Cucurbita Pepo L. seemnete etanoolne ekstrakt muudab kroonilise stressiga rottide neuroendokriinset häiret ning põletikumarkerite ja HSP70 ekspressiooni neerupealistes

1 Põhiteaduste osakond, Meditsiinikolledž, Printsess Nourah Bint Abdulrahmani Ülikool (PNU), Riyadh, Saudi Araabia,

2 Meditsiinilise histoloogia ja rakubioloogia osakond, meditsiiniteaduskond, Mansoura ülikool, Mansoura, Egiptus,

3 Menoufifia ülikooli arstiteaduskonna histoloogia osakond, Shebin ElKoum, Egiptus,

4 Meditsiini põhiteaduste osakond, Unaizahi meditsiini- ja meditsiiniteaduste kolledž, Qassimi ülikool, Buraydah, Saudi Araabia,

5 Bioloogiateaduste osakond, Kuningas Abdulazizi ülikooli loodusteaduste osakond, Jeddah, Saudi Araabia,

6 Meditsiini laboritehnoloogia osakond, rakendusmeditsiiniteaduste teaduskond, Tabuki ülikool, Tabuk, Saudi Araabia,

7 Biokeemia osakond, Kuningas Abdulazizi ülikooli loodusteaduskond, Jeddah, Saudi Araabia,

8 Histoloogia ja rakubioloogia osakond, arstiteaduskond, Assuit University, Asyut, Egiptus,

9Yousef Abdullatif Jameel Prohvetlike meditsiinirakenduste õppetool (YAJCPMA), arstiteaduskond, King Abdulazizi ülikool, Jeddah, Saudi Araabia,

10 Hematoloogia/pediaatrilise onkoloogia osakond, King Abdulazizi ülikooli haigla (KAUH), arstiteaduskond, King Abdulazizi ülikool, Jeddah, Saudi Araabia,

11 Meditsiinilise histoloogia osakond, arstiteaduskond, Damietta ülikool, Damietta, Egiptus

Lisateabe saamiseks: ali.ma@wecistanche.com

Taust:Kirjeldati, et kõrvitsatel (Cucurbita pepo L.) on antioksüdantne, põletikuvastane, väsimusevastane ja antidepressantne toime. Theneerupealisedon oluline stressile reageeriv organ, mis hoiab stressi ajal homöostaasi.

Eesmärgid:Selle uuringu eesmärk oli hinnata Cucurbita manustamise efektiivsustpepo L. (CP) ekstrakti käitumuslike, biokeemiliste ja struktuuriliste muutuste leevendamiselneerupealisedkroonilise ettearvamatu kerge stressiga (CUMS) põhjustatud kokkupuutest ja uurida selle mõju mehhanismi. Materjalid ja meetodid: 40 isast albiinorotti jagati 4 rühma (n-10): kontrollrühmad, CUMS-i, fluoksetiiniga töödeldud ja CP-ga töödeldud rühmad. Katse lõpus hinnati seerumis käitumismuutusi, kortikosterooni taset, põletikku soodustavaid tsütokiine TNF- ja IL-6 ning oksüdantide/antioksüdantide profiili.Neerupealisednäärmeid töödeldi histopatoloogiliseks ja immunohistokeemiliseks hindamiseks. Kaspaasi-3 ja Ki67 ning kuumašokivalgu 70 (HSP70) geeniekspressiooni hinnati neerupealistes RT-PCR abil.

Tulemused:CP ekstrakt vähendas oluliselt kortikosterooni taset (p < 0,001),liikumatusaeg (p < 0,001)="" ning="" põletikulised="" ja="" oksüdatiivsed="" muutused,="" mis="" on="" seotud="" cums-i="" põhjustatud="" depressiooniga="" võrreldes="" ravimata="" rühmaga.="" cp="" ekstrakt="" leevendas="" cums-i="" indutseeritud="">neerupealisedhistopatoloogilised muutused ja oluliselt vähenenud apoptoos (p < 0,001) ja oluliselt ülesreguleeritud antioksüdantide tase seerumis.

Märksõnad:kõrvits, stress, depressioon, kaspaas-3, ki67, Hsp70, apoptoos

Klõpsake, et näha neerupealiste jaoks mõeldud tubulosa annust

SISSEJUHATUS

Üle 264 miljoni inimese igas vanuses kannatab depressiooni all kogu maailmas (WHO, 2020). Depressioonis inimese sooritused on koolis, tööl ja perekonnas üldiselt kehvad. Depressioon võib viia enesetapuni; seega peetakse seda 15- kuni 29-aastaste laste surmapõhjuseks teiseks (WHO, 2020). Imetajad võivad stressirohkeid sündmusi üle elada, aktiveerides neile sündmustele vastavad füsioloogilised reaktsioonid. Neerupealised on osa hüpotalamuse-hüpofüüsi-neerupealise koore (HPA) teljest ja sümpaatia-adrenomedullaarsest teljest, mis säilitab stressi ajal homöostaasi (Ulrich-Lai et al., 2006). Teatati, et termilise stressiga kokkupuude põhjustab HSP70 kiire ekspressiooni neerupealise koores (Huang et al., 2001). Nendel valkudel on rakusisene kaubitsemine, antigeeni esitlus, apoptoos ja palju muid toiminguid (Khar et al., 2001). On kirjeldatud, et eksogeensed hormoonid või endogeensete hormoonide häired võivad kriitilistel arenguperioodidel avaldada püsivat mõju füsioloogilistele ja käitumuslikele radadele, mida reguleerivad hüpotalamuse neuroendokriinsed ahelad (Gore ja Patisaul, 2010). Kirjeldati ka neuroendokriinseid häireid, et laiendada endokriinsete häirete mõistet integratiivse füsioloogia täielikule laiusele; seetõttu on see rohkem kui hormonaalne häire (Waye ja Trudeau, 2011). Neuroendokriinse regulatsiooni, ainevahetuse ja toitumise/mikrobiota muutusi peetakse põletiku ja depressiooni tekke eelsoodumuse vallandajateks (Huang et al., 2019). Eeldati, et depressioonil – üks neuropsühhiaatrilistest häiretest – ja põletikul on kahepoolne seos. Kui depressioon soodustab põletikulisi reaktsioone, siis põletik soodustab neuropsühhiaatrilisi häireid, sealhulgas depressiooni (Bauer ja Teixeira, 2019). Fluoksetiin, klassikaline antidepressant, on üks turul saadaolevatest ravimitest depressiooni raviks. Nüüd peetakse seda esilekerkivaks neuroendokriinsüsteemi kahjustajaks.

See fluoksetiini toime on pigem kõrvaltoime kui peamine terapeutiline sihtmärk imetajatel (León-Olea et al., 2014). Seetõttu on vajadus ohutumate antidepressantide järele, millel pole kõrvaltoimeid neuroendokriinsele seisundile. Kõrvitsad (Cucurbita pepo L.) on majanduslikult olulised liigid, mida kasvatatakse kogu maailmas. Neil on toitumis- ja tervisega seotud eelised, kuna need sisaldavad rohkesti fenoole, flavonoide, aminohappeid, süsivesikuid ja vitamiine (Wang et al., 2002). Mitmed uuringud näitasid, et kõrvitsatel on ulatuslik bioaktiivsus, näiteks diabeedivastane, vähivastane, antioksüdant, põletikuvastane, väsimusevastane ja antidepressandilaadne toime (Wang et al., 2012; Zhang et al., 2012; Nawirska-Olszańska et al., 2013; Kim Nr et al., 2016). Traditsiooniline meditsiin peamiselt Ayurveda süsteemid ja Hiina meditsiin on kasutanud kõrvitsa erinevaid osi, sealhulgas viljade ja seemnete viljaliha (Perez Gutierrez, 2016). Sweetme Sweet Pumpkin (SSP) ja Cucurbita moschata Duchi antidepressantide efektiivsust testiti varem in vivo uuringus, kasutades sunnitud ujumistesti (FST) indutseeritud depressiooni loommudelit, ja seda võrreldi fluoksetiiniga (Kim Nr et al., 2016). . Ühes suhteliselt hiljutises ülevaates tehti kokkuvõte, et antidepressantide toitude, nagu kõrvitsaseemnete, antidepressantide skoor oli 47 protsenti, mis tagab selle antidepressandilaadse toime (Lachance ja Ramsey, 2018). Hiljuti toetasid Dotto ja Chacha rohkem loom- ja kliinilistel katsetel põhinevaid uuringuid, et kinnitada kõrvitsaseemnete leevendavat toimet depressioonile (Dotto ja Chacha, 2020). Need aruanded julgustasid testima kõrvitsate efektiivsust kroonilise stressi mõju leevendamisel neerupealistele. Seetõttu viidi see uuring läbi, et hinnata Cucurbita pepo L. (CP) ekstrakti suukaudse manustamise mõju kroonilise ettearvamatu kerge stressi (CUMS) põhjustatud käitumusliku, biokeemilise ja neerupealiste struktuuri leevendamisele ning uurida selle mõju mehhanismi. .

MATERJALID JA MEETODID

Kõrvitsa ekstraheerimine ja annustamine

Cucurbita pepo L. (vautšeri näidis: AQJ_95) osteti Saudi Araabiast Jeddah' kohalikult turult. Need tuvastati Kuningas Abdulazizi ülikooli herbaariumis, kasutades herbaariumi ja KSA taimestiku isendeid (Chaudhary, 2001). Voucheri isendid paigutati herbaariumi. Autorid tuvastasid CP ja seda kontrollis Kuningas Abdulazizi ülikooli loodusteaduskonna botaanik. CP ekstraheerimine viidi läbi vastavalt varasematele uuringutele (Wang et al., 2012). Toores puuviljad koos koorega lõigati viilutaja abil ja kuivatati lüofilisaatoriga (FD5508; ilShinBioBase Co., Ltd., Korea) ning seejärel purustati elektrilise lihvimismasinaga. Pulber lasti peene pulbri saamiseks läbi 40-sõela ja hoiti õhukindlas anumas. Kuivatatud pulber (50 g) segati 450 ml 80% etanooliga ja jäeti üheks päevaks 37 °C juures loksutisse (JSSI-100T; JS Research Inc., Compact Shaking Incubator., Korea) ja seejärel filtreeriti vati ja filterpaberiga teisel päeval. Seda ekstraheerimisprotsessi korrati kaks korda 37 kraadi juures, et saada etanooliekstrakt.

CP koostisosade identifitseerimine

PE keemilist koostist analüüsiti gaasikromatograafiaga GC-TSQ Evo 8000 massispektromeetriga (Thermo Scientific, Austin, TX, Ameerika Ühendriigid) otsese kapillaarkolonniga TG-5MS ( 30 m × 0,25 mm × 0,25 µm kile paksusega). Kolonni ahju temperatuur seati algselt 50 kraadini ja seejärel tõsteti 5 kraadi C/min 250 kraadini C ja hoiti 2 minutit, seejärel tõsteti lõpptemperatuurini 300 kraadi 25 kraadi minutis ja hoiti 2 minutit. Injektori ja MS ülekandeliini temperatuuri hoiti vastavalt 270 ja 260 °C; heeliumi kasutati kandegaasina konstantsel voolukiirusel 1 ml/min. Lahusti viivitus oli 4 minutit ja 3 µl lahjendatud proovid süstiti automaatselt, kasutades PTV-injektoris splitless-režiimis GC-ga ühendatud Autosampler AS1300. EI massispektrid koguti täisskaneerimise režiimis 70 eV ionisatsioonipingetel vahemikus m/z 50–650. Iooniallika temperatuur määrati 250 kraadile. Komponendid tuvastati nende massispektrite võrdlemisel WILEY 09 ja NIST 14 massispektri andmebaasi massispektritega, mida kasutatakse mis tahes ekstrakti tundmatute komponentide keemilise koostise tuvastamiseks ja uurimiseks (Wiley, 2006; Mikaia et al., 2014). Analüüs viidi läbi kvalitatiivselt, kasutades Thermo Scientifific™ Xcalibur™ 2.2 tarkvara ja kõik väärtused esitati suhtelistes protsentides (Abd El-Kareem et al., 2016).

Eksperimentaalne disain

Selle uuringu kiitis heaks KSA Jeddahis asuva King Abdulazizi ülikooli arstiteaduskonna biomeditsiiniliste uuringute eetikakomitee (viitenumber {{0}}). Selles uuringus saadi King Fahd Medical Research Centerist (KFMRC) nelikümmend isast albiinorotti, kes kaalusid 150–200 g ja vanuses 2–3 kuud. Enne katse alustamist lasti rottidel 1 nädal laboritingimustega aklimatiseeruda. Kontrollrühmaks määrati kümme rotti, kes jäeti CUMS-iga kokku puutumata. Ülejäänud kolmekümnele rotile tehti 4 nädala jooksul CUMS-i protseduur, mis hõlmas erinevat tüüpi stressoreid erinevatel kellaaegadel päeva jooksul, et vältida stressiga harjumist. CUMS-i protseduuri kirjeldati täielikult varasemates töödes (Ayuob et al., 2016; Ali et al., 2017) ja see on näidatud tabelis 1. CUMS-iga kokku puutunud rotid jaotati 3 rühma (n 10). Töötlemata rühm (CUMS) sai 0,03% karboksümetüültselluloosi (CMC-Na) 2 nädala jooksul sondiga. FLU-ravi saanud rühm sai maosondiga FLU-d (Dar Al Dawa Pharmaceuticals Co., Ltd., Amman, Jordaania), farmakoloogiliseks valideerimiseks kasutatavat antidepressanti, mis oli lahustatud 0,03% CMC-Na-s annuses 20 mg/kg (Li) et al., 2014). CP-ga töödeldud rühm sai destilleeritud vees lahustatud CP ekstrakti annuses 100 mg/kg sondiga 2 nädala jooksul vastavalt Wang et al. (2012).

Käitumismuutuste hindamine

FST viidi läbi 4 nädala pärast, et kinnitada CUMS-i mõju rottidele (Ali et al., 2017). Selle katse ajal pandi iga rott klaasjasse silindrilisse anumasse (kõrgus 20 cm, läbimõõt 14 cm), kus oli 15 cm vett temperatuuril 25 ± 2 °C. Rotti salvestati käitumistarkvara (Noldus Information Technology, EthoVision) abil 6 minutit. XT®) ja 6 minuti jooksul liikumatult veedetud koguaega mõõtis katserühmade suhtes pime tehnik. Määrati koguaeg sekundites, mille rotid veetsid jäsemeid liigutamata, välja arvatud hiire pinnal hoidmiseks vajalik väike liikumine, "liikumatusaeg" 6 minuti jooksul.

Biokeemilised tehnikad

24 tundi pärast käitumistesti lõpetamist võeti rottide intraorbitaalsest siinusest vereproovid pärast tuimastamist 4-protsendilise isofluraaniga (SEDICO Pharmaceuticals Company, Kairo, Egiptus) 100-protsendilises hapnikus. Pärast seda eutaniseeriti rotid emakakaela dislokatsiooniga. Vereproove tsentrifuugiti seerumi saamiseks kiirusel 3, 000 p/min 15 minutit temperatuuril 4 °C ja neid hoiti biokeemiliseks hindamiseks temperatuuril –18 °C. Kortikosterooni taset (ALPCO Diagnostics, Orangeburg, NY, Ameerika Ühendriigid) hinnati ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsi komplektide abil vastavalt tootja juhistele. Tootja juhiste kohaselt hinnati TNF-i ja IL-6 (Quantakin R&D süsteem, USA komplekt) ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsi abil. Iga proovi optiline tihedus määrati kahes eksemplaris mikroplaadi ELISA lugejaga, mis oli seatud 450 nm peale. Malondialdehüüdi (MDA) taseme mõõtmiseks spektrofotomeetriliselt lainepikkusel 535 nm kasutati tiobarbituurhappega reageerivate ainete (TBARS) testikomplekti (Biodiagnostic; Egiptus) (Gamal et al., 2018). Superoksiiddismutaasi (SOD) taset mõõdeti SOD testikomplekti (Biodiagnostic; Egiptus) abil (Packer, 2002). Glutatioonperoksidaasi (GPX) taseme hindamine viidi läbi GPX komplekti (Randox Labs, Crumlin, Ühendkuningriik) abil. Katalaasi (CAT) aktiivsuse kvantifitseerimiseks koostati testi ja kõigi proovide jaoks kalibreerimiskõver, kasutades analüüsikomplekte (Biodiagnostic; Egiptus). Meetodit on eelnevalt kirjeldatud (Gamal et al., 2018).

Kvantitatiivne reaalajas PCR

RNA ekstraheerimine koeproovidest viidi läbi, kasutades TriFast™ reagenti (PeqLab, Saksamaa, kat. nr.: {{0}}), nagu on kirjeldatud tootja protokollis. Puhastatud RNA kontsentratsiooni hinnati spektrofotomeetriga NanoDrop 2000c (Thermo Scientific, Ameerika Ühendriigid). Igast proovist ekstraheeritud RNA pöördtranskribeeriti, kasutades SensiFAST™ cDNA sünteesikomplekti RT-qPCR jaoks (Bioline USA Inc., Ameerika Ühendriigid, kat. nr: BIO-65053), järgides tootja juhiseid. Sünteesitud cDNA-d säilitati -80 kraadi juures kuni kasutamiseni qRT-PCR jaoks. QRT-PCR reaktsioonid viidi läbi, kasutades SensiFAST™ SYBR Lo-ROX komplekti (Bioline USA Inc., Ameerika Ühendriigid, kat. nr.: BIO-94002) ​​Applied Biosystems 7500 reaalajas PCR-tuvastussüsteemis (Life Technology). , Ühendriigid). Selles uuringus kasutatud rottide geenispetsiifilised praimerid kujundati Primer3 tarkvaraga (v.0.4.0) ja nende spetsiifilisust kontrolliti programmi NCBI/Primer-BLAST abil. Seejärel osteti praimerid ettevõttest Willowfort™ (Ühendkuningriik). Praimeriteks olid GAPDH (5′-TGCACCACCAACTGCTTAGC-3′, 5′-GGC ATGGACTGTGGTCATGAG-3′), kaspaas-3 (edasi 5- TGT ATGCCTACCCTG, tagurpidi 5-GCGCAAAGT GACTGGATGAACC-3), HSP70 (5′-ACGAGGGTCTCAAGG GCAAG-3′, 5′-CTCTTTCTCAGCCAGCGTGTTAG-3′). Ki67 (edasi 5-AGAAGAGCCCACAGCACAGAGAA-3, tagurpidi 5-AGAAGAGCCCACAGCACAGAGAA 3). PCR-i segu valmistati järgmiselt: 10 µl SensiFASTTM SYBR Lo-ROX segu, 0,8 µl päripraimerit, 0,8 µl pöördpraimerit, 2 µl matriits-cDNA-d ja 6,4 µl nukleaasivaba vett. Reaktsioonisegu kanti üle termotsüklerisse, mis oli eelnevalt programmeeritud hoidma 95 kraadi juures 2 minutit, millele järgnes 40 tsüklit 95 kraadi juures 15 sekundit ja seejärel 60 kraadi juures 30 sekundit. Igas katses viidi läbi negatiivne kontrollreaktsioon, mis ei sisaldanud matriitsi. PCR produktide spetsiifilisuse tõestamiseks viidi läbi sulamiskõvera analüüs ja iga reaktsiooni Ct väärtus saadi amplifikatsioonigraafikutelt. Iga geeniekspressiooni suhteline kvantifitseerimine koeproovides arvutati, kasutades võrdleva läve (ΔΔCt) meetodit, kus sisemise kontrollgeenina oli GAPDH. Üldise voldimuutuse jaoks arvutati see välja ja lineariseeriti 2-ΔΔCt aritmeetilise valemiga.

Histoloogilised tehnikad

Katse lõpus ja pärast rottide tuimastamist avati kõht ja parempoolne neerupealine lõigati välja. Parafiiniplokkide saamiseks viidi läbi neerupealise fikseerimine 10 protsendilises neutraalses puhverdatud formaliinis ja edasised protsessid. Valmistati parafiinilõigud paksusega 4-μm ja värviti hematoksüliini ja eosiiniga (H&E). Veelgi enam, teised parafiini lõigud värviti immunohistokeemiliselt, kasutades streptavidiin-biotiin-peroksidaasi tehnikat. Slaide inkubeeriti üleöö 4 kraadi juures ja seejärel inkubeeriti rakkude proliferatsiooni demonstreerimiseks monoklonaalse anti-Ki67-ga (Dako Cytomation, Ameerika Ühendriigid, lahjendus 1:1, 000). Lisaks kasutati apoptoosi tuvastamiseks polüklonaalset anti-kaspaas{10}} antikeha (Santa Cruz Biotechnology, Ameerika Ühendriigid, lahjendus 1:1,{13}}). Kasutati ka polüklonaalset antikeha kuumašokivalgu -70 (HSP70) vastu (Dako, Carpinteria, CA, Ameerika Ühendriigid, lahjendus 1:1, 000). Kasutati Dako värvimissüsteemist pärinevat vastavat biotinüülitud konjugeeritud sekundaarset antikeha. Ainult sekundaarse antikehaga värvitud slaide kasutati negatiivsete kontrollidena. Tuumad värviti hematoksüliiniga. Pruuni tsütoplasmaatilist värvimist peeti positiivseks reaktsiooniks. Värvitud lõike uuriti ja pildistati digikaamera ja arvutiga ühendatud Olympus Microscope BX-51 (Olympus) abil. Antikehade immunoreaktiivsuse poolkvantitatiivne analüüs viidi läbi Pro Plus pildianalüüsi tarkvaraga. Immunopositiivse reaktsiooni pindala protsenti hinnati 30 väljal × 400 suurendusega. Positiivsed rakud loendati 1,0 mm2 pindala kohta, nagu on kirjeldanud Zhou et al. (2016). Igalt slaidilt uuriti vähemalt viit välja ja iga looma kohta arvutati keskmine. Morfomeetrilise analüüsi jaoks uuriti igal loomal nelja sektsiooni (suurendus × 100). Neerupealiste erinevate tsoonide paksust mõõdeti mikromeetrites. Neerupealise koore paksus saadi medulla ja neerupealise kapsli vahelise kauguse mõõtmisel sirgjooneliselt, igas neerupealise koore kvadrandis tehakse üks mõõtmine.

Statistiline analüüs

TULEMUSED

Käitumuslikud tulemused

CP ekstrakti analüüsi tulemused GC-MS abil

Biokeemiline hindamine

Kortikosterooni tase seerumis

Kortikosterooni tase tõusis oluliselt (p < {0}},001) ravimata rottidel, kes said CUMS-i, võrreldes kontrollrottidega, samas kui FLU ja CP-ga ravitud rottidel vähenes oluliselt (p < 0,001) seerumi kortikosterooni tasemel.

TNF- ja IL-6 tase seerumis

MDA, SOD, GPX ja CAT tasemed seerumis

Ki67, kaspaasi-3 ja HSP70 geeniekspressioon

RT-PCR näitas CUMS-i rühma neerupealistes võrreldes kontrollrühmaga ebaoluliselt kõrget Ki67 geeniekspressiooni, samas kui FLU- ja CP-ga ravitud rühmade ekspressioon oli märkimisväärselt kõrge, võrreldes CUMS-iga eksponeeritud rühmaga (joonis 3E). . Kaspaasi-3 puhul oli selle geeniekspressioon oluliselt suurenenud (p < 0.001)="" cums-i="" rühma="" neerupealistes="" võrreldes="" kontrollrühmaga,="" samas="" kui="" flu-="" ja="" cp-ga="" ravitud="" rühmad="" näitasid="" olulist="" langust="" võrreldes="" cums-iga="" kokkupuutunud="" rühmaga="" (joonis="" 3f="" hsp70="" geeniekspressiooni="" puhul="" registreeriti="" cums-i="" rühma="" neerupealistes="" oluliselt="" kõrgem="" (p="">< 0,001)="" tase="" kui="" cums-i="" rühmas.="" kontrollrühmas,="" samas="" kui="" flu="" ja="" cp-ga="" ravitud="" rühmade="" oma="" vähenes="" oluliselt="" võrreldes="" cums-iga="" eksponeeritud="" rühmaga="" (joonis="">

Histopatoloogiline hindamine

ARUTELU

Kaasaegne ühiskond on ilmselgelt täis stressi, mis võib tuleneda igapäevastest probleemidest, tervishoiust ja tööga seotud probleemidest. Need stressorid võivad põhjustada niinimetatud stressiga seotud häireid (Clayton ja McCance, 2014). Selles uuringus kasutati Cucurbita pepo L. viljaliha ja koore etanooliekstrakti, et uurida selle potentsiaali CUMS-i põhjustatud depressiivse käitumise leevendamisel ja selle mõju neerupealistele. Seda tõestas a

seerumi kortikosterooni taseme märkimisväärne tõus ja seda kinnitab pikaajaline liikumatus FST ajal. Need leiud olid kooskõlas eelnevalt teatatud leidudega (Tang et al., 2015). Teatati, et nii TNF- kui ka IL-6 osalesid depressiooni patogeneesis (Taraz et al., 2015; Pedraz-Petrozzi et al., 2020). Teatati, et IL-6 või TNF-retseptorite puudulikkusega hiired on depressiivse käitumise suhtes resistentsed (Viana et al., 2010). Seetõttu hinnati neid selles uuringus ja täheldati, et nii TNF- kui ka IL{10}} suurenesid 4 nädala jooksul CUMS-iga kokku puutunud rottide seerumis oluliselt, mis näitab, et neil oli depressioon. Seda järeldust toetasid Numakawa jt. (2014) käitumusliku meeleheitega hiirtel ja Taraz et al. (2015) depressiooniga patsientidel. Selles uuringus seostati kõrvitsaekstrakti manustamist depressiivse käitumise leevenemisega, mis ilmnes FST liikumatuse aja olulisel vähenemisel ning mida kinnitas kortikosterooni ja põletikuliste tsütokiinide TNF- ja IL-6 oluline vähenemine seerumit. Neid leide toetasid Kim Nr jt. (2016), kes teatas, et SSP 28 päeva jooksul vähendas põletikuliste tsütokiinide taset depressiooniga rottidel.

Kõrvitsa põletikuvastane toime võib olla tingitud kõrvitsa aktiivsetest ühenditest, nagu oleiin- ja palmitiinhape ning östradiool. Depressiooni korral kirjeldati oleiinhappe, palmitiinhappe ja linoolhappe alareguleerimist (Conklin et al., 2010; Martín et al., 2010). Teatati, et oleiinhappe vahendatud neuroprotektsioon on seotud selle põletikuvastase toimega, mida vahendab peroksisoomi proliferaatoriga aktiveeritud gammaretseptori (PPAR-) aktiveerimine (Song et al., 2019). Lisaks teatati, et palmitiinhape pärsib fosfolipaasi A(2) ja seetõttu peetakse seda põletikuvastaseks ühendiks (Aparna et al., 2012). Östradiool oli üks selles uuringus tuvastatud kõrvitsaühenditest. Östradiool kutsus esile põletikuvastase toime ja seejärel leevendab depressiivset käitumist (Xu et al., 2015). Teine mehhanism, mille abil östradiool võib esile kutsuda antidepressiivse toime, on ajust pärineva neurotroofse faktori (BDNF) ekspressiooni ja ERK fosforüülimise ülesreguleerimine ER-i aktiveerimise kaudu ajus (Yang et al., 2010). Selles uuringus tõusis CUMS-iga eksponeeritud rottidel MDA seerumi tase, samas kui SOD, GPX ja CAT tase langes. Sarnased muutused dokumenteeriti pärast kokkupuudet CUMS-iga varasemates uuringutes ja nad lisasid, et need biokeemilised muutused põhjustasid oksüdatiivset stressi ja HPA kahjustust (Nabavi et al., 2015). Liu T. et al. (2015) teatasid ka, et depressiooni teket võib seostada vähese antioksüdantide sisaldusega organismis.

Sageli teatati kõrvitsa puuviljaekstrakti antioksüdantsetest omadustest (Bahramsoltani et al., 2017). Lisaks teatati, et Cucurbita pepo L. viljaliha ja koor töötlevad kõrgemat antioksüdantset aktiivsust kui teised osad, näiteks seemned (Oyeleke et al., 2019). Kõrvitsaekstrakti manustamine suurendas paljudes varasemates uuringutes märkimisväärselt SOD ja GPX taset ning vähendas MDA taset hiirte seerumis (Guo-Hua et al., 2000; Dang, 2004) ning seda mõju dokumenteeriti ka selles uuringus. Seetõttu võib kõrvitsate antioksüdantne toime olla selle antidepressandi toime taga, mis on selles uuringus ilmne. See on kooskõlas Kim Nr jt tähelepanekutega. (2016). Teatati, et põletikuvastase, antioksüdantse ja väsimusevastase toimega looduslikel toodetel on ka antidepressandilaadne toime (Jeong et al., 2015). Kõik need varasemad tegevused said kõrvitsas tõestust. Selles uuringus CUMS-i rühmas täheldatud neerupealiste koore rakkude suurenenud tsütoplasmaatiline vakuolatsioon võib olla tingitud kasvavast nõudlusest lipiidide järele, mis moodustavad kortisooli sünteesi nurgakivi. Cigankova jt. (2005) täheldasid, et pikaajaline eksperimentaalne hüperdünaamika põhjustas kortikaalsete rakkude mitme tsütoplasmaatilise lipiiditilkade ühinemise. Need lipiiditilgad sisaldavad kolesterooli, mis on steroidhormoonide sünteesi peamine eelkäija.

Koldysheva ja Lushnikova (2008) teatasid aga, et stress põhjustas lipiidide tilkade märkimisväärse vähenemise neerupealise koore rakkudes, eriti ZF-s (Koldysheva ja Lushnikova, 2008). Kirjeldati, et füüsilise stressiga kokkupuutel kanduvad valustiimulid hüpotalamusele, mille tulemuseks on CRH sekretsioon hüpofüüsi portaalsüsteemi, mis suurendab ACTH sekretsiooni ja stimuleerib selle retseptoreid ZF-is ja ZR-is, et suurendada kortisooli sekretsiooni (Patti et al. , 2018). Varem teatati CUMS-iga eksponeeritud rottidel täheldatud paksenenud neerupealiste kapslist ja trabeekulitest (El-Desouki et al., 2011; Altayeb ja Salem, 2017) fibroblastide suurenenud kollageeni sünteesi tõttu immobiliseerimisstressiga kokkupuutel. Paljudel CUMS-iga eksponeeritud rottide neerupealiste rakkudel olid sügavalt värvunud tuumad, mis näitab, et neis toimus apoptoos, mida kinnitas kaspaas-3 immunohistokeemiline värvimine. Sarnasest tähelepanekust teatasid Altayeb ja Salem (2017), kui nad uurisid immobiliseerimisstressi mõju rottide neerupealistele. Liu Q. et al. (2015) teatasid, et liigne oksüdatiivne stress, mis ilmnes pärast kokkupuudet CUMS-iga selles uuringus, muudab "apoptoosiga seotud geenide" ekspressioonitasemeid ning kutsub esile raku apoptoosi ja degeneratsiooni Bcl{12}}, Baxi ja kaspaasi signaaliradade kaudu. -3. Seda mehhanismi kinnitas selles uuringus RT-PCR, mis näitas kaspaas{15}} geeniekspressiooni olulist ülesreguleerimist.

Kirjanduse läbivaatamisel ei ilmnenud Cucurbita pepo otsest mõju kaspaas{0}}-vahendatud apoptoosile erinevates kudedes. Näib, et neerupealistes tuvastatud kaspaas-3-positiivsete apoptootiliste rakkude arvu vähenemine oli tingitud selles uuringus dokumenteeritud Cucurbita pepo antioksüdantsest toimest. Seda toetavad paljud varasemad uuringud, mis on läbi viidud teiste taimede ja ürtidega, millel on märkimisväärne antioksüdantne toime (Banagozar Mohammadi et al., 2019; Ghazizadeh et al., 2020). See uuring näitas, et kokkupuude CUMS-iga suurendas Ki67--positiivsete rakkude arvu neerupealise koores, mis ilmnes oluliselt ZF-is, mis viitab prolifereeruvate rakkude arvu suurenemisele, ning selle tulemusel suurenes selle kihi paksus oluliselt. Teisest küljest vähenes Ki67-positiivsete prolifereeruvate rakkude arv medullas CUMS-i toimele ebaoluliselt. Need tähelepanekud olid kooskõlas Ulrich-Lai jt tähelepanekutega. (2006), kes teatasid Ki67-positiivsete rakutuumade arvu suurenemisest ainult välimises ZF-is pärast kroonilise muutuva stressiga kokkupuudet, samas kui medulla näitas raku hüpertroofiat, mitte hüperplaasiat. Veelgi enam, Laborie jt (2003) teatasid medullaarse funktsiooni üldisest suurenemisest pärast kroonilise stressiga kokkupuudet,

mis viitab sellele, et krooniline stress võib põhjustada medullaarset hüpertroofiat. Selles uuringus suurendas kõrvitsaekstrakti manustamine oluliselt rakkude proliferatsiooni, mis ilmnes Ki67 geeni ülesreguleerimisest ja immuunekspressioonist peaaegu kõigis tsoonides ja neerupealise medullas võrreldes CUMS-iga. See selgitas selles uuringus registreeritud näärmete tsoonide suurenenud paksust. Samuti võib see kompenseerida CUMS-iga kokkupuutest põhjustatud apoptootilist toimet. Seda järeldust toetavad Kim Hy jt. (2016), kes teatasid Ki67 mRNA ekspressiooni olulisest ülesreguleerimisest ja BALB/c hiirte põrnast eraldatud splenotsüütide proliferatsioonist, mida raviti SSP-ga, voogedastusega ja Cucurbita moschata Duchiga ning selle peamise komponendi -karoteeniga. Käesolevas uuringus suurendas kokkupuude CUMS-iga märkimisväärselt HSP70 geeniekspressiooni ja immuunekspressiooni kõigis neerupealiste tsoonides. Kooskõlas sellega, Zheng et al. (2008) tõestasid ka, et suurenenud HSP70 ekspressioon pärast stressirohketesse tingimustesse sattumist moduleerib põletikulisi reaktsioone, inhibeerides põletikulise transkriptsioonifaktori, tuumafaktor-kappa B (NF-kappaB) aktivatsiooni. Lisaks võib HSP70 otseselt häirida apoptoosi ja nekroosi (Yenari et al., 2005). Hiljuti on Li et al. (2019) teatasid HSP70 ekspressiooni ülesreguleerimisest sigade neerupealiste koes pärast kuumastressiga kokkupuudet, mis näitab HSP70 rolli neerupealiste vigastuses ja rõhutab selle olulisust põletikuliste reaktsioonide suhtes.

HSP70 kiiret esilekutsumist vastuseks stressile peetakse raku kaitseprotsessi jaoks oluliseks. Meie uuringus seostati CUMS-iga eksponeeritud rottide ravi kõrvitsatega HSP70 ekspressiooni ebaolulise vähenemisega, mis oli seotud apoptoosi ja põletikuliste reaktsioonide vähenemisega. See võib viidata nii FLU kui ka CP poolt indutseeritud HSP70 suhteliselt kõrge taseme kasulikule mõjule, kuna selle tulemuseks oli kaspaasi -3-vahendatud apoptoosi vähenemine ja põletikuliste tsütokiinide vabanemine. Kuigi kõrvitsate mõju kuumašoki valgu perekonnale ei olnud varem kirjeldatud, kirjeldati oleiinhapet, mis on selles uuringus kasutatud kõrvitsate peamised koostisosad, et reguleerida HSP60 ekspressiooni inimese T-lümfotsüütide rakuliinis (Martins De Lima). et al., 2004), mis toetab meie uuringutulemusi. Cucurbita pepo kui antidepressanditaolise ainena pakutud toimemehhanism on kokku võetud joonisel 7. Selle uuringu piirangute hulka kuulus ka suutmatus täiendavalt uurida CP antidepressandi toime mehhanismi, mistõttu on vaja täiendavaid uuringuid. julgustanud seda tegema. Kokkuvõtteks võib öelda, et see uuring annab teaduspõhiseid tõendeid Cucurbita pepo L. ekstrakti tõhususe kohta CUMS-i põhjustatud käitumuslike ja biokeemiliste muutuste leevendamisel, samuti histopatoloogilist mõju neerupealistele. Need mõjud ilmnesid apoptoosi ja HSP70 ekspressiooni allareguleerimise kaudu ning näisid olevat vahendatud Cucurbita pepo L. ekstrakti antioksüdantse ja põletikuvastase toime kaudu. Kuigi see uuring ja mõned muud hiljutised uuringud on dokumenteerinud Cucurbita pepo antidepressandilaadset toimet ja uurinud selle mehhanismi, on selle toime kinnitamiseks inimestel vaja täiendavaid uuringuid, sealhulgas kliinilisi uuringuid.

See on meie väsimusevastane toode! Lisateabe saamiseks klõpsake pildil!

VIITED

Abd-El-Kareem, MSMA, Rabbih, MAEF, Selim, ETM, Elsherbiny, EAE-M. ja El-Khateeb, AY (2016). GC/EIMS-i kasutamine koos poolempiiriliste arvutustega basiiliku eeterliku õli mõnede lenduvate komponentide tuvastamiseks ja uurimiseks.

Altayeb, Z. ja Salem, M. (2017). Valgus- ja elektronmikroskoopiline uuring immobiliseerimisstressi mõju kohta täiskasvanud rottide neerupealise koorele ja vitamiini EJ Med. võimalikku parandavat rolli. Histoloogia 1, 44–56.

Aparna, V., Dileep, KV, Mandal, PK, Karthe, P., Sadasivan, C. ja Haridas, M. (2012). N-heksadekaanhappe põletikuvastane omadus: struktuursed tõendid ja kineetiline hinnang. Chem. Biol. Drug Des. 80, 434–439.

Bahramsoltani, R., Farzaei, MH, Abdolghaffari, AH, Rahimi, R., Samadi, N., Heidari, M. jt. (2017). Cucurbita Moschata Duchesne puuviljakoore fütokemikaalide, antioksüdantide ja põletushaavade paranemistegevuse hindamine. Iraan J. Basic Med. Sci. 20, 798–805. doi:10.22038/ IJBMS.2017.9015

Banagozar Mohammadi, A., Torbati, M., Farajdokht, F., Sadigh-Eteghad, S., Fazljou, SMB, Vatandoust, SM jt. (2019). Seritsiin leevendab vaoshoitud stressist põhjustatud depressiivset ja ärevusetaolist käitumist oksüdatiivse stressi, neuropõletiku ja apoptoosi moduleerimise kaudu prefrontaalses ajukoores ja hipokampuses.

Bauer, ME ja Teixeira, AL (2019). Psühhiaatriliste häirete põletik: mis tuleb kõigepealt? Ann. N. Y Acad. Sci. 1437, 57–67.

Chaudhary, S. (2001). Saudi Araabia Kuningriigi taimestik: Illustreeritud Riyadh: Põllumajandus- ja veeministeerium, Riiklik Herbaarium, Riiklik Põllumajandus- ja Veeuuringute Keskus, 2. Riyadh: anatoomia ja morfoloogia.

Cigankova, V., Zibrin, M., Bod A, K. ja Holovska, K. (2005). Pikaajalise eksperimentaalse hüpodünaamia mõju Jaapani vuttide neerupealistele: ja ultrastruktuurne uuring. BÜLETÄÄN-VETERINAARINSTITUUT PULAWY 49, 449.

Clayton, M. ja McCance, K. (2014). "Stress ja haigused", patofüsioloogias täiskasvanute ja laste haiguste bioloogiline alus. Toimetajad K. Mcccance, S. Huether, V. Brashers ja N. Rote. 7. väljaanne (USA: Canada Elsevier).

Conklin, SM, Runyan, CA, Leonard, S., Reddy, RD, Muldoon, MF ja Yao, JK (2010). N-3 ja N-6 polüküllastumata rasvhapete vanusega seotud muutused raske depressiivse häirega isikute eesmises tsingulaatkoores. Prostaglandiinid Leukot. Essent. Rasvhapped 82, 111–119.

Doron, R., Lotan, D., Versano, Z., Benatav, L., Franko, M., Armoza, S. jt. (2014). Estsitalopraami või uudsete ravimtaimede segude ravi stressiga kokkupuute ajal või pärast seda vähendavad ärevuselaadset käitumist kortikosterooni ja BDNF-i modifikatsioonide kaudu.

Dotto, JM ja Chacha, JS (2020). Kõrvitsaseemnete potentsiaal funktsionaalse toidu koostisosana: ülevaade. Teaduslik Afr. 10, e00575.

Duke, JA (1992). GRAS-i ürtide ja muude majandustaimede fütokeemiliste koostisosade käsiraamat. [Võrgus]. Boca Raton: FL: CRC Press.

El-Desouki, N., El-Refaiy, A., Abdel-Azeem, H. ja El-Baely, M. (2011). Immobilisatsiooni mõju histoloogilised ja ultrastrukturaalsed uuringud

Stress Albiinoroti neerupealise koorele ja diasepaami parandav roll. J. Egiptus. Ger. Soc. Zoo 62, 25–45. Gamal, M., Moawad, J., Rashed, L., Morcos, MA ja Sharawy, N. (2018).

Tetrahüdrobiopteriini võimalik osalus sepsise redoks-homöostaasi häires – indutseeritud aju düsfunktsioon. Brain Res. 1685, 19–28.

Gore, AC ja Patisaul, HB (2010). Neuroendokriinsed häired: ajaloolised juured, praegune areng, küsimused tulevikuks. Esiosa. Neuroendokrinool. 31, 395–399.

Guo-Hua, X., Zhi-Hong, H. ja Yong-Fangl, W. (2000). Uuring kõrvitsa polüsahhariidi võimaliku kasvajavastase toime ja immuunsuse kohta. J. Wuhan Prof. Med. Coll. 28, 1–4.

Hema, R., Kumaravel, S. ja Alagusundaram, K. (2011). Murraya Koenigii bioaktiivsete komponentide GC/MS määramine. J. Am. Sci. 7, 80–83. Huang, L., Mivechi, NF ja Moskophidis, D. (2001). Ülevaade peamise stressist põhjustatud Hsp70 molekuli reguleerimisest ja funktsioonist

Chaperone in vivo: geeni hsp70.1 või hsp70.3 suunatud geenihäirega hiirte analüüs. Mol. Cel, Biol. 21, 8575–8591.

Huang, Q., Liu, H., Suzuki, K., Ma, S. ja Liu, C. (2019). Söömise ja meeleolu sidumine: toitumise, toidu antioksüdantide ja depressiooni ülevaade. Antioksüdandid 8, 376. doi: 10,3390/antiox8090376

Jeong, HJ, Kim, JH, Kim, NR, Yoou, MS, Nam, SY, Kim, KY jt. (2015). Stilleni antidepressantne toime. Arch. Pharm. Res. 38, 1223–1231.

Jonnalagadda, SC, Suman, P., Morgan, DC ja Seay, JN (2017). "Peatükk 2 - Betuliini ja betuliinhappe derivaatide sünteesi ja terapeutiliste ainetena kasutamise hiljutised arengud", väljaandes Studies in Natural Products Chemistry. Toimetaja R. Atta Ur (Elsevier). Khar, A., Ali, AM, Pardhasaradhi, BY, Varalakshmi, CH, Anjum, R. ja Kumari, AL (2001). Stressivastuse esilekutsumine muudab inimese kasvajarakud

Kurkumiini vahendatud apoptoosi suhtes resistentsed jooned: reaktiivsete hapniku vaheühendite roll. Cell Stress Chaperones 6, 368–376. doi:10.1379/1466-1268(2001) 006<0368:iosrrh>2.0.co;2 Kikuchi, T., Ando, ​​H., Maekawa, KI, Arie, H., Yamada, T. ja Tanaka, R. (2015). Kaks uut Ent-kaurane-tüüpi diterpeenglükosiidi suvikõrvitsa (Cucurbita Pepo L.) seemnetest. Fitoteraapia 107, 69–76. doi:10.1016/j.fifitote.2015.09.019 Kim, HY, Nam, SY, Yang, SY, Kim, HM ja Jeong, HJ (2016a). Cucurbita

Moschata Duch. Ja selle aktiivne komponent karoteen soodustab tõhusalt immuunvastuseid splenotsüütide ja makrofaagide aktiveerimise kaudu. Immunopharmacol. Immunotoksikool. 38, 319–326.

Koldysheva, EV ja Lushnikova, EL (2008). Roti neerupealiste koore ultrastruktuurne ümberkorraldamine pärast kogu keha hüpertermiat. Bull. Exp. Biol. Med. 145, 650–655.

Metürapooni indutseeritud glükokortikoidide vähenemine moduleerib mittekolinergilise transsünaptilise aktivatsiooni kaudu türosiini hüdroksülaasi ja fenüületanoolamiin-N-metüültransferaasi geeni ekspressiooni roti neerupealises. J. Neuroendocrinol. 15, 15–23.

Lachance, LR ja Ramsey, D. (2018). Antidepressandid: tõenditel põhinev toitainete profileerimise süsteem depressiooni jaoks. World J. Psychiatry 8, 97–104.