Kurkumiini ja selle nanoosakeste mõju võrdlev uuring Niiluse tilapia (Oreochromis Niloticus) kasvule, immuunsusele ja kuumastressikindlusele

Selles uuringus hinnati vaba või nano-kurkumiiniga toidulisandite mõju Niiluse tilapia (Oreochromis niloticus) kasvuvõimele, immuunseisundile ja kuumastressikindlusele. Valmistati seitse isonitrogeeni (28 protsenti valku) ja isokalorisisaldusega (445 kcal/100 g DM) dieeti. Kuut dieeti täiendati kolme tasemega nano-kurkumiini (50 (CN50), 100 (CN100), 200 (CN200) mg kg-1 dieet) või vaba kurkumiini (50 (C50), 100 (C100), 200 (C200) ) mg kg-1 dieet) ja kontrolldieet jäeti ilma lisandita (CON). Kalu (13,54 ± 0,32 g) (keskmine ± SD) toideti katsetoiduga 65 päeva.

Pärast söötmiskatset puutusid kalad kokku ägeda kuumastressiga, tõstes vee temperatuuri järk-järgult 3 tunni jooksul 25 kraadilt 40 kraadini. Seejärel hoiti kala 4 tundi 40 kraadi juures. Tulemused näitasid nano-kurkumiini paremust selle vaba vormi ees kasvuvõime parandamisel, kõrgeimad tulemused saadi CN100 juures, millele järgnes CN200. Ainult kuumastress, mitte eksperimentaalsed dieedid, suurendas trombotsüütide arvu, keskmist korpuskulaarset mahtu (MCV), keskmist korpuskulaarset hemoglobiini (MCH), leukotsüütide ja neutrofiilide arvu, samas kui lümfotsüütide arv vähenes.

Kuumusstressikindluse ja immuunsuse vahel on tihe seos. Kuumusestress võib põhjustada kehale palju väljakutseid, nagu kõrge temperatuur, madal temperatuur, nälg ja hüpoksia. Need väljakutsed võivad viia muutusteni rakusiseses ja rakuvälises keskkonnas, mis käivitavad organismi stressireaktsiooni. Pärast pikka kohanemisperioodi võib kehal tekkida tugevam vastupanu kuumastressile. Samal ajal võib kuumastress mõjutada ka immuunsust. Pärast pikaajalist kuumastressi on organismi immuunsüsteem teatud määral kahjustatud. Kuumastressist põhjustatud immuunšokk suurendab patsientide nakatumisohtu ja vähendab immuunrakkude funktsiooni. Mõõdukas kuumastress võib aga tõsta immuunsust, kuna see aktiveerib organismi iseparanemise ja immuunsüsteemi. Seetõttu võib mõõdukas kuumastress tugevdada organismi vastupanuvõimet ja immuunsust ning parandada organismide kohanemisvõimet ja ellujäämist keerukates keskkondades. Lisaks bioloogiale peaksime, inimesed, pöörama tähelepanu ka immuunsuse paranemisele. Cistanche mõjutab oluliselt immuunsust. Cistanche on rikas mitmesuguste antioksüdantsete ainete poolest, nagu C-vitamiin, C-vitamiin, karotenoidid jne. Need koostisosad võivad eemaldada vabu radikaale, vähendada oksüdatiivset stressi ja parandada immuunsüsteemi vastupanuvõimet.

Klõpsake cistanche deserticola toidulisand

CN50 ja CN100 rühmad näitasid maksaensüümide (alaniini aminotransferaas (ALT) ja aspartaataminotransferaas (AST)) madalamat aktiivsust kui teised ravimeetodid, samas kui C200 andis nende ensüümide kõrgeima aktiivsuse. Kõrgeim immunoglobuliini (IgM) tase tuvastati CN100, CN200, C100 ja C200, millele järgnes CN50. C200 rühmas oli komplemendi 3 ja komplemendi 4 (vastavalt C3 ja C4) tase kõrgem kui teistel ravimeetoditel. C50 ja CON rühmad andsid madalaimad IgM, C3 ja C4 väärtused. Kortisooli tase oli CN50 ja CN100 rühmades teiste rühmadega võrreldes oluliselt madalam. Pärast kuumastressi tõusid ALT, AST, IgM, C3, C4, kortisool ja glükoos. Seega on nano-kurkumiin oma vabast vormist tõhusam kuumusstressikindluse suurendamisel, kaasasündinud immuunsuse esilekutsumisel, stressinäitajate alandamisel ja Niiluse tilapia kasvuvõime edendamisel parima kontsentratsiooniga 100 mg kg-1 dieedil.

Karpkala järel maailmas levinuim kalaliik on Niiluse tilapia (Oreochromis niloticus) 1,2. Tilapiat kasvatatakse praegu enam kui 12{5}} riigis üle maailma2. Tilapia ülemaailmne tootmine põrkas vähem kui 0,5 miljonilt tonnilt (MMT) 1990. aastate alguses 6,03 MMT-ni 2018. aastal, kusjuures keskmine aastane kasvumäär oli 13,5 protsenti 2. Tilapia intensiivne kasvatamine muudab selle aga tundlikuks erinevate stressitegurite suhtes, nagu kuumastress (HS), mis on globaalse soojenemise peamine tagajärg3. Kuigi Niiluse tilapia talub laia temperatuurivahemikku (optimaalne temperatuurivahemik on 25–28 kraadi), võib optimaalsest vahemikust kõrgem veetemperatuur pärssida immuunsüsteemi ja kahjustada selle antioksüdantset reaktsiooni4,5. HS pärsib immuunsüsteemi rakuvahendatud ja humoraalsete immuunvastuste kaudu6. Näiteks on leitud, et HS vähendab immunoglobuliinide (IgG ja IgM)7 taset.

HS8 ajal mõjutavad ka immuunvastuse esmased näitajad (valged verelibled, punased verelibled, hemoglobiin ja glükoos). Nüri latikas (Megalobrama amblycephala Yih) näitas lüsosüümi, alternatiivse komplemendi aktiivsuse, üldvalgu ja Ig M taseme tõusu pärast 6-tunnist kuumastressi, mistõttu need parameetrid langesid9. Järelikult võib kuumastress kalade tervist kahjustada, põhjustades kasvu taandumise ja kõrge Fsh suremuse10. Kalade kaitsemehhanismide tugevdamine immuunstimulantide manustamise kaudu toidus on muutunud vesiviljeluse stressitegurite kontrolli all hoidmise prioriteediks11. Erinevatest immuunstimulaatoritest sisaldavad ravimtaimed keemilisi koostisosi, mis tugevdavad immuunsust spetsiifiliste või mittespetsiifiliste radade kaudu, muutes looma vastupidavamaks väliste stressitegurite suhtes12.

Kurkumiin on oranžikaskollane, hüdrofoobne, bioaktiivne taimne koostisosa ja polüfenoolne ühend, mis on ekstraheeritud kurkumist (Curcuma longa). Kurkumiini peamised aktiivsed komponendid on diferuloüülmetaan (77 protsenti), demetoksükurkumiin (17 protsenti) ja bisdemetoksükurkumiin (6 protsenti)13. Üllataval kombel on kurkumiinil viirusevastased, seenevastased, põletikuvastased, antioksüdantsed ja vähivastased omadused 14–17. Seega võib kurkumiin stimuleerida fsh18,19 kaasasündinud immuunsüsteemi. Mitmed uuringud on näidanud kurkumiini kui potentsiaalse immunostimulaatori ja antioksüdandi kandidaadi kasulikku mõju erinevate kalaliikide toidus 20–26. Halb vees lahustuvus ja biosaadavus piiravad aga kurkumiini praktilisi rakendusi13.

Hiljuti töötati välja nano-kurkumiin, et vältida kurkumiini halbu manustamisomadusi ja tugevdada selle ravitoimet27. Erinevalt kurkumiinist, mis moodustab vees vähese lahustuvuse tõttu tükke, lahustub nanokurkumiin vesikeskkonnas täielikult ega moodusta zeta potentsiaali olemasolu tõttu tükke27. Võrreldes vaba kurkumiiniga näitas nano-kurkumiin plasmas ja kudedes suuremat läbilaskvust, pikemat vereringet ja paremat süsteemset biosaadavust 28–30

Jiangi et al.31 sõnul stimuleeris nanosfääridesse laetud kurkumiin selle antioksüdantset ja immunoloogilist toimet. Need mõjud võivad olla seotud osakeste vähenemisega nanomeetrilisele skaalale, mis tagab aktiivsete materjalide jätkusuutliku vabanemise ning suurendab biosaadavust ja molekulaarse dispersiooni taset31. Kuigi nano-kurkumiini ja selle vaba vormi mõju võrdlemiseks fsh-le ei ole tehtud ühtegi uuringut, on seda hiljuti katsetatud lindudel, nagu Jaapani vutt (Coturnix japonica)32. Marchiori et al.32 leidsid, et nanokapseldatud kurkumiin parandas Jaapani vuttide (Coturnix japonica) jõudlust kolm korda väiksema annusega kui vaba kurkumiin, mis näitab nanomaterjalide potentsiaali loomakasvatuse parandamisel.

Siiani ei ole nano-kurkumiini kalade toitumises testitud. Seetõttu oli selle uuringu eesmärk hinnata kurkumiini vaba või nanovormiga toidulisandite mõju Niiluse tilapia kasvuvõime, immuunsuse seisundi ja kuumastressikindluse parandamisele.

Materjalid ja meetodid Eksperimentaalsed dieedid.

Eksperimentaalsete dieetide koostis ja keemiline analüüs on näidatud tabelis 1. Valmistati seitse isonitrogeenilist (28 protsenti valku) ja isokalorilist (445 kcal/100 g DM) dieeti. Kuut dieeti täiendati kolme tasemega nano-kurkumiini (50 (CN50), 100 (CN100), 200 (CN200) mg kg-1 dieet) või vaba kurkumiini (50 (C50), 100 (C100), 200 (C200) ) mg kg-1 dieet) ja kontrolldieet jäeti ilma lisandita (CON). Kuivad ja peeneks jahvatatud koostisosad segati õlisid lisades käsitsi põhjalikult läbi. Pärast seda sõtkuti kõik koostisosad, lisades järk-järgult sooja vett. Tainas granuleeriti sobiva läbimõõduga hakklihamasinaga. Dieedid kuivatati päikese käes ja hoiti -20 kraadi juures plastpurkides.

Kalad ja katserajatised.

Niiluse tilapia (Oreochromis niloticus) sõrmikud saadi Aleksandria lähedal asuvast kaubanduslikust farmist ja neid hoiti Egiptuse Aleksandria filiaali riikliku okeanograafia ja kalanduse instituudi kalakasvatuslaboris klaaskiust mahutis (1 m3). Sada kuuskümmend kaheksa kala (13,54±0.32 g) asustati uuesti 21 klaasakvaariumi (70 L akvaarium-1) tihedusega 8 kala akvaariumi kohta. Iga ravi koosnes 3 kordusest (A, B ja C). Kalad aklimatiseeriti akvaariumiga 2 nädala jooksul ja neid toideti kontrolltoiduga, et kohaneda eksperimentaalsete dieetidega. Kalu toideti katsetoiduga kolm korda päevas kuni täiskõhutundeni 65 päeva jooksul. Igasse akvaariumi viidi pideva õhutamisega kloorivaba kraanivesi. Iga ravi korral tarbitud sööda kogus arvutati kord nädalas toidukonteinerite kaalu erinevuse järgi enne ja pärast söötmist. Fotoperiood määrati vastavalt 12 h: 12 h valgus: tume. Veekvaliteedi parameetreid jälgiti katse ajal igal nädalal, kasutades Hanna Aquaculture Multiparameter Photometer HI83303. Vee temperatuur, lahustunud hapnik, ammoniaak-N ja pH registreeriti järgmiselt; 25±2,1 kraadi, vastavalt 6,4 mg L-1, 0,05 mg L-1 ja 7,7. Pärast kuumastressi (40 kraadi) kokkupuudet oli lahustunud hapniku ja ammoniaagi N sisaldus kalapaagis vastavalt 2,1 mg L-1 ja 0,62 mg L-1. Kaks tundi pärast toitmist eemaldati väljaheited sifooniga.

Eetiline deklaratsioon.

Katsed viidi läbi Egiptuse riikliku okeanograafia ja kalanduse instituudi veeorganismide ja katseloomade institutsionaalse hooldamise komitee (NIOF-IACUC) poolt välja kirjutatud ja heaks kiidetud juhiste järgi.

Kurkumiini ja nano-kurkumiini preparaat.

Kurkumiini ja nano-kurkumiini valmistas NanoTech Egypti fotoelektroonika ja nanotehnoloogia uurimisosakond. Nano-kurkumiin valmistati redutseerimismeetodil, nagu on kirjeldanud Dhivya et al.33. UV-Vis neeldumisspektrid saadi Ocean Optics USB2000 pluss VIS-NIR Fiber optics spektrofotomeetriga. Nanoosakeste pinnamorfoloogia ja suuruse uurimiseks kasutati kõrglahutusega transmissioonielektronmikroskoopi (TEM), JEOL JEM-2100. TEM-pildistamine näitas peaaegu 50 ± 5, 5 nm nano-kurkumiini peaaegu sfäärilise kuju, sileda pinna ja ühtlase suuruse jaotust (joonis 1). Nano-kurkumiini osakeste osakeste suuruse jaotus ja zeta potentsiaal määrati Zetasizer Malvern instrumendiga (Malvern, UK), versioon 7.13, seerianumber: MAL 1203718. Zeta potentsiaal (mV) ja Zeta hälve (mV) olid -25 .0 ja 4,16 vastavalt (joonis 2).

Tootlik jõudlus.

Kõik kalad igas paagis koguti ja kaaluti enne söötmiskatse algust ja terminalis. Kasv, söödakasutus ja muud biomeetrilised indeksid arvutati vastavalt järgmistele võrranditele:

Keha keemiline koostis.

Enne söötmiskatse algust võeti 10 kalalt juhuslikult proovid ja külmutati kogu keha biokeemia analüüsiks -20 kraadini. Söötmiskatse lõpus võeti kogu keha biokeemilise analüüsi jaoks proovid kuuest kalast ravi kohta. Kõik proovid külmutati kohe -20 kraadi juures kuni analüüsimiseni. Kõigi proovide toorvalgu, lipiidide, niiskuse ja tuhasisalduse hindamiseks järgiti AOAC34 meetodeid.

Vereproovide võtmine.

Pärast söötmiskatset võeti vereanalüüsiks kuus kala ravi kohta. Kalade tuimastamiseks on kasutatud nelgiõli (0,1 ml L−1). Vereproovid (1 ml) koguti kala sabaveenist plastmikrotorudesse, mis sisaldasid antikoagulanti (dikaaliumetüleendiamiintetraäädikhape, EDTA), et säilitada proovid hematoloogilises analüüsis kasutamiseks. Igast proovist koguti üks ml verd ilma antikoagulandita mikrotuubidesse ja tsentrifuugiti 10 minutit kiirusel 2500 x g, et eraldada seerum, mis määrati biokeemilise analüüsi jaoks.

Hematoloogiline analüüs.

Erütrotsüüdid, hematokrit (HCT), hemoglobiin (HGB), keskmine korpuskulaarne maht (MCV), keskmine korpuskulaarne hemoglobiin (MCH), keskmine hemoglobiini kontsentratsioon (MCHC), vereliistakud (PLT), leukotsüüdid ja diferentsiaalarv (neutrofiilid (NEUT), lümfotsüüdid) (LYMPH)), monotsüüdid (MON), eosinofiilid (EO), basofiilid (BAS) ja ebaküpsed granulotsüüdid (IG) loendati automatiseeritud hemotsütomeetriga XE 2100 (Advia 2120 & Sysmex, Siemens). Kõiki nimetatud indekseid hinnati enne ja pärast kuumastressi.

Seerumi biokeemia.

Vereproovide seerumis analüüsiti seerumi alaniinaminotransferaasi (ALT), seerumi aspartaataminotransferaasi (AST), immunoglobuliini M (IgM), komplementide 3 ja 4 (vastavalt C3 ja C4), kortisooli ja glükoosi kontsentratsioone. Glükoosi analüüsiti heksokinaasi meetodil35, kasutades Cobas pakki (viitenumber, 04404483 190) Cobas-c 311 analüsaatori kaudu, süsteemi ID 0768316. Kortisooli määrati vastava immuunkompleksi meetodi36 moodustumise alusel elektrokemoluminestsents-immunoanalüüsi "ECLIA" paketi (viitenumber, 11875116 122) kaudu, kasutades Cobas-e immunoanalüüsi analüsaatorit. ALT analüüs viidi läbi, kasutades Cobas C paketti (viitenumber, 207649q57 322), Cobas-C 311 analüsaatorit, süsteemi ID 0 764 957. ALT tuvastati vastavalt Bergmeyer et al.37 ja ECCLS38. ALT katalüüsis reaktsiooni L-alaniini ja 2-oksoglutaraadi vahel. Te-moodustunud püruvaat redutseeritakse NADH poolt reaktsioonis, mida katalüüsib laktaatdehüdrogenaas (LDH), moodustades L-laktaadi ja NAD. NADH oksüdatsiooni kiirus on otseselt proportsionaalne katalüütilise ALT aktiivsusega.

See määratakse neeldumise vähenemise mõõtmise teel. Proovis sisalduv AST katalüüsis aminorühma ülekandmist L-aspartaadi ja 2-oksoglutaraadi vahel, moodustades oksaloatsetaadi ja L-glutamaadi. Seejärel reageeris oksaloatsetaat NADH-ga malaatdehüdrogenaasi (MDH) juuresolekul, moodustades NAD. See analüüs järgis IFCC soovitusi, kuid optimeeriti vastavalt Bergmeyer et al.37 ja ECCLS38, kasutades Cobas c paketti (viitenumber, 20764949322) läbi Cobas-C 311 analüsaatori. Süsteem lD 076494I. IgM määrati immunoloogilise aglutinatsiooni põhimõttel39 läbi Cobas c 311, süsteemi ID 0767883, kasutades Cobas c pakki (viitenumber, 03507190). IgM antikehad ja antigeenid reageerisid proovis üksteisega ja moodustasid antigeeni/antikeha kompleksi. Pärast aglutinatsiooni mõõdeti seda turbidimeetriliselt alam-/põhilainepikkusel: 700/340. C3 ja C4 määrati sademe moodustamisega spetsiifilise antiseerumi lisamise teel ja seejärel määrati need turbidimeetriliselt alam-/põhilainepikkusel: 700/34039. C3 mõõdeti läbi Cobas c 311, süsteemi ID 0765600, kasutades Cobas c pakki (viitenumber, 03001938322). C4 analüüsiti läbi Cobas c 311, süsteemi ID 0765619, kasutades Cobas c pakki (viitenumber, 03001962322).

Kuumuse stress.

Pärast söötmiskatse lõpetamist koguti katseklaasist akvaariumist viis kala igast kordusest ja viidi 0.5-tonnisse klaaskiudpaaki, mis sisaldas 7 alamkasvatusüksust (7-). L perforeeritud plastikust silindrilised mahutid). Iga konteiner kujutab endast iga ravi koopiat. Iga ravi kordused A, B ja C on puutunud kokku kuumastressiga vastavalt esimesel, teisel ja kolmandal päeval. Seega korrati kuumastressi väljakutset kolm korda kolme järjestikuse päeva jooksul. Vee temperatuuri tõsteti järk-järgult 3 tunni jooksul 25 kraadilt 40 kraadini. Vee temperatuuri reguleeris kunstlik termostaat. Pärast 4-tunnist 40-kraadist kokkupuudet anesteseeriti iga üksuse kalad nelgiõliga. Vereproovid koguti, et määrata ALT, AST, IgM, C3 ja C4, glükoosi ja kortisooli tase, samuti kalade hematoloogiline arv.

Statistiline analüüs.

Andmeid kasvutulemuse ja söödakasutuse kohta töödeldi ühesuunalise dispersioonanalüüsi (ANOVA) abil. Kuumusestressi ja eksperimentaalsete dieetide mõju hindamiseks kaladele kasutati kahesuunalist ANOVA-d. Vahendite järjestamiseks kasutati Duncani post hoc testi. P Väiksem või võrdne 0.05 peeti statistiliselt oluliseks. Kogu statistikat töödeldi SPSS paketi (versioon 23.0) abil.

Deklaratsioon.

Kõik meetodid on esitatud ARRIVE juhistes 2.0.

Tulemused

Kasvujõudlus ja söödakasutus.

Katsetoiduga toidetud kalade kasvutulemused ja söödakasutuse tulemused on esitatud tabelis 2. Suurim lõppmass (FW) ja kaalutõus (WG) saadi kalade söötmisega CN100, millele järgnes CN200 (P Väiksem või võrdne 0.05). CN50-ga söödetud kalad andsid mõõdukaid FW ja WG ning olid sarnased C100 söödetud kaladega (P suurem või võrdne 0.0 5). WG madalaimad tulemused registreeriti fsh-toidetud CON, C50 või C200 puhul (P Väiksem või võrdne 0,05). CN100 ja CN200 toidetud kaladel oli kõrgeim spetsiifiline kasvumäär (SGR), millele järgnesid CN50 ja C100 (P väiksem või võrdne 0,05). Kuid fsh-toidetud CN200 SGR ei erinenud oluliselt CN50-st ega C100-st (P suurem kui 0,05 või sellega võrdne). CON, C50 ja C200 kalarühmad andsid madalaima SGR-i (P väiksem või võrdne 0,05). Suurim keskmise päevakasvu (ADG) tulemus registreeriti CN100 rühmas, millele järgnesid CN200 ning seejärel CN50 ja C100 rühmad (P väiksem või võrdne 0,05). Rühmad CON, C50 ja C200 näitasid ADG madalaimaid väärtusi (P Väiksem või võrdne 0,05). Suurim söödakogus (FI) registreeriti rühmades CN50, CN100, CN200 ja C100, millele järgnesid CON, C50 ja C200 rühmad (P väiksem või võrdne 0,05). Madalaim FCR tuvastati CN100 ja CN200, millele järgnesid CN50 ja C100, samas kui FCR kõrgeimad väärtused täheldati CON, C50 ja C200 puhul (P väiksem või võrdne 0,05). CN100 ja CN200 rühmad andsid kõrgeimad valgu efektiivsuse suhte (PER) väärtused, millele järgnesid CN50 ja C100, samas kui madalaimad väärtused saadi CON, C50 ja C200 puhul (P väiksem või võrdne 0,05).

Keha keemiline koostis.

Katsetoiduga toidetud Niiluse tilapia lähedase keemilise koostise tulemused on illustreeritud tabelis 3. Kuivaine eri rühmade vahel ei olnud olulisi erinevusi (P suurem või võrdne 0.05 ). Suurimad toorvalgu (CP) väärtused saadi CN50, CN100, CN200 ja C100, millele järgnesid CON, C50 ja C200 (P väiksem või võrdne kuni 0,05); aga C50 ei erinenud oluliselt CN50-st, CN100-st ja C100-st (P suurem kui 0,05 või sellega võrdne). Kõigil töötlustel oli kõrgem toorlipiidide suhe kui CON (P väiksem või võrdne 0, 05). Suurimad tuhatulemused registreeriti CON ja C200, millele järgnes C50 ja madalaimad tulemused täheldati CN50, CN100, CN200 ja C100 puhul (P Väiksem või võrdne 0,05).

Hematoloogiline analüüs.

Tabelis 4 on näidatud kalade hematoloogiline analüüs pärast söötmiskatset 25 kraadi juures ja pärast kuumastressi 40 kraadi juures. Tulemused näitasid, et eksperimentaalsed dieedid ja kuumastress mõjutasid märkimisväärselt mõningaid hematoloogilisi parameetreid (P väiksem või võrdne 0.05). Eksperimentaalsed dieedid ei mõjutanud hematoloogilist arvu (P suurem või võrdne {{10}},05), välja arvatud C200, mis andis teiste eksperimentaalsete dieetidega võrreldes kõrgema leukotsüütide ja madalama neutrofiilide arvu (P vähem kui või 0,05). Kuid pärast kuumastressi tuvastati trombotsüütide, MCV, MCH, leukotsüütide ja neutrofiilide arvu suurenemine, samas kui lümfotsüütide arv vähenes (P vähem kui 0,05 või sellega võrdne) ja muud hematoloogilised seisundid ei avaldanud mõju. parameetrid (P suurem kui 0,05 või sellega võrdne).

Biokeemiline vereanalüüs.

Biokeemilise vereanalüüsi tulemused enne ja pärast katsetoitudega söödetud Niiluse tilapia kuumastressi on toodud tabelis 5. Nii dieedil kui ka kuumastressil on suur mõju fsh biokeemilistele vereparameetritele (P Väiksem või võrdne kuni 0.05). ALT näitas suurimat aktiivsust C200, millele järgnesid CON ja C100 ning seejärel C50 ja CN200, samas kui madalaimad väärtused saadi CN50 ja CN100 ravis (P väiksem või võrdne 0,05) . Suurim AST aktiivsus anti C200-s, millele järgnes C100- ja CON-ravi, millele järgnes C50, samas kui madalaim aktiivsus tuvastati CN50-, CN100- ja CN200-ravi korral (P väiksem või võrdne 0,05). Kuid AST väärtus CN200-s ei erinenud oluliselt C50-st (P suurem kui 0,05 või sellega võrdne).

Kõrgeimad IgM tasemed saadi rühmades C200, C100, CN100 ja CN20 0, millele järgnes CN50, samas kui C50 ja CON andsid madalaimad väärtused (P Väiksem kui 0,05 või sellega võrdne). C200 näitas kõrgeimat C3 taset, millele järgnes CN50 (P väiksem või võrdne 0,05), samas kui C100, CN100 ja CN200 ei erinenud oluliselt C200-st ega CN50-st (P suurem või võrdne 0,05). C50 ja CON andsid C3 jaoks madalaimad väärtused (P Väiksem või võrdne 0,05). Suurimad C4 väärtused leiti C200 ja CN200, millele järgnesid CN50 ja seejärel CN100 ja C100, samas kui C50 ja CON andsid madalaimad tulemused (P Väiksem või võrdne 0,05). C200 andis kõrgeima kortisooli väärtuse, millele järgnes CON, järgnes C100 ning seejärel CN200 ja C50 (P väiksem või võrdne 0,05). Madalaimad kortisooli tulemused registreeriti CN50 ja CN100 puhul (P väiksem või võrdne 0,05). C200-s ja CON-is saadud glükoos oli kõrgem kui teistes töötlustes (P väiksem või võrdne 0,05). Pärast kuumastressi täheldati ALAT, AST, IgM, C3, C4, kortisooli ja glükoosi tõusu (P väiksem või võrdne 0,05).

Arutelu

Käesolevas uuringus andis Niiluse tilapia söötmine kurkumiini sisaldava dieediga võrreldes kontrolldieediga märgatavalt paremaid kasvutulemusi. Lisaks näitab see uuring märkimisväärselt nano-kurkumiini paremust selle vaba vormi ees Niiluse tilapia kasvuvõime parandamisel. Käesolevas uuringus saavutati Niiluse tilapia parim kasvujõudlus (WG, SGR ja ADG) ja söödakasutus (FCR ja PER) annusega 100 mg kg-1, millele järgnes 200 mg kg-1 nano-kurkumiini dieet. . See on kooskõlas Mahmoudi jt 23 arvamusega, kes leidsid, et Niiluse tilapia (Oreochromis niloticus) toitmine 50 või 100 mg kg-1 kurkumiini dieediga parandas kasvujõudlust ja sööda kasutamist. Nad seostasid selle kasvuvõime ja söödakasutuse paranemise seedeensüümide (amülaasi, proteaasi, trüpsiini ja lipaasi) aktiivsuse paranemisega22,40. Lisaks võib kurkumiin võimendada teisi ensüüme (Na pluss /K pluss -ATPaas, soole leeliseline fosfataas, gamma-glutamüültranspeptidaas ja kreatiinkinaas), mis vastutavad toitainete lagunemise ja assimilatsiooni eest22. Lisaks võib kurkumiin toimida prebiootikumina, soodustades soolestiku foorumit ning parandades seedimist ja imendumist soolestikus, mille tulemusena paraneb üldine tervis ja fsh40 kasv. Kurkumiini toidulisandite positiivne mõju on ilmnenud erinevatel kalaliikidel, nagu näiteks rohukarp (Ctenopharyngodon ideas)41, ristikarp (Carassius auratus)22, suur kollane krooks (Pseudosciaene crocea)42, vikerforell (Oncorhynchus mykiss)17. meriahven (Lates calcarifer)43.

Nagu eelnevalt mainitud, on käesolev uuring kurkumiini nanoosakeste jaoks parem kui vaba kurkumiin Niiluse tilapia kasvukiiruse suurendamisel. Teisisõnu võib nano-kurkumiini väiksem annus suurendada Niiluse tilapia kasvuvõimet ja anda sama efekti kui vaba kurkumiini suurem annus. Näiteks 50 mg kg-1 nano-kurkumiini dieet andis sama efekti kui 100 mg kg-1 vaba kurkumiini dieet. Toetuseks näitas nano-kurkumiini bioloogiline poolestusaeg 60-korda pikenemist võrreldes vaba kurkumiiniga rotimudelites44. Lisaks on nano-kurkumiinil suurem süsteemne biosaadavus plasmas ja kudedes võrreldes vaba kurkumiiniga30. See võib olla tingitud vaba kurkumiini vähesest lahustuvusest vees; seetõttu moodustab see agregaate ja on vastuvõtlik opsoniseerumisele, samas kui nano-kurkumiin lahustub vees täielikult ilma agregatsioonita oma zeta potentsiaali tõttu27.

Vaba kurkumiini ja nano-kurkumiini lisamine kõrgeimal tasemel (200 mg kg-1 dieet) praeguses uuringus vähendas kasvujõudlust ja söödakasutust võrreldes CON-iga. Tegelikult on kurkumiin polüfenool. On teatatud, et polüfenoolide väikesed annused võivad bioakumuleeruda kehakudedes, kus need soolestikus täielikult ei imendu45. Polüfenoolide kõrge sisaldus võib põhjustada kasvu taandumist46. See efekt oli nano-kurkumiinravi korral madalam, mis näitab, et nano-kurkumiin võib olla ohutum kui selle vaba vorm. Toetuseks näitasid Lee et al.47 nano-kurkumiini kasutamise bioohutust.

Käesolevas uuringus suurendasid kurkumiin ja nano-kurkumiin toorvalgu ja lipiidide sisaldust kala kehas. Samamoodi parandas toidulisand kurkumiiniga 50–200 mg kg-1 dieedil märkimisväärselt toorlipiidide ja valkude ladestumist Niiluse tilapia lihastes23. See võib olla seotud soolestiku mikrobiota reguleerimisega, mis suurendas toitainete tõhusat kasutamist23. Teine selgitus oleks kurkumiini kasulik mõju kalade seedeensüümide, sealhulgas trüpsiini, lipaasi ja amülaasi aktiivsusele22. Lisaks aeglustavad negatiivselt laetud osakesed, nagu nano-kurkumiin, seerumivalkude adsorptsioonikiirust, mille tulemuseks on pikem poolväärtusaeg kui positiivselt laetud osakestel48. See võib seletada, miks nano-kurkumiini sisaldavatel kalatoidudel oli kõrgem toorvalgusisaldus kui kalaga toidetud vaba kurkumiini dieedil.

Maksaensüümide (nt ALT ja ASAT) aktiivsuse suurenemine on maksakahjustuse bioloogiline marker49,50. Käesolevas uuringus langesid ALT ja AST tasemed nano-kurkumiini rühmades kas enne või pärast kuumastressi ja teatud määral vaba kurkumiini rühmas, mis näitab nano-kurkumiini eeliseid (see oli selles arutelus varem õigustatud ). Sarnaselt võib kurkumiin ära hoida vesinikperoksiidi poolt indutseeritud hepatotoksilisust rottidel ja vähendada ALT ja AST ensüümide taset51. Veelgi enam, katsetulemused süsiniktetrakloriidist (CCl4) põhjustatud fibroosiga hiirtel näitasid, et nano-kurkumiin vähendas oluliselt ALAT ja AST taset 52. Seega näitab kurkumiini võime vähendada mõningaid veremarkereid (nt ALT ja AST) selle võimet olla antibakteriaalne. -põletikuaine maksakahjustuse ajal53.

Vaatamata kurkumiini kaitsvale toimele maksakahjustuse vastu selles uuringus mõõdukas kontsentratsioonis (100 mg kg-1 dieet), ilmnesid kõrvaltoimed kõrgemal kontsentratsioonil (200 mg kg-1 dieet). Sama mustrit järgides näitas kurkumiin kontsentratsioonist sõltuvat toimet ka hiidkarpkalal (Cyprinus carpio), mis kannatas CCl-indutseeritud maksakahjustuse all54. Sarnaselt leiti, et kurkumiinil on isaste rottide alkohoolse maksakahjustuse korral kahekordne toime sõltuvalt kontsentratsioonist, kuna selle kaitsev toime saavutati ainult madala kontsentratsiooni korral, kuid maksakahjustuse kiirenemist täheldati suurema kontsentratsiooni korral 55. rotid näitasid, et kõrge kontsentratsioon kurkumiini pikaajalisel tarbimisel võib vähendada kehakaalu, kiirendada oksüdatiivset stressi ja põletikku ning stimuleerida maksakahjustusi, suurendades samal ajal AST ja -GGT taset56.

Kurkumiini kahekordne toime võib olla seotud selle võimega stimuleerida heemoksüdaasi -1 (HO-1) mittetoksilistes ja toksilistes kontsentratsioonides ning HO-1 indutseerimine on seotud reaktiivsed hapniku liigid (ROS), mis viitab põhjuslikule seosele57. Samamoodi leidsid Cao et al.58, et madalamates kontsentratsioonides on kurkumiinil kasulik toime antioksüdantse toime esilekutsumisega; kõrgemad kontsentratsioonid suurendavad aga raku ROS-i taset, mille tulemuseks on oksüdatiivne DNA kahjustus inimese hepatoomi G2 rakkudes.

Kuumusestress tõstab stressinäitajaid, nagu kortisooli ja glükoosi taset. Praeguses uuringus vähendas kurkumiini (välja arvatud 200 mg kg-1 dieedi suur annus) või nano-kurkumiini lisamine tilapia dieeti nii glükoosi kui ka kortisooli taset kas enne või pärast kuumastressi. Parimad kortisoolitasemed tuvastati CN50 ja CN100 juures. Seda õigustab ilmselt kurkumiini kui polüfenooli olemus. On näidatud, et polüfenoolid parandavad stressinäitajaid, kortisooli ja glükoosi59,60). Neid toimeid võib seostada ka kurkumiini oksüdatsioonivastaste omadustega, mis on leitud, et see kõrvaldab lipiidradikaalid rakumembraanist ja muutub fenoksüülradikaaliks14,61. Lisaks alandab kurkumiin maksa glükoosisisaldust, suurendades glükoosi omastamist GLUT2, GLUT3 ja GLUT4 geeniekspressioonide ülesreguleerimise kaudu62. Toetuseks näitasid Wei et al.63, et toiduga saadav kurkumiin vähendas sigadel stressist põhjustatud kortisooli taset oluliselt kolmandiku võrra.

Kuid selles uuringus viis kurkumiini kõrgem kontsentratsioon (200 mg kg-1 dieet) kõrgema kortisooli tasemeni võrreldes teiste ravimeetoditega, sealhulgas kontrollrühmaga. Paralleelselt tootis C200 kõrgemat glükoosisisaldust, mis oli sarnane kontrollrühma omale. Sama mõju ilmnes munakanadel, kus kurkumiini suuremad annused ei vähendanud kortisooli taset võrreldes madalamate kontsentratsioonidega, mis vähendasid kortisooli taset enne või pärast kokkupuudet kõrgel temperatuuril 64. Autorid seostasid seda mõju kurkumiini kahetoimelise potentsiaaliga, kuna see võib sõltuvalt annusest toimida antioksüdandina ja/või oksüdeerijana65. Peroksiidide kõrge kontsentratsioon suurendab rakke ja kudesid kahjustava ROS-i vabanemist65.

Selles uuringus ei mõjutanud eksperimentaalsed dieedid hematoloogilisi näitajaid, välja arvatud C200, mis andis teiste eksperimentaalsete dieetidega võrreldes kõrgemaid leukotsüüte ja madalamaid neutrofiile. Kõrgenenud leukotsüütide arv kõrge kurkumiinisisaldusega (200 mg kg-1 dieet) võib rõhutada kalade stressirohket seisundit selle kontsentratsiooni juures. Leukotsütoos on otseselt proportsionaalne stressi raskusastmega ja stressi kahjustusega, mis seejärel käivitab immuunkaitsesüsteemi 66,67.

Temperatuur mõjutab fsh68 hematoloogilisi parameetreid. Sellega seoses tõusis pärast kuumastressi trombotsüütide, MCV, MCH, leukotsüütide ja neutrofiilide arv, samal ajal kui lümfotsüütide arv vähenes, ja praeguses uuringus ei mõjutanud teisi vereparameetreid. Toetuseks teatasid Grzelak jt69 märkimisväärsest lümfopeeniast ja neutrofiiliast ägeda stressi all kannatavatel sebrakaladel (Danio rerio) võrreldes stressita või kontrollkaladega. Lisaks põhjustab termiline stress hüpoksiat või anoksiat 70, 71 ja sellest mõjust teatati käesolevas uuringus. Omakorda leiti, et hüpoksia suurendab leukotsüütide, trombotsüütide ja neutrofiilide arvu ning vähendab lümfotsüütide arvu punases tilapia 72 puhul. See võib olla seotud kortisooli 72 kõrgenenud tasemega. Neutrofiilia ja lümfopeenia ilmnesid pärast ravi kortisooliga. karpkalal (C. carpio L.)73. Karpkala (Carassius carassius) tekitas pärast stressi allutamist veres suure neutrofiilide ja lümfotsüütide suhte, mis on tihedalt seotud glükokortikoidide kõrgenenud tasemega 74.

Immunoglobuliin M ja komplemendid (C3 ja C4) on kalade kaasasündinud immuunsüsteemi peamised komponendid ning need on immuunsüsteemi kaitse esimeste liinide hulgas ja mängivad olulist rolli kalade tervise kaitsmisel75–78. IgM ja komplemendid mängivad olulist rolli loomakeha kaitsmisel infektsioonide eest stressi ajal, samuti apoptootiliste ja vigastatud rakkude neelamise soodustamisel79–82. Tegelikult suurenes käesolevas uuringus enne ja pärast kuumastressi IgM, C3 ja C4 tase kurkumiini lisamisega toidule. Veelgi enam, nanokurkumiin näitas nende näitajate paremat paranemist kui vaba kurkumiin. Siin esitatud tulemused IgM, C3 ja C4 kohta toovad esile kaks fakti: kurkumiini madal annus on parem ja nanopreparaat on tõhusam (mida selles arutelus varem õigustati). Toetuseks indutseeris kurkumiin Niiluse tilapia kaasasündinud immuunvastuse annuses 50 mg kg-1 dieedi, kuid kõrgematel tasemetel oli kasv pärsitud23. Käesolevas uuringus leiti, et IgM, C3 ja C4 tase tõusis temperatuuri tõustes, mis näitab põletikuvastaste ainete tootmise stimuleerimist, et vähendada koekahjustusi. Seda toetavad käesoleva uuringu seerumi maksaensüümide (ALT ja AST) tulemused. Teadaolevalt põhjustab kuumastress kaladel koekahjustusi ja oksüdatiivset stressi; seega põhjustab see apoptoosi ja rakusurma83–85. Lühiajaline äge kuumastress viib C3 ja C486 ülesreguleerimiseni. Lisaks on komplemendi süsteemi puudulikkus suurendanud veresoonte kahjustusi, veresoonte läbilaskvust ja angioödeemi 87.

Niiluse tilapia puhul täheldati temperatuuri tõusuga (18, 23, 28, 33 kraadi) plasma IgM taseme järkjärgulist tõusu, välja arvatud kõrgeim temperatuur10. Samamoodi suurendas meriahven (Dicentrarchus labrax) kasvatamine kõrgel temperatuuril (23 kraadi) nende IgM taset võrreldes kalade kasvatamisega 17 kraadi 88 juures. Vastupidi, teised uuringud näitasid, et HS alandas fsh89-s IgM, C3 ja C4 taset. 91. See lahknevus võib olla põhjendatud kuumastressi kestusega, kus IgM, C3 ja C4 tasemed tõusevad ägeda stressi korral, kuid vähenevad kroonilise stressi korral9, 10. Nüri latikas (Megalobrama amblycephala Yih) näitas pärast 6-tunnist kuumastressiga kokkupuudet alternatiivse komplemendi aktiivsuse ja IgM taseme tõusu, mis vähenes pärast 12 tundi 9.

Kokkuvõtteks võib öelda, et nano-kurkumiin on parem kui vaba kurkumiin Niiluse tilapia kasvuvõime, stressinäitajate, mittespetsiifilise immuunsuse ja kuumastressikindluse parandamisel. Nano-kurkumiini toidulisand 50 või 100 mg kg-1 dieedil oli tõhus sooritusvõime parandamisel ja kuumastressi negatiivsete mõjude leevendamisel, samas kui 100 või 200 mg kg-1 dieedi annused parandasid Niiluse tilapia kasvuvõimet. . Seega oli 100 mg kg-1 dieedi annus efektiivne nii kasvuvõime kui ka kuumakindluse jaoks.

Andmete kättesaadavus

Kõik selle uuringu käigus loodud või analüüsitud andmed sisalduvad selles avaldatud artiklis.

Viited

1. Wang, M. & Lu, M. Tilapia polükultuur: ülemaailmne ülevaade. Akvakult. Res. 47, 2363–2374 (2016).

2. FAO (ÜRO Toidu- ja Põllumajandusorganisatsioon). 2020. Globaalne vesiviljelustoodang 1950–2020.

3. Bao, JW et al. Vere biokeemia, rasvhapete koostis ja mikroRNA-de ekspressioon kuumastressi vastused geneetiliselt täiustatud tilapia (Oreochromis niloticus) korral. J. Term. Biol. 73, 91–97 (2018).

4. El-Sayed, AFM Tilapia Culture 2nd end, 348 (Elsevier/Academic Press, 2020).

5. Dawood, MAO, Eweedah, NM & Elbialy, ZIA Dieetnaatriumbutüraat parandas kuumastressiga kokkupuutunud Niiluse tilapia (Oreochromis niloticus) verestressi biomarkereid, kuumašokivalke ja immuunvastust. J. Term. Biol. 88, 102500 (2020).

6. Bagath, M. et al. Kuumastressi mõju piimaveiste immuunsüsteemile. Rev. Res. Vet. Sci. 126, 94–102 (2019).

7. Chu, GM & Song, YM Nuumsigade kasvunäitajad, vereomadused ja immuunvastused erinevatel aastaaegadel. Aasia J. Anim. Vet. Adv. 8(5), 691–702 (2013).

8. Das, R. et al. Kuumusestressi mõju piimaloomade tervisele ja jõudlusele: ülevaade. Vet. Maailm. 9, 260–268 (2016).

9. Zhang, C.-N. et al. Fruktooligosahhariidi mõju immuunreaktsioonile, antioksüdantide võimele ning HSP70 ja HSP90 ekspressioonile tömbi latika (Megalobrama amblycephala Yih) kõrge kuumastressi korral. Vesiviljelus 433, 458–466 (2014).

10. Dominguez, M., Takemura, A., Tsuchiya, M., & Nakamura, S. Erinevate keskkonnategurite mõju tsirkuleerivatele immunoglobuliinide tasemetele Niiluse tilapia, Oreochromis niloticus'e korral. Vesiviljelus 241, 491e500 (2004).

11. Galina, J., Yin, G., Ardo, L. & Jeney, Z. Te use of immunostimulating herbs in fish: An overview of research. Fish Physiol, Biochem. 35, 669–676 (2009).

12. Vallejos-Vidal, E., Reyes-López, F., Teles, M. & MacKenzie, S. Te vastus fsh to immunostimulant diets. Fish Shellfish Immunol. 56, 34–69 (2016).

13. Lee, WH et al. Kurkumiin ja selle derivaadid: nende rakendamine neurofarmakoloogias ja neuroteaduses 21. sajandil. Curr. Neuropharmacol. 11, 338–378 (2013). 14. Ak, T. Kurkumiini antioksüdantsed ja radikaale püüdvad omadused. Chem. Biol. Suhelda. 174, 27–37 (2008).

15. Aggarwal, BB & Harikumar, KB Kurkumiini, põletikuvastase aine, potentsiaalsed terapeutilised toimed neurodegeneratiivsete, kardiovaskulaarsete, kopsu-, metaboolsete, autoimmuunsete ja neoplastiliste haiguste vastu. Int. J. Biochem. Cell Biol. 41, 40–59 (2009).

16. Yuan, J., Liu, R., Ma, Y., Zhang, Z. & Xie, Z. Kurkumiin nõrgendab hingamisteede põletikku ja hingamisteede vormimist, inhibeerides NF-kB signaaliülekannet ja COX-2 sigaretisuitsus. indutseeritud KOK-i hiirtel. Põletik 41, 1804–1814 (2018).

17. Yonar, EM, Yonar, SM, İspir, Ü., Ural, M. & Ş.,. Kurkumiini mõju hematoloogilistele väärtustele, immuunsusele, antioksüdantide seisundile ja vikerforelli (Oncorhynchus mykiss) resistentsusele Aeromonas salmonicida subsp. Akromogeenid. Fish Shellfish Immunol. 89, 83–90 (2019).

18. Leya, T. et al. Kurkumiiniga täiendatud dieedi mõju Cirrhinus mrigala kasvule ja mittespetsiifilistele immuunparameetritele Edwardsiella tarda nakkuse vastu. Int. J. Curr. Microbiol. 6, 1230–1243 (2017).

19. Negi, PS, Jayaprakasha, GK, Rao, LJM & Sakariah, KK Kurkumiõli antibakteriaalne toime: kurkumiini valmistamise kõrvalsaadus. J. Agric. Food Chem. 47, 4297-4300 (1999).

20. Mandal, MNA et al. Kurkumiin kaitseb võrkkesta rakke valguse ja oksüdatiivse stressi poolt põhjustatud rakusurma eest. Vaba Rad. Biol. Med. 46, 672–679 (2009).

21. Prasad, S., Gupta, SC, Tyagi, AK & Aggarwal, BB Kurkumiin, kuldse vürtsi komponent: voodi kõrvalt pingile ja tagasi. Biotehnoloogia. Adv. 32, 1053–1064 (2014).

22. Jiang, J. et al. Toidu kurkumiini lisamise mõju ristikarpkala Carassius auratus kasvuvõimele, soolestiku seedeensüümide aktiivsusele ja antioksüdantsele võimele. Vesiviljelus 463, 174–180 (2016).

23. Mahmoud, HK, Al-Sagheer, AA, Reda, FM, Mahgoub, SA & Ayyat, MS Kurkumiini toidulisandi mõju kasvule, immuunsusele, antioksüdantide seisundile ja resistentsusele Oreochromis niloticuse Aeromonas hydrophila suhtes. Vesiviljelus 475, 16–23 (2017).

24. Umamaheswari, M. & Krishnamurthy, R. Kurkumiini (Curcuma longa) immunomoduleeriv toime magevee söödavale kalale Catla catla (Hamilton-Buchanan). Int. J. Adv. Sci. Res. Manag. 3, 115–118 (2018).

25. García-Pérez, OD et al. Konjugeeritud linoolhappe ja kurkumiini mõju kasvuvõimele ja oksüdatiivse stressi ensüümidele Vaikse ookeani valgete krevettide (Litopenaeus vannamei) aflatoksiinidega söödas. Akvakult. Res. 51, 1051–1060 (2020).

26. Li, L., Zhang, Z. & Huang, Y. Integreeriv transkriptoomianalüüs ja signaaliradade avastamine, mis on seotud kurkumiini kaitsva toimega tilapia hepatotsüütides oksüdatiivse stressi vastu. Aquat. Toksikool. 224, 105516 (2020).

27. Muller, RH & Keck, CM Biotehnoloogiliste ravimite tarnimise väljakutsed ja lahendused – ravimite nanokristalltehnoloogia ja lipiidide nanoosakeste ülevaade. J. Biotechnol. 113, 151–170 (2004).

28. Mythri, RB, Jagatha, B., Pradhan, N., Andersen, J. & Bharath, MS Mitokondriaalse kompleksi I pärssimine Parkinsoni tõve korral: kuidas saab kurkumiin mitokondreid kaitsta? Antioks. redokssignaal. 9, 399–408 (2007).

29. Sahni, JK, Baboota, S. & Ali, J. Nanofarmaatsiatoodete paljulubav roll ravimite kohaletoimetamisel. Pharm. Ajad. 43, 16–18 (2011).

30. Zou, P., Helson, L., Maitra, A., Stern, ST & McNeil, SE Polymeric curcumin nanoparticle farmakokinetics and metabolism in bile duct cannulated rots. Mol. Farmaatsia. 10, 1977–1987 (2013).

31. Jiang, Y., Chekuri, S., Fang, RH & Zhang, L. Engineering biological interactions on the nanoscale. Curr. Arvamus. Biotehnoloogia. 55, 1–8 (2019).

32. Marchiori, MS et al. Kurkumiin külma stressiga vuti toidus parandab jõudlust ja munade kvaliteeti. Anim. Feed Sci. Technol. 254, 114–192 (2019).

33. Dhivya, R., Rajendran, J. & Rajasekaran, M. PH-tundlik kurkumiin / ZnO nanokomposiit ravimite kohaletoimetamiseks. Adv. Mater. Lett. 6, 505–512 (2015).

34. AOAC (Ametlike Analüütiliste Chemistide Ühendus). Ametlikud analüüsimeetodid. AOAC, Arlington, Virginia (1990).

35. Kotid, DB süsivesikud. In: Tietz NW (ed) Kliinilise keemia alused. 4. väljaanne WB Saunders, Philadelphia, lk 351–374 (1996).

36. Rosalki, S. Neerupealiste funktsiooni biokeemiline testimine. Int. J. Clin. Harjuta. 52, 189–191 (1998).

37. Bergmeyer, HU, Horder, N. & Rej, R. Heaks kiidetud soovitus IFCC meetodite kohta ensüümide katalüütilise kontsentratsiooni mõõtmiseks. Osa 2. IFCC meetod aspartaataminotransferaasi jaoks. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 24, 497–510 (1986).

38. ECCLS. L: aspartaataminotransferaasi (EC 2.6.1.1, ASAT) katalüütilise aktiivsuse kontsentratsiooni määramine seerumis. Klin. Chem. Miti. 20, 198–204 (1989).

39. Tiez, NW, toim. Laboratoorsete testide kliiniline juhend, 3. väljaanne. Philadelphia: WB Saunders Company 354–357 (1995).

40. Midhun, SJ et al. Seedeensüümide, GH, IGF-1 ja IGF-2 geenide moduleerimine teleost, Tilapia (Oreochromis mossambicus) kurkumiiniga. Akvakult. Int. 24, 1277–1286 (2016).

For more information:1950477648nn@gmail.com