4.6. Tiobarbituurhappega reageerivad ained (TBAR)

TBAR-ide sisaldust kasutati lipoperoksüdatsiooni indeksina. Ajukoes lisati 50 mM fosfaatpuhvrit (pH 7,4) kontsentratsioonini 25 mg/ml (mass/maht) ja suspensiooni homogeniseeriti ultraheliga 10 sekundi jooksul. 30 µl homogenaadile lisati 250 µl 1 protsenti fosforhapet ja 75 µl 0,6 protsenti tiobarbituurhapet (TBA). Reaktiivi segu inkubeeriti 100 °C juures veevannis 45 minutit, seejärel jahutati jäävannis ja seejärel tsentrifuugiti 3000×g juures 10 minutit temperatuuril 4 °C. Igast proovist võeti 150 µl supernatanti. Fluorestsentsi mõõdeti FLUOSTAR mikroplaadilugejaga (BMG LABTECH, Ortenberg, Baden-Württemberg, Saksamaa), mille ergastusfilter oli seatud 485 nm (ribalaius 5 nm) ja emissioonifilter oli seatud 530 nm (ribalaius 5 nm). Kalibreerimiskõver koostati, kasutades standardina malondialdehüüdi (MDA). Tulemused väljendati pmol MDA/mg valgu kohta.

Tistanche glükosiid võib samuti suurendada SOD aktiivsust südame- ja maksakudedes ning oluliselt vähendada lipofustsiini ja MDA sisaldust igas koes, eemaldades tõhusalt erinevaid reaktiivseid hapnikuradikaale (OH-, H2O₂ jne) ja kaitstes tekitatud DNA kahjustuste eest. OH-radikaalide poolt. Tsistanche fenüületanoidglükosiididel on tugev vabade radikaalide eemaldamisvõime, suurem redutseerimisvõime kui C-vitamiinil, nad parandavad SOD aktiivsust sperma suspensioonis, vähendavad MDA sisaldust ja omavad teatud kaitset sperma membraani funktsioonile. Tsistanche polüsahhariidid võivad suurendada SOD ja GSH-Px aktiivsust D-galaktoosi poolt põhjustatud eksperimentaalselt vananevate hiirte erütrotsüütides ja kopsukudedes, samuti vähendada MDA ja kollageeni sisaldust kopsudes ja plasmas ning suurendada elastiini sisaldust. hea puhastav toime DPPH-le, pikendab hüpoksia aega vananevatel hiirtel, parandab SOD aktiivsust seerumis ja aeglustab eksperimentaalselt vananevatel hiirtel kopsude füsioloogilist degeneratsiooni Raku morfoloogilise degeneratsiooniga on katsed näidanud, et Cistanche'il on hea antioksüdantne võime ja sellel on potentsiaal olla ravim naha vananemishaiguste ennetamiseks ja raviks. Samal ajal on Cistanche ehhinakosiidil märkimisväärne võime eemaldada DPPH vabu radikaale ja see suudab eemaldada reaktiivseid hapniku liike ja takistada vabade radikaalide poolt indutseeritud kollageeni lagunemist, samuti on sellel hea parandav toime tümiini vabade radikaalide anioonide kahjustustele.

Klõpsake valikul Kust Cistanche'i osta saab

【Lisateabe saamiseks:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

4.7. Peamiste antioksüdantsete ensüümide ensümaatiline aktiivsus

Ensüümide aktiivsuse määramiseks ajukoes lisati lüüsipuhver, mis sisaldas 50 mM fosfaatpuhvrit (pH 7,4) ja antiproteaase (1 mM EDTA, 1 mM PMSF, 1 g/mL pepstatiini ja 1 g/mL leupeptiini). kontsentratsiooniga 50 mg/ml (mass/maht). Seejärel töödeldi suspensiooni ultraheliga 30 sekundit jäävannis ja homogenaati tsentrifuugiti 10,000 × g juures 15 minutit temperatuuril 4 °C. Supernatandid koguti antioksüdantsete ensüümide ensümaatilise aktiivsuse määramiseks.

Superoksiiddismutaasi (SOD) aktiivsust mõõdeti pürogallooli autooksüdatsiooni pärssimise järgi 420 nm juures [69]. Üks ensüümiühik määratleti kui ensüümi kogus, mis on vajalik pürogallooli autooksüdatsiooni kiiruse 50% inhibeerimiseks. SOD ensümaatiline aktiivsus väljendati rahvusvahelistes ühikutes (IU) / mg valgu kohta. Katalaasi (CAT) aktiivsust mõõdeti Triton-X-100 (1 %, maht/maht) töödeldud supernatantides pärast vesinikperoksiidi (H2O2) kadumist lainepikkusel 240 nm [70] ja substraadina teatati ensüümi aktiivsus ( µmol H2O2) transformeeritud/min · mg valku. Glutatioonperoksüdaas (GPx) määrati pärast NADPH oksüdatsiooni 340 nm juures liigse GR, GSH ja kumeenhüdroperoksiidi juuresolekul [71]. GPx aktiivsus väljendati transformeeritud substraadina (nmol NADPH) / min mg valku. Glutatioonreduktaasi (GR) aktiivsust analüüsiti pärast NADPH oksüdeerimist lainepikkusel 340 nm GSSG juuresolekul [72] ja väljendati substraadina (nmol NADPH) transformeeritud/min · mg valku. GR ja mõlemad GPx aktiivsused korrigeeriti spontaanse reaktsiooni suhtes bioloogiliste proovide puudumisel (ensüümi puudumisel).

4.8. BACE1 aktiivsustest

BACE1 testiprotokoll hõlmab sekretaasi-spetsiifilise substraadi (peptiidi) kasutamist, mis on konjugeeritud kahe reportermolekuliga, nimelt EDANS ja DABCYL, mille tulemuseks on fluorestsentssignaali vabanemine [73,74]. BACE1 aktiivsust mõõdeti nii ajukoores kui ka hipokampuse lüsaatides. Reaktsioon viidi läbi temperatuuril 37 °C 1 tund, kasutades 10 uM substraati 50 mM naatriumatsetaatpuhvris (pH 4,5). Fluorestsentsi intensiivsuse mõõtmiseks kasutati FLUOSTAR mikroplaadi lugejat (BMG LABTECH, Ortenberg, BadenWürttemberg, Saksamaa), mille ergastusfilter oli seatud 360 nm (ribalaius 5 nm) ja emissioonifilter oli seatud 530 nm (ribalaius 5 nm). Sekretaasi ensümaatilise aktiivsuse tase on proportsionaalne fluoromeetrilise reaktsiooniga ja andmed on väljendatud fluorestsentsi x-kordse suurenemisena võrreldes taustkontrollidega (reaktsioonid substraadi või koe puudumisel). BACE1 aktiivsus normaliseeriti valgu kontsentratsiooniga. Kvertsetiini või rutiiniga töödeldud hiirte BACE1 aktiivsust väljendati TgAPP kontrollhiirte aktiivsuse protsendina.

4.9. Peamiste antioksüdantsete ensüümide, APP, BACE1, ADAM10, kaspaas-3 ja kaspaas-6 ning põletikuliste tsütokiinide RT-PCR geeniekspressioon

4.9.1. RNA täielik ekstraheerimine ja puhastamine

Analüüsisime aju erinevaid piirkondi, nimelt ajukoort ja hipokampust, mida hoiti temperatuuril –80 ◦C. Teadaolevale hulgale ajukoele lisati Triomol® lüüsipuhvrit vahekorras 1:10 (mass/maht). Proove homogeniseeriti 30 sekundit, kasutades juhtmeta mootorit (Pellet pestle, Sigma-Aldrich) ja inkubeeriti 5 minutit temperatuuril 25 °C, et võimaldada nukleoproteiinikomplekside täielikku dissotsiatsiooni. Seejärel lisati iga kasutatud Triomol® lüüsipuhvri ml kohta 0,2 ml kloroformi. Tuube loksutati tugevalt 15 sekundit ja inkubeeriti 25 °C juures 3 minutit. Seejärel tsentrifuugiti neid 11,000 × g juures 15 minutit temperatuuril 4 ◦C. Pärast tsentrifuugimist saadi kolm faasi, ülemises faasis oli RNA.

RNA eraldamiseks viidi ülemine faas teise katsutisse ja sadestati 0,5 ml isopropanooli lisamisega. Pärast isopropanooli ja vesilahuse põhjalikku segamist ümberpööramisega inkubeeriti segu 10 minutit toatemperatuuril, et soodustada sademete teket, ja tsentrifuugiti 12,000 × g juures 10 minutit temperatuuril 4 °C. Supernatandid eemaldati ja pelleteid pesti 75% etanooliga ja tsentrifuugiti 7500 × g juures 5 minutit temperatuuril 4 °C. Pelletid kuivatati toatemperatuuril ja lahustati 50 ui DEPC-ga töödeldud vees. DNA jälgede eemaldamiseks lisati 2,5 µl DNaasi (RNaasivaba) ja inkubeeriti 37 °C juures 30 minutit. Lõpuks inkubeeriti proove 64 °C juures 5 minutit, et inaktiveerida DNaasi.

Seejärel mõõdeti RNA kontsentratsioone UV-VIS spektrofotomeetriga (BMG LABTECH, Ortenberg, Baden-Württemberg, Saksamaa) 260 nm juures ja puhtust hinnati, võttes arvesse neeldumissuhet 260 ja 280 nm juures (A260/A280).

RNA terviklikkuse ja puhtuse määramine viidi läbi elektroforeesiga 1-protsendilises agaroosgeelis, mis oli värvitud GelRediga ja visualiseeriti UV-valguses, kus kui RNA oli terve, siis kaks ülemist riba, mis vastavad ribosomaalsele RNA-le (28S ja 18S) ja kaks alumist riba. tuli jälgida ülekande-RNA-le (tRNA) ja 5S ribosomaalsele RNA-le vastavat.

4.9.2. Komplementaarse DNA (cDNA) süntees

cDNA on palju stabiilsem kui RNA ja võimaldab seetõttu mugavamat ja ohutumat proovide käsitlemist. cDNA sünteesiti mRNA-st retrotranskriptsiooni teel, kasutades esimese ahela cDNA sünteesikomplekti RT-qPCR jaoks (Fermentas Life Sciences).

Retrotranskriptsiooni läbiviimiseks cDNA sünteesiks 2 µg RNA-le lisati 11 µl DEPC-ga töödeldud vett ja 1 µl 10X juhuslikke praimereid. Seejärel inkubeeriti segu RNA denatureerimiseks 65 °C juures 10 minutit. Selle aja möödudes viidi torud kohe 5 minutiks temperatuurini 4 °C, et vältida RNA renatureerimist. cDNA sünteesi reaktiivide segu on näidatud tabelis S1 (täiendavad andmed).

Igale proovile lisati kaheksa µl reaktsioonisegu. Kogu maht viidi torude põhja ja inkubeeriti 42 °C juures 60 minutit. Lõpuks peatati reaktsioon pöördtranskriptaasi inaktiveerimisega, kuumutades seda 70 °C juures 10 minutit.

4.9.3. Reaalajas PCR

Reaalajas PCR põhijooneks on see, et produktide analüüs toimub amplifikatsiooniprotsessi käigus fluorestsentsi määramise teel. Sel viisil toimuvad võimendus- ja tuvastamisprotsessid samaaegselt samas katsutis või viaalis, ilma et oleks vaja täiendavaid toiminguid. Reaalajas PCR-i jaoks kasutatakse termotsükleid, mis suudavad fluorestsentsi samaaegselt võimendada ja tuvastada. Kasutasime LightCycleri reaalajas termotsükleri (Roche Diagnostics, Mannheim, Saksamaa).

Tabelis S2 (täiendavad andmed) on loetletud reaktiivid, mis on vajalikud reaalajas PCR-i jaoks, kasutades tuvastamissüsteemina järjestusspetsiifilisi praimereid ja DNA-d siduvat värvi (SYBR Green I, Roche Molecular Systems, Inc., Rotkreuz, Šveits).

Erinevate kvantifitseeritud markerite praimerite kujundamiseks kasutati bioinformaatika programmi Primer3Plus, mille jaoks võtsime Medline'i vaba juurdepääsuga andmebaasist huvipakkuvate geenide cDNA järjestused. Praimerid tarnis Merck (Sigma-Aldrich). Hübridisatsioonitemperatuur ja kasutatud erinevate praimerite järjestus on näidatud tabelis S3 (täiendavad andmed).

Huvipakkuvate geenide amplifitseerimise reaktsioonitingimused on näidatud tabelis S4 (täiendavad andmed).

Lõpuks allutati proovidele sulatusprogramm: 95 ◦C 15 s, 65 ◦C 30 s ja kuni 98 ◦C kiirusega 0,1 ◦C/s pideva fluorestsentssalvestusega.

cDNA tasemete kvantifitseerimiseks kasutati tsükli läve (Ct) võrdlusmeetodit [75], kasutades majapidajana GADPH-d. Majahoidja amplifikatsioon tehti paralleelselt analüüsitud geeniga. Ct väärtused arvutati 4.{2}} tarkvara abil, mida pakub LightCycler (Roche Diagnostics, Mannheim, Saksamaa). Tarkvara võimaldab eristada proovi võimendusest tulenevat fluorestsentsi ja tausta. Samuti registreeriti sulamiskõverad. Amplifitseeritud fragmendi sulamistemperatuuri määramine võimaldas iseloomustada amplifitseeritud produkti. Ribade suurust kontrolliti 1,5-protsendilise agaroosgeeliga.

Uuritava geeni ekspressiooni varieerumine kvertsetiini või rutiiniga töötlemisel väljendati kontroll-TgAPP (ravita hiired) funktsioonina ja selle ekspressiooni normaliseerimisel GADPH tasemetega. Change Fold (2−∆∆Ct) näitab, mitu korda huvipakkuvat geeni muudetakse kontrollhiirte konkreetse ravi käigus.

4.10. Statistilised analüüsid

Kõik testid viidi läbi vähemalt kahes eksemplaris ja kolmes erinevas katses. Saadud tulemused väljendatakse keskmisena ± standardviga. Ühesuunaline dispersioonanalüüs (ANOVA) viidi läbi pärast seda, kui andmed olid testitud ja näitasid, et need sobivad normaaljaotusega. Viidi läbi Newman-Keulsi mitme võrdluse post-hoc testid, uurides keskmisi erinevusi rühmade vahel. Väärtused p < 0.05 peeti oluliseks. Statistilisteks analüüsideks kasutati tarkvara SigmaPlot 11.0.

5. Kokkuvõtted

Toitumisharjumused ja toidulisandid võivad mõjutada raku redoksseisundit. Selle põhjal püüdsime parandada raku redoks-homöostaasi AD hiiremudelis kvertsetiini või rutiini sisaldava flavonoidse dieediga, et leevendada amüloidpatoloogiat, võttes arvesse raku redoksseisundi ja proteasoomist sõltuvate amüloidi omaduste koostoimet asümptomaatilise AD korral. Meie andmekogumid on asjakohased, kuna TgAPP hiiremudelis kuvatud flavonoidide efektid on kooskõlas nendega, mida on varem teatatud meie in vitro ja ex vivo mudelites.

Kokkuvõtteks näitavad meie leiud, et dieediravi alustamine asümptomaatilises staadiumis või AD-sarnaste sümptomite ilmnemisel võib APP ekspressiooni ja BACE1 aktiivsuse samaaegse reguleerimise kaudu taastada raku redoksseisundi ja APP füsioloogilise töötlemise.

Kuigi meie leide on raske ekstrapoleerida inimese seisundile, võib neil olla ulatuslik mõju inimese reaktsioonile tulevastele ravimitele. Kahest flavonoidist näib rutiin, millel on üldiselt silmatorkavam in vivo toime, kõige sobivam lisada igapäevasesse dieeti AD adjuvantravina, mis põhineb aju intratsellulaarse redoks-homöostaasi suurendamisel.

Täiendavad materjalid:Järgmise toetava teabe saab veebisaidilt alla laadida. Viide [76] on tsiteeritud lisamaterjalides.

Autori kaastööd:PB-B. ja SM-A. koostas idee ja katsekavandi, aitas katsetel, tõlgendas saadud tulemusi ja kirjutas käsikirja. KLJ-A. viis läbi katseid, analüüsis andmeid ja tõlgendas saadud tulemusi. JB aitas andmeanalüüse ja käsikirja revideerimist. Kõik andmed genereeriti ettevõttesiseselt ja paberitehast ei kasutatud. Kõik autorid nõustuvad vastutama kõigi töö aspektide eest, tagades terviklikkuse ja täpsuse. Kõik autorid on käsikirja avaldatud versiooni läbi lugenud ja sellega nõustunud.

Rahastamine:Seda uurimistööd rahastasid Meditsiiniuuringute Sihtasutus «Mutua Madrileña» (meditsiiniuuringute projektide stipendiumide neljas väljaanne), Hispaania haridus- ja teadusministeerium (viide AGL2008-04892-C03-02) ja Hispaania teadus- ja innovatsiooniministeerium (viide CTQ2010-16170).

Institutsioonilise ülevaatenõukogu avaldus:Loomade protokollid kiitis heaks Madridi Complutense'i ülikooli institutsionaalne loomade hooldamise ja kasutamise komitee (IACUC) ning need olid täielikult kooskõlas Euroopa direktiiviga 2010/63/teaduslikel eesmärkidel kasutatavate loomade kaitse kohta ja Hispaania loomade heaolu käsitlevate õigusaktidega. kuninglik dekreet 53/2013, 1. veebruar 2013).

Teadliku nõusoleku avaldus:Ei kohaldata.

Andmete kättesaadavuse avaldus:Selle uuringu tulemusi toetavad andmed on mõistliku taotluse korral kättesaadavad vastavalt autorilt.

Tänuavaldused:Täname Sihtasutust Folch KLJA eeldoktorantuuri eest.

Huvide konfliktid:Autorid kinnitavad, et huvide konflikti ei esine.

Lühendid

AD, Alzheimeri tõbi; ADAM-10, A disintegriini ja metalloproteinaasi domeeni sisaldav valk 10; APP, amüloidi prekursorvalk; APPswe, amüloidi prekursorvalgu rootsi mutatsioon; A , amüloid-; BACE1, -sait APP lõhustav ensüüm 1; CAT, katalaas; GPx, glutatioonperoksidaas; GR, glutatioonreduktaas; GSH, vähendatud glutatioon; GSSG, oksüdeeritud glutatioon; SOD, superoksiidi dismutaas.

Viited

1. Ebenau, JL; Pelkmans, W.; Verberk, IMW; Verfaillie, SCJ; van den Bosch, KA; van Leeuwenstijn, M.; Collij, LE; Scheltens, P.; Prins, ND; Barkhof, F.; et al. Neurodegeneratsiooni CSF-i, plasma- ja kujutise markerite seos kliinilise progresseerumisega inimestel, kellel on subjektiivne kognitiivne langus. Neurology 2022, 98, e1315–e1326. [CrossRef] [PubMed]

2. Dominguez, LJ; Veronese, N.; Vernuccio, L.; Catanese, G.; Inzerillo, F.; Salemi, G.; Barbagallo, M. Toitumine, füüsiline aktiivsus ja muud elustiili tegurid kognitiivse allakäigu ja dementsuse ennetamisel. Toitained 2021, 13, 4080. [CrossRef]

3. Tsarbopoulos, A. Alzheimeri tõbi: looduse "ravimikarbi" uurimine uute raviainete jaoks. Biomol. Kontseptsioonid 2020, 11, 201–208. [CrossRef] [PubMed]

4. Ashe, KH; Zahs, KR Alzheimeri tõve bioloogia uurimine hiirtel. Neuron 2010, 66, 631–645. [CrossRef] [PubMed]

5. Zahs, KR; Ashe, KH "Liiga palju häid uudiseid" – kas Alzheimeri tõve hiiremudelid üritavad meile öelda, kuidas Alzheimeri tõbe ennetada, mitte ravida? Trends Neurosci. 2010, 33, 381–389. [CrossRef]

6. Foley, AM; Ammar, ZM; Lee, RH; Mitchell, CS Süstemaatiline ülevaade amüloiditasemete ja transgeense hiire kognitiivse defitsiidi mõõtmiste vahel Alzheimeri tõve korral. J. Alzheimeri dis. 2015, 44, 787–795. [CrossRef]

7. Anand David, A.; Arulmoli, R.; Parasuraman, S. Ülevaateid kvertsetiini bioloogilisest tähtsusest: bioaktiivne flavonoid. Pharm. Rev 2016, 10, 84–89.

8. Habtemariam, S. Rutin kui Alzheimeri tõve loomulik teraapia: ülevaated selle toimemehhanismidest. Curr. Med. Chem. 2016, 23, 860–873. [CrossRef]

9. Martín-Aragón, S.; Jiménez-Aliaga, K.; Benedí, J.; Bermejo-Bescós, P. Kvertsetiini ja rutiini neurohormeetilised vastused amüloidi prekursorvalku (APPswe rakud) üleekspresseerivas rakuliinis. Fütomeditsiin 2016, 23, 1285–1294. [CrossRef]

10. Zhou, W.; Qing, H.; Tong, Y.; Song, W. BACE1 geeniekspressioon ja valgu lagunemine. Ann. NY Acad. Sci. 2004, 1035, 49–67. [CrossRef]

11. Gutbier, S.; Spreng, AS; Delp, J.; Schildknecht, S.; Karreman, C.; Suciu, I.; Brunner, T.; Groettrup, M.; Leist, M. Neuronaalse apoptoosi ennetamine astrotsüütide poolt tiooli poolt vahendatud stressivastuse modulatsiooni ja proteotoksilisest stressist taastumise kiirendamise kaudu. Rakkude surma erinevus. 2018, 25, 101–117. [CrossRef] [PubMed]

12. Aoyama, K. Glutatioon ajus. Int. J. Mol. Sci. 2021, 22, 5010. [CrossRef] [PubMed]

13. Scholey, A. Tervise ja haiguste neurokognitsiooni toitained: meetmed, metoodikad ja mehhanismid. Proc. Nutr. Soc. 2018, 77, 73–83. [CrossRef] [PubMed]

14. Apelt, J.; Bigl, M.; Wunderlich, P.; Schliebsm, R. Vananemisega seotud oksüdatiivse stressi suurenemine korreleerub beeta-sekretaasi aktiivsuse arengumustriga ja beeta-amüloidnaastude moodustumisega Alzheimeri-sarnase patoloogiaga transgeensetel Tg2576 hiirtel. Int. J. Dev. Neurosci. 2004, 22, 475–484. [CrossRef] [PubMed]

15. Howlett, DR; Richardson, JC APP transgeensete hiirte patoloogia: Alzheimeri tõve mudel või lihtsalt APP üleekspressioon? Histol. Histopatool. 2009, 24, 83–100. [PubMed]

16. Cencioni, C.; Spallotta, F.; Martelli, F.; Valente, S.; Mai, A.; Zeiher, AM; Gaetano, C. Oksüdatiivne stress ja epigeneetiline regulatsioon vananemise ja vanusega seotud haiguste korral. Int. J. Mol. Sci. 2013, 14, 17643–17663. [CrossRef]

17. Tsang, AH; Chung, KK Oksüdatiivne ja nitrosatiivne stress Parkinsoni tõve korral. Biochim. Biophys. Acta 2009, 1792, 643–650. [CrossRef]

18. Mandal, PK; Saharan, S.; Tripathi, M.; Murari, G. Aju glutatiooni tase – uudne biomarker kergete kognitiivsete häirete ja Alzheimeri tõve jaoks. Biol. Psühhiaatria 2015, 78, 702–710. [CrossRef]

19. Chen, JJ; Thiyagarajah, M.; Song, J.; Chen, C.; Herrmann, N.; Gallagher, D.; Rapoport, MJ; Must, SE; Ramirez, J.; Andreazza, AC; et al. Muutunud tsentraalne ja vere glutatioon Alzheimeri tõve ja kerge kognitiivse kahjustuse korral: metaanalüüs. Alzheimer's Res. Seal. 2022, 14, 23. [CrossRef]

20. Pocernich, CB; Butterfield, DA Glutatiooni taseme tõus Alzheimeri tõve ravistrateegiana. Biochim. Biophys. Acta (BBA)-Mol. Alus Dis. 2012, 1822, 625–630. [CrossRef]

21. Raza, A.; Xie, W.; Kim, KH; Dronamraju, VR; Williams, J.; Vince, R.; Veel, ψ-GSH SS-dipeptiid pärsib Alzheimeri tõve hiiremudelis oksüdatiivset stressi ja neuropõletikku. Antioksüdandid 2022, 11, 1075. [CrossRef] [PubMed]

22. Yang, H.; Xie, Z.; Wei, L.; Ding, M.; Wang, P.; Bi, J. Glutatiooni mimeetiline D609 leevendab mälupuudulikkust ja vähendab amüloidi ladestumist A PP/PS1 transgeenses hiiremudelis. Neuroreport 2018, 29, 833–838. [CrossRef] [PubMed]

23. Guerrero-Gómez, D.; Mora-Lorca, JA; Sáenz-Narciso, B.; Naranjo-Galindo, FJ; Muñoz-Lobato, F.; Parrado-Fernández, C.; Goikolea, J.; Cedazo-Minguez, Á.; Link, CD; Neri, C.; et al. Glutatiooni redoks-homöostaasi kadumine kahjustab proteostaasi, inhibeerides autofagiast sõltuvat valkude lagunemist. Rakkude surma erinevus. 2019, 26, 1545–1565. [CrossRef] [PubMed]

24. Lefaki, M.; Papaevgeniou, N.; Chondrogianni, N. Proteasoomi funktsiooni redoksregulatsioon. Redox Biol. 2017, 13, 452–458. [CrossRef] [PubMed]

25. Bonet-Costa, V.; Pomatto, LC; Davies, KJ Alzheimeri tõve proteasoom ja oksüdatiivne stress. Antioksüd. Redokssignaal. 2016, 25, 886–901. [CrossRef]

26. Belkacemi, A.; Ramassamy, C. Oksüdatiivse stressi ajajada ajus Alzheimeri tõve transgeensetest hiiremudelitest, mis on seotud amüloidkaskaadiga. Vaba Radik. Biol. Med. 2012, 52, 593–600. [CrossRef]

27. Tanigawa, S.; Fujii, M.; Hou, Nrf2 ja Keap1 DX-i toime ARE-vahendatud NQO1 ekspressioonis kvertsetiini poolt. Vaba Radik. Biol. Med. 2007, 42, 1690–1703. [CrossRef]

28. Chondrogianni, N.; Kapeta, S.; Chinou, I.; Vassilatou, K.; Papassideri, I.; Gonos, ES Kvertsetiini vananemisvastane ja noorendav toime. Exp. Gerontol. 2010, 45, 763–771. [CrossRef]

29. Bodendorf, U.; Danner, S.; Fischer, F.; Stefani, M.; Sturchler-Pierrat, C.; Wiederhold, KH; Staufenbiel, M.; Paganetti, P. Inimese beeta-sekretaasi ekspressioon hiire ajus suurendab beeta-amüloidi püsiseisundi taset. J. Neurochem. 2002, 80, 799–806. [CrossRef]

30. Yamakawa, H.; Yagishita, S.; Futai, E.; Ishiura, S. beeta-sekretaasi inhibiitori tugevus väheneb "Rootsi mutandi" amüloidi prekursorvalgu ebanormaalse beeta-lõhustumise tõttu. J. Biol. Chem. 2010, 285, 1634–1642. [CrossRef]

31. Keller, D.; Erö, C.; Markram, H. Rakkude tihedus hiire ajus: süstemaatiline ülevaade. Ees. Neuroanat. 2018, 12, 83. [CrossRef] [PubMed]

32. Mladenovic Djordjevic, AN; Kapetanou, M.; Loncarevic-Vasiljkovic, N.; Todorovic, S.; Athanasopoulou, S.; Jovic, M.; Prvulovic, M.; Taoufik, E.; Matsas, R.; Kanazir, S.; et al. Farmakoloogiline sekkumine transgeensesse hiiremudelisse parandab Alzheimeri tõvega seotud patoloogilist fenotüüpi: proteasoomi aktiveerimise kaasamine. Vaba Radik. Biol. Med. 2021, 162, 88–103. [CrossRef] [PubMed]

33. Tamagno, E.; Bardini, P.; Guglielmotto, M.; Danni, O.; Tabaton, M. Beeta-amüloidi 1-42 erinevad agregatsiooniseisundid vahendavad erinevat mõju oksüdatiivsele stressile, neurodegeneratsioonile ja BACE-1 ekspressioonile. Vaba Radik. Biol. Med. 2006, 41, 202–212. [CrossRef] [PubMed]

34. Jorissen, E.; Prox, J.; Bernreuther, C.; Weber, S.; Schwanbeck, R.; Serneels, L.; Snellinx, A.; Craessaerts, K.; Thathiah, A.; Tesseur, I.; et al. Desintegriin/metalloproteinaas ADAM10 on ajukoore loomiseks hädavajalik. J. Neurosci. 2010, 30, 4833–4844. [CrossRef]

35. Kuhn, PH; Wang, H.; Dislich, B.; Colombo, A.; Zeitschel, U.; Ellwart, JW; Kremmer, E.; Roßner, S.; Lichtenthaler, SF ADAM10 on primaarsetes neuronites amüloidi prekursorvalgu füsioloogiliselt oluline konstitutiivne sekretaas. EMBO J. 2010, 29, 3020–3032. [CrossRef]

36. Postina, R.; Schroeder, A.; Dewachter, I.; Bohl, J.; Schmitt, U.; Kojro, E.; Prinzen, C.; Endres, K.; Hiemke, C.; Õnnistus, M.; et al. Desintegriin-metalloproteinaas takistab Alzheimeri tõve hiiremudelis amüloidnaastude moodustumist ja hipokampuse defekte. J. Clin. Uurige. 2004, 113, 1456–1464. [CrossRef]

37. Elfiky, AM; Mahmoud, AA; Elreedy, HA; Ibrahim, KS; Ghazy, MA Kvertsetiin stimuleerib mitteamüloidogeenset rada, aktiveerides ADAM10 ja ADAM17 geeniekspressiooni alumiiniumkloriidist indutseeritud Alzheimeri tõve rotimudelis. Life Sci. 2021, 285, 119964. [CrossRef]

38. Copanaki, E.; Chang, S.; Vlachos, A.; Tschäpe, JA; Müller, UC; Kögel, D.; Deller, T. sAPPalpha antagoniseerib proteasomaalse stressi poolt põhjustatud dendriitide degeneratsiooni ja neuronite surma. Mol. Raku neuroosci. 2010, 44, 386–393. [CrossRef]

39. Renziehausen, J.; Hiebel, C.; Nagel, H.; Kundu, A.; Kins, S.; Kogel, D.; Behl, C.; Hajieva, P. Amüloid-beeta valgu prekursori sAbetaPPalpha lõhustumisprodukt moduleerib BAG3--sõltuvat agressiivset moodustumist ja suurendab raku proteasoomi aktiivsust. J. Alzheimeri dis. 2015, 44, 879–896. [CrossRef]

40. Livingstone, RW; Vanem, MK; Singh, A.; Westlake, CM; Tate, WP; Abraham, WC; Williams, JM sekreteeritud amüloidi prekursorvalk-alfa suurendab LTP-d Ca2 pluss läbilaskvate AMPA retseptorite sünteesi ja kaubitsemise kaudu. Ees. Mol. Neurosci. 2021, 14, 660208. [CrossRef]

41. Crawford, HC; Dempsey, PJ; Brown, G.; Adam, L.; Moss, ML ADAM10 vähi ja põletiku terapeutilise sihtmärgina. Curr. Pharm. Des. 2009, 15, 2288–2299. [CrossRef] [PubMed]

42. Saftig, P.; Lichtenthaler, SF Alfa sekretaas ADAM10: metalloproteaas, millel on ajus mitu funktsiooni. Prog. Neurobiol. 2015, 135, 1–20. [CrossRef] [PubMed]

43. Borreca, A.; Gironi, K.; Amadoro, G.; Ammassari-Teule, M. Fragile-X vaimse alaarengu valgu ja heteronukleaarse ribonukleoproteiin C valgu vastassuunaline düsregulatsioon seostub Alzheimeri tõve APP-i täiustatud tõlkimisega. Mol. Neurobiol. 2016, 53, 3227–3234. [CrossRef] [PubMed]

44. Augustin, S.; Rimbach, G.; Augustin, K.; Schliebs, R.; Wolffram, S.; Cermak, R. Lühi- ja pikaajalise ravi mõju Ginkgo biloba ekstraktiga amüloidi prekursorvalgu tasemele Alzheimeri tõvega seotud transgeense hiire mudelis. Arch. Biochem. Biophys. 2009, 481, 177–182. [CrossRef] [PubMed]

45. Borreca, A.; Valeri, F.; De Luca, M.; Ernst, L.; Russo, A.; Nobili, A.; Cordella, A.; Corsetti, V.; Amadoro, G.; Mercuri, NB; et al. Translatsiooni efektiivsuse mööduv ülesreguleerimine prodromaalsetel ja varajase sümptomaatiliste Tg2576 hiirtel aitab kaasa A-patoloogiale. Neurobiol. Dis. 2020, 139, 104787. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​D'Amelio, M.; Sheng, M.; Cecconi, F. Kaspaas-3 kesknärvisüsteemis: peale apoptoosi. Trends Neurosci. 2012, 35, 700–709. [CrossRef]

47. Ertürk, A.; Wang, Y.; Sheng, M. Dendriitide ja okkade lokaalne pügamine kaspaasist-3-sõltuvate ja proteasoomidega piiratud mehhanismide abil. J. Neurosci. 2014, 34, 1672–1688. [CrossRef]

48. D'Amelio, M.; Cavallucci, V.; Middei, S.; Marchetti, C.; Pacioni, S.; Ferri, A.; Diamantini, A.; De Zio, D.; Carrara, P.; Battistini, L.; et al. Kaspaas-3 käivitab Alzheimeri tõve hiiremudelis varajase sünaptilise düsfunktsiooni. Nat. Neurosci. 2011, 14, 69–76. [CrossRef]

49. Gervais, FG; Xu, D.; Robertson, GS; Vaillancourt, JP; Zhu, Y.; Huang, J.; LeBlanc, A.; Smith, D.; Rigby, M.; Shearman, MS; et al. Kaspaaside osalemine Alzheimeri tõve amüloid-beeta prekursorvalgu proteolüütilisel lõhustamisel ja amüloidogeense A-beeta peptiidi moodustumisel. Cell 1999, 97, 395–406. [CrossRef]

50. Park, G.; Nhan, HS; Tyan, SH; Kawakatsu, Y.; Zhang, C.; Navarro, M.; Koo, EH Kaspaasi aktiveerimine ja APP kaspaasi poolt vahendatud lõhustamine on seotud amüloidvalgust põhjustatud sünapsi kadumisega Alzheimeri tõve korral. Cell Rep. 2020, 31, 107839. [CrossRef]

51. Lu, DC; Rabizadeh, S.; Chandra, S.; Shayya, RF; Ellerby, LM; Jah, X.; Salvesen, GS; Koo, EH; Bredesen, DE Teine tsütotoksiline proteolüütiline peptiid, mis on saadud amüloid-beeta-valgu prekursorist. Nat. Med. 2000, 6, 397–404. [CrossRef] [PubMed]

52. LeBlanc, AC Caspase-6 kui uudne varane sihtmärk Alzheimeri tõve ravis. Eur. J. Neurosci. 2013, 37, 2005–2018. [CrossRef]

53. Albrecht, S.; Bogdanovic, N.; Ghetti, B.; Winblad, B.; LeBlanc, AC Caspase-6 aktivatsioon perekondliku Alzheimeri tõve ajus, mis kannab amüloidi prekursorvalku või preseniliin I või preseniliin II mutatsioone. J. Neuropathol. Exp. Neurol. 2009, 68, 1282–1293. [CrossRef] [PubMed]

54. Morihara, T.; Teter, B.; Yang, F.; Lim, perearst; Boudinot, S.; Boudinot, FD; Frautschy, SA; Cole, GM Ibuprofeen pärsib interleukiin-1beeta pro-amüloidogeense alfa1-antihümotrüpsiini induktsiooni, et leevendada beeta-amüloidi (Abeta) patoloogiat Alzheimeri tõve mudelites. Neuropsychopharmacology 2005, 30, 1111–1120. [CrossRef] [PubMed]

55. Niu, YL; Zhang, WJ; Wu, P.; Liu, B.; Päike, GT; Yu, DM; Deng, JB Apoptoosiga seotud valkude kaspaas-3 ja NF-kappaB ekspressioon Tg2576 hiirte hipokampuses. Neurosci. Bull. 2010, 26, 37–46. [CrossRef]

56. Fuller, S.; Steele, M.; Munch, G. Aktiveeritud astroglia kroonilise põletiku ajal Alzheimeri tõve korral – kas nad jätavad tähelepanuta oma närvisüsteemi toetava rolli? Mutat. Res. 2010, 690, 40–49. [CrossRef]

57. Lee, M.; Cho, T.; Jantaratnotai, N.; Wang, YT; McGeer, E.; McGeer, PL GSH ammendumine gliiarakkudes kutsub esile neurotoksilisuse: seos vananemise ja degeneratiivsete neuroloogiliste haigustega. FASEB J. 2010, 24, 2533–2545. [CrossRef]

58. Hensley, K. Alzheimeri tõve neuroinflammation: mehhanismid, patoloogilised tagajärjed ja terapeutilise manipuleerimise potentsiaal. J. Alzheimeri dis. 2010, 21, 1–14. [CrossRef]

59. Lu, J.; Wu, DM; Zheng, YL; Hu, B.; Zhang, ZF; Shan, Q.; Zheng, ZH; Liu, CM; Wang, YJ Quercetin aktiveerib AMP-aktiveeritud proteiinkinaasi, vähendades PP2C ekspressiooni, kaitstes vana hiire aju kõrge kolesteroolist põhjustatud neurotoksilisuse eest. J. Pathol. 2010, 222, 199–212. [CrossRef]

60. Chen, JC; Ho, FM; Chao, PDL; Chen, CP; Jeng, KC; Hsu, HB; Lee, ST; Wen Tung, W.; Lin, WW iNOS-i geeniekspressiooni pärssimist kvertsetiini poolt vahendab IkappaB kinaasi, tuumafaktor-kappa B ja STAT1 inhibeerimine ning see sõltub heemi oksügenaasi-1 induktsioonist hiire BV-2 mikrogliia puhul. Eur. J. Pharmacol. 2005, 521, 9–20. [CrossRef]

61. Dwivedi, D.; Megha, K.; Mišra, R.; Mandal, PK Glutatioon ajus: ülevaade selle konformatsioonidest, funktsioonidest, biokeemilistest omadustest, kvantitatiivsest määramisest ja võimalikust terapeutilisest rollist ajuhäirete korral. Neurochem. Res. 2020, 45, 1461–1480. [CrossRef] [PubMed]

62. Rossner, S.; Sastre, M.; Bourne, K.; Lichtenthaler, SF BACE1 ekspressiooni transkriptsiooni- ja translatsiooniregulatsioon – mõju Alzheimeri tõvele. Prog. Neurobiol. 2006, 79, 95–111. [CrossRef] [PubMed]

63. Westerman, MA; Cooper-Blacketer, D.; Mariash, A.; Kotilinek, L.; Kawarabayashi, T.; Younkin, LH; Carlson, GA; Younkin, SG; Ashe, KH Seos Abeta ja mälu vahel Alzheimeri tõve Tg2576 hiiremudelis. J. Neurosci. 2002, 22, 1858–1867. [CrossRef] [PubMed]

64. Irizarry, MC; Locascio, JJ; Hyman, BT Beeta-saidi APP lõhustava ensüümi mRNA ekspressioon APP transgeensetel hiirtel: anatoomiline kattumine transgeeni ekspressiooniga ja staatiline tase vananemisega. Olen. J. Pathol. 2001, 158, 173–177. [CrossRef] [PubMed]

65. Hsiao, K.; Chapman, P.; Nilsen, S.; Eckman, C.; Harigaya, Y.; Younkin, S.; Yang, F.; Cole, G. Korrelatiivsed mälupuudused, abeeta tõus ja amüloidnaastud transgeensetel hiirtel. Teadus 1996, 274, 99–102. [CrossRef] [PubMed]

66. Hsiao, K. Alzheimeri amüloidi prekursorvalke ekspresseerivad transgeensed hiired. Exp. Gerontol. 1998, 33, 883–889. [CrossRef]

67. Simon, AM; Schiaparelli, L.; Salazar-Colocho, P.; Cuadrado-Tejedor, M.; Escribano, L.; López de Maturana, R.; Del Río, J.; Pérez-Mediavilla, A.; Frechilla, D. Inimese metsikut tüüpi APP üleekspressioon hiirtel põhjustab kognitiivseid puudujääke ja patoloogilisi tunnuseid, mis ei ole seotud Abeta tasemega. Neurobiol. Dis. 2009, 33, 369–378. [CrossRef]

68. Senft, AP; Dalton, TP; Shertzer, HG Glutatiooni ja glutatiooni disulfiidi määramine fluorestsentssondi oftalaldehüüdi abil. Anal. Biochem. 2000, 280, 80–86. [CrossRef]

69. Marklund, S.; Marklund, G. Superoksiidi aniooni radikaali osalus pürogallooli autooksüdatsioonis ja superoksiidi dismutaasi mugav test. Eur. J. Biochem. 1974, 47, 469–474. [CrossRef]

70. Aebi, H. Catalase in vitro. Meetodid Enzymol. 1984, 105, 121–126.

71. Barja de Quiroga, G.; Perez-Campo, R.; Lopez Torres, M. Antioksüdantide kaitse ja peroksüdatsioon vanade rottide maksas ja ajus. Biochem. J. 1990, 272, 247–250. [CrossRef] [PubMed]

72. Massey, V.; Williams, CH, Jr. Pärmi glutatioonreduktaasi reaktsioonimehhanismi kohta. J. Biol. Chem. 1965, 240, 4470–4480. [CrossRef]

73. Jash, K.; Gondaliya, P.; Sunkaria, A.; Kalia, K. MicroRNA-29b moduleerib sekretaasi aktiivsust SH-SY5Y rakuliinis ja diabeetilise hiire ajus. Cell Mol. Neurobiol. 2020, 40, 1367–1381. [CrossRef] [PubMed]

74. Jimenez-Aliaga, K.; Bermejo-Bescos, P.; Benedi, J.; Martin-Aragon, S. Kvertsetiinil ja rutiinil on amüloidogeensed ja fibrillide lagunemisvastased toimed in vitro ning tugev antioksüdantne toime APPswe rakkudes. Life Sci. 2011, 89, 939–945. [CrossRef] [PubMed]

75. Ramos, CA; Bowman, TA; Boles, NC; kaupmees, AA; Zheng, Y.; Parra, I.; Fuqua, SA; Shaw, CA; Goodell, MA Tõendid üksikute hematopoeetiliste tüvirakkude transkriptsiooniprofiilide mitmekesisuse kohta. PLoS Genet. 2006, 2, e159.

76. Schmued, LC; Hoidikud, CC; Scallet, AC; Xu, L. Fluoro-Jade C annab degenereeruvate neuronite ülikõrge eraldusvõime ja kontrasti märgistamise. Brain Res. 2005, 1035, 24–31. [CrossRef] [PubMed]

Lahtiütlus/väljaandja märkus:Kõikides väljaannetes sisalduvad väited, arvamused ja andmed on ainult konkreetse(te) autori(te) ja kaastöölise(te), mitte MDPI ja/või toimetaja(te) avaldused, arvamused ja andmed. MDPI ja/või toimetaja(d) loobuvad vastutusest inimestele või varale tekitatud vigastuste eest, mis tulenevad sisus viidatud ideedest, meetoditest, juhistest või toodetest.

【Lisateabe saamiseks:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】