Vananemisvastane – Klotho geeniga aktiveeritud karkass soodustab noorendavat haavade paranemisreaktsiooni inimese rasvkoest pärinevates tüvirakkudes
Apr 12, 2023
3. Arutelu
Selle uuringu eesmärk oli uurida vananemisvastase vahendi funktsionaalset mõju -Klotho geeniga aktiveeritud karkass inimese ADSC-del haavade paranemise tõhustamiseks. Üldiselt leidsime, et geeniga aktiveeritud karkass pakub ADSC-de regeneratiivsete võimete kontrollitud aktiveerimist, nagu on kujutatud joonisel5. Täpsemalt, geeniga aktiveeritud karkass suurendas ajutiselt ADSC-de tüve, aktiveerides transkriptsioonifaktori oktoober-4. Geeniga aktiveeritud karkass soodustas ka fibroosivastase geeni TGF- varajast aktivatsiooni. 3, oluline tegur kontrollitud paranemisel koos vähenenud armistumisega. Lisaks kontrollisid aktiveeritud ADSC-d ajutiselt endoteeli angiogeneesi ja toetasid naha fibroblastide paranemist parakriinse signaalimise kaudu. Küpsemise suunas kontrollisid ADSC-d ka pro-fibrootilise vastuse aktiveerimist dermaalsetes fibroblastides. Vahepeal regenereerisid geeniga aktiveeritud karkassil olevad ADSC-d tõhusalt naha alusmembraani, suurendades laminiini ja kollageeni IV ladestumist. Seda reaktsiooni seostati veelgi armidega seotud vähenemisega -SMA valgu ekspressioon ja paranenud kvalitatiivne elastiini maatriksi sadestumine. Meie uuring tegi ühiselt kindlaks, et -Klotho geen aktiveeritudCistancheomab tohutut potentsiaalihaavade paranemistja võikstäiustatud tüvirakkudel põhinev ravi noorendavate tervendavate rakenduste jaoks.
Joonis 5. Skemaatiline skeem B-Klotho geeniga aktiveeritud karkassi funktsionaalsest mõjust inimese ADSC-dele haavade paranemise rakendustes. Selle uuringu peamised tulemused on (1) tüvirakkude pluripotentsuse ja antifibrootilise vastuse ajutine suurenemine, (2) paranenud parakriinne kontroll angiogeneesi suunas ja pro-fibrootiline kollageeni ümberkujunemine dermaalsetes fibroblastides ning lõpuks (3) rakkude suurenenud küpsemine. basaalmembraan, mis kontrollib armidega seotud valkude ekspressiooni. Elastiini maatriksi punktiirjooned viitavad paremale kvalitatiivsele ladestumisele.
Klõpsake siin, et teada saada, kuidas CistancheHaavade paranemise mõju
Haavaparanemise strateegiates rakendatakse plasmiidipõhist geeniteraapiat, et ajutiselt tugevdada rakulisi reaktsioone, kuni haava paranemine on lõppenud.37]. Meie geeniga aktiveeritud karkass näitab ka seda, et terapeutiline -Klotho geen on ajutiselt reguleeritud 14 päeva jooksul. Märkimisväärselt täiustatud (170-fold) väljend -Klotho mRNA 3. päeval võib omistada kohesele-varajale CMV promootorile, mis teadaolevalt suurendab kodeeritud transgeeni transkriptsioonilist aktivatsiooni.38]. Kuid MSC-des võib CMV läbida DNA metüülimise või histooni deatsetüülimise, mis võib vähendada transgeeni ekspressiooni.39]. Lisaks on plasmiidid üldiselt mittereplitseeruvad episoomid, mis piiravad transgeeni ülekannet jagunevatesse rakkudesse ja põhjustavad aja jooksul transgeeni ekspressiooni langust.40]. Heterokromaatiliste markerite olemasolu, mis pärinevad bakterite järjestustestplasmiid võib veelgi represseerida transgeeni ekspressiooni [41], mis üldiselt aitab kaasa mööduvale geeniekspressioonile.
Üks raskesti paranevate haavade ravimise viise on rakuseemnega bioaktiivsete karkasside kasutamine. Üks põhjus on nende võime soodustada haava kiiret paranemist. Siiriku metaboolselt aktiivsed rakud sekreteerivad parakriinseid tegureid ja läbivad diferentseerumist, korraldades haavakeskkonnas keerulisi signaaliülekandeid [42]. Eelkõige on tüvirakkudel ainulaadne võime tajuda väliseid stiimuleid ja moduleerida nende vastust homöostaasi taastamiseks.43]. Kuid tüvirakud kaotavad oma tüve, kui neid in vitro paljundatakse, et tekitada siiriku jaoks suur rakkude arv. Meie uuring näitab, et tüve saab ajutiselt suurendada, kasutades geeniga aktiveeritud karkassi, mis kannab vananemisvastast geeni - Klotho. Täpsemalt märkisime, et vananemisvastase geeniga aktiveeritud karkass suurendas tüve geeni Oct-4 ekspressiooni ADSC-des. okt44]. ADSC-des võib Oct-4 geeni aktiveerimine soodustada nende proliferatsiooni ja diferentseerumise potentsiaali [45]. Seega võib Oct{0}} suurenenud ekspressioon hõlbustada geeniga aktiveeritud karkassil olevate ADSC-de kiiret diferentseerumist peremeesrakkudeks ja aidata kaasa paranemisprotsessile.
Olles jälginud Oct-4 geeni aktiveerumist ADSC-des, hindasime seejärel ADSC-de angiogeenset tugevust. Angiogenees on siiriku tõhusaks integreerimiseks peremeeskoega ülioluline [46]. Siiriku rakud käivitavad angiogeneesi parakriinsete tegurite sekretsiooni kaudu. Angiogenees on samuti oluline sündmus granulatsioonikoe arengus ja selle aktiivsus väheneb granulatsioonikoe küpsedes.47]. Angiogeense aktiivsuse programmeeritud piiramine paranemise hilisemates staadiumides on oluline armistumise ja hüpergranulatsiooni kontrolli all hoidmiseks, mis võib takistada epiteliseerumist.48]. Meie leid näitab ka, et geeniga aktiveeritud karkassil olevad ADSC-d võivad parandada endoteeli võrsumist ja kontrollida nende kasvu parakriinse signaalimise kaudu. Lisaks näitab endoteelirakkude metaboolse aktiivsuse ja võrsumise märkimisväärne suurenemine vastusena 3. päeval CM-le ADSC-dega koormatud geeniga aktiveeritud karkassi potentsiaali kiiresti peremeeskoega integreeruda. Veelgi enam, tüvirakkude CM kasutamine on laialt levinud rakuvaba lähenemisviis haavade kvaliteetse paranemise parandamiseks.49]. Piiranguna tunnistame, et täiskasvanud naha endoteelirakud oleksid angiogeneesi uurimiseks paremad rakumudelid; siiski, et säilitada kooskõla meie varasemate uuringutega ja HUVEC-id on laialdaselt aktsepteeritud kui "kuldstandardi" rakukandidaat [50], võtsime kasutusele HUVEC-i angiogeneesi testi.
Fibroblastide remodelleerumise aktiivsuse suurenemine on granulatsioonikoe küpsemise üldine tunnus.51]. Selles etapis asendatakse kollageen III maatriksid järk-järgult tugevamate kollageen I kiududega.51]. Seejärel soodustavad kollageenkiud haava kokkutõmbumist [52] ja haava kokkutõmbumine on haava täielikuks sulgemiseks hädavajalik [53]. Kollageeni I ladestumise agressiivne ja pidev suurenemine võib aga suurendada armide teket [54]. Armide kontrollimine on ülioluline, kuna see võib pärssida teiste nahalisandite, nagu karvanääpsude, rasunäärmete ja higinäärmete arengut, näiteks põletushaavade korral.54]. Meie leid näitab, et geeniaktiveeritud karkassirühmast pärit vana (14. päev) CM võib kontrollida pro-fibrootilise kollageeni I ekspressiooni täiskasvanud dermaalsetes fibroblastides. See kontrollitud toime fibroblastidele ilmnes ilma täiendavat mõju fifibroblastide migratsioonile või nende fibroosivastasele kollageeni III ekspressioonile võrreldes geenivaba karkassirühmaga. Seetõttu soovitame, et ADSC-dega koormatud geeniga aktiveeritud karkass võib pakkuda paremat kontrolli in vivo armistumise piiramisel kontrollitud kollageeni I ekspressiooni kaudu. Li jt on samuti näidanud, et ADSC-d CM võivad märkimisväärselt vähendada kollageeni I ekspressiooni hüpertroofilistest armidest pärinevates fibroblastides.55]. Veel üks Wangi jt uuring näitas kollageeni I ekspressiooni sarnast vähenemist keloidi päritolu fibroblastides.56], mis näitavad ühiselt ADSC-de CM-i fibroosivastast potentsiaali.
Üks olulisemaid leide, mille me rakenduse rakendamisel märkisime -Klotho geeniga aktiveeritud karkass on ADSC-de basaalmembraani tõhustatud regenereerimine. Basaalmembraani regenereerimine on oluline veresoonte küpsemiseks ja täielikuks epiteliseerumiseks.57,58]. Oluline on, et suundumus, kus valgud laminin(21- korda) ja kollageen IV (88- korda) on ülesreguleeritud, mis näitab veelgi basaalmembraani suurenenud küpsemist geeniga aktiveeritud karkasside rühmas [59]. Lisaks sellele, et see toimib vananemisvastase tegurina [60], beeta-klotho toimib FGF retseptorite tundlikkuse suurendamiseks fibroblastide kasvufaktori (FGF) suhtes.61]. Lisaks on leitud, et FGF-i signaaliülekande suurenemine soodustab laminiini ja kollageeni IV ladestumise kaudu basaalmembraani küpsemist.62]. Seetõttu, arvestades beeta-klotho rolli FGF-i kaasretseptorina, võib geeniga aktiveeritud karkassirühma suurenenud keldri küpsemine olla potentsiaalselt vahendatud ADSC-de FGF-i signaaliülekande suurenemisega.
Alusmembraani komponent, mis on geeniga aktiveeritud karkassirühmas märkimisväärselt ülesreguleeritud, on kollageen IV valk. Kollageen IV valk moodustab 50 protsenti kõigist basaalmembraanidest.63] ja tagab alusmembraanile struktuurse stabiilsuse [59]. Vananemine vähendab aga märkimisväärselt IV kollageeni ekspressiooni dermaal-epidermaalses ühenduses [58,64] ja IV kollageeni puudumine võib soodustada armide patogeneesi [65]. Seega näitavad meie tulemused, et ADSC-dega koormatud geeniga aktiveeritud karkassi suurenenud basaalmembraani regenereeriv potentsiaal võib märkimisväärselt kaasa aidata eakate patsientide paranemisele. Teised uuringud on samuti näidanud, et rasvkoest pärineval ECM-il on tohutu terapeutiline potentsiaal naha parandamiseks.66]. Veelgi enam, laminiini ja IV kollageeni rikkad koekonstruktorid pakuvad huvi ka hingamisteede epiteeli parandamiseks.67].
Lisaks fibroblastide profibrootilisele kontrollile näitab meie uuring veel, et geeniga aktiveeritud karkassi ADSC-d ekspresseerivad ka armidega seotud valgu 2- korda madalamat ekspressiooni. -SMA [68]. Kuigi me ei hinnanud selle mõju in vivo, vähenes kohalik -SMA ekspressioon on parema kvalitatiivse paranemise jaoks ülioluline [69]. Fibrootiliste ainete nagu bleomütsiini kasutamine [70] võiks olla üks viis ADSC-de/geeniga aktiveeritud karkassi konstruktsiooni fibroosivastaste omaduste paremaks hindamiseks in vitro; meie fookus oli siiski konstruktsiooni ajutise terapeutilise potentsiaali kindlakstegemisel.
Teine näitaja, et ADSC-dega koormatud geeniga aktiveeritud karkass võib parandada kvalitatiivset paranemist, on kiulise elastiini maatriksi sadestumine geenivaba karkassi rühma laiguliste rakuväliste sekretsioonide asemel. Elastiini ladestumine on üks peamisi tegevusi, mis soodustab loote armideta haavade paranemist [71]. Täiskasvanute nahal puudub aga elastiini ladestumine [71]. Sellisena lisatakse tropoelastiini, elastiini eelkäijat, sageli biomaterjalist karkassi, et kontrollida haavade paranemise armistumist [72]. Kokkuvõttes näitavad meie tulemused, et ADSC-d / -Klotho geeniga aktiveeritud karkassi konstruktsioon võib anda in vivo tugeva antifibrootilise vastuse.
4. Materjalid ja meetodid
4.1. Geenaktiveeritud karkassi ettevalmistamine
Geeniga aktiveeritud karkass töötati välja 2-sammulise protsessi abil. Esiteks valmistati tahked poorsed kollageen-kondroitiinsulfaadi karkassid veise kõõluste 1. tüüpi kollageeni ja haikõhrest saadud kondroitiin-6-sulfaadi külmkuivatamise teel (Sigma, UK). Tellingute valmistamisel kasutati ühtsete pooride loomiseks loodud optimeeritud külmkuivatusprotsessi [73]. Meie avaldatud protokolli alusel [74], siis töödeldi külmkuivatatud karkasse dehüdrotermiliselt (DHT) temperatuuril 105◦C vaakumis steriliseerimiseks ja mehaaniliseks täiustamiseks. Steriliseeritud karkassid ristseoti seejärel keemiliselt 14 mM N-(3-dimetüülaminopropüül)-N'-etüülkarbodiimiidi vesinikkloriidi ja 5,5 mM N-hüdroksüsuktsiinimiidi (EDC/NHS molaarsuhe 2,5) (Sigma, UK) lahusega. parandada veelgi mehaanilist stabiilsust [75]. Ristseotud karkassi pesti seejärel PBS-iga (Gibco, Paisley, UK), et eemaldada kemikaalide jäägid. Kui karkassid olid valmis, valmistati polüpleksid suhtega N/P10 (lämmastiku ja fosfaadi suhe), segades eelnevalt kindlaksmääratud mahus hargnenud polüetüleen-imiini (PEI) lahust plasmiidse DNA-ga (pDNA), mis kodeerib inimese beeta-Klotho geeni. -Klotho), saadud ettevõttest SinoBiological, Peking, Hiina. N/P10 suhe valiti meie varasemate uuringute põhjal, milles leiti, et N/P10 suhtega polüpleksid võivad tõhusalt moodustada väikseid, stabiilseid katioonseid nanoosakesi plasmiididega, mis on nii suured kui GLuc (5,76 kb) [.21,23]. Enne kasutamist lahjendati plasmiidid endotoksiinivabas vees, et saada töökontsentratsioon0.5µg/µL. Plasmiid sisaldab inimese võimendatud kohest-varajast tsütomegaloviirust(CMV3) promootor, mis soodustab kodeeritud kõrgetasemelist stabiilset ja mööduvat ekspressioonigeen imetajate rakkudes.
Plasmiidi/PEI segul lasti 30 minutit settida, et ise polüpleksiks kokku kogudananoosakesed. Seejärel laaditi nanoosakesed pipetiga karkassidelevõrdsetes kogustes polüplekslahust karkassi külje kohta. Kokku 2µg pDNA olikasutatakse karkassi kohta geeniaktiveeritud karkassi väljatöötamiseks.
4.2. Rakkude külvamine on sisse lülitatud -Klotho geeniga aktiveeritud karkass
Inimese ADSC-d (iXCells Biotechnologies, San Diego, CA, USA) laiendati ettevõtte tarnitud ADSC kasvusöötmes (kat. nr MD0003) 4. passaažini. Kokku 5× 105 ADSC-d (2.5× 105 külje kohta) külvati seejärel geenivaba karkassi (kontroll,n = 3) või geeniga aktiveeritud karkass (test,n = 3). Pärast seda, kui lasti rakkudel umbes 20 minutit settida, lisati 2 ml transfektsioonikeskkonda OptiMEM (Gibco, UK) ja tsellulariseeritud karkassi inkubeeriti 37 °C juures.◦C 24 tundi. Pärast 24-tunnist inkubeerimist viidi tsellulariseeritud geenivabad või geeniga aktiveeritud karkassid uutele 12-süvendiplaatidele ja toideti 2 ml ADSC kasvusöötmega. Seejärel vahetati söödet iga 3–4 päeva järel kuni 14. päevani, kogudes 1 ml konditsioneeritud söödet (CM) ja asendades selle võrdse koguse värske söötmega. Kõik CM-id säilitati aadressil−80 ◦C kuni analüüsini.
4.3. qRT-PCR analüüsid määramiseks -Klotho geenide üleekspressioon ja funktsionaalsete geenide aktiveerimine
Sihtgeenide mööduva regulatsiooni määramiseks koguti rakud 3. (varajane) ja 14. (hiline) päeval pärast külvamist geenivabadele või geeniaktiveeritud karkassidele. Rakud lüüsiti esmalt Qiazoli lüüsireagendiga (Qiagen, Germantown, MD, USA). Seejärel lisati kloroform, et eraldada rakulüsaat valgu-, DNA- ja RNA-faasideks. RNeasy komplekti (Qiagen, Manchester, UK) kasutades ekstraheeriti RNA ning nende kvaliteet ja kogus määrati Multiskan Go plaadilugeja (Thermo Scientific, UK) abil, mille neelduvus oli seatud 260 nm. Seejärel eemaldati genoomne DNA, segades RNA genoomse DNA pühkimispuhvriga (Qiagen, Manchester, UK) ja kuumutades temperatuurini 42 °C.◦C 2 minutit. Seejärel viidi cDNA valmistamiseks läbi pöördtranskriptsioon. cDNA duplikaadid replikatsiooni kohta (n = 3) laaditi qRT-PCR plaatidele ja seejärel viidi analüüs läbi, kasutades tabelis loetletud praimereid.1. MRNA ekspressiooni korduv muutus geenivaba karkassi rakkude suhtes arvutati, kasutades 2.−∆∆CTmeetod kolme korduse keskmiste põhjal rühma kohta. Majapidamisgeenina kasutati inimese GAPDH-d (Hs_GAPDH_1_SG, kat. nr QT00079247).
4.4. ADSC-dest sekreteeritud faktorite bioaktiivsuse analüüsid -Klotho geeniga aktiveeritud karkass
4.4.1. Angiogeensed bioaktiivsuse analüüsid
4.4.2. Naha fibroblastide paranemise ja küpsemise analüüsid
Pärast angiogeneesi testi uurisime CM-i potentsiaali naha paranemisel, kasutades inimese täiskasvanud naha fibroblastide (iXcells, kat. nr 10 HU-014) kriimustustesti. Selle uuringu jaoks valisime konkreetselt vanuses CM alates 14. päevast, et uurida selle mõju fibroblastide haavade sulgemisele küpsemise ajal. Kokku 1× 104 rakud süvendi kohta 96-süvendiga plaadil külvati ja inkubeeriti üleöö fibroblastide kasvusöötmes. Järgmisel päeval tekitati monokihile haav, kriimustades horisontaalselt 200 µl pipetiotsa süvendil. Seejärel loputati monokihti PBS-ga, et eemaldada praht ja toideti CM-ga. Haava sulgumine registreeriti 12–16 tundi pärast kriimustust. Immunovärvimist kasutati fibrootilise kollageeni I (1:100, Novusbio, UK) ja antifibrootilise kollageeni III (1:100, Novusbio, UK) ekspressiooni uurimiseks fibroblastides. F-aktiini pildistamiseks värviti fibroblastid rodamiiniga (1:800, Abcam, UK). Immunovärvimine viidi läbi vastavalt jaotises kirjeldatule4.5, välja arvatud kudede töötlemine ja deparafiniseerimine. 4. läbimisel kasutati nii HUVEC-e kui ka fibroblaste.
4.5. Ekstratsellulaarse maatriksi valkude immunofluorestsentskujutis
Pärast 14-päevast kultiveerimist koguti tsellulariseeritud geenivabad või geeniga aktiveeritud karkassid maatriksi sadestumise tuvastamiseks immunofluorestsentsi abil. Proovide töötlemine viidi läbi nagu eelnevalt kirjeldatud. Lühidalt öeldes pesti karkassi esmalt PBS-iga ja fikseeriti 20 minutiks 10% neutraalses puhverdatud formaliinis. Seejärel töödeldi fikseeritud proove, kasutades deparafiniseerimise standardprotokolli. Seejärel lõigati klotsid 7-µm paksusteks viiludeks ja kogutakse laetud slaididele. Seejärel deparafineeriti sektsioonid ksüleeni abil, millele järgnes sektsiooni rehüdreerimine etanooli gradientidega. Seejärel rakud permeabiliseeriti 0,2 protsendi Tweeniga®20 (Sigma-Aldrich, Prantsusmaa) lahus PBS-s 30 minutit (10 min pesu× 3) ja blokeeriti, kasutades 1 0 protsenti NGS-i (tavaline kitseseerum, Invitrogen, Rockford, IL, USA) / 5 protsenti BSA / 0,3 M glütsiini (valmistatud permeabiliseerivas lahuses) 1 tund. Pärast blokeerimist loputati slaidid PBS-is ja seejärel inkubeeriti temperatuuril 4 °C◦C üleöö tabelis loetletud sihtmaatriksvalkude vastaste antikehadega2. Järgmisel päeval loputati slaide PBS-s kolm korda 2–3 minutit, et eemaldada kõik seondumata primaarsed antikehad. Seejärel inkubeeriti slaide kas Alexa 488-konjugeeritud kitse hiirevastases IgG-s (A32723, Invitrogen, UK) või Alexa 594-konjugeeritud kitse küülikuvastases IgG-s (A11012, Invitrogen, UK) temperatuuril 1: 800 lahjendus toatemperatuuril 1 tund pimedas. Loputamisetapp viidi läbi nagu varem ja tuumade vastuvärviti, kasutades paigalduskeskkonda DAPI-ga (ab104139, Abcam, UK). Seejärel pildistati slaidid fluorestsentsmikroskoobiga (Olympus BX43, Jaapan) temperatuuril 20 °C.× objektiivne. Kontrollidena kasutati ainult sekundaarsete antikehadega inkubeeritud proove.
Pildi kvantifitseerimine
Image] tarkvara (Image, NIH, MD, USA) kasutati ekspresseeritud valkude koguse poolkvantitatiivseks määramiseks. Iga markeri jaoks määrati esmalt konstantne läviväärtus erinevate sektsioonide esialgse pildistamise teel. Kasutades seatud läviväärtust, määrati kujutiste integreeritud tihedus (värvitud ala x keskmine halli väärtus) ja normaliseeriti seejärel rakkude arvuga (DAPI loendamine), et saada lõplik keskmine fluorestsentsi tihedus raku kohta. Keskmine kvantifitseeriti 8-10 juhusliku kujutise põhjal iga korduse kohta ja vähemalt kolm kordust rühma kohta. Seejärel kasutati kolmest kordusest/rühmast saadud keskmisi väärtusi rühmadevahelise suhtelise ekspressiooni mõõtmiseks.
4.6. Statistiline analüüs
Kõik tulemused on väljendatud keskmisena pluss standardhälve. Rühmadevahelise statistilise olulisuse arvutamiseks kasutati üldiselt paaritut kahepoolset t-testi, kus p < 0,05 peeti oluliseks
See uuring näitas, etVananemisvastane -Klotho geeniga aktiveeritud cistanchepakkumised kontrollitud ADSC-de regenereerimisvõime aktiveerimine. Selle uuringu peamised tulemused on (1)tüvirakkude pluripotentsuse ja fibroosivastase vastuse mööduv suurenemine, (2)paranenud parakriinne kontroll angiogeneesi suunasja pro-fibrootiline kollageeni remodelleeriminenaha fibroblastides ja lõpuks (3)basaalmembraani suurenenud küpseminekontrolliga armidega seotud valkude ekspressiooni üle. Kokkuvõttes näitavad need tulemusedet ADSC-dega koormatud -Klotho geeniga aktiveeritud karkassil võib olla suur potentsiaal apaljude nahahaavade ravimiseks.
ressursid, KÕIK, FJO ja MBK; andmete kureerimine, KÕIK ja MBK; kirjutamine - originaalkavandi ettevalmistaminemine, KÕIK; kirjutamine — läbivaatamine ja toimetamine, KÕIK, FJO ja MBK; visualiseerimine, KÕIK; järelevalve,FJO ja MBK; projektihaldus, MBK; rahastamise omandamine, FJO ja MBK Kõik autoridon käsikirja avaldatud versiooni läbi lugenud ja sellega nõustunud.
Huvide konfliktid:Autorid kinnitavad, et huvide konflikti ei eksisteeri.
Viited
1. Laiva, AL; O'Brien, FJ; Keogh, MB Uuendused diabeetiliste haavade paranemise geenide ja kasvufaktorite kohaletoimetamise süsteemides.J. Tissue Eng. Regen. Med.2018, 12, e296–e312. [CrossRef] [PubMed]
2. Makrantonaki, E.; Wlaschek, M.; Scharffetter-Kochanek, K. Haavade paranemishäirete patogenees eakatel.JDDG J. Dtsch. Dermatol. Ges.2017, 15, 255–275. [CrossRef] [PubMed]
3. Ganguly, P.; El-Jawhari, JJ; Burska, AN; Ponchel, F.; Giannonudis, PV; Jones, EA In vivo vananemise analüüs inimese luuüdi mesenhümaalsetes stroomarakkudes, kasutades kolooniaid moodustava ühiku-fibroblasti testi ja CD45low CD271 pluss fenotüüpi.Stem Cells Int.2019, 2019, 5197983. [CrossRef]
4. Westerweel, PE; Teraa, M.; Rafifii, S.; Jaspers, JE; valge, IA; Hooper, AT; Verhaar, MC Häiritud endoteeli eellasrakkude mobilisatsioon ja düsfunktsionaalne luuüdi strooma suhkurtõve korral.PLoS ONE2013, 8, e60357. [CrossRef]
5. Murray, RZ; West, ZE; Cowin, AJ; Farrugia, BL Biomaterjalide arendamine ja kasutamine haavade paranemise ravimeetoditena.Põletada. Trauma2019,
6. [CrossRef] [PubMed] 6. Ebrahimian, TG; Pouzoulet, F.; Squiban, C.; Buard, V.; André, M.; Nõbu, B.; Tamarat, R. Rasvkoest pärinevatel stroomarakkudel põhinev rakuteraapia soodustab füsioloogilist ja patoloogilist haava paranemist.Arterioskleer. Tromb. Vasc. Biol.2009, 29, 503–510. [CrossRef]
7. Wu, Y.; Chen, L.; Scott, PG; Tredget, EE Mesenhümaalsed tüvirakud soodustavad haavade paranemist diferentseerumise ja angiogeneesi kaudu.Tüvirakud2007, 25, 2648–2659. [CrossRef] [PubMed]
8. Foubert, P.; Gonzalez, AD; Teodosescu, S.; Berard, F.; Doyle-Eisele, M.; Jekkala, K.; Fraser, JK Rasvast saadud regeneratiivne rakuteraapia põletushaavade paranemiseks: kahe manustamismeetodi võrdlus.Adv. Haavahooldus2016, 5, 288–298. [CrossRef] [PubMed]
9. Assi, R.; Foster, TR; Tema, H.; Stamati, K.; Bai, H.; Huang, Y.; Dardik, A. Mesenhümaalsete tüvirakkude kohaletoimetamine biomimeetiliselt konstrueeritud karkassis soodustab diabeetiliste haavandite paranemist.Regen. Med.2016, 11, 245–260. [CrossRef] [PubMed]
10. Jiang, Y.; Chen, B.; Liu, Y.; Zhufu, Z.; Yan, X.; Hou, X.; Tan, Q. Kollageeni karkassi mõju rasvkoest pärinevate strooma vaskulaarsete fraktsioonide rakkudega diabeetilise haava paranemisele: uuring diabeetilise sigade mudelis.Tissue Eng. Regen. Med.2013, 10, 192–199. [CrossRef]
11. Falanga, V.; Sabolinski, M. Kahekihiline elava naha konstruktsioon (APLIGRAF®) kiirendab raskesti paranevate veenihaavandite täielikku sulgumist.Haavaparandus Regen.1999, 7, 201–207. [CrossRef] 12. Hart, CE; Loewen-Rodriguez, A.; Lessem, J. Dermagraft: Kasutamine krooniliste haavade ravis.Adv. Haavahooldus.2012, 1, 138–141. [CrossRef] [PubMed] 13. Dinh, TL; Veves, A. Apligrafi efektiivsus diabeetiliste jalahaavandite ravis.Plast. Reconstr. Surg.2006, 117, 152S–157S. [CrossRef] [PubMed]
14. Eaglstein, WH; Falanga, V. Koetehnoloogia ja Apligrafi väljatöötamine®, inimese naha ekvivalent.Clin. Seal.1997, 19, 894–905. [CrossRef]
15. Jiang, T.; Xu, G.; Wang, Q.; Yang, L.; Zheng, L.; Zhao, J.; Zhang, X. In vitro ekspansioon kahjustas kõhre defektide raviks varajase läbipääsuga mesenhümaalsete tüvirakkude tüve.Cell Death Dis2017, 8, e2851. [CrossRef] [PubMed]
16. Liu, J.; Ding, Y.; Liu, Z.; Liang, X. Mesenhümaalsete tüvirakkude vananemine: funktsionaalsed muutused, molekulaarsed mehhanismid ja noorendamise strateegiad.Ees. Cell Dev. Biol.2020, 8, 258. [CrossRef] [PubMed]
17. Wang, W.; Xu, X.; Li, Z.; Lendlein, A.; Ma, N. Mesenhümaalsete tüvirakkude geenitehnoloogia mitteviirusliku geeni kohaletoimetamise teel.Clin. Hemorheool. Mikroskeem.2014, 58, 19–48. [CrossRef]
18. Deveza, L.; Choi, J.; Lee, J.; Huang, N.; Cooke, J.; Yang, F. Polümeeri-DNA nanoosakeste poolt indutseeritud CXCR4 üleekspressioon parandab tüvirakkude siirdamist ja kudede regeneratsiooni hiire tagajäseme isheemia mudelis.Teranostika2016, 6, 1176–1189. [CrossRef] [PubMed]
19. O'Brien, FJ Biomaterjalid ja koetehnoloogia karkassid.Mater. Täna2011, 14, 88–95. 20. Yannas, I.; Tzeranis, D.; Harley, B.; Niisiis, P. Bioloogiliselt aktiivsed kollageenipõhised karkassid: töötlemise ja iseloomustamise edusammud.Philos. Trans. R. Soc. Matemaatika. Phys. Eng. Sci.2010, 368, 2123–2139. [CrossRef]
21. Laiva, AL; Raftery, RM; Keogh, MB; O'Brien, FJ SDF-i pro-angiogeenne mõju-1 geeniga aktiveeritud kollageenipõhised karkassid tüvirakkude juhitud angiogeneesis.Int. J. Pharm.2018, 544, 372–379. [CrossRef] [PubMed]
22. Lackington, WA; Raftery, RM; O'Brien, FJ Geeniaktiveeritud närvijuhtimiskanali in vitro efektiivsus, mis sisaldab mitteviiruslikke PEI-pDNA nanoosakesi, mis kannavad NGF-i, GDNF-i ja c-Juni kodeerivaid geene.Acta Biomater.2018, 75, 115–128. [CrossRef]
23. Tierney, EG; Duffy, perearst; Hibbitts, AJ; Cryan, SA; O'Brien, FJ Mitteviiruslike geenidega aktiveeritud maatriksite väljatöötamine luu regenereerimiseks polüetüleenimiini (PEI) ja kollageenipõhiste karkasside abil.J. Kontroll. Vabasta2012, 158, 304–311. [CrossRef] [PubMed] 24. Laiva, AL; O'Brien, FJ; Keogh, MB SDF-1 geeniga aktiveeritud kollageeni karkass juhib inimese Schwanni rakkude funktsionaalset diferentseerumist haavade paranemise rakendustes.Biotehnoloogia. Bioeng.2021, 118, 725–736. [CrossRef] [PubMed]
