika kokkuvõte. American Heart Associationi aruanne, Circulation 133 (2016) 447–454.

[32] JE Jumblatt, TA, Muskariinse ligandi sidumissaitide reguleerimine närvi kasvufaktoriga PC12 feokromotsütoomirakkudes, Nature 297 (1982), 152–154.

[33] S. Afrazi, S. Esmaeili-Mahani, V. Sheibani, M. Abbasnejad, Neurosteroid allopregnanoloon nõrgendab kõrge glükoosisisaldusega indutseeritud apoptoosi ja takistab eksperimentaalset diabeetilist neuropaatilist valu: in vitro ja in vivo uuringud, J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 139 (2014) 98–103.

[34] X. Liu, X. Zhu, M. Chen, Q. Ge, Y. Shen, S. Pan, Resveratrool kaitseb PC12 rakke OGD/R-indutseeritud apoptoosi eest mitokondriaalse vahendatud signaaliraja kaudu, Acta Biochem Biophys Sin . 48 (2016) 342–353.

[35] PW Kleikers, K. Wingler, JJ Hermans, I. Diebold, S. Altenhofer, KA Radermacher, B. Janssen, A. Gorlach, HH Schmidt, NADPH oksüdaasid kui oksüdatiivse stressi allikas ja molekulaarne sihtmärk isheemia/reperfusiooni korral vigastus, J. Mol. Med. (Berl) 90 (2012) 1391–1406.

[36] FC Liu, HI Tsai, HP Yu, punase veini ekstrakti, resveratrooli, organeid kaitsvad toimed oksüdatiivse stressi poolt vahendatud reperfusioonikahjustuse korral, Oxid. Med. Rakk Longev. (2015) 568634.

[37] LK Seidlmayer, V. V. Juettner, S. Kettlewell, EV Pavlov, LA Blatter, EN Dedkova, Distinct mPTP aktivatsioonimehhanismid isheemia-reperfusioonis: Ca2 plus plus , ROS, pH ja anorgaanilise polüfosfaadi panus, Cardiovasc. Res. 106 (2015) 237–248.

[38] F. Su, AC Guo, WW Li, YL Zhao, ZY Qu, YJ Wang, Q. Wang, YL Zhu, Madala annuse etanooli eelkonditsioneerimine kaitseb hapniku-glükoosi puuduse / reoksüdatsioonist põhjustatud neuronikahjustuse eest, aktiveerides suure juhtivuse , Ca2 pluss pluss -aktiveeritud K plus pluss Kanalid In vitro, Neurosci. Bull. 33 (2017) 28–40.

[39] Y. Li, M. Wang, S. Wang, Mitokondriaalse lõhustumise inhibeerimise mõju energia metabolismile roti hipokampuse neuronites isheemia/reperfusioonikahjustuse ajal, Neurol. Res. (2016) 1.–8.

[40] C. Rui, L. Yuxiang, H. Yinju, Z. Qingluan, W. Yang, Z. Qipeng, W. Hao, M. Lin, L. Juan, Z. Chengjun jt, Protective effffects of Lycium barbarum polüsahhariid vastsündinute rottide primaarselt kultiveeritud hipokampuse neuronitel, mis on vigastatud hapniku-glükoosi deprivatsiooni ja reperfusiooni tõttu, J. Mol. Histol. 43 (2012) 535–542.

[41] BR Broughton, DC Reutens, CG Sobey, Apoptootilised mehhanismid pärast ajuisheemiat, Stroke 40 (2009) e331–339.

[42] Jordan M. Willcox, AJS Summerlee, Relaxin kaitseb astrotsüüte hüpoksia eest in vitro, PLoS One. 9 (3) (2014) e90864.

[43] X. Zhang, D. Yuan, Q. Sun, L. Xu, E. Lee, AJ Lewis, BS Zuckerbraun, MR Rosengart, kaltsium/kalmoduliinist sõltuv proteiinkinaas reguleerib PINK1/Parkini ja DJ{3} } mitofagia teed sepsise ajal, FASEB J. 31 (2017) 4382–4395.

[44] S. Vasseur, S. Afzal, J. Tardivel-Lacombe, DS Park, JL Iovanna, TW Mak, DJ-1/ PARK7 on hüpoksiast põhjustatud rakuliste reaktsioonide oluline vahendaja, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 106 (2009) 1111–1116.

[45] Z. Xianghong, Y. Du, S. Qian, X. Li, L. Emma, ​​J. Anthony, Brian Lewis, S. Zuckerbraun, Matthew R. Rosengart, Kaltsium/kalmoduliinist sõltuv proteiinkinaas reguleerib PINK1/ Parkini ja DJ-1 mitofagia rajad sepsise ajal, FASEB J. (2017). [

46] MS Choi, T. Nakamura, SJ Cho, X. Han, EA Holland, J. Qu, GA Petsko, JR Yates 3., RC Liddington, SA Lipton, DJ-1 transnitrosüülimine PTEN-iks nõrgendab neuronaalsete rakkude surma Parkinsoni tõve mudelites, J. Neurosci. 34 (2014) 15123–15131.

[47] RK Dongworth, UA Mukherjee, AR Hall, R. Astin, SB Ong, Z. Yao, A. Dyson, G. Szabadkai, SM Davidson, DM Yellon, DJ Hausenloy, DJ-1 kaitseb rakusurma eest pärast ägedat südameisheemia-reperfusioonikahjustust, Cell Death Dis. 5 (2014) e1082.

[48] ​​A. Di Cello, M. Di Sanzo, FM Perrone, G. Santamaria, E. Rania, E. Angotti, R. Venturella, S. Mancuso, F. Zullo, G. Cuda, F. Costanzo, DJ{ {1}} on usaldusväärne seerumi biomarker kõrge riskiga endomeetriumi vähi (Tumor Biol) eristamiseks. 39 (2017) 1010428317705746.

[49] H. Aleyasin, MW Rousseaux, PC Marcogliese, SJ Hewitt, I. Irrcher, AP Joselin, M. Parsanejad, RH Kim, P. Rizzo, SM Callaghan jt, DJ-1 kaitsevad nigrostriataali teljest neurotoksiinist MPTP, moduleerides AKT rada, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 107 (2010) 3186–3191.

[50] RM Canet-Aviles, MA Wilson, DW Miller, R. Ahmad, C. McLendon, S. Bandyopadhyay, MJ Baptista, D. Ringe, GA Petsko, MR Cookson, Parkinsoni tõve valgu DJ-1 onneuroprotektiivnetsüsteiin-sulfiinhappe poolt juhitud mitokondriaalse lokaliseerimise tõttu, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101 (2004) 9103–9108.

[51] M. Liu, B. Zhou, ZY Xia, B. Zhao, SQ Lei, QJ Yang, R. Xue, Y. Leng, JJ Xu, Z. Xia, DJ hüperglükeemiast põhjustatud pärssimine-1 ekspressioon kahjustas isheemilise järelkonditsioneerimisjärgse kardioprotektsiooni efektiivsust rottidel, Oxid. Med. Rakk Longev. (2013) (2013) 564902.