Ainulaadne atsüülitud flavonoolglükosiid Prunus Persica (L.) Var. Florida Prince: uus tahkete lipiidide nanoosakeste kosmeetiline preparaat nahahoolduseks, 1. osa

Abstraktne: Polüfenoolid on tuntud toidu antioksüdandid. Nad on viimasel ajal äratanud märkimisväärset huvi naha vananemise ja päikese UV-kiirgusest tuleneva hüperpigmentatsiooni ennetamiseks. Prunus persica (L.) lehti peetakse kõrvalsaadusteks ja neil on kõrge polüfenoolide sisalduse tõttu märkimisväärne antioksüdantne toime. Selle uuringu eesmärk oli välja töötada kosmeetiline vananemisvastane ja nahka valgendav kreem, kasutades Prunus persica (L.) (PPEE) etanoolilehtede ekstrakti, mis on laetud tahketesse lipiidide nanoosakestesse (SLN), et parandada naha kohaletoimetamist. PPEE keemiline uurimine näitas märkimisväärselt kõrget üldfenoolide ja flavonoidide sisaldust koos märkimisväärse antioksüdantse toimega (DPPH, ABTS ja -karoteeni testid). Ainulaadne haruldase struktuuriga atsüülitud kaempferoolglükosiid, kaempferool 3-O- -4C1-(600 -O-3, 4-dihüdroksüfenüülatsetüülglükopüranosiid) ( KDPAG) eraldati esimest korda ja selle struktuur selgitati täielikult. See on esimene näide atsüülimisest 3,{{10}}dihüdroksüfenüüläädikhappega flflavonoidide keemias. In vitro tsütotoksilisuse uuringud inimese keratinotsüütide rakuliiniga näitasid PPEE ja PPEE-SLN-de mittetoksilisust. Lisaks näitasid PPEE, PPEE-SLN ja KDPAG head elastaasivastast aktiivsust, mis on võrreldav N (metoksüsuktsinüül)-Ala-Ala-Pro-Val-klorometüülketooni omaga. Lisaks näitasid PPEE-SLN-id ja KDPAG oluliselt (p <0,001) kõrgemat kollagenaasi- ja türosinaasivastast aktiivsust võrreldes vastavalt EDTA ja kojic-happega. Erinevaid PPEE-SLN-i kreemivalemeid (2 protsenti ja 5 protsenti) hinnati hiiremudelil võimaliku kortsudevastase toime suhtes UV-indutseeritud fotovananemise vastu, kasutades kortsude hindamismeetodit ja näitasid, et neil on väga oluline UV-kaitseefekt, nagu on tõestatud. kudede biomarkerite (SOD) ja histopatoloogiliste uuringute abil. Seega näitab käesolev uuring, et Prunus persica lehtede kõrvalsaadused pakuvad looduslike kosmeetikakomponentide jaoks huvitavat ja väärtuslikku ressurssi. See annab seotud andmeid PPEE-SLN-ide võimaliku ohutu kasutamise edasiseks uurimiseks paiksetes vananemisvastastes kosmeetikapreparaatides, millel on täiustatud naha läbilaskvus.

Asjakohaste uuringute kohaseltcistancheon tavaline ravimtaim, mida tuntakse kui "imerohi, mis pikendab eluiga". Selle põhikomponent ontsistanosiid, millel on erinevad mõjud naguantioksüdant, põletikuvastanejaimmuunfunktsiooni edendamine. Mehhanism cistanche janaha valgendaminepeitub antioksüdantses toimescistanche glükosiidid. Inimese nahas sisalduv melaniini toodetakse türosiini oksüdeerumisel, mida katalüüsibtürosinaas, ja oksüdatsioonireaktsioon nõuab hapniku osalemist, seega muutuvad keha hapnikuvabad radikaalid oluliseks melaniini tootmist mõjutavaks teguriks. Tistanche sisaldab tsistanosiidi, mis on antioksüdant ja võib vähendada vabade radikaalide teket organismis, seegamelaniini tootmise pärssimine.

how to take cistanche

Klõpsake valgendamiseks mõeldud toidulisand Cistanche

Lisateabe saamiseks:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Märksõnad:kaempferool 3-O- -4C1-(600 -O-3, 4-dihüdroksüfenüülatsetüülglükopüranosiid) kõrvalsaadused; tahked lipiidide nanoosakesed; antioksüdant; in vitro nahaga seotud ensüümid; in vivo kortsudevastane

1. Sissejuhatus

Naha vananemine on keeruline, mitmefaktoriline progresseeruv protsess, mis katalüüsib füüsilisi muutusi nahas ja sidekoes [1]. See jaguneb sisemiseks ja väliseks vananemiseks.

Naha väline vananemine tuleneb peamiselt keskkonnateguritest, nagu saasteained, suitsetamine ja elustress, või valdavalt korduvast kokkupuutest UV-kiirgusega (fotovananemine) [2].

Liigne kokkupuude UV-kiirgusega stimuleerib reaktiivsete hapnikuliikide (ROS) ületootmist, mille tulemuseks on endogeenne oksüdatiivne stress nahakudedes, mis viib rakuvälise maatriksi (ECM) komponentide lagunemiseni. ECM-i lagunemine on otseselt seotud naha vananemisega ja vastutab teatud ensüümide, nagu kollagenaas, elastaas ja türosinaas, aktiivsuse suurenemise eest, mis on seotud naha vananemisega. Need nahaensüümide aktivatsioonid põhjustavad elastiini ja kollageeni taseme langust, mis viib naha elastsuse ja tugevuse vähenemiseni ning kortsude ilmnemiseni [3]. Samuti põhjustab liigse melaniini tootmise esilekutsumine ja naha päevitamine naha hüperpigmentatsiooni.

Seetõttu saab naha vananemist ennetada antioksüdantidega, millel on vabu radikaale siduv toime, millel võib olla suur tähtsus vananemisega seotud haiguste kaitses ja ravis, mis hõlmab ROS-i [4]. Teine viis vananemist aeglustada on elastaasi, kollagenaasi ja türosinaasi inhibiitorite kasutamine, mis on väga tugevad kandidaadid kortsudevastaseks ja nahka valgendavaks tegevuseks, toetades naha elastsuse säilimist ja võivad olla levinud lähenemisviis pigmentatsioonihäiretega tegelemisel [5].

On teatatud, et taimedest eraldatud looduslikud antioksüdandid vähendavad UV-kiirguse poolt indutseeritud fotovananemise ohtu nii in vitro kui ka in vivo [6] ning need on kosmeetikatoodete koostisainetena eelistatavamad kui sünteetilised antioksüdandid kulude ja kõrvalmõjude osas. Lisaks on paljud in vitro ja in vivo uuringud näidanud, et fenoolsed ühendid, nagu fenoolhapped, flavonoidid ja tanniinid, võivad eemaldada vabu radikaale ja inhibeerida elastaasi, kollagenaasi ja türosinaasi ensüüme [7].

Teatatud on looduslike antioksüdantide kasutamisest paiksetes preparaatides, et kaitsta nahka välistest teguritest põhjustatud oksüdatiivse stressi eest [8]. Enamik antioksüdantide molekule on aga loomupäraselt ebastabiilsed ja võivad enne toimekohta jõudmist kergesti oksüdeeruda, moodustades inaktiivseid ühendeid, mis muudab nende koostise sobivaks ja stabiilseks kosmeetikatooteks keeruliseks. Need leiud tõestavad vajadust unikaalsete manustamissüsteemide järele, et neid antioksüdantseid koostisi täiustada [9].

Paikselt manustatavate polüfenoolide läbilaskvust mõjutavad mitmed tegurid; fenooli alamklass, selle struktuur, molekuli suurus ja glükosiidi või aglükooni vorm, samuti muud koostise komponendid. Kuid koostoime naha komponentidega füüsikaliste ja keemiliste meetodite segu kaudu võib parandada läbilaskvust sarvkihi barjääristruktuuri pöörduva katkemise kaudu. Kapseldamise lähenemisviisid on üks läbilaskvust suurendavaid meetodeid, mida kasutatakse kõige sagedamini polüfenoolide hõlpsaks stabiliseerimiseks säilitamise ajal, suurendades nende antioksüdantset toimet, naha kaudu imendumist ja läbitungimist kosmeetikas ja paiksetes teraapiates. Hiljuti välja töötatud kapseldamistehnoloogiad hõlmavad nanoemulsioone, transferaase, tahkeid lipiidide nanoosakesi, nanokristalle ja ribosoome [10].

cistanche side effects reddit

Tahked lipiidide nanoosakesed (SLN) on nahatoodete stabiilne kohaletoimetamise süsteem. SLN-sid peetakse paljulubavateks ravimikandjateks paiksete ravimvormide puhul nende fotostabiilsuse, kontrollitud vabanemisomaduste, oklusiivsuse, lõhna maskeeriva toime ja aktiivsete koostisosade läbitungimise parandamise tõttu läbi naha, suurendades selle hüdratatsiooni ilma nahaärrituse tunnusteta, lisaks lihtsusele. toodang, madal toksilisus ja füüsiline stabiilsus [9,11].

Seetõttu on ülimalt oluline otsida asjakohast taimsete polüfenoolide allikat kui võimalikke terapeutilisi kortsudevastaseid ja nahka valgendavaid aineid, kasutades nanokandjate kohaletoimetamise süsteemi, samuti selle võimet parandada organismi antioksüdantide süsteemi.

Maailmas on umbes 2000 virsiku kultivari [12]. Prunus (Rosaceae) on kuulus taimeperekond, mis hõlmab fenoolirikkaid liike [13–15]. Mõnda selle perekonna liike kasvatatakse Egiptuses söödavate viljade saamiseks või dekoratiivtaimedena [16].

Prunus persica (L.) Batch (PP) on väike paljaste okste ja lühikese tüvega, laialivalguva ümara võraga [12] puu, mida tavaliselt kasvatatakse Lääne-Aasias, Euroopas, Indias ja Põhja-Aafrikas [17]. Traditsiooniliselt on selle lehti kasutatud diureetikumide, lahtistite, vermifuugidena, insektitsiididena, rahustitena, läkaköha, leukoderma ja palavikuvastaste ravimitena [17]. Lisaks iseloomustasid lehtede farmakoloogilised uuringud nende in vivo diabeedivastast, spasmogeenset, põletikuvastast, antikoagulandi, hepatoprotektiivset, malaariavastast, astmavastast ja in vitro tsütotoksilist, antimikroobset ja lämmastikoksiidi inhibeerivat toimet koos olulise antioksüdantse toimega. [18–22].

PP järgijate, puuviljade ja seemnete fenoolprofiili, nende antioksüdantse toime ning farmakoloogiliste ja toiteväärtuste uurimiseks on tehtud palju uuringuid [13,14,23,24]. Lehtede kohta oli aga väga vähe andmeid. Praeguseks on saadaval üks aruanne, mis kirjeldab viie flavonoolglükosiidi eraldamist etanoolileheekstraktist [25]. Lisaks on iseloomustatud fenoolseid ühendeid, sealhulgas fenoolhappeid ja flflavonoide, kasutades HPLC-MS analüüsi, kus kõigi määratud ühendite hulgas domineerivad flflavonoolid [20,26].

Veelgi enam, kuigi on teatatud, et PP seemnetel, puuviljadel, järglastel ja muudel liikidel on in vivo kaitsev toime UV-kiirguse poolt indutseeritud fotovananemise ning in vitro kortsudevastase ja nahka valgendava toime vastu [15,23,27–32], pole kunagi teatatud PP lehtede ekstraktist.

Suures koguses PP lehti on virsikupuude kasvatamise ja puuviljakonservitööstuse kõrvalsaadused [33]. PP seemnete, puuviljade ja muude lehtede sortide kõrvalsaadusi on hinnatud kosmeetikatoodetes ja dieettoiduna potentsiaalseks väärtustamiseks [32, 34, 35]. Kuid meile teadaolevalt on PP var. Florida Prince'i pole kunagi uuritud ja see võib olla huvitav fütokemikaalide allikas. Võrreldes teiste tööstusharudega on kosmeetikaturg ligipääsetavam ja laienev ning võib olla kõrvalsaaduste väärtustamise allikaks [15]. Nahahooldus- ja naha vananemistooted on ühed kõige olulisemad kosmeetilised potentsiaalid.

Jätkates meie uuringuid Egiptuse söödavate taimede polüfenoolide kohta [36] ja kuna PP lehti peetakse kõrvalsaadusteks ja neil on peamiselt nende kõrge flavonoolide sisalduse tõttu märkimisväärne antioksüdantne toime, on selle uuringu eesmärk allutada PPEE ulatuslikule fütokemikaalile. analüüsida selle fenoolprofiili ja lisada PPEE laaditud SLN-idesse ainulaadse naha kohaletoimetamise süsteemina. Lisaks hinnati vananemisvastast ja nahka valgendavat kosmeetilist potentsiaali, uurides PPEE, PPEE-SLN-de ja eraldatud koostisosade in vitro antioksüdantset aktiivsust ning hinnates nende inhibeerivat toimet nahaga seotud ensüümide suhtes. Lisaks PPEE-SLN-ide lisamisele paikse kosmetseutilisse vananemisvastasesse kreemi ning toote ohutuse testimiseks ning PPEE-SLN-i kreemipreparaatide võimaliku in vivo kortsudevastase toime hindamiseks UV-indutseeritud fotovananemise vastu. hiire mudel. See võib anda andmeid PPEE-SLN lehtede võimaliku kasutamise edasiseks uurimiseks paiksetes preparaatides, millel on parem naha läbilaskvus.

2. Materjal ja meetodid

2.1. Kindral

NMR spectra were acquired in DMSO-d6 on an Avance 400 NMR spectrometer (Bruker bio spin Gmbh, Rheinstetten, Germany) at 400 MHz. Standard pulse sequence and parameters were used to obtain one-dimensional 1H and 13C-APT, and two-dimensional HSQC and HMBC spectra. 1H chemical shifts (δ) were measured in ppm, relative to TMS, and 13C-NMR chemical shifts to DMSO-d6 and were converted to TMS scale by adding 39.49. ORAC measurements were performed on a FLUOstar Omega Microplate Reader (BMG LABTECH Gmbh, Ortenberg, Germany). A Shimadzu UV–Visible-1601 spectrophotometer (Shimadzu, Kyoto, Japan) was used for recording the UV spectra. Chromatographic analysis (PC) was carried out on Whatman No. 1 paper, using solvent systems: (1) H2O; (2) 6% HOAc; (3) BAW (n-BuOH–HOAc–H2O, 4:1:5, upper layer). For 2-DPC, solvent 2 was used for the first way and solvent 3 for the second way. Materials: chemicals, solvents, elastase, collagenase, tyrosinase enzymes, and reference drugs (EDTA, kojic acid, and N-(Methoxysuccinyl)-Ala-Ala-Pro-Val-chloromethyl ketone with purities >95 protsenti) saadi firmalt Sigma-Aldrich (Sigma-Aldrich, MO, USA).

cistanche for sale

2.2. Taimsed materjalid

Prunus persica (L.) Batsch var. Florida Prince koguti 2020. aasta juunis EL-Hashashi talust, El-Bastani sissepääsu juurest, Kairo-Alexandria kõrbeteelt K. 103, 18 k. sees, Egiptus. Vautšeri näidis (4643) paigutati Egiptuse Giza Aiandusuuringute Instituudi põllumajandusuuringute keskuse taimestiku ja fütotaksonoomia uuringute osakonda (CAIM). Prof dr Abdel-Haleem Abdel-Mogaly, Põllumajandusuuringute Keskuse botaanika prof.

2.3. Taimeekstrakti valmistamine

PP lehtede proovi (2 kg) ekstraheerimiseks kasutati kuuma EtOH/H2O (3:1, kolm korda, kumbki 3 l, 8 tundi, püstjahuti all), millele järgnes lahusti aurustamine alandatud rõhul temperatuuril 50 ◦C, saades amorfse ekstrakti. , PPEE, pruunikas tumeda värvusega (101 g).

2.4. Polüfenoolide üldsisalduse (TPC) määramine

PPEE üldfenoolisisalduse hindamiseks kasutati Folin-Ciocalteu reaktiivi, nagu on kirjeldanud Li jt, [37], väljendatuna mg ekvivalentse gallushappe/g kuivekstrakti kohta.

2.5. Flavonoidide üldsisalduse (TFC) määramine

Flavonoidide kogusisalduse hindamiseks kasutati alumiiniumkloriidi kolorimeetrilist meetodit, mida on kirjeldanud Bahromun et al., [38]. Tulemused on esitatud mg ekvivalentidena kvertsetiini/g kuivekstrakti kohta.

2.6. PPEE fraktsioneerimine ja ühendi 1 eraldamine

Saadud kuivmaterjal (101 g), lahustatuna 150 ml MeOH-s, kanti MCI geelikolonnile (CHP20P, 75–150 mm; Mitsubishi Chemical Co., Düsseldorf, Saksamaa) ja elueeriti kahaneva polaarsusega MeOH/H2O segudega. Tulemuseks on neli suuremat fraktsiooni (I–IV). Fraktsiooni I elueerimiseks kasutati 30% MeOH/H2O, 22 g; fraktsiooni II elueeriti 50% MeOH vesilahusega, 3,1 g; fraktsioon III, 70% MeOH vesilahusega (4,6 g); fraktsiooni IV elueeriti 90% MeOH vesilahusega (1,9 g). Fraktsiooni III kontsentreeritud lahus jäeti üleöö toatemperatuuril seisma, saades ühendi 1 toorproovi (765 mg). Sellele järgneb filtreerimine ja uuesti lahustamine keevas EtOH-s, seejärel jäetakse toatemperatuuril seisma, et saada pruunikaskollane puhas proov 1 (530 mg).

2.7. Kaempferooli 3-O- -4C1-(6"-O-3, 4-dihüdroksüfenüülatsetüülglükopüranosiidi) (1) identifitseerimine

Rf väärtused: 34 (H2O), 39 (15 protsenti HOAc), 44 (BAW). UV MeOH-s λmax nm: 268, 316, 368; NaOAc: 267, 317, 369; NaOAc pluss H3BO3: 268, 318, 340; NaOMe: 277, 37{186}}. Tavaline happeline hüdrolüüs andis glükoosi (Co-PC), kaempferooli (Co-PC) ja 3,4-dihüdroksüfenüüläädikhappe (UV ja 1H NMR spektrid), UV λmax (MeOH): 224, 282 nm; λmax (MeOH pluss A1C13): 220, 250 (sh), 291 nm; (MeOH pluss NaOAc pluss H3BO3) 211, 234 (sh), 288 nm. 1H NMR: 8 ppm: 3,40 (s, 2H, C-H2), 6,60 (m, 3H aromaatne, H-2, H-5, H-6), glükosidaasi töötlemine 1 [lüofiliseeritud, kromatograafiliselt puhas, soolavaba ensüüm mandlist, BDH Merck, Poole Dorset, UK (EC 3.2.1.21)] 24 tundi temperatuuril 37 °C atsetaatpuhvris, pH 5,1: ühend saadi muutumatul kujul. 1H-NMR 1: 8 ppm: kaempferooli fragment: 8,0,3 (d, J=8 Hz, H-20 ja H-60), 6,89 (d, J=8 Hz, H-30 ja H-50), 6,45 (d, J=2 Hz, H-6), 6,21 (d, J=2 Hz, H -8); glükoosiosa: 5,42 (d, J=8 Hz, anomeerne prooton H-100), 4,04 (dd, J=12 Hz ja J=4,5 Hz, H{{ 88}} a), 4,2 (d, J=12 Hz, H-600 b); 3,4-dihüdroksüfenüüläädikhappe fragment: 3,46 (lai singlett, ∆ν1/2=4 Hz, CH2-7), 6,67 (m, 3H, H-2000, H{ {104}}, H{105}}). 13C-NMR 1: 8 ppm: kaempferooli fragment: 156,65 (C{111}}), 133,5 (C{114}}), 178,01 (C{117}}), 161,69 (C{120}} ), 99,13 (C-6), 164,58 (C-7), 93,90 (C-8), 156,71 (C{132}}), 104,39 (C{135}} ), 121,34 (C-10), 133,66 (C-20 ja C-60), 161,63 (C-40), 115,20 (C-30 ja C{ {149}} ); glükoosiosa: 99,13 (C-100), 73,85 (C-200), 76,88 (C-300), 70,35 (C-400), 76,96 (C{164}). }), 62,25 (C-600); 3,4-dihüdroksüfenüüläädikhappe fragment: 127,87 (C-1000), 116,35 (C-2000), 145,33 (C-3000), 148,92 (C{181}). }), 121,57 (C{184}}), 117,0 (C{187}}), 176,26 (C=O), 40,02 (C-H2).

2.8. In-Vitro uuringud

2.8.1. Inimese keratinotsüütide tsütotoksilisuse hindamine

Inimese keratinotsüütide rakuliin saadi ettevõttest VACSERA CO. (The Egyptian Company for the Production of Vaccines, Seera and Drugs, Giza, Egypt). MTT test viidi läbi PPEE ja PPEE-SLN jaoks vastavalt Mostafa jt meetodile. [36].

2.8.2. In vitro antioksüdantide testid

DPPH test viidi läbi Yardpiroon et al. meetodil. [39] ja positiivse kontrollina kasutati C-vitamiini. ABTS-analüüs järgis Re et al. [40] meetodit, standardina kasutati C-vitamiini. Karoteeni pleegitamise testis kasutati positiivse kontrolli BHT juuresolekul meetodit, mida on kirjeldanud Soulef et al., [14]. Iga testitava proovi väärtus esitati inhibeerimiskõverana 50 protsendi või IC50 juures.

2.8.3. Elastaasi-, kollagenaasi- ja türosinaasivastase toime hindamine

Vananemisvastast ja nahka valgendavat toimet hinnati Mostafa jt meetodite järgi. [41]. Elastaasivastase testi jaoks inkubeeriti 1 µg/ml inimese leukotsüütide elastaasi HEPES puhvriga pH 7,5 ja iga testitud ekstraktiga või 1,4 mg/ml N-metoksüsuktsinüül-Ala-Ala-Pro-klorometüülketooniga (standardne inhibiitor) 96-süvendiga plaat 20 minutiks toatemperatuuril enne 100 µL 1 mM N-metoksüsuktsinüül-Ala-Ala-Pro-Val-p-nitroaniliidi substraadina lisamist. Pärast 40-minutilist inkubeerimist mõõdeti neeldumist lainepikkusel 405 nm, kasutades tühja katsena kasutatavat ekstrakti/inhibiitorit. Testitud proove kasutati kontsentratsioonivahemikus 25–300 µg/ml.

Anti-kollagenaasi jaoks inkubeeriti 1 mg/ml 1. tüüpi kollagenaasi Clostridium histolyticum'ist, selle puhvrit (pH 7,4) ja kõiki testitud ekstrakte või 1,4 mg/ml EDTA-d (standardne inhibiitor) 20 minutit temperatuuril 37 ◦C enne. lisades substraadina 100 µL FALGPA-d. Segu inkubeeriti veel 1 tund temperatuuril 37 °C, seejärel lisati 200 µL 2% ninhüdriini 200 mM tsitraatpuhvris (pH 5) ja pandi 5 minutiks keevasse veevanni. Seejärel lasti lahusel jahtuda. Seejärel lisati 200 ui 50% isopropanooli ja neeldumised mõõdeti 540 nm juures. Testitud proove kasutati kontsentratsioonivahemikus 25–300 µg/ml.

Türosinaasivastase testi jaoks inkubeeriti 5600 ühikut/ml seene türosinaasi iga testitud ekstraktiga või 1,4 mg/ml kojichappega (standardne inhibiitor) 15 minutit temperatuuril 37 ◦C, enne kui substraadiks lisati 1 mM L-DOPA. . Moodustunud dopakroomi neeldumist mõõdeti 475 nm juures. Testitud proove kasutati kontsentratsioonivahemikus 75–500 µg/ml.

2.9. PPEE-SLN-ide formuleerimine ja iseloomustus

Preparaat valmistati Choubey et al. meetodil. [11]. Esiteks lahustati glütserüülmonostearaat kloroformi-metanooli segus (1:1) ja seejärel dispergeeriti selles lahuses etanooliekstrakt. Hiljem eemaldati orgaanilised lahustid rotaatoraurustiga ja lahust kuumutati. Seejärel lisati Tween 80 ja segu segati kiirusel 3000 p/min 30 minutit ja seejärel homogeniseeriti 4 tundi enne filtreerimist ja kuivatamist. PPEE-SLN-de iseloomustamist uuriti kuju ja pinna morfoloogia, osakeste suuruse, polüdisperssuse indeksi (PDI), zeta potentsiaali analüüsi, kinnijäämise efektiivsuse (PEE) ja Fourier' teisenduse infrapuna (FT-IR) spektroskoopia uuringute abil.

2.10. PPEE paikse kreemi valemite valmistamine

2.10.1. PPEE-SLNs kreemi koostis

Kaks kreemipreparaati (2 protsenti ja 5 protsenti PPEE-SLN-idest) valmistati vastavalt tabelis 1 näidatud meetodile Mahawar et al. [42].

cistanche amazon

2.10.2. PPEE-SLN-de kreemi hindamisparameetrid

Organoleptilised omadused, kreemi pH, määritavusuuringud, viskoossuse test, homogeensuse test, plaastri test (Burchardi test), in vitro naha läbilaskvuse uuring ja stabiilsusuuringud (ICH juhised) hinnati vastavalt Matangi et al. [43]. Mikroobide piirmäära test viidi läbi vastavalt Sekari et al. [44].

2.11. PPEE-SLNs kreemi in-Vivo kortsudevastane uuring

2.11.1. Katseloomad

50 isast karvutut hiirt (HR{{0}}) (4-nädalased), 17–24 g, saadi ettevõttest VACSERA. Katse viidi läbi pärast Oktoobri Moodsate Teaduste ja Kunstide Ülikooli (MSA) eetikakomitee heakskiitu. Protokolli numbri (PG1/EC1/2020PD) valimi suurus määrati vastavalt (G. Power) tarkvarale. Nädal enne in vivo kortsudevastast uuringut said hiired vabalt juurde pääseda toidule ja veele ning aklimatiseerusid konditsioneeritud ruumiga (23 ± 2 ◦C). Hiired (50) jagati juhuslikult viide rühma (n=10), nagu on näidatud tabelis 2. Ravi viidi läbi 40 päeva jooksul kolm korda nädalas 0,5 g PPEE-SLN-i kreemi või mõne muu raviga ja rakendati dorsaalsete hiirte nahale ja seejärel UV-kiirgusele (365 nm).

cistanche para que serve

2.11.2. Kortsude skoori mõõtmine

Enne ja pärast paikset ravi tehti kaks korda nädalas dorsaalsete hiirte nahafotod. Naha kortsude klassifikatsiooni hinnati Bissetti visuaalse kortsude skaala abil [45]. Hindamisskaala aluseks oli kortsude tekstuur (peen või jäme) ja keratoosi tekstuur, mis jagunesid viide klassi: halvem (−2), veidi halvem (−1), muutusteta (0), veidi paranenud ( pluss 1) ja täiustatud ( pluss 2).

2.11.3. Histoloogiline hindamine

Histoloogiline hindamine viidi läbi Elderi jt meetodil. [46].

2.11.4. Superoksiiddismutaasi (SOD) aktiivsus

SOD aktiivsust hinnati Ukeda jt meetodil. [47].

2.12. Statistiline analüüs

Kõiki proove analüüsiti kolmes korduses. Andmed esitati kui keskmine ± standardhälve (SD). IC50 väärtused (50-protsendiliseks inhibeerimiseks vajalik kontsentratsioon) arvutati lineaarse regressioonikõvera loomise teel, mis näitab proovi kontsentratsioone ja inhibeerimise protsenti. Statistiline võrdlus viidi läbi ühesuunalise dispersioonanalüüsi (ANOVA) abil, mis viidi lõpule Tukey testiga mitme võrdluse jaoks. Antioksüdantsete aktiivsuste ja ensüümi inhibeerimise testide erinevaid väärtusi võrreldi Pearsoni korrelatsioonitesti abil ja erinevusi peeti statistiliselt olulisteks p < 0,05 juures. Nende analüüside tegemiseks kasutati GraphPad Prism 5.03 for Windows (GraphPad Software, San Diego, CA, USA).

3. Tulemused

3.1. Fenooli ja flavonoidide üldsisaldus

TPC määrati spektrofotomeetriliselt PPEE-s kui 387,5 ± 4,28 mg GAE/g ekstrakti. Samuti hinnati TFC-ks 241,7 ± 3,25 mg QE/g ekstrakti. PPEE näitas kõrgeid fenool- ja flflavonoidühendite kontsentratsioone. Mõlemad tulemused järgivad PP lehtede ekstraktide kohta varem teatatud väärtusi, mis kinnitavad, et flavonoidid on PP lehtede peamised keemilised koostisosad [20].

rou cong rong benefits

3.2. Kaempferooli eraldamine ja struktuur

3-O- - 4C1-(600 -O-3, 4-dihüdroksüfenüülatsetüülglükopüranosiid), ühend 1

Pärast kõigi teadaolevate struktuuride välja sorteerimist selles ekstraktis muutus ainulaadsete potentsiaalselt bioloogiliselt aktiivsete ühendite otsimine tõhusamaks. Saadud 2-DPC analüütiliste andmete kohaselt leiti, et PPEE fenoolid fraktsioneerivad kõige paremini MCI geelkolonnis, mida elueeriti kahaneva polaarsusega MeOH/H2O segudega, mis andis neli peamist kolonni fraktsiooni. Fraktsiooni III kuumast kontsentraadist (desorbeeriti kolonnist 70% MeOH vesilahusega) eraldati amorfne materjal üleöö toatemperatuuril seistes. Selle materjali kahekordsel kristallimisel keevast EtOH-st saadi kromatograafiliselt puhas pruunikaskollane amorfne pulber 1. Sellel olid kromatograafilised omadused (UV-valguses tumelilla täpp-PC, ammoniaagi auruga suitsutamisel sidrunkollaseks muutumine mõõduka migratsiooniga vesi- ja orgaanilistes lahustites ) ja värvusreaktsioonid (sidrunkollane värv Naturstoffi reagendiga), mis viitas kaempferooli derivaadile, millel on vaba 40 hüdroksüülrühm ja O-asendatud 3-O-positsioon. UV-spektrid 1 MeOH-s (268 nm, 316 nm, 360 nm) ja diagnostiliste nihkereaktiivide [48] lisamisel olid tüüpilised 3-O-glükosüülitud kaempferooli omadele (positiivne nihe NaOAc-ga, stabiilne nihe koos NaOMe'iga). 1 (2 N HCl vesilahus, 3 h, 100 ◦C) tavaline happeline hüdrolüüs andis glükoosi (võrdluspaberkromatograafia, Co-PC), kaempferooli ja 3,4-dihüdroksüfenüüläädikhappe (UV) absorptsiooni ja 1H-NMR spektrid üksikute proovide jaoks, mis on eraldatud hüdrolüsaadi etüülatsetaadi ekstrakti preparatiivsete paberkromatogrammidega). Järelikult on 1 kaempferool 3-O-(3,4-dihüdroksüfenüülatsetüülglükosiid). Ühend saadakse muutumatul kujul pärast 24-tunnist inkubeerimist ensüümiga -glükosidaasiga, mis tõestab, et glükosüülfragment on atsüülitud. Molekulaarvalem 1 järeldati, et see on C29H26O14 selle negatiivse HRESI massispektri põhjal, mis näitas [MH]-iooni m/z juures=597,5302 (arvutatud C29H25O14 jaoks, 597,5015). ESI-MS katse (negatiivse iooni režiim) andis kvaasimolekulaarse iooni piigi [MH]− m/z: 597 juures, mis näitab molekulmassi 598 1 kohta. Täiendavad fragmendi ioonide piigid ESI-MS-MS spektris olid täheldati m/z juures: [MH]−: 447, 167 ja 285, mis vastab dihüdroksüfenüülatsetaadi kadumisele lähteühendist 1, samas kui fragmendi ioonid m/z 285 ja m/z 167 juures omistati kaempferoolile ja dihüdroksüfenüüläädikhappe osad, vastavalt. Kõigi molekulis 1 olevate fragmentide kinnituskoha määramiseks ja kõigi süsiniku ja prootoni resonantside täieliku määramise võimaldamiseks 1 NMR-spektroskoopiline analüüs, sealhulgas 1D- 1H ja 13C ning 2D-HSQC ja HMBC , viidi seejärel läbi. Viie signaali suhkrupiirkonnas vahemikus δ ppm 62,25 kuni 76,9 ja anomeerse süsiniku signaali põhjal, mis asus 99,13 ppm juures, tõestati, et suhkruosa peab olema kinnitatud kaempferooli positsioonile 3, kuna see C-3 süsiniku signaal nihutati ülespoole ja vastavad orto- ja para-süsiniku signaalid nihutati allapoole (vt eksperimentaal). Sarnased nihked on hästi teada Nawwari jt töödest. [48]. Seda kinnitasid veel HMBC spektris tuvastatud 3 J pikamaa korrelatsioonid, mille käigus leiti üks ristsignaal, mis korreleeris anomeerse glükoosi prootoni H-100 signaali δ 5,42 juures flavonooli C-3 süsinikuga. signaal δ 133,5 juures. Glükoosiosa -konfiguratsioon tuletati C-100 keemilisest nihkest 99,13 ppm juures. Suhkru süsiniku keemilise nihke väärtused kinnitasid selle fragmendi püranoosi vormi [48]. 1H-NMR spekter 1 tulenes samuti pakutud struktuurist. Anomeerse prootoni signaali keemiline nihe δ 5,42 ppm (d, J=8 Hz) juures näitas, et anomeerne süsinik on seotud kaempferooli fragmendiga temperatuuril C-3 (δppm 133,5) ja määratud sidestuskonstandil 8 Hz, tõestage glükoosiosa -konfiguratsiooni. Suhkruosa konformatsioon on 4C1, millele järgneb ülalkirjeldatud -konfiguratsioon.

Samuti järgnes 3,4-dihüdroksüfenüüläädikhappe fragmendi kinnitumine C-600 metüleenglükopüranoosi fragmendiga selle süsiniku signaali nihkest allapoole väärtuseni 8 ppm 62,25 13C-NMR spektris. Seda kinnitas veel HMBC spektri ristpiik, mis korreleeris metüleenglükoosi prootonite signaale δ 4,04 (H-600 a) ja δ 4,2 ppm (H-600 b) karbonüülsüsinikuga. 3,4-dihroksüfenüüläädikhappe fragment δ 176,26 ppm juures. Need ja ülaltoodud andmed kinnitasid lõpuks, et ühendi 1 struktuur on uus kaempferool 3-O- - 4C1-(600 -O-3,{ {24}}dihüdroksüfenüülatsetüülglükopüranosiid (KDPAG), millest teatati esmakordselt looduses, kuna see esindab esimest atsüülimist 3,4-hüdroksüfenüüläädikhappega seoses flflavonoidide keemiaga (joonis 1).

cistanche tubulosa supplement