ACKR4a kutsub esile autofagia, et blokeerida NF-kB signaalimine ja apoptoos, et hõlbustada Vibrio Harveyi infektsiooni

KOKKUVÕTE

Autofagia ja apoptoos on kaks tunnustatud bakterite invasiooni resistentsuse mehhanismi. Kuid bakterid on samuti arendanud võimet vältida immuunsust. Selles uuringus tuvastasime ACKR4a, atüüpilise kemokiini retseptorite perekonna liikme, NF-kB raja supressorina, mis teeb koostööd Becliniga-1, et kutsuda esile autofagia, mis pärsib NF-kB signaaliülekannet ja blokeerib apoptoosi, hõlbustades Vibrio harveyi infektsioon. Mehhaaniliselt aktiveerib V. harveyi poolt indutseeritud Ap{5}} ACKR4a transkriptsiooni ja ekspressiooni. ACKR4a moodustab kompleksi vastavalt Beclin-1 ja MyD88-ga, indutseerides autofagiat ja transportides MyD88 lüsosoomi lagunemiseks, et pärssida põletikuliste tsütokiinide tootmist. Samal ajal blokeerib ACKR4a-indutseeritud autofagia apoptoosi, inhibeerides kaspaasi8. See uuring tõestab esimest korda, et V. harveyi kasutab kaasasündinud immuunsuse vältimiseks nii autofagiat kui ka apoptoosi, mis viitab sellele, et V. harveyi on arendanud kalade immuunsuse vastast võimet. 

cistanche tubulosa - parandab immuunsüsteemi

SISSEJUHATUS

Immuunsüsteem jaguneb üldiselt kaasasündinud ja omandatud immuunsuseks, kusjuures enamik organisme toetub ellujäämiseks peamiselt kaasasündinud immuunsusele.1 Kaasasündinud immuunsus on organismides moodustunud kaitsemehhanism. See tunneb ära patogeeniga seotud molekulaarse mustri (PAMP) mustrituvastusretseptorite (PRR) kaudu, reageerib kiiresti patogeensele infektsioonile ja kaitseb peremeesorganismi nakkuse eest.2,3 Olulise PRR-i, teemaksulaadsed retseptorid (TLR) võivad algatada mitmesuguseid vastuseid fagotsütoosist tsütokiinide tootmiseni, tugevdades seeläbi veelgi põletikulisi ja kaasasündinud immuunvastuseid.4 Enamikul juhtudel annavad TLR-id signaali peamiselt MyD88-sõltuva raja kaudu, mis edastab signaale tuuma aktiveerimiseks kaskaadreaktsioonide kaudu. faktor-kappa B (NF-kB).5 NF-kB on kaasasündinud immuunsuse käivitamise üks võtmetegureid ja on oluline põletikulise vastuse, kaasasündinud immuunsuse, rakkude diferentseerumise, proliferatsiooni ja ellujäämise koordineerimiseks. peetakse põletikulise vastuse peamiseks initsiaatoriks.6 Kui bakterid nakatavad peremeesorganismi, sünteesitakse kaasasündinud immuunvastuse allavoolu efektorid, nagu tsütokiinid ja kemokiinid, mis lõpuks põhjustavad bakterite kasvu blokeeriva põletikulise vastuse. Kuid kaasevolutsioonis oma peremeestega on bakterid välja töötanud ka mitmesuguseid regulatiivseid strateegiaid, et vältida ja õõnestada oma peremeesorganismi kaitset.

Arvatakse, et autofagia ja apoptoos on kaks olulist bakterite sissetungi vastast teed.7 Autofagia on konservatiivne protsess, mis transpordib ebanormaalsed valgud lüsosoomidesse lagunemiseks ja mängib olulist rolli eukarüootide kaasasündinud immuunsuses bakterite invasiooni vastu.8,9 Siiski bakterid väldivad immuunsust, kasutades imetajatel autofagiat. Tavaliselt on rakkude eesmärk autofagia kaudu eemaldada sissetungivad ekstratsellulaarsed bakterid ja koloniseerivad bakterid tsütoplasmas,10 kuid mõned bakterid võivad autofagia "kaaperdada", et viia lõpule isekasv ja paljunemine.11–13 Näiteks Unc{7}}nagu kinaas 1 (ULK1), Beclin1, mikrotuubuliga seotud valgu kerge ahel 3 (LC3) ja autofagiaga seotud valgud (ATG-d) teevad koostööd, et moodustada autofagosoome, mis kapseldavad sissetungivad mikroorganismid ja transpordivad need lagunemiseks lüsosoomidesse.14–16 Kuid Mycobacterium tuberculosis väheneb. -reguleerib Beclinit-1, et vältida autofagosoomide moodustumist, inhibeerides lõpuks autofagiat ja soodustades nakatumist.17 Erinevalt autofagosoomide moodustumise pärssimisest kasutavad mõned bakterid autofagosoome isepaljunevate saitide lõpuleviimiseks, et soodustada proliferatsiooni.11,18 Lisaks autofagia korral on apoptoos ka peremeesorganismi kaitsevahend sissetungivate patogeenide vastu.7 Apoptoos on rakusurma muster, mida kasutatakse kahjustatud rakkude eemaldamiseks, et säilitada süsteemse keskkonna stabiilsus.19 Bakterite invasiooni signaali saamisel kutsub peremeesorganism esile nakatunud apoptoosi. rakke, et pärssida bakteriaalset infektsiooni.20 Seetõttu sõltub edukas bakterite koloniseerimine selle võimest vältida apoptoosi ja kaitsta bakterite replikatsiooni. Näiteks Edwardsiella tarda tagab oma ellujäämise, inhibeerides apoptoosi pärast sebrakala ZF4 rakkude nakatumist, 21 Shigella saavutab eduka kolonisatsiooni apoptoosi inhibeerimisega22 ja A-rühma streptokoki (GAS) toodetud S-valk seondub erütrotsüütide membraaniga, et vältida peremeesorganismi immuunsüsteemi tuvastamist. 23 Kuigi on tõestatud, et paljudel bakteritel on välja arenenud võime immuunsusest kõrvale hiilida, on mõned teated merepatogeenide kohta. Vibrio harveyi kuulub perekonda Vibrionaceae, mida peetakse merekalade kõrge patogeensuse tekitajaks; see põhjustab gastroenteriiti, lihasnekroosi ja nahahaavandeid ning on üks peamisi merekalade suremuse põhjuseid.24

cistanche taime suurendav immuunsüsteem

Välja arvatud autofagia ja apoptoos, võivad mõned bakterid (nt Staphylococcus aureus) isegi kasutada oma peremeesorganismi kemokiini retseptoreid immuunsuse vältimiseks.25 Kemokiini retseptorid on G-valguga seotud retseptorid (GPCR), mida leidub peamiselt leukotsüütide pinnal. Need sisaldavad seitset transmembraanset struktuuri, mis on seotud ligandi sidumise ja signaaliülekandega ning mängivad võtmerolli immuun- ja põletikuliste reaktsioonide algatamisel ja säilitamisel.26 Kemokiiniuuringute edenedes avastati atüüpilised kemokiiniretseptorid (ACKR-id).27 Kuigi ACKR-id on Struktuurilt sarnased teiste kemokiini retseptoritega ja suudavad sisestada ligande, ei saa nad aktiveerida signaaliülekande rada, kuna puudub DRYLAIV domeen, mida nimetatakse ka "vaikivaks retseptoriks".28 ACKR-ide funktsioon võib kajastuda järgmiselt 1. Nad võivad konkureerida tüüpiliste retseptoritega kemokiini sidumisel ja seeläbi reguleerida raku kemotaksise signaaliülekannet; 2. Kemokiini sisestamisel rakkudesse väheneb kemokiini kontsentratsioon keskkonnas, et mõjutada rakkude värbamist ja toimida kemokiinide püüdjana. 3. Need aitavad kemokiinidel viia lõpule rakkudevaheline transport läbi stroomaraku barjääri.29 ACKR-ide perekonda kuuluvad peamiselt DARC,30 D6 31,32, CXCR7,33 ja CCRL1,34 CCRL1 on tuntud ka kui atüüpiline kemokiini retseptor. 4 (ACKR4). Praegu on mõned uuringud näidanud, et ACKR4 näib realiseerivat signaaliülekannet G-valgust sõltumatu raja kaudu35–37 ning sellel on põletiku ja immuunvastuse kontrolli all hoidmisel üleliigne roll.38 Selle roll adaptiivses immuunsuses on hästi teada, kuid kaasasündinud immuunsuse funktsiooni uuritakse harva.

Kaasasündinud immuunsuse korral on TLR-raja signaaliülekanne selgrootutest imetajateni väga konserveerunud. TLR-i signaaliülekande põhivalguna on MyD88 selgroogsetel laialdaselt uuritud. Lisaks võivad MyD88 väga konserveerunud struktuuri tõttu olla selle homoloogidel kalades sarnased funktsioonid imetajatega.39,40 Sebrakala puhul osaleb MyD88 bakteriaalsete infektsioonide eemaldamises.41 Varasemad uuringud on samuti kinnitanud, et V. harveyi väldib immuunsust, hävitades MyD88 signaaliülekande.42 Kuid mehhanismid, kuidas V. harveyi immuunsusest kõrvale hiilib, on teleostkalade puhul halvasti mõistetavad. Selles uuringus oli ACKR4a V. harveyi poolt stimuleeritud Miichthys muy's kiiresti ülesreguleeritud. Ülesreguleeritud ACKR4a pärssis kaasasündinud immuunsust, indutseerides autofagiat MyD88-vahendatud NF-kB raja blokeerimiseks ja indutseerides autofagiat apoptoosi blokeerimiseks, et tugevdada V. harveyi infektsiooni. Meie teadmiste kohaselt on käesolev aruanne esimene, mis selgitab, et on leitud, et V. harveyi kasutab kaasasündinud immuunsuse vältimiseks nii autofagiat kui ka apoptoosi.

cistanche tubulosa - parandab immuunsüsteemi

TULEMUSED

V. harveyi infektsioon indutseerib ACKR4a ekspressiooni, et soodustada eneseproliferatsiooni

V. harveyi nakkuse regulatsioonis potentsiaalselt seotud geenide tuvastamiseks ravisime miiuy croakerit V. harveyiga 48 tundi, seejärel kasutasime RNA-seq analüüsi, et sõeluda erinevaid ekspressioonigeene (DEG) ravitud ja ravimata V. harveyiga. põrna proovid. Sügava järjestuse andmete põhjal tuvastasime 145 ülesreguleeritud geeni ja 28 0 allareguleeritud geeni (joonis 1A). Selle põhjal valisime rühmitamise soojuskaardi jaoks 10 suurimat ja 10 vähimat DEG-d (korduvuse muutuse log2 oli 1,0) ja tulemus näitas, et nii V. harveyiga töödeldud kui ka töötlemata proovide vastavad proovid olid hästi replitseeritud (joonis 1B). . ACKR4a mRNA-sid uuriti ja leiti, et need ekspresseeruvad tugevalt M-muusika ajus pärast V. harveyi nakatumist (joonis S1A). Seega kasutati järgnevates katsetes M. muiiy ajurakuliini (MBrC). ACKR4a-si1 katkestamise efektiivsus on MBrC-s 46, 1% ja ACKR4a-si2 63, 7% (joonis S1B), seega kasutati järgmistes katsetes ACKR4a-si2 (nimega ACKR4a-si). Seejärel keskendusime geenile ACKR4a, millel võib olla immuunfunktsioon, ja kolooniaid moodustavate üksuste (CFU) analüüsi tulemused näitasid, et ACKR4a soodustas V. harveyi proliferatsiooni (joonised 1C, 1D ja S1C). Et täiendavalt uurida mehhanismi, mille abil ACKR4a soodustab V. harveyi proliferatsiooni, analüüsiti ACKR4a ekspressioonimustrit. ACKR4a MBrC rakkudes reguleeris V. harveyi. Tulemused näitasid ajast sõltuvat viisi V. harveyi infektsiooni korral nii mRNA kui ka valgu tasemel (joonised 1E ja 1F). Lisaks pärssis ACKR4a vaigistamine tõhusalt ACKR4a ekspressiooni nii mRNA kui ka valgu tasemel (joonised 1E ja 1G). Ülaltoodud tulemused näitasid, et ACKR4a ülesreguleerimine võib hõlbustada V. harveyi nakatumist.

Joonis 1. V. harveyi poolt indutseeritud ACKR4a soodustab selle isevohamist

ACKR4a pärsib V. harveyi poolt käivitatud NF-KB signaaliülekannet 

Leidsime, et MBrC nakatamine V. harveyi'ga mõjutas rakkude proliferatsiooni kiirust ja selle leidmise kontrollimiseks viisime läbi rakkude proliferatsiooni testid. Tulemused näitasid, et V. harveyi infektsioon vähendas MBrC proliferatsiooni (joonis S1D). Hilisemad katsed on kinnitanud, et ACKR4a üleekspressioon vähendas rakkude proliferatsiooni, samas kui ACKR4a vaigistamine suurendas rakkude proliferatsiooni (joonis 2A ja S1E). Mitmed uuringud on näidanud, et NF-kB aktiveerimine soodustab rakkude proliferatsiooni. Leiti, et BAY 11–7082, NF-kB inhibiitor, võib samuti vähendada MBrC proliferatsiooni (joonis 2A ja S1E). Sarnaselt varasematele aruannetele43 seostati NF-kB-luc suurenemist V. harveyi infektsiooniga ajast sõltuval viisil (joonis S1F).

Joonis 2. ACKR4a inhibeerib V. harveyi käivitatud NF-KB signaaliülekannet

Et täiendavalt määrata ACKR4a mõju V. harveyi poolt käivitatud NF-KB signaaliülekandele, viidi läbi lutsiferaasi reporteranalüüs. ACKR4a inhibeeris oluliselt V. harveyi ja LPS-ga vallandatud NF-kB lutsiferaasi aktiivsust; V. harveyi poolt vallandatud IL-1b ja TNFa lutsiferaasi aktiivsust inhibeeris samuti ACKR4a (joonised 2B–2D). Endogeenne ACKR4a vaigistati, et kinnitada selle rolli kaasasündinud immuunsuses. Seejärel tuvastati täiendavalt p65 ja põletikueelsete tsütokiinide (IL-1b ja TNFa) ekspressioonimustrid, ACKR4a vaigistamine suurendas drastiliselt p65 mRNA-sid, IL-1b mRNA-sid ja TNFa mRNA-sid (joonised 2E–2G ). MLC ja MKC tulemused näitasid ka, et ACKR4a võib pärssida NF-KB signaaliülekannet (joonised S1G – S1J). ELISA tulemused olid samuti sarnased; ACKR4a vaigistamine suurendas oluliselt TNFa-d ja ACKR4a üleekspressioon inhibeeris TNFa-d (joonis 2H). NF-kB aktivatsiooni hindamiseks on rohkem vaja analüüsida translitereeritud vormi, st fosforüülitud NF-kB, ja see on NF-kB aktiivsuse mõõt sihtgeenidele. NF-kB stimuleerimisel p65 fosforüülitakse ja siseneb tuuma, et reguleerida põletikueelsete tsütokiinide transkriptsiooni. P65 fosforüülimise reguleerimise uurimiseks ACKR4a poolt mõõtsime p65 fosforüülimise taset pärast ACKR4a vaigistamist ja ACKR4a üleekspressiooni immunobloti abil. V. harveyi infektsioon suurendas p65 fosforüülimist, mis tõestas, et V. harveyi aktiveeris tõhusalt NF-kB. Selle põhjal suurendas ACKR4a vaigistamine p65 fosforüülimist, samas kui ACKR4a üleekspressioon vähendas p65 fosforüülimist, mis näitab, et ACKR4a on NF-KB signaaliülekande inhibiitor (joonised 2I ja 2J). Sebrakala puhul suurendas ACKR4a katkestamine p65 fosforüülimist. Lisaks näitas CFU test, et BAY 11–7082 suurendas oluliselt MBrC proliferatsiooni (joonis 2K). Üldiselt näitavad need andmed, et ACKR4a toimib NF-kB signaaliülekande negatiivse regulaatorina, et pärssida kaasasündinud immuunsust V. harveyi infektsiooni ajal.

Joonis 3. ACKR4a interakteerub MyD88 ja MyD88 lagunemise promootoritega autofagias

ACKR4a suhtleb MyD88-ga ja soodustab MyD88 autofagilist lagunemist

Järgmisena püüdsime kindlaks teha, milline sihtmärk NF-kB signaalides vahendab ACKR4a0 supresseerivat funktsiooni. NF-KB-lutsiferaasi reporteri test näitas, et ACKR4a üleekspressioon põhjustas lutsiferaasi aktiivsuse vähenemise, mille MyD88 indutseeris annusest sõltuval viisil (joonis 3A). ACKR4a üleekspressioon ei näidanud aga mingit mõju TRAF6 või TAK1 poolt juhitud lutsiferaasi aktiivsusele (joonised 3B ja 3C). Immunobloti tulemus oli sarnane lutsiferaasi reporteranalüüsiga; ACKR4a üleekspressioon inhibeeris MyD88 annusest sõltuval viisil, kuid TRAF6 ja TAK1 ei mõjutanud (joonis 3D). Need tulemused viitavad sellele, et ACKR4a toimib MyD88 tasemel.

Kõik imetajate TLR-id, välja arvatud TLR3, sõltuvad signaalide edastamiseks vähemalt osaliselt MyD88 adapterist, mis muudab MyD88 otsese reguleerimise tõhusamaks.44 Seejärel uurisime MyD88 ekspressiooni V. harveyi nakkuse erinevatel aegadel ja leidsime, et ACKR4a vaigistab. suurendas MyD88 ekspressiooni (joonis 3E) ja ACKR4a üleekspressioon inhibeeris MyD88 ekspressiooni ajast sõltuval viisil (joonis 3F). Huvitav tulemus leiti, et kuigi ACKR4a vaigistamine suurendas V. harveyi poolt käivitatud MyD88 ekspressiooni, ei olnud seda võimendust rakkude puhkeajal (joonised 3G ja 3H). Et paremini mõista ACKR4a toime aluseks olevat molekulaarset mehhanismi MyD{18}}vahendatud NF-kB signaaliülekandes, viisime läbi kaasimmunosadestamise (Co-IP) testid, et teha kindlaks, kas ACKR4a interakteerub MyD88-ga. Flag-ACKR4a võib immunosadestada Myc-MyD88-ga (joonised 3I ja S1K). Kooskõlas sellega leidsime, et Flag-MyD88 võib suhelda endogeense ACKR4a-ga (joonis 3J). Järgnevad subtsellulaarsed lokaliseerimiskatsed näitasid, et ACKR4a-l ei olnud MyD88-ga olulist kooslokaliseerumist (joonis S1L). Seega toetavad need leiud kontseptsiooni, et ACKR4a suhtleb füüsiliselt MyD88-ga ja nende koostoime toimub tõenäoliselt tsütoplasmas. Järgmisena uurisime mehhanismi, mille abil ACKR4a pärssis MyD88 ekspressiooni. Kas NH4Cl või 3-metüüladeniin (3-MA), autofagiast lüsosoomist sõltuva lagunemisraja inhibiitorid, põhjustasid ACKR4a juuresolekul MyD88 märkimisväärse kuhjumise ja MG132 ei mõjutanud rakkude lagunemist. MyD88 (joonis 3K). Lisaks näitasid sarnased tulemused, et 3-MA ja NH4Cl blokeerisid oluliselt MyD88 lagunemist annusest sõltuval viisil (joonised 3L ja 3M). Need leiud näivad viitavat sellele, et autofagia blokeerimine takistab tõhusalt ACKR4a-le suunatud MyD88 lagunemist. Autofaagiline voog tähistab autofagia dünaamilist protsessi, mis on autofaagilise aktiivsuse usaldusväärne näitaja. Kuna GFP fluorestsents kustutatakse lüsosoomis, saab autofagia staadiumi määrata GFP ja RFP fluorestsentsi järgi.42 Kollase fluorestsentsi jälgimine paneelil Merge näitas ACKR4a juuresolekul rohkem punast fluorestsentsi, mis näitab, et ACKR4a soodustas autofagosoomid ja lüsosoomid; arvestades, et autofagia inhibiitor klorokviin (CQ) takistas autofagosoomide ja lüsosoomide sulandumist, näidates rohkem kollast fluorestsentsi (joonis 3N). Et täiendavalt kinnitada, et ACKR4a sihib MyD88 autofaagilise lagunemise jaoks, viidi läbi lüsosomaalse lokaliseerimise test, MyD88 (roheline) ja lüsosoomid (punased) lokaliseeriti MBrC rakus (joonis 3O), mis viitab sellele, et MyD88 transporditi lüsosoomidesse. Kokkuvõttes näitavad need tulemused, et ACKR4a interakteerub MyD88-ga ja sihib MyD88 autofaagilise lagunemise jaoks.

Joonis 4. ACKR4a osaleb autofagia reguleerimises Beclini kaudu-1

ACKR4a osaleb autofagia reguleerimises Beclini kaudu{1}}

Mõned bakterid kasutavad oma kasvu ja nakatumise soodustamiseks autofagiat, nende replikatsioon väheneb, kui autofagia puudub.13 Et testida, kas V. harveyi osaleb autofagia reguleerimises MBrC rakkudes, nakatati rakud V. harveyi'ga ja seejärel ekspressioonimuster. LC3 kohta uuriti. MBrC rakkudes suurendas V. harveyi kokkupuude autofaagiat, nagu näitas GFP-LC3 puncta akumuleerumine, millega kaasnes ajast sõltuv V. harveyi infektsiooni suurenemine (joonis 4A). ACKR4a üleekspressioon suurendas V. harveyi poolt indutseeritud autofagiat, mida näitab RFP-LC3 puncta akumulatsiooni märkimisväärne suurenemine, erinevalt ACKR4a vaigistamisest, mis vähendas oluliselt V. harveyi poolt indutseeritud autofagiat (joonised 4B ja 4C). Lisaks põhjustas ACKR4a vaigistamine V. harveyi poolt indutseeritud LC3-II ekspressiooni vähenemist (joonis 4D).

ULK1, Beclin-1 ja ATG5 olid autofagia peamised regulatoorsed valgud. qPCR tulemused näitasid, et ACKR4a suurendas oluliselt Beclin-1, kuid mitte ULK1 ja ATG5 ekspressiooni (joonis 4E). ULK1, ATG5 ja Beclini lutsiferaasi reporteri test{10}} näitas, et ACKR4a üleekspressioon põhjustas ainult Beclin{12}}lutsiferaasi aktiivsuse suurenemise (joonis 4F). Järgmisena tuvastasime, et ACKR4a üleekspressioon suurendas Beclin-1, kuid mitte ULK1 ja ATG5 ekspressiooni (joonis 4G). Samuti inhibeeris Beclin-1-si ACKR4a-indutseeritud autofagiat, samas kui ATG5-si inhibeeris ainult osaliselt (joonis 4H). Ülaltoodud tulemused näitasid, et ACKR4a oli suunatud Beclinile{25}}. Seetõttu uuriti Beclin-1 funktsiooni ja mehhanismi MyD88 ACKR4a-vahendatud autofagilises lagunemises. V. harveyi'ga nakatunud sebrakaladel ei põhjustanud ACKR4a katkestamine olulisi muutusi ULK1-s, vähendades samal ajal oluliselt Beclin-1 ja ATG5 (joonised S2B–S2D). Beclin-1 suurendas veelgi ACKR4a-indutseeritud autofagilist voogu Baf1A ja CQ-ga töödeldud (joonis 4I) ja Beclin{41}} suurendas MyD88 lagunemist ACKR4a poolt (joonis 4J). Seejärel viisime läbi Co-IP testid, et teha kindlaks, kas ACKR4a interakteerub Becliniga-1, ja avastasime, et ACKR4a interakteerub Becliniga-1 ja V. harveyi infektsioon tugevdas ACKR4a ja Beclini vahelist koostoimet{51 }} (joonis 4K). Lüsosomaalse lokaliseerimise test näitas, et ACKR4a suurendas autofagosoomi sulandumist lüsosoomiga (joonis 4L). Seejärel suurendab ACKR4a endogeenset Beclin{56}} ekspressiooni (joonis 4M) ja ACKR4a vaigistamine nõrgendab V. harveyi poolt indutseeritud Beclin-1 ekspressiooni (joonis 4N). Lisaks suurendas Beclin-1 vaigistamine p65 fosforüülimist, mille käivitas V. harveyi, mis viitab veel sellele, et V. harveyi kutsub esile autofagia, mis reguleerib negatiivselt NF-KB signaaliülekannet (joonis 4O). Järgmisena püüdsime kindlaks teha Beclini -1 bioloogilise tähtsuse V. harveyi infektsiooni korral, eriti V. harveyi proliferatsiooni kontrollimisel. Viidi läbi CFU test ja leiti, et nii Beclin-1 vaigistamine kui ka CQ-blokeeritud autofagia vähendasid V. harveyi vohamist, mis tõestab, et V. harveyi kasutab oma proliferatsiooni soodustamiseks autofagiat (joonis 4P). Ülaltoodud tulemused näitavad koos, et ACKR4a indutseerib ja moodustab Becliniga komplekse{71}}, et soodustada autofagiat ja hõlbustada seejärel V. harveyi nakatumist.

Tistanche kasulikud omadused meestele - tugevdavad immuunsüsteemi

Cistanche Enhance Immunity toodete vaatamiseks klõpsake siin

【Küsi lisa】 E-post:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

ACKR4a indutseeris autofagia blokeeritud apoptoosiks

Autofaagilist rakusurma peetakse mõistlikuks alternatiiviks apoptoosile ja apoptoos on samuti tunnustatud antibakteriaalne mehhanism; edukad bakteriaalsed infektsioonid viivad enesereplikatsiooni lõpule, inhibeerides apoptoosi.22 V. harveyi poolt indutseeritud autofagia ja apoptoosi vahelise seose määramiseks määrati MBrC rakkude apoptoos erineva raviga enne ja pärast V. harveyi nakatumist ning ACKR4a vaigistamine suurendas V. harveyi poolt indutseeritud apoptoos (joonised 5A ja 5B, vasak paneel). Kuna kaspaas3 ja kaspaas7 on apoptoosi algatamisel olulised, aktsepteeritakse neid laialdaselt kui usaldusväärseid apoptoosi indikaatoreid. Kaspaas Glo 3/7 test näitas, et ACKR4a üleekspressioon inhibeeris V. harveyi poolt indutseeritud kaspaas3/7 aktiivsust, samas kui ACKR4a vaigistamine võimendas V. harveyi poolt indutseeritud kaspaas3/7 aktiivsust (joonis 5B, parem paneel). V. harveyi ja eksogeenselt lisatud rekombinantse aktiivse kaspaas8 indutseeritud kaspaas3/7 aktiivsust inhibeeris ACKR4a (joonis 5C), mis viitab sellele, et ACKR4a on võimeline tõhusalt blokeerima apoptoosi signaaliülekannet. Kuigi ACKR4a-indutseeritud autofagia on tõestatud, on vaja täiendavaid uuringuid, et uurida autofagia rolli apoptoosi blokeerimisel. Nagu on näidatud joonisel 5D, suurendas ACKR4a vaigistamine märkimisväärselt efektorkaspaase (kaspaas7) ja initsiaatorkaspaase (kaspaas8). Lisaks inhibeeris ACKR4a üleekspressioon kaspaas7 ja kaspaas8 mRNA-sid (joonis 5E) ja ACKR4a knockdown suurendas sebrakalas märkimisväärselt kaspaasi7 ja kaspaas8 (joonised S2E ja S2F). Varasemad uuringud on näidanud, et Beclin{41}} on molekulaarne lüliti, mis vahendab apoptoosi ja autofagia protsesse,45 seega uuriti Beclin-1 osalust apoptoosi reguleerimises. Meie uuringus alandas Beclin-1 üleekspressioon V. harveyi poolt indutseeritud kaspaasi8, samas kui Beclin-1 vaigistas ülesreguleeritud V. harveyi poolt indutseeritud kaspaasi8 (joonis 5F). Huvitav tulemus leiti, et kaspaas8 oli V. harveyi infektsiooni 3 tunni pärast oluliselt ülesreguleeritud; see inhibeeriti uuesti infektsiooni kestuse suurenemisega ja LC3-II oli negatiivses korrelatsioonis kaspaas8-ga (joonis 5G). Ülaltoodud tulemuste kohaselt indutseeris ACKR4a autofagiat, et blokeerida apoptootilist signaaliülekannet ja hõlbustada V. harveyi nakatumist, ning Beclin{59}} võib olla potentsiaalne sihtmärk autofagia ja apoptoosi kaskaadis.

Joonis 5. ACKR4a indutseerib autofagiat, et blokeerida apoptoosi

Ap-1 suurendab ACKR4a-indutseeritud autofagiat V. harveyi infektsiooni korral

Seejärel uuriti V. harveyi infektsiooni poolt indutseeritud ACKR4a ekspressiooni mehhanismi. Esmalt konstrueeriti neli erinevat ACKR4a promootori plasmiidi vastavalt promootori ennustusjärjestustele (joonis 6A). Lutsiferaasi test näitas, et ACKR4a-p-3 aktiivsus oli kõrgeim (joonis 6B). ACKR4a ekspressiooni ülesvoolu aktivaatori tuvastamiseks V. harveyi infektsiooni ajal analüüsiti ACKR4a promootorpiirkonda ja leiti, et ACKR4a-l on potentsiaalsed Sp-1 ja Ap-1 seondumissaidid (joonis 6C). ACKR4a-luc test näitas, et Sp-1 ei suutnud lutsiferaasi aktiivsust suurendada ja Ap-1 suurendas lutsiferaasi aktiivsust (joonised 6D ja 6E), mis suurendas võimaluse, et ACKR4a võib olla Ap otsene sihtmärk. -1. Selle uurimiseks konstrueeriti kaks lutsiferaasi vektorit, mis koosnesid mutantsest ACKR4a-st (joonis 6F). Lutsiferaasi test näitas, et mutandid, millel puuduvad Ap-1 sidumissaidid, inhibeerisid lutsiferaasi aktiivsust erinevalt metsiktüübist (joonis 6G). Kinnitamaks, et Ap-1 soodustab ACKR4a ekspressiooni, vaigistasime või suurendasime Ap-1 ekspressiooni üleekspressiooni või knockdowni kaudu ning ACKR4a ekspressiooni hinnati transfekteeritud MBrC rakkudes. Ap-1 vaigistamine vähendas oluliselt V. harveyi poolt indutseeritud ACKR4a ekspressiooni (joonis 6H), samas kui Ap-1 üleekspressioon suurendas oluliselt ACKR4a ekspressiooni (joonis 6I). Immunobloti tulemused olid kooskõlas qPCR tulemustega, Ap-1 üleekspressioon suurendas ACKR4a ekspressiooni, samas kui Ap-1 vaigistamine vähendas ACKR4a ekspressiooni (joonis 6J). ChIP analüüs näitas, et Ap-1 seondub normaalsetes füsioloogilistes tingimustes MBrC rakkudes ACKR4a promootoriga ja V. harveyi stimulatsioon võimendas Ap-1 seondumist ACKR4a promootoriga (joonis 6K). Ülaltoodud tulemused kinnitasid, et ACKR4a on Ap-1 potentsiaalne transkriptsiooni sihtmärk. Seejärel uuriti Ap-1 funktsiooni autofaagias; Ap-1 vaigistamine vähendas tõhusalt V. harveyi infektsioonist põhjustatud GFP-LC3 akumulatsiooni (joonis 6L) ja samuti nõrgendas see V. harveyi infektsioonist põhjustatud LC3-II ülesreguleerimist (joonis 6M). ). CFU test viidi läbi, et uurida Ap-1 rolli V. harveyi infektsioonis ja leiti, et AP-1 hõlbustab V. harveyi proliferatsiooni (joonis 6N). Kokkuvõttes näitasid ülaltoodud tulemused, et Ap-1 aktiveerib ACKR4a transkriptsiooni ja ekspressiooni ning aitab kaasa V. harveyi nakkusele.

Joonis 6. Ap-1 võimendatud ACKR4a indutseeritud autofagia V. harveyi infektsiooni korral

Joonis 7. Töömudel selle kohta, kuidas ACKR4a soodustab V. harveyi nakatumist

ARUTELU

On näidatud, et ACKR-id osalevad mitmetes bioloogilistes protsessides, nagu kemokiinisüsteemi regulatsioon, kemokiini ligandi sisestamine, rakusisene lagunemine ja põletikuline reaktsioon, 4, 26 mis on oluline mitte ainult adaptiivse immuunsuse jaoks, vaid ka kaasasündinud immuunsüsteemi olulise komponendina. .33,34 Siiski ei ole ACKR-ide rolli kalade bakteriaalse infektsiooni põletikulises vastuses uuritud. See uuring näitab esimest korda, et ACKR4a, ACKR-i perekonna liige, soodustab autofagia ja apoptoosi kaudu V. harveyi nakatumist kaladele. Mehhaaniliselt reguleeris ACKR4a transkriptsiooni üles transkriptsioonifaktor AP-1. Seejärel sünergiseeriti ülesreguleeritud ACKR4a autofagia esilekutsumiseks Beclin{10}} ja transporditi MyD88 lagunemiseks lüsosoomidesse. Samal ajal indutseerib ACKR4a autofagiat, et blokeerida apoptoosi ja hõlbustab seejärel V. harveyi nakatumist (joonis 7). Kaasasündinud immuunsus mängib otsustavat rolli eukarüootide kaitsmisel endogeense ja eksogeense patogeense invasiooni eest.46 Pikaajalise mikroorganismidega kokkupuute tulemusena on kaladel välja kujunenud optimeeritud kaasasündinud immuunsus, et kaitsta neid nakkuste eest.47 TLR-id tundsid ära PAMP, kui bakteriaalne infektsioon tekib, ja algatas kaasasündinud immuunvastuse MyD{17}}sõltuvate ja sõltumatute radade kaudu, mis kutsus esile põletikueelsete tsütokiinide tootmise, et kõrvaldada bakteriaalne infektsioon. MyD88 on TLR signaalimise oluline adapter, välja arvatud TLR3, kasutavad kõik imetajate TLR-id NF-kB signaalimise aktiveerimiseks MyD88.48 Seetõttu võib MyD88 otsereguleerimine olla kõige tõhusam. Näiteks S-1-atsetüültsüsteiin inhibeerib IL-6 tootmist, kutsudes esile MyD88 lagunemise. Samamoodi on kalade puhul teatatud, et IRF3 ja eIF3k pärsivad NF-kB signaaliülekannet, sihtides MyD88.42,49 Kogunenud tõendid on samuti näidanud, et MyD88 oli oluline bakteriaalsete infektsioonide kõrvaldamiseks. Näiteks MyD{35}}puudulikud hiired ei suutnud bakterikomponente ära tunda ja olid S. aureuse suhtes väga vastuvõtlikud. 50 Lisaks on näidatud, et MyD88 osaleb sebrakala bakteriaalsete infektsioonide kõrvaldamises.41 Kaasasündinud immuunsüsteemi aktiveerimine soodustab bakterite kliirensit, mis kujutab endast suurt selektiivset survet, aidates neil arendada võimet pärssida kaasasündinud immuunsust. .51,52 On näidatud, et salmonella suudab pärast peremeesrakkude nakatamist reguleerida immuunvastuseid ja manipuleerida põletikuliste reaktsioonidega. Salmonella virulentsus SpvC defosforüülib pöördumatult ERK, p38 ja MAPK, inhibeerides seeläbi põletikueelsete tsütokiinide transkriptsiooni.53 Selles uuringus kombineeriti V. harveyi-ga nakatunud M. miiuy ülesreguleeritud ACKR4a MyD88-ga, et inhibeerida p65 forseerimist. ja blokeerige NF-kB signaalimine. See viitab sellele, et bakterid võivad pärssida ka kalade kaasasündinud immuunsust, häirides immuunsüsteemi vältimise eesmärgil TLR-signaali adapterite stabiilsust.

Autofagia ja apoptoos on kaks tunnustatud bakteriaalse invasiooni resistentsuse mehhanismi, kusjuures antimikroobne autofagia on barjäär sissetungivate mikroorganismide vastu. PRR-id võivad indutseerida autofagiat peremees-bakterite kontakti erinevatel etappidel ja pärssida bakterite rakusisest kasvu.54 Vastupidi, bakterid on välja töötanud ka tõhusad mehhanismid autofagia ennetamiseks, selle vastu võitlemiseks või juhtimiseks. Need mehhanismid hõlmavad sageli Beclini-1 sihtimist autofagia blokeerimiseks,55 autofagosoomide küpsemise takistamiseks56 ja mõnel juhul isegi autofagia aktiveerimiseks, et tagada bakterite kasvu toitmine.57 Erinevalt leiti, et V. harveyi indutseeris Beclin{{6} } aktiveeritud autofagia ACKR4a kaudu, mis sihib MyD88 autofagilise lagunemise jaoks, blokeerides seeläbi NF-KB signaaliülekande ja soodustades enesereplikatsiooni. Teine kaitsestrateegia on programmeeritud rakusurm (apoptoos), mis aktiveerub, kui patogeenid kasutavad peremeesrakke ellujäämiseks ja replikatsiooniks. Näiteks makrofaagide mükobakteritega nakatumine põhjustab apoptoosi, mis aitab kaasa bakterite elimineerimisele rakkudest.58 Lisaks hävitab TNF-a-vahendatud makrofaagide apoptoos rakusisese keskkonna mükobakterite paljunemiseks ja vähendab nakatunud mükobakterite kasvukiirust.59 Võitlemiseks. apoptoosi ellujäämissurve, kodeerivad paljud edukad patogeenid geene, mille saadused inhibeerivad apoptoosi peremeesrakkudes, säilitades nii patogeeni replikatsiooni elujõulisuse.60 Kuigi neid mehhanisme on imetajatel hästi uuritud, on apoptoosi bakteriaalsest pärssimisest kalades vähe teada. Meie uuringus mängib V. harveyi poolt indutseeritud autofagia rolli apoptootilistes etappides ja blokeerib apoptootilist signaaliülekannet. Apoptoos ja autofagia soodustavad ja antagoniseerivad üksteist. Pre-apoptootilistes etappides blokeerivad rakud apoptootilist rada ja vähendavad autofagia kaudu apoptoosi taset, säilitades seega eelise. Autofaagia ei põhjusta rakusurma apoptoosi varases staadiumis, vaid soodustab ka rakkude ellujäämist.61 Autofagia apoptoosi hilises staadiumis võib soodustada apoptoosi ning seejärel inhibeerib suurenenud apoptoos autofagia tekkimist p53 ja BH3 radade migratsiooni kaudu. Bioloogiline protsess on rangelt reguleeritud, sealhulgas autofagia ja apoptoosi koostoime. Apoptoosi ja autofagia interaktiivses reaktsioonimehhanismis osalevad arvukad regulatoorsed geenid, Beclin-1 on üks neist.63 Lisaks autofagia initsiatsiooni reguleerimisele osaleb Beclin-1 ka apoptoosi reguleerimises.45 ,64 Uuringud on näidanud, et Beclin-1 kaotab pärast aktiveeritud kaspaaside poolt lõhustamist oma võimet seista vastu apoptoosile.65 See viitab sellele, et Beclin-1 mängib regulatsioonis olulist rolli "molekulaarse lülitina". autofagiast ja apoptoosist.

cistanche tubulosa - parandab immuunsüsteemi

V. harveyi on mere gramnegatiivne bakter, mis kujutab tõsist ohtu mereakvakultuuri kalanduse tervisele. V. harveyi infektsioon põhjustab kaladel meningiiti ja entsefaliiti,66 ja V. harveyi infektsioon põhjustab ajukoormat.67 Vastuseks bakteriaalsele infektsioonile on kalade peamised kaitsesüsteemid kaasasündinud immuun- ja põletikulised reaktsioonid. Kuid bakterid on sümbioosis oma peremeestega arendanud ka võimet vältida immuunsust. Kokkuvõttes näitavad meie tulemused V. harveyi immuunvastust kõrvalehoidmise mehhanismi kaladel. ACKR4a indutseerib autofagiat, et inhibeerida NF-kB signaaliülekannet ja blokeerida apoptoosi, mis omakorda hõlbustab V. harveyi nakatumist teleostkaladel. See on ka esimene kord, kui on leitud, et gramnegatiivsed bakterid väldivad immuunsust, reguleerides samaaegselt kaasasündinud immuunsust ja apoptoosi autofagia kaudu. See uuring annab ülevaate autofagia mõjust peremees-bakteri interaktsioonile teleostkalades ja annab ülevaate imetajate resistentsusest bakteriaalse infektsiooni suhtes.

VIITED

1. Dinarello, CA (2018). Ülevaade IL-1 perekonnast kaasasündinud põletiku ja omandatud immuunsuse korral. Immunol. Ilm 281, 8–27.

2. Gaidt, MM, Ebert, TS, Chauhan, D., Ramshorn, K., Pinci, F., Zuber, S., O'Duill, F., Schmid-Burgk, JL, Hoss, F., Buhmann, R. et al. (2017). Inimese müeloidrakkude DNA-põletikku käivitab STING-raku surmaprogramm NLRP3-st ülesvoolu. Lahter 171, 1110–1124.e18.

3. Xiao, TS (2017). Kaasasündinud immuunsus ja põletik. Kamber. Mol. Immunol. 14, 1–3.

4. Koropatnick, TA, Engle, JT, Apicella, MA, Stabb, EV, Goldman, WE ja McFallNgai, MJ (2004). Mikroobsete faktorite poolt vahendatud areng peremees-bakterite vastastikuses suhetes. Teadus 306, 1186–1188.

5. Janeway, CA (1989). Asümptoodile lähenemine? Evolutsioon ja revolutsioon immunoloogias. Cold Spring Harb. Sümp. Kvant. Biol. 54, 1–13.

6. Vallabhapurapu, S. ja Karin, M. (2009). NF-KB transkriptsioonifaktorite reguleerimine ja funktsioon immuunsüsteemis. Annu. Rev. Immunol. 27, 693–733.

7. Krakauer, T. (2019). Põletik, autofagia ja rakusurm: peremeesorganismi kaasasündinud kaitsekolmainsus rakusiseste bakterite vastu. Vahendajad Põletik. 2019, 2471215.

8. Hurley, JH ja Young, LN (2017). Autofagia initsiatsiooni mehhanismid. Annu. Rev. Biochem. 86, 225–244.

9. Tema, X., Zhu, Y., Zhang, Y., Geng, Y., Gong, J., Geng, J., Zhang, P., Zhang, X., Liu, N., Peng, Y ., et al. (2019). RNF34 toimib immuunsuses ja selektiivses mitofaagias, suunates MAVS-i autofagilise lagunemise jaoks. EMBO J. 38, 1009788–e101018.

10. Yin, L., Lv, M., Qiu, X., Wang, X., Zhang, A., Yang, K. ja Zhou, H. (2021). IFN-G manipuleerib NOD{3}}vahendatud autofagia ja Edwardsiella piscicida interaktsiooniga, et suurendada rakusisest kliirensit kaladel. J. Immunol. 207, 1087–1098.

11. Mansilla-Pareja, ME, Bongiovanni, A., Lafont, F. ja Colombo, MI (2017). Coxiella burnetii replikatiivse vakuoolimembraani terviklikkuse muutused ja koosmõju autofagia rajaga. Esiosa. Kamber. Nakata. Microbiol. 7 112.

12. Bravo-Santano, N., Ellis, JK, Mateos, LM, Calle, Y., Keun, HC, Behrends, V. ja Letek, M. (2018). Intratsellulaarne Staphylococcus aureus moduleerib autofagia aktiveerimiseks peremeesorganismi tsentraalset süsiniku metabolismi. mSphere 3, 003744–003818.

13. Winchell, CG, Dragan, AL, Brann, KR, Onyilagha, FI, Kurten, RC ja Voth, DE (2018). Coxiella burnetii õõnestab p62 / sekvestosoomi 1 ja aktiveerib Nrf2 signaaliülekande inimese makrofaagides. Nakata. Immun. 86, e00608–e00617.

14. Lee, HK, Lund, JM, Ramanathan, B., Mizushima, N. ja Iwasaki, A. (2007). Autofagiast sõltuv viiruse äratundmine plasmatsütoidsete dendriitrakkude poolt. Teadus 315, 1398–1401.

15. Jounai, N., Takeshita, F., Kobiyama, K., Sawano, A., Miyawaki, A., Xin, KQ, Ishii, KJ, Kawai, T., Akira, S., Suzuki, K., ja Okuda, K. (2007). Atg5 Atg12 konjugaati seostatakse kaasasündinud viirusevastaste immuunvastustega. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 104, 14050–14055.

16. Schaaf, MBE, Keulers, TG, Vooijs, MA ja Rouschop, KMA (2016). LC3 / GABARAP perekonna valgud: autofagia (mitte) seotud funktsioonid. FASEB J 30, 3961–3978.

17. Chen, Z., Wang, T., Liu, Z., Zhang, G., Wang, J., Feng, S. ja Liang, J. (2015). Mycobacteria tuberculosis'e poolt indutseeritud autofagia inhibeerimine MiR-30A poolt kui võimalik immuunpõgenemise mehhanism inimese makrofaagides. Jpn. J. Infect. Dis. 68, 420–424.

18. Kubori, T., Bui, XT, Hubber, A. ja Nagai, H. (2017). Legionella RavZ mängib rolli ubikvitiini värbamise vältimisel baktereid sisaldavatesse vakuoolidesse. Esiosa. Kamber. Nakata. Microbiol. 7 384.

19. Danial, NN ja Korsmeyer, SJ (2004). Rakusurm: kriitilised kontrollpunktid. Lahter 116, 205–219.

20. Salvesen, GS ja Ashkenazi, A. (2011). Hetktõmmis: kaspaasid. Lahter 147, 476–476.e1.

21. Zhou, ZJ ja Sun, L. (2016). Edwardsiella tarda poolt indutseeritud apoptoosi pärssimine: rakusisese ellujäämise strateegia. Esiosa. Kamber. Nakata. Microbiol. 6, 76.

22. Gu¨ nther, SD, Fritsch, M., Seeger, JM, Schiffmann, LM, Snipas, SJ, Coutelle, M., Kufer, TA, Higgins, PG, Hornung, V., Bernardini, ML jt. (2020). Tsütosoolsed gramnegatiivsed bakterid takistavad apoptoosi, inhibeerides efektorkaspaase lipopolüsahhariidi kaudu. Nat. Microbiol. 5, 354–367.

23. Wierzbicki, IH, Campeau, A., Dehaini, D., Holay, M., Wei, X., Greene, T., Ying, M., Sands, JS, Lamsa, A., Zuniga, E., et al. (2019). A-rühma streptokoki S-valk kasutab punaseid vereliblesid immuunkamuflaažina ja on immuunsüsteemist kõrvalehoidumise oluline tegur. Cell Rep. 29, 2979–2989.e15.

24. Chen, J., Lu, Y., Ye, X., Emam, M., Zhang, H. ja Wang, H. (2000). Vibrio harveyi kvoorumi tuvastamise praegused edusammud ravimite avastamise sihtmärkidena. Eur. J. Med. Chem. 207, 112741.

25. Kimura, T., Jain, A., Choi, SW, Mandell, MA, Schroder, K., Johansen, T. ja Deretic, V. (2015). TRIM-vahendatud täppis-autofagia on suunatud kaasasündinud immuunsuse tsütoplasma regulaatoritele. J. Cell Biol. 210, 973–989.

26. Zlotnik, A. ja Yoshie, O. (2012). Kemokiinide superperekond vaadati uuesti. Immunity 36, 705–716.

27. Ulvmar, MH, Hub, E. ja Rot, A. (2011). Ebatüüpilised kemokiini retseptorid. Exp. Cell Res. 317, 556–568.

28. Bonecchi, R., Savino, B., Borroni, EM, Mantovani, A. ja Locati, M. (2010). Kemokiini peibutusretseptorid: struktuurifunktsioon ja bioloogilised omadused. Curr. Üles. Microbiol. Immunol. 341, 15–36.

29. Comerford, I., Litchfield, W., Harata-Lee, Y., Nibbs, RJB ja McColl, SR (2007). Kemotaktiliste võrkude reguleerimine "ebatüüpiliste" retseptorite poolt. Bioessees 29, 237–247.

30. Horuk, R., Chitnis, CE, Darbonne, WC, Colby, TJ, Rybicki, A., Hadley, TJ ja Miller, LH (1993). Malaariaparasiidi Plasmodium vivax retseptor: erütrotsüütide kemokiini retseptor. Teadus 261, 1182–1184.

31. Bonini, JA, Martin, SK, Dralyuk, F., Roe, MW, Philipson, LH ja Steiner, DF (1997). Inimese uudse CC-kemokiini retseptori (CCR10) kloonimine, ekspressioon ja kromosomaalne kaardistamine, millel on kõrge afiinsus MCP-1 ja MCP-3 suhtes. DNA Cell Biol. 16, 1249–1256.

32. Nibbs, RJ, Wylie, SM, Yang, J., Landau, NR ja Graham, GJ (1997). Inimese uudse beeta-kemokiini retseptori D6 kloonimine ja iseloomustamine. J. Biol. Chem. 272, 32078–32083.

33. Burns, JM, Summers, BC, Wang, Y., Melikian, A., Berahovich, R., Miao, Z., Penfold, MET, Sunshine, MJ, Littman, DR, Kuo, CJ jt. (2006). SDF-1 ja I-TAC uudne kemokiini retseptor osaleb rakkude ellujäämises, rakkude adhesioonis ja kasvaja arengus. J. Exp. Med. 203, 2201–2213.

34. Gosling, J., Dairaghi, DJ, Wang, Y., Hanley, M., Talbot, D., Miao, Z. ja Schall, TJ (2000). Tipptasemel: uudse kemokiiniretseptori tuvastamine, mis seob dendriitrakke ja T-raku suhtes aktiivseid kemokiine, sealhulgas ELC, SLC ja TECK. J. Immunol. 164, 2851–2856.

35. Hall, RA, Premont, RT ja Lefkowitz, RJ (1999). Heptahelilise retseptori signaalimine: väljaspool G-valgu paradigmat. J. Cell Biol. 145, 927–932.

36. Brzostowski, JA ja Kimmel, AR (2001). Signaliseerimine null G juures: G-valgust sõltumatud funktsioonid 7-TM retseptorite jaoks. Trends Biochem. Sci. 26, 291–297.

37. Sun, Y., Huang, J., Xiang, Y., Bastepe, M., Ju¨ppner, H., Kobilka, BK, Zhang, JJ ja Huang, XY (2007). Annusest sõltuv üleminek G-valguga seotud signaalilt G-valgust sõltumatule signaaliülekandele GPCR abil. EMBO J. 26, 53–64.

38. Nibbs, RJB ja Graham, GJ (2013). Immuunregulatsioon ebatüüpiliste kemokiini retseptorite poolt. Nat. Rev. Immunol. 13, 815–829.

39. Lewis, BP, Burge, CB ja Bartel, DP (2005). Konserveeritud seemnete sidumine, mida sageli külgnevad adenosiinid, näitab, et tuhanded inimese geenid on mikroRNA sihtmärgid. Lahter 120, 15–20.

40. Friedman, RC, Farh, KKH, Burge, CB ja Bartel, DP (2009). Enamik imetajate mRNA-sid on mikroRNA-de konserveerunud sihtmärgid. Genome Res. 19, 92–105.

41. Denli, AM, Tops, BBJ, Plasterk, RHA, Ketting, RF ja Hannon, GJ (2004). Primaarsete mikroRNA-de töötlemine mikroprotsessorikompleksi abil. Loodus 432, 231–235.

42. Chen, Y., Cao, B., Zheng, W., Sun, Y. ja Xu, T. (2022). eIF3k pärsib NF-kB signaaliülekannet, sihtides MyD88 ATG{5}}vahendatud autofagilise lagunemise jaoks teleostkalades. J. Biol. Chem. 298, 101730.

43. Chu, Q., Sun, Y., Cui, J. ja Xu, T. (2017). Indutseeritav mikroRNA-214 aitab pärssida NF-kB-vahendatud põletikulist reaktsiooni, suunates kalades myd88 geeni. J. Biol. Chem. 292, 5282–5290.

44. Gay, NJ, Symmons, MF, Gangloff, M. ja Bryant, CE (2014). Toll-tüüpi retseptori signaalikomplekside kokkupanek ja lokaliseerimine. Nat. Rev. Immunol. 14, 546–558.

45. McKnight, NC ja Zhenyu, Y. (2013). Beclin 1 on PI3K-III oluline komponent ja põhiregulaator tervise ja haiguste korral. Curr. Patobiol. Rep 1, 231–238.

46. ​​Mutwiri, G., Gerdts, V., Lopez, M. ja Babiuk, LA (2007). Kaasasündinud immuunsus ja uued abiained. Rev. Sci. Tehn. 26, 147–156.

47. Buchmann, K. (2014). Kaasasündinud immuunsuse areng: vihjed selgrootutelt kalade kaudu imetajateni. Esiosa. Immunol. 5 459.

48. Chu, Q., Sun, Y., Cui, J. ja Xu, T. (2017b). MicroRNA-3570 moduleerib NF-kB rada teleost-kalades, sihtides MyD88. J. Immunol. 198, 3274–3282.

49. Yan, X., Zhao, X., Huo, R. ja Xu, T. (2020). IRF3 ja IRF8 reguleerivad NF-KB signaaliülekannet, sihites MyD88 teleost-kalades. Esiosa. Immunol. 11 606.

50. Takeuchi, O., Hoshino, K. ja Akira, S. (2000). Tipptasemel: TLR2-puudulikud ja MyD88-puudulikud hiired on Staphylococcus aureuse nakkusele väga vastuvõtlikud. J. Immunol. 165, 5392–5396.

51. Keszei, AFA, Tang, X., McCormick, C., Zeqiraj, E., Rohde, JR, Tyers, M. ja Sicheri, F. (2014). SspH1-PKN1 kompleksi struktuur näitab peremeessubstraadi äratundmise alust ja bakteriaalse E3 ubikvitiini ligaasi aktiveerimise mehhanismi. Mol. Cell Biol. 34, 362–373.

52. Gu¨ nster, RA, Matthews, SA, Holden, DW ja Thurston, TLM (2017). SseK1 ja SseK3 III tüüpi sekretsioonisüsteemi efektorid inhibeerivad NFkB signaaliülekannet ja nekroptootilist rakusurma salmonellaga nakatunud makrofaagides. Nakata. Immun. 85, e00010–e00017.

53. Mazurkiewicz, P., Thomas, J., Thompson, JA, Liu, M., Arbibe, L., Sansonetti, P. ja Holden, DW (2008). SpvC on Salmonella efektor, millel on fosfotreoniini lüaasi aktiivsus peremeesorganismi mitogeen-aktiveeritud proteiinkinaasidel. Mol. Microbiol. 67, 1371–1383.

54. Saitoh, T. ja Akira, S. (2010). Kaasasündinud immuunvastuste reguleerimine autofagiaga seotud valkude poolt. J. Cell Biol. 189, 925–935.

55. Orvedahl, A., Alexander, D., Tallo´ czy, Z., Sun, Q., Wei, Y., Zhang, W., Burns, D., Leib, DA ja Levine, B. (2007) ). HSV-1 ICP34.5 annab neurovirulentsuse, sihtides Beclin 1 autofagia valku. Rakuperemees mikroob 1, 23–35.

56. Kyei, GB, Dinkins, C., Davis, AS, Roberts, E., Singh, SB, Dong, C., Wu, L., Kominami, E., Ueno, T., Yamamoto, A., et al. (2009). Autofagia rada ristub HIV-1 biosünteesiga ja reguleerib viiruse saagikust makrofaagides. J. Cell Biol. 186, 255–268.

57. Niu, H., Xiong, Q., Yamamoto, A., Hayashi Nishino, M. ja Rikihisa, Y. (2012). Bakteriaalse Beclin 1 siduva valgu poolt indutseeritud autofagosoomid hõlbustavad kohustuslikku intratsellulaarset infektsiooni. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 109, 20800–20807.

58. Hussain, MA, Datta, D., Singh, R., Kumar, M., Kumar, J. ja Mazumder, S. (2019). TLR-2 vahendatud tsütosoolse-Ca2+ tõus aktiveerib ER stressi-superoksiidi-NO-signaalosoomi, suurendades TNF-a tootmist, mis viib Mycobacterium smegmatisega nakatunud kalamakrofaagide apoptoosi. Sci. Vabariik 9, 12330.

59. Lee, J., Hartman, M. ja Kornfeld, H. (2009). Makrofaagide apoptoos tuberkuloosi korral. Yonsei Med. J. 50, 1–11.

60. McCormick, AL (2008). Apoptoosi kontroll inimese tsütomegaloviiruse poolt. Curr. Üles. Microbiol. Immunol. 325, 281–295.

61. Kuma, A., Hatano, M., Matsui, M., Yamamoto, A., Nakaya, H., Yoshimori, T., Ohsumi, Y., Tokuhisa, T. ja Mizushima, N. (2004) . Autofagia roll varajases vastsündinute nälgimise perioodil. Loodus 432, 1032–1036.

62. Marin˜ o, G., Niso-Santano, M., Baehrecke, EH ja Kroemer, G. (2014). Enesetarbimine: autofagia ja apoptoosi koosmõju. Nat. Rev Mol. Cell Biol. 15, 81–94.

63. Furuya, D., Tsuji, N., Yagihashi, A. ja Watanabe, N. (2005). Beclin-1 suurendas kaspaas 9 aktiivsuse suurendamise kaudu indutseeritud cis-diamiindikloroplaatina apoptoosi. Exp. Cell Res. 307, 26–40.

64. Pattingre, S., Tassa, A., Qu, X., Garuti, R., Liang, XH, Mizushima, N., Packer, M., Schneider, MD ja Levine, B. (2005). Bcl-2 antiapoptootilised valgud pärsivad Beclin 1-sõltuvat autofagiat. Cell 122, 927–939.

65. Djavaheri-Mergny, M., Maiuri, MC, and Kroemer, G. (2010). Ristvestlus apoptoosi ja autofagia vahel Beclin 1 kaspaasi poolt vahendatud lõhustamise teel. Oncogene 29, 1717–1719.

66. Grimes, DJ, Gruber, SH ja May, EB (1985). Sidrunhaide Negaprion brevirostris (Poey) eksperimentaalne nakatumine Vibrio liikidega. J. Kala. Dis. 8, 173–180.

67. Mohamad, N., Mohd Roseli, FA, Azmai, MNA, Saad, MZ, Md Yasin, IS, Zulkiply, NA ja Nasruddin, NS (2019). Vibrio harveyi ja V. alginolyticus'e loomulik samaaegne nakatumine kultiveeritud hübriidrühmitajatel Malaisias. J. Aquat. Anim. Tervis 31, 88–96.