Fengdani pojengi flavonoidide antioksüdant, valgendav ja antibakteriaalne toime
Mar 23, 2022
Kontakt: ali.ma@wecistanche.com
Jie Lu†, Zhiqiang Huang†, Yusheng Liu, Huimin Wang, Min Qiu, Yinghui Qu ja Wenpeng Yuan*
Abstraktne: Flavonoididneil on oluline bioloogiline toime, nagu põletikuvastane, antibakteriaalne, antioksüdant ja valgendav toime, mis on potentsiaalne funktsionaalne toidutooraine. Fengdani pojengi bioloogiline aktiivsus agaflavonoidpole eriti selge. Seetõttu on selles uuringus pojengflavonoidekstraheeriti Fengdani pojengi seemnejahust ning pojengi antioksüdantsest, antibakteriaalsest ja valgendavast toimestflavonoiduuriti. Optimaalseteks ekstraheerimistingimusteks olid metanooli kontsentratsioon 90 protsenti, tahke aine ja vedeliku suhe 1:35 g: ml, temperatuur 55 ◦C ja aeg 80 minutit; nendes tingimustes Fengdani pojengi saakflavonoidvõib ulatuda 1,205 ± 0,019 protsendini (rutiini kuivmassi ja pojengiseemnejahu kuivmassi suhe). Fengdani pojengi kliirens kokkuflavonoididkuni 1,1-difenüül-2-pikrüülhüdrasüül (DPPH) vaba radikaal, hüdroksüülradikaal ja 2,2'-asino-bis (3-etüülbensotiasoliin-6-sulfoonhape) (ABTS) vabade radikaalide sisaldus võib ulatuda vastavalt 75, 70 ja 97 protsendini. Fengdani pojengflavonoidvõib pärssida grampositiivsete bakterite kasvu. Fengdani pojengi minimaalsed inhibeerivad kontsentratsioonid (MIC).flavonoidS. aureusel olid B. anthracis, B. subtilis ja C. perfringens {{0}}.0293 mg/mL, 0,1172 mg/ml, 0,2344 mg/ml ja 7,500 mg/ ml, vastavalt. Fengdani pojengi flavonoidi inhibeerimise määr türosinaasi suhtes oli 8,53–81,08 protsenti. See uuring näitas intensiivselt, et Fengdani pojengi antioksüdant, valgendav ja antibakteriaalne toime on kokkuflavonoididolid märkimisväärsed. Fengdani pojeng kokkuflavonoididon suurepärane võimalus kasutada funktsionaalse toidumaterjalina.
Märksõnad:Fengdani pojengflavonoid; antioksüdant; valgendamine; antibakteriaalne toime; funktsionaalne toit
Flavonoidid, Cistanche peamine element, on vananemisvastane toime.
Vajuta, et näha tsistaansi ekstrakti vananemisvastaseid eeliseid
1. Sissejuhatus
Peony is one of the economic and ornamental crops, which has been cultivated for more than 1600 years in China [1]. Oil peony refers to the variety of peony that can be used as a raw material for edible oil [2]. As one of the most commonly used oil peonies, Fengdan peony contains dark oval seeds, which has abundant unsaturated fatty acids (>90 protsenti) [3]. Hiina valitsus on tunnistanud pojengiseemneõli uueks ressursitoiduks, kuna 2011. aastal oli selles palju linoleenhapet [4]. Lisaks on Hiina Rahvavabariigi riiklik tervise- ja pereplaneerimise komisjon 2011. aastal sertifitseerinud pojengiseemned kui funktsionaalse toidu uue ressursi inimeste tervise parandamiseks [5]. Fengdani pojengiseemnejahu on üks olulisemaid kõrvalsaadusi pojengiseemneõli valmistamisel, mis moodustab umbes 60–70 protsenti Fengdani pojengi seemnest ning on rikas flavonoidide, valkude, polüsahhariidide, polüfenoolide, paeonifloriini ja muude toimeainete poolest. koostisained. Suurt kogust Fengdani pojengiseemnejahu kasutatakse aga praegu ainult söödana või jäätmetena [6], mis toob kaasa loodusvarade raiskamise ja keskkonnareostuse [2].
Kirjanduse andmetel on flavonoididel oluline bioloogiline toime, nagu põletikuvastane, antibakteriaalne, antioksüdant ja valgendav toime [7–10], mida peetakse.potentsiaalsed funktsionaalse toidu toorained. Näiteks võib sojaoa isoflavoon oma antioksüdantsete omaduste tõttu kaitsta rakke vabade radikaalide kahjustuste eest [11–13]. Ginkgo biloba ekstraktis sisalduval flavonoidil on tugevad antioksüdantsed omadused ja see võib otseselt pärssida vabu radikaale [14]. Valge guajaavi flavonoidekstrakt on looduslik antibakteriaalne aine, mis võib muuta E. coli ja S. aureuse mikroskoopilist morfoloogiat [15].
Kahjuks pole Fengdani pojengi flavonoid potentsiaalse funktsionaalse toidutoormena kaasatud mitte ainult tööstuslikule tootmisele, vaid ka tema bioloogiline aktiivsus pole eriti selge. Seetõttu ekstraheeriti Fengdani pojengi seemnejahust pojengi flavonoidide kasulikkuse suurendamiseks toidupõllul nii palju kui võimalik ja ressursside raiskamise vähendamiseks ning pojengi flavonoidi antioksüdant, valgendav ja antibakteriaalne toime. uuriti. Eeldatakse, et see paneb aluse Fengdani pojengist uute funktsionaalse toidu tooraine väljatöötamisele.
2. Tulemused ja arutelu
2.1. Nelja teguri mõju flavonoidide kogusaagisele
Metanooli kontsentratsiooni mõju flavonoidide kogusaagisele on näidatud joonisel 1a. Flavonoidide kogusaagis suurenes algul, seejärel vähenes metanooli kontsentratsiooni tõusuga ning saavutas maksimumi (1,016 protsenti, rutiini kuivmassi ja pojengijahu kuivmassi suhe), kui metanooli kontsentratsioon oli 90 protsenti .Põhjus võib olla seotud metanooli polaarsusega ja flavonoidide kogusisalduse lahustuvusega pojengiseemnejahus [16]. Seega oli metanooli optimaalne kontsentratsioon 90 protsenti.
Nagu on näidatud joonisel fig 1c, suurenes flavonoidide kogusaagis alguses ja seejärel vähenes temperatuuri tõusuga. Flavonoidide kogusaak saavutas maksimaalse väärtuse (1,141 protsenti, rutiini kuivmassi ja pojengiseemnejahu kuivmassi suhe) temperatuuril 55 ◦C. Kogu flavonoidide lahustumiskiirust seemnejahus kiirendati temperatuuri sobiva tõstmisega. Osaline kogu flavonoid lagunes aga kõrgel temperatuuril eksponeerimisel [18], mis viib flavonoidide kogusaagise vähenemiseni. Seega oli 55 ◦C parim temperatuur.
Ekstraheerimisaja mõju flavonoidide kogusaagisele on näidatud joonisel 1d. Flavonoidide kogusaagis suurenes kiiresti 0,5 tunniga 1,5 tunnini. Kui ekstraheerimisaeg oli üle 1,5 tunni, jäi flavonoidide kogusaagis muutumatuks. Selle nähtuse põhjuseks võib olla see, et seemnejahu flavonoidide koguhulk lahustus pidevalt koos ekstraheerimisaja pikenemisega 0,5 tunniga 1,5 tunnini. Veelgi enam, kui aeg jõudis 1,5 tunnini, võivad kõik flavonoidid olla lahustunud. Seetõttu avaldas aja pikendamine veidi flavonoidide kogusaagist [4,19]. Seega oli parim ekstraheerimisaeg 1,5 h.
2.2. Flavonoidide kogusaagi optimeerimine
2.2.1. Mudeli sobitamine ja andmete analüüs RSM-i abil
Erinevate tegurite suhtelise tähtsuse edasiseks uurimiseks Fengdani pojengiseemnejahu flavonoidide kogusaagis viidi läbi RSM-katse. RSM-i kasutatakse mitmefaktoriliste katsete statistilises kavandamises ja andmeanalüüsis, et hinnata mitme muutuja suhtelist olulisust ja leida parimad tingimused ideaalseteks vastusteks [20]. Box-Behnkeni disain koos RSM-iga sobib lineaarse regressiooni võrrandiga, nii et katset saab täpsemalt analüüsida, et leida mõjutegurite hulgast seadus [21].
Tabel S1 näitas seost flavonoidide kogusaagise ja testimuutujate vahel. Eksperimentaalseid andmeid analüüsiti mitme regressioonianalüüsiga. Flavonoidide kogusaagise (Y) ja tahke aine ja vedeliku suhte (A), ekstraheerimistemperatuuri (B) ja ekstraheerimisaja (C) ruutpolünoomi regressioonivõrrand oli: y=1,19 pluss 0 .01A − {{10}}.02B − 0.003C pluss 0,02AB − 0,02AC pluss 0,01BC – 0,03A2 – 0,04B20,02C2.
Ruutpolünoomi mudeli anova on näidatud tabelis 1Mudeli F-väärtus oli 18,57, mudeli p väärtus oli 0.0004 (p < 0,01), mudeli sobivusaste oli 0,1202 ja määramiskoefitsient (R2) oli 0.9598, mis näitas, et mudelil oli äärmiselt oluline statistiline olulisus. Esmane termin (B) ja sekundaarne termin (A2, B2, C2) avaldasid äärmiselt olulist mõju flavonoidide kogusaagisele (p < 0.01).="" a,="" ab="" ja="" ac="" mõjutasid="" oluliselt="" flavonoidide="" kogusaagist="" (p="">< 0,05).="" c="" ja="" bc="" ei="" avaldanud="" olulist="" mõju="" flavonoidide="" kogusaagisele="" (p=""> 0,05). Vastavalt kolme teguri F-väärtusele oli mõju flavonoidide kogusaagisele ekstraheerimistemperatuur > tahke ja vedeliku suhe > ekstraheerimisaeg.
Tabel 1.Ruutpolünoomi mudeli anova.
Kolmemõõtmelised (3D) reaktsioonipinna diagrammid on näidatud joonistel 2a, c, e. 3D-graafiku kõrgeim punkt oli interaktiivsete tegurite jaoks parim tingimus. A ja B (joonis 2b), A ja C (joonis 2d) vastastikmõju kontuuride nõlvad olid järsemad, samas kui A ja C (joonis 2f) kalded olid siledad. See näitas, et interaktsioonil A ja B, A ja C oli suur mõju flavonoidide kogusaagisele, samas kui interaktsioonil B ja C ei olnud olulist mõju flavonoidide kogusaagisele. RSM-katse ja regressioonanalüüsi vaheline kooskõla tõestas veelgi, et loodud mudel oli täpsem.
Joonis 2.3D pinna diagrammid AB jaoks (a), AC (c) ja eKr (e) kuni flavonoidide kogusaagini.
2.2.2. Optimaalsete tingimuste kontrollimine
Mudeli antud teoreetilised optimaalsed parameetrid olid tahke ja vedeliku suhe 1:36,11, ekstraheerimistemperatuur 53,52 ◦C, ekstraheerimisaeg 82,65 min ja flavonoidide kogusaagise teoreetiline väärtus oli 1,195 protsenti. Arvestades tegelikku tööd, kohandati teoreetilised parameetrid tahke ja vedeliku suhtele 1:35, ekstraheerimistemperatuurile 55 ◦C ja ekstraheerimisajale 80 min. Nendes tingimustes oli flavonoidide kogusaagis 1,205 ± 0,019 protsenti. Võrreldes teoreetilise prognoosi väärtusega oli suhteline viga 0,8 protsenti. Teoreetiline väärtus oli kooskõlas tegeliku tulemusega, mis näitab, et optimeerimisparameetrid olid saadaval. Chen et al. [10] ekstraheeris pojengist flavonoide, kasutades 60-protsendilist etanooli-vesilahust ja saagis oli 1,34 protsenti, mis oli kooskõlas käesoleva dokumendiga. RSM-i kasutati laialdaselt flavonoidide optimaalse ekstraheerimise protsessi optimeerimiseks taimedest, nagu Aurantii Fructus [22], Pueraria [23] ja Curcuma Zedoaria lehed [24]. Võrreldes ortogonaalse testiga oli RSM-i eeliseks täpne prognoositavus, suurem täpsus ja mõjutegurite hõlpsam analüüsimine [25].
2.3. Fengdani pojengi flavonoidi antioksüdantne toime
Flavonoidid on looduslikud antioksüdandid, mis puhastavad tõhusalt vabu radikaale kehas. Flavonoidide antioksüdantne võime tuleneb asjaolust, et flavonoidid võivad anda vabadele radikaalidele vesinikuaatomeid ja muuta end fenoolseteks vabadeks radikaalideks. Automaatse oksüdatsiooni ahelreaktsiooni ülekandekiirust saab aeglustada fenoolsete vabade radikaalide stabiilsus, pärssides seega lipiidide edasist oksüdatsiooni [26].
Kogu flavonoidide kliirens DPPH vabadest radikaalidest on näidatud joonisel 3a. Kontsentratsioonivahemikus 0,1 kuni 1.0 mg/ml korreleerus flavonoidide koguhulga ja VC kliirens DPPH vabade radikaalidega positiivselt nende kontsentratsiooniga. Vahemikus 0,1 kuni 0,5 mg/ml suurenes VC kliirens selle kontsentratsiooniga. Kui kontsentratsioon oli suurem kui 0,5 mg/ml, jõudis VC kliirens 98 protsendini ja kippus olema stabiilne. Vahemikus 0,1 kuni 0,8 mg/mL suurenes flavonoidide üldkliirens koos kontsentratsiooni suurenemisega. Kui kontsentratsioon oli suurem kui 0,8 mg/ml, stabiliseerus kogu flavonoidide kliirens ligikaudu 75 protsendini. Oancea jt. [27] teatas, et pojengi toorekstrakti kliirens DPPH vabadest radikaalidest oli 81 protsenti; kliirens oli sarnane selle uuringu tulemustele. Fengdani pojengi kogu flavonoididel oli teatav DPPH vabade radikaalide puhastamise võime, kuid võime oli veidi väiksem kui VC. Reaktsioon antioksüdandi ja DPPH vaba radikaali vahel toimub vesinikuaatomi ja elektronide ülekandemehhanismi abil [28]. DPPH vaba radikaal on etanoolilahuses lilla. Kui antioksüdant püüab DPPH vaba radikaali vesinikuvarude kaudu stabiilsesse olekusse, muutub selle värvus kollaseks ja sellel on tugev neeldumine lainepikkusel 517 nm [29]. Selles artiklis suurendati pojengide flavonoidide puhastavat toimet DPPH-le oluliselt flavonoidide kontsentratsiooni suurenemisega, mis näitas, et pojengi flavonoidid olid tõhusad antioksüdandid.
Kogu flavonoidide kliirens hüdroksüülradikaaliks on näidatud joonisel 3b. Kontsentratsioonis 0,1 kuni 1.0 mg/mL oli flavonoidide kogukliirens hüdroksüülradikaaliks madalam kui VC. 0,4 mg/ml juures saavutas VC kliirens põhimõtteliselt maksimumi, ligikaudu 97 protsendini. Flavonoidide üldsisaldus hüdroksüülradikaalidel suurenes koos kontsentratsiooni tõusuga ja saavutas maksimaalse väärtuse (70 protsenti), kui kontsentratsioon oli kõrgem kui 0,8 mg/ml. Hüdroksüülradikaal on üsna aktiivne ja võib kiiresti reageerida mis tahes biomolekuliga, mis põhjustab elunditele või kudedele suurt kahju [30]. Hüdroksüülradikaal on rakkudele kõige toksilisem reaktiivne hapnikuliik [31], mis kiirendab rakkude apoptoosi, suurendades keha oksüdatsiooni [32]. Yang et al. [33] leidis, et pojengiseemneõli puhastav toime hüdroksüülradikaalile oli kontsentratsioonist sõltuv ja hüdroksüülradikaali kliirens oli kuni 92 protsenti kontsentratsioonivahemikus 0,1–0,5 mg/ml. Võrreldes käesoleva artikliga oli pojengiseemnejahu flavonoidide kliirens väiksem kui pojengiseemneõlil, kuid pojengiseemneõli tootmise kõrvalsaadusena avaldasid pojengiseemnejahust ekstraheeritud flavonoidid ka ilmset hüdroksüülradikaali eemaldavat toimet. madalamal kontsentratsioonil. Seetõttu võiks pojengi flavonoide pidada funktsionaalseks toidutooraineks, millel on hüdroksüülradikaali püüdmise võime. Ühelt poolt mõjus see paremini inimese antioksüdantide kaitsesüsteemile, teisalt aga võis parandada ka pojengiseemnete igakülgset ärakasutamist.
2.4. Fengdani pojengi flavonoidi valgendav toime
Nagu on näidatud joonisel 4, põhjustas Fengdani pojengi flavonoid (0.03–1.00 mg/mL) türosinaasi inhibeerimist 8,53–81,08 protsenti, mis inhibeeris türosinaasi annusest sõltuvalt . IC50 oli 0,24 mg/ml. Lin et al. [36] leidsid, et türosinaasi inhibeerimise määr oli umbes 75 protsenti, kui pojengi etanooliekstrakti kontsentratsioon oli 1 mg/ml. Türosinaasi inhibeerimise määr oli lähedane selle artikli tulemustele. Melaniin on valgendamise pärssimise võtmeaine [37]. Türosinaas on melaniini sünteesil ülioluline ensüüm, mida kasutatakse kosmeetiliste ja valgendavate funktsionaalsete toiduainete skriinimisel [38]. Türosinaasi inhibiitorid on enamiku kosmeetikatoodete või valgendavate toitude olulised koostisosad [39]. Selles uuringus oli pojengi flavonoidil türosinaasi aktiivsusele ilmne inhibeeriv toime. Seetõttu oli otstarbekas ja otstarbekas lisada pojengi flavonoide valgendavate materjalidena kosmeetikatoodetele või valgendavatele toiduainetele.
Tabel 2.Inhibeerimistsooni läbimõõt.
3. Materjalid ja meetodid
3.1. Materjalid ja reaktiivid
Fengdani kooritud pojengiseemnejahu osteti ettevõttelt Guyu Peony Biotechnology Co., Ltd. (Heze, Hiina). Seemnejahu jahvatati pulbriks ja lasti seejärel läbi 40-sõela [45]. Seemnejahu pulber koguti ja säilitati edaspidiseks kasutamiseks temperatuuril 4 ◦C. Rutiini standard, C-vitamiin (VC), metanool, veevaba etanool, naatriumnitrit (NaNO2), alumiiniumnitraat (Al(NO3)3) ja naatriumhüdroksiid (NaOH) tarniti HiinastPharmaceutical Group Co., Ltd. (Peking, Hiina); Hüdroksüülradikaal, DPPH vaba radikaalja ABTS vabade radikaalide eemaldamise võimsuse komplekt osteti ettevõttelt Shanghai Tongwei Industrial Co., Ltd.
3.2. Kogu flavonoidide ekstraheerimine
Lisaks lisati 1000 ml keeduklaasi 15.00 g kooritud Fengdani pojengiseemnejahu. Seejärel asetati see digitaalse ekraaniga termostaadiga veevanni (HH-S4, Jiangsu, Hiina) koos elektrilise segistiga (OES-60M, Wenzhou, Hiina, 220 p/min) ja ekstraheeriti järgmistel tingimustel: metanooli kontsentratsioon oli 90 protsenti, tahke ja vedeliku suhe oli 1:35 g: ml, ekstraheerimistemperatuur oli 55 ◦C ja ekstraheerimisaeg 80 minutit. Ekstraheerimisel koguti falvonoidide filtraat vaakumfiltriga.
3.3. Ühe teguri eksperiment
Fengdani pojengi seemnejahu flavonoidide kogusaagist optimeeriti ühe teguri katse abil. See võib kajastada nelja teguri mõju flavonoidide kogusaagile. Seda katset uuriti ühe muutuja meetodil. Katse tegurid ja muutujad on näidatud tabelis 3.
Tabel 3.Ühefaktorilise katse tegurid ja muutujad
3.4. RSM-i eksperiment
Ühe teguri katse andis RSM-katse jaoks iga teguri kolm muutujat. Selles uuringus valiti ühefaktorilise katse põhjal metanooli kontsentratsiooniks 90 protsenti; Argumentidena kasutati tahke ja vedeliku suhet, ekstraheerimistemperatuuri ja ekstraheerimisaega. Vastuse väärtusena kasutati pojengi flavonoidide kogusaagist. Tuginedes Box-Behnken testi põhimõttele Design-Expert tarkvaras 12.0, oli kolme teguri ja kolme tasemega RSM loodud selleks, et optimeerida pojengiseemnejahust kogu flavonoidide ekstraheerimistingimusi. Kogu katsekujundus koosnes 17 katsepunktist (tabel S1). Puhta vea hindamiseks viidi disainikeskuses läbi viis kordust (13–17). RSM-i tegurid ja tasemed on näidatud tabelis 4.
Tabel 4.RSM-i tegurid ja tasemed.
3.5. Fengdani pojengi kogu flavonoidide pulbri valmistamine
Pärast optimaalse ekstraheerimisprotsessi määramist RSM-iga ekstraheeriti Fengdani pojengi flavonoidide kogusisaldus parima ekstraheerimisprotsessiga, seejärel saadi pojengi kogu flavonoidide pulber pärast filtraadi kontsentreerimist rotaatoraurustis (20 ml/min, 25 W, R). -1001VN, Zhengzhou, Hiina) ja kuivatati külmkuivatis (-80 ◦C, 24 h, SCIENTZ-12N, Ningbo, Hiina). Pulbrit kasutataks antioksüdantsetes, valgendavates ja antibakteriaalsetes katsetes.
3.6. Antioksüdantide aktiivsuse hindamine
Fengdani pojengi flavonoidide kogulahus ja erineva massikontsentratsiooniga VC lahus (0.1, 0.2, 0.3, 0.4, {{9) }}.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0 mg/mL) valmistati 80-protsendilise etanooliga, mida kasutatakse kogu flavonoidide kliirensi määramiseks kolmest vabast radikaalist.
3.6.1. DPPH vabade radikaalide test
Kogu flavonoidide kliirens DPPH vabadest radikaalidest määrati nii, nagu kirjeldas Pham, DC, väikeste muudatustega [48]. Lühidalt, 150 μL 0,2 mM DPPH veevabas etanoolis lisati 150 μL proovile erinevates kontsentratsioonides (0,1–1,0 mg/mL). Segu loksutati ja inkubeeriti 30 minutit toatemperatuuril pimedas. 200 µl segu lisati 96-süvendiga plaadile ja neeldumist mõõdeti 517 nm juures ensüümiga märgistatud seadmega (SpectraMax 190, Shanghai, Hiina). Kontrollainena kasutati VC-d. DPPH kliirens arvutati järgmise valemiga.
DPPH kliirens protsentides={1− [(Ai − Aj) / Ao] × 100 } protsenti (2)
kus Ai oli 150 μL proovi pluss 150 μL DPPH neeldumine; Aj oli 150 μL proovi pluss 150 μL veevaba etanooli neeldumine; A0 oli 150 μL DPPH pluss 150 μL veevaba etanooli neeldumine.
3.6.2. Hüdroksüülradikaali test
Flavonoidide üldkliirens hüdroksüülradikaaliks määrati nii, nagu on kirjeldanud Zhou, J., mõningate muudatustega [49]. Lühidalt, 50 μL erineva kontsentratsiooniga proovilahuseid (0,1–1.0 mg/mL), 50 μL 9,0 mM salitsüülhappe-etanooli lahust , 50 μL 9,0 mM FeSO4 lahust ja 200 μL destilleeritud vett segati tuubis. Seejärel lisati ülaltoodud segule 50 µl 8,8 mM H2O2 ja neeldumist mõõdeti 510 nm juures. Hüdroksüülradikaali kliirens arvutati järgmise valemiga.
Hüdroksüülradikaali kliirens protsent={1− [(Ai − Aj) / Ao] × 100 } protsenti (3)
kus Ai oli proovi neelduvus; Aj on deioniseeritud vee neelduvus H2O2 asemel; A0 oli proovi asemel deioniseeritud vee neelduvus.
3.6.3. ABTS vabade radikaalide test
Kogu flavonoidide kliirens ABTS-i vabadest radikaalidest määrati nii, nagu kirjeldas Gong, J. mõningate muudatustega [5{{10}}]. Lühidalt, 1 ml 7 mM ABTS lahust ja 1 ml 2,45 mM kaaliumpersulfaadi lahust segati tuubis 12 tundi toatemperatuuril pimedas. Segu lahjendati 40 korda veevaba etanooliga. Seejärel segati tuubis 6 minutit toatemperatuuril pimedas 190 μL segu ja 10 μL erineva kontsentratsiooniga (0,1–1,0 mg/mL) proove; neeldumist mõõdeti 734 nm juures. ABTS-i vabade radikaalide kliirens arvutati järgmise valemiga.
ABTS-i kliirens protsentides={1− [(Ai − Aj) / Ao] × 100 } protsenti (4)
kus Ai oli 10 μL proovi pluss 190 μL segu neeldumine; Aj oli 10 μL proovi pluss 190 μL veevaba etanooli neeldumine; A0 oli 10 μL veevaba etanooli pluss 190 μL segu neeldumine.
Cistanche selged vabad radikaalid.
3.7. Valgendava tegevuse hindamine
Türosinaasi inhibeerimise test määrati nii, nagu on kirjeldanud Chen Q väikeste muudatustega [38]. Lühidalt, 40 μL 5 mmol/L türosiini, mis oli lahustatud 80 μL 1/15 fosfaatpuhvris (pH 6,8), segati 40 μL Fengdani pojengi flavonoidide üldlahusega temperatuuril 37 °C 15 minutit. Järgmisena lisati reaktsiooni käivitamiseks 40 µl türosinaasi (300 IU/ml). Analüüsisegu inkubeeriti 37 °C juures 10 minutit. Neeldumist mõõdeti ensüümiga märgistatud instrumendiga (SpectraMax 190, Shanghai, Hiina) 482 nm juures. Samal ajal moodustati tühirühm ja kontrollrühm. Tühjarühmas türosinaasi ei lisatud ja mahu täiendamiseks kasutati fosfaatpuhvrit. Kontrollrühmas flavonoidilahust ei lisatud ja mahu täiendamiseks kasutati fosfaatpuhvrit. Türosinaasi aktiivsuse inhibeeriv protsent arvutati järgmise valemiga:
Inhibeerimismäär (protsent)= [1−(As − Ab) / (Ac − Ab)] × 100 protsenti (5)
kus AB oli tühja rühma neeldumine lainepikkusel 482 nm, AC oli kontrollrühma neeldumine lainepikkusel 482 nm ja AS oli proovi neeldumine lainepikkusel 482 nm.
3.8. Antibakteriaalse toime katse
Seejärel lisati bakteriaalsesse külmkuivatustorusse 400 μl steriilset vett. Pärast täielikku segamist jaotati agarplaadile ühtlaselt 200 μl bakterivedelikku. Bakterite aktiveerimiseks inkubeeriti seda biokeemilises inkubaatoris (LRH-250, 650 W, Changzhou, Hiina) temperatuuril 37 ◦C 24 tundi. Seejärel korjati üksik koloonia ühekordse inokulatsioonisilmusega agarplaadile (65-0001, Shandong, Hiina) ja inokuleeriti vedelasse söötmesse. Sööde asetati intelligentsesse konstantse temperatuuriga kultuuriostsillaatorisse (HNYC-202T, 1800 W, Tianjin, Hiina) temperatuuril 37 ◦C, 120 p/min 24 tundi. Bakterisuspensiooni kontsentratsiooni jälgiti ja loendati hemotsütomeetriga (Q401, Shanghai, Hiina) ning seejärel reguleeriti see väärtuseni 106 CFU/ml [51].
Inhibeerimistsooni katse viidi läbi stantsimismeetodil. Esiteks valmistati 80-protsendilise metanooliga erineva kontsentratsiooniga (30 mg/ml ja 500 mg/ml) Fengdani pojengi flavonoidide kogulahused. Seejärel jaotati 80 μl bakterisuspensiooni ühtlaselt steriilsele agarisöötmele. Järgmisena augustati söötmesse 7 mm läbimõõduga augustajaga (A0358, Guangzhou, Hiina) 4 auku. Kolm auku lisati 100 µl flavonoidide üldlahusele ja teine lisati kontrollina 100 µl 80-protsendilisele metanoolile. Lõpuks kultiveeriti seda biokeemilises inkubaatoris temperatuuril 37 °C 24 tundi. Iga augu ümber oleva läbipaistva inhibeerimistsooni läbimõõt mõõdeti noonuse nihikuga (SWB-227-150, Guangzhou, Hiina).
MIC-katse viidi läbi vastavalt järgmistele etappidele. Bakterite kasvusüsteem, mis sisaldab erinevas kontsentratsioonis flavonoidide üldlahust (0.0037, 0.0073, 0.0146, 0.0293, 0.0586, 0.1172, 0.2344, 0.4688, 0.9375, 1.8750, 3.7500, 7.5000, }}.{m/{26) valmistati topeltgradientlahjendusmeetodil [52]. Lisaks kasutati kasvu kontrollrühmana bakterilahuse lisamist ilma flavonoidide üldlahuseta ja tühja kontrollrühmana kasutati flavonoidide kogulahust ilma bakterilahuseta. Neid kultiveeriti intelligentses konstantse temperatuuriga kultuuriostsillaatoris (HNYC- 202T, 1800 W, Tianjin, Hiina) temperatuuril 37 ◦C, 120 p/min 24 tundi. Flavonoidide maksimaalne lahjendatud kontsentratsioon ilma bakterite kasvuta oli kogu flavonoidide MIC bakteritel [53].
3.9. Statistiline analüüs
Ruutpolünoomi mudeli ja optimeerimise kordajate arvutamiseks kasutati Design-Expert V12.0.3.0 (Stat-Ease Inc., Minneapolis, MN, USA). Polünoomimudeli võrrandi täpsuse kontrollimiseks kasutati F-väärtusi ja p-väärtusi ning statistiliselt oluliseks loeti p-väärtusi, mis olid väiksemad kui {{10}},05 (p < 0,05).="" kõiki="" katseid="" mõõdeti="" kolm="" korda="" ja="" andmeväärtused="" väljendati="" keskmistena="" ±="" standardhälbe="">
4. Järeldused
Selles uuringus olid Fengdani pojengi flavonoidide optimaalsed ekstraheerimistingimused metanooli kontsentratsioon 90 protsenti, tahke ja vedeliku suhe 1:35, ekstraheerimistemperatuur 55 ◦C, ekstraheerimisaeg 80 minutit ja flavonoidide kogusaagis oli 1,204 protsenti . Usume, et ekstraheerimisprotsess sobib tööstuslikuks tootmiseks. Fengdani pojengi flavonoididel oli suurepärane antioksüdantne toime, kogu flavonoidide kliirens DPPH vabadest radikaalidest oli 75 protsenti, hüdroksüülradikaalist 70 protsenti ja ABTS vabast radikaalist 97 protsenti. Lisaks oli Fengdani pojengi flavonoididel teatud valgendav toime, Fengdani pojengi flavonoidide türosinaasi inhibeerimise määr oli annusest sõltuv ja IC50 võis ulatuda 0,24 mg/ml-ni. Lisaks võivad Fengdani pojengi flavonoidid pärssida grampositiivsete bakterite kasvu. Kõik tulemused pakkusid usaldusväärset andmetoetust Fengdani pojengi flavonoidide kogusisalduse kasutamiseks tervisetoodete ja funktsionaalse toidu toorainetes ning panid aluse Fengdani pojengi flavonoidide kogusisalduse tööstuslikule tootmisele.
cistanche tabletid, mis sisaldavad flavonoide
kliki pildil ja vaata täpsemalt