Kahevalentne nõrgestatud gripiviiruse elusvaktsiin kaitseb sigade H1N2 ja H3N2 kliiniliste isolaatide eest 2. osas

2.5. Ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs (ELISA)

Katteantigeenide valmistamiseks paljundati SD435 ja SD467 MDCK rakkudes ja puhastati sahharoosi gradiendi ultratsentrifuugimisega. Viiruste inaktiveerimine toimus, lisades viirusele 97% propiolaktooni kontsentratsioonis 1:1000 (maht/maht) (Thermo Fisher Scientific, AAB2319703). Seda segu loksutati temperatuuril 4 °C üleöö, inkubeeriti 37 °C juures kaks tundi, et hõlbustada -propiolaktooni hüdrolüüsi, seejärel hoiti kuni kasutamiseni temperatuuril -80 °C.

Antigeenid ja immuunsus on lahutamatud. Antigeen viitab mis tahes ainele, mida immuunsüsteem suudab ära tunda ja põhjustada immuunvastust, sealhulgas bakterid, viirused, kasvajarakud jne, samas kui immuunsus viitab organismi võimele reageerida nendele antigeenidele.

Antigeenide ja immuunsuse vahelist seost saab illustreerida lihtsa metafooriga: Nii nagu treenimine nõuab piisavat treeningut ja toidulisandeid, sõltub immuunsuse paranemine ka korduvast kokkupuutest antigeenide ja vastavate immuunrakkude ja immuunmolekulidega. toota. Kui immuunsüsteem puutub kokku antigeeniga, ründab see spetsiifilisi antikehi ehk immuunrakke koos mälurakkudega, et kaitsta meid uuesti nakatumise eest.

Teadus on kinnitanud, et heade elu- ja toitumisharjumuste kujundamine võib aidata parandada immuunsust. Näiteks võib puhtuse hoidmine, mittesuitsetamine, mõõdukas treening ja magamisharjumused aidata vähendada antigeenide, näiteks bakterite ja viiruste sissetungi. Samal ajal võib immuunsust parandada ka mõnede antioksüdantide, vitamiinide ja mineraalide rikaste toitude (nt juur- ja puuviljad, täisteratooted ja kala) söömine.

Lühidalt öeldes on seos antigeeni ja immuunsuse vahel väga tihe. Vaid korduva kokkupuute kaudu antigeenidega ja õigete eluviisidega saab immuunsust pidevalt parandada ning erinevaid haigusi ennetada ja ravida. Seetõttu peaksime säilitama positiivse hoiaku ja kujundama häid eluharjumusi, et end haiguste eest kaitsta. On näha, et peame oma immuunsust parandama. Cistanche võib aidata meil parandada oma immuunsust, sest Cistanche on rikas mitmesuguste antioksüdantsete ainete poolest, nagu C-vitamiin, karotenoidid jne. Need koostisosad võivad eemaldada vabu radikaale ja vähendada oksüdatiivset stressi, parandades immuunsüsteemi vastupanuvõimet.

Klõpsake cistanche deserticola toidulisand

Vaktsineerimisest ja nakatamisest põhjustatud swIAV-spetsiifiliste IgG tasemete mõõtmiseks võeti sea seerumit pärast esimest (20. päev) ja teist (30. päev) vaktsineerimist ning enne lahkamist (36. päev).

Puhastatud propiolaktooniga inaktiveeritud viirused SD435 (1 µg/mL) ja SD467 (2 µg/mL), lahjendatud karbonaat/vesinikkarbonaat kattepuhvris (pH 9,6) kanti Immulon-2 96- süvendiplaatidele temperatuuril 1{{ 12}}0 µL süvendi kohta (Thermo Labsystems, Ottawa, ON, Kanada, 3655) ja inkubeeriti üleöö temperatuuril 4 ◦C. Pärast üleöö inkubeerimist pesti kaetud plaate neli korda TBST-ga (0,1 M Tris, 0,17 M NaCl ja 0,05 protsenti Tween 20), millele lisati seerumi või BALF-i neljakordsed seerialahjendused. plaati kahes eksemplaris, millele järgneb kahetunnine inkubeerimine toatemperatuuril. Seerum lisati alglahjendusega 1:10 ja BALF lisati lahjendamata kujul. Igal plaadil võeti eelnevalt määratletud positiivsete kontrollseerumite proovid ning vastavad negatiivsed kontrollid, seerum ja BALF eelmises uuringus vaktsineerimata sigadelt [14].

Plaate pesti neli korda TBST-ga, misjärel kitse sigade IgG (H pluss L) fosfataasiga märgistatud afiinsuspuhastatud antikeha (1:5000) (Sigma Aldrich, SAB3700435) või hiire seavastane IgA (Serotec, MCA658) ( 1:300) lahjendati TBST-ga ja jäeti üheks tunniks toatemperatuuril inkubeerima. IgA ELISA-d töötati välja biotinüülitud kitse hiirevastaste IgG (H pluss L) antikehade (CALTAG, Burlingame, CA, USA, M30015) ja streptavidiini leeliselise fosfataasi lahuse (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA) lisamisega ühe tunni jooksul. toatemperatuuril.

Pärast inkubeerimist pesti nii IgG kui ka IgA plaate neli korda TBST-ga, millele lisati p-nitrofenüülfosfaadi substraat (PNPP) [10 mg/mL p-nitrofenüülfosfaadi di(tris)soola kristalliline (Sigma-Aldrich) Lisati 1% dietanoolamiini (Sigma-Aldrich), 0,5 mg/ml MgCl2 ja pH 9,8] (1 mg/ml) ja inkubeeriti toatemperatuuril kaks tundi.

Reaktsioon peatati 0,3 M etüleendiamiintetraäädikhappe (EDTA) lisamisega ja plaatidelt loeti spektrofotomeeter 405 nm juures, etalonlainel 490 nm. Proovi tiiter määratleti kui kõrgeim lahjendus, mille juures selle proovi OD oli kõrgem kui määratletud piirväärtus (teadaoleva negatiivse proovi keskmine OD pluss kahekordne standardhälve).

2.6. Viiruse neutraliseerimise (VN) test

MDCK rakud (3,5 × 104 uM) plaaditi 96-süvendiga plaatidele. Seerum ja BALF inaktiveeriti kuumusega 56 °C juures 30 minutit. Plaadile lisati neljakordselt seerumi ja BALF-i kahekordsed lahjendused ning 60 µL lahjendatud seerumit või BALF-i inkubeeriti 1 tund temperatuuril 37 °C 100 TCID50 sisaldava võrdse mahuga SD435 või SD456. Seejärel lisati MDCK rakkudele 100 ui segu ja tsütopatogeenne toime (CPE) dokumenteeriti 48 tundi ja 72 tundi pärast nakatumist (pi). Neutraliseeriva antikeha tiiter oli iga seerumiproovi kõrgeim lahjendus, mis kaitses rakke täielikult CPE eest vähemalt kahes süvendis 4-st.

2.7. Viiruse määramine

Pärast kogumist asetati kopsuproovid kohe jääle ja külmutati kuni töötlemiseni temperatuuril –80 ◦C. Töötlemiseks kaaluti iga kopsukude ja lisati 10-protsendiline (mass/maht) MEM-i, millele oli lisatud 1x antibiootikumi-mükootilist ainet (Thermo Fisher Scientific, 15240-062). Kopsukoe homogeniseeriti TissueLyser II-s (Qiagen, Hilden, Saksamaa) 30 Hz juures 5 minutit, millele järgnes tsentrifuugimine 5000 × g juures 10 minutit temperatuuril 4 °C. Homogeniseeritud supernatant koguti ja säilitati kuni edasise analüüsini temperatuuril –80 ◦C. Nina tampooniproove segati vorteksiga 15 sekundit ja tsentrifuugiti 1600 × g juures 25 minutit temperatuuril 4 °C. Supernatandid koguti ja säilitati kuni edasise analüüsini temperatuuril –80 ◦C. Viiruse tiitrid määrati TCID50 analüüsiga kopsude ja kvantitatiivse RT-PCR abil nina tampooniproovide jaoks.

2.8. RNA ekstraheerimine ja kvantitatiivne RT-PCR (qRT-PCR)

SD467 ja SD435 viiruse RNA tasemete määramiseks nina tampooniproovides pärast nakatamist viidi läbi qRT-PCR. Standardkõver tehti, kasutades teadaoleva tiitriga SD435 ja SD467 RNA-d. Lühidalt, RNeasy Plus Mini komplekti (Qiagen, Toronto, ON, Kanada, 74136) kasutati vRNA ekstraheerimiseks 200 µl ninapesust. RNA muundati cDNA-ks, kasutades universaalset gripipraimerit Uni12 ja SuperScript III transkriptaasi (Invitrogen, Burlington, ON, Kanada) [19]. qPCR viidi läbi kolmes eksemplaris StepOnePlusTM Real-Time PCR süsteemis (Applied Biosystems, CA, USA) Power SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems), 5 µL cDNA ja 1 µL 10 µM päri- ja tagurpidi praimeriga. PCR reaktsioonid viidi läbi anniilimistemperatuuril 58 °C 40 tsüklit. Kõik qPCR praimerite järjestused on saadaval nõudmisel.

2.9. Statistiline analüüs

Statistiline analüüs viidi läbi GraphPad Prism 8 tarkvara abil. Kasutati Mann-Whitney ja Kruskal-Wallise mitteparameetrilisi teste. Olulised erinevused on tähistatud tähega * (p < 0.05), ** (p < 0.01), *** (p < 0,001) või **** (p < 0,0001). ns=ei ole oluline.

3. Tulemus

3.1. Kahevalentse vaktsiiniga vaktsineerimine kaitses uute kliiniliste isolaatide eest

Mõõtsime füüsilist vastust nakatavatele viirustele ja viiruse replikatsiooni hingamisteedes, et hinnata kahevalentse vaktsiini kaitset nende uute kliiniliste isolaatide vastu. Temperatuuri registreeriti iga päev viie päeva jooksul pärast viirusnakkust kõigis rühmades. Sigadel, keda vaktsineeriti ja keda nakatati SD435 (H3N2) (MEM/SD435) või SD467 (H1N2) (MEM/SD467), ilmnes 1. päeval pärast viirusnakkust tüüpilist temperatuuritõusu, mille keskmine temperatuur oli 40,6 ◦ C ja 41,1 ◦ C vastavalt. Seda hüpet ei täheldatud vaktsineeritud rühmades, keda nakatati SD435 (Bivalent/SD435) või SD467 (Bivalent/SD467), mille keskmine temperatuur oli vastavalt 39,4 ◦C ja 39,6 ◦C. 2.–5. päeval pärast nakatamist oli nii vaktsineeritud kui ka vaktsineerimata rühmade temperatuur umbes 39 ◦C (joonis 2A).

Viis päeva pärast nakatamist tehti kõikidele sigadele lahkamine, nende kopsud eemaldati ja analüüsiti, et määrata kindlaks kahjustuste hulk. Bivalent/SD435 rühmas esines kahjustusi minimaalselt või üldse mitte, kopsukahjustuste mediaan oli 0,65 protsenti. MEM/SD435 rühmas esines oluliselt rohkem kahjustusi kui tema vaktsineeritud kolleegil, mediaan oli 5,1 protsenti (p=0,0025) (joonis 2B). Bivalent/SD467 rühmas oli seitsmest viiel siga vähe kahjustusi (<2%), one had minor lesions (3.75%), and one outlier had high lesions (31%), with a group median of 1.9%. Compared with the vaccinated group, the MEM/SD467 group had a higher degree of lesions with a median of 4.55% (p = 0.0417) (Figure 1C).

Kopsudes olid Bivalent/SD435 ja Bivalent/SD467 rühmad mõlemad madalad viiruse tiitrid, vastavalt 8,6 PFU/mL/gr ja 3.0 PFU/mL/gr. MEM/SD435 ja MEM/SD467 rühmades oli seevastu suurem viirusekogus, keskmised vastavalt 656,1 ja 9118,2 PFU/mL/gr (p=0.0025 mõlema jaoks) (joonis 3A, B). Sarnased suundumused ilmnesid ninatampoonide puhul. Bivalent/SD435 rühmas olid nasaalsed tiitrid madalad 1., 3. ja 5. päeval pärast nakatamist (dpc), samas kui MEM/SD435 rühmas olid tiitrid veidi kõrgenenud ja tõusid päevade edenedes (ns) (joonis 3C). Bivalent/SD467 rühmas olid nasaalsed tiitrid samuti madalad, keskmiselt alla 5 PFU/ml 1. ja 5. päeval ning 10,0 PFU/ml 3. päeval pärast nakatamist. Tiitrid olid MEM/SD467 rühmas igal päeval kõrgemad, keskmiselt 4123,6 PFU/mL/gr 1dpc (p=0,0278), 77233,1 PFU/mL/gr (p=0,0009) 3dpc ja 65,2 PFU/mL/gr 5dpc (ns) puhul (joonis 3D).

Kokkuvõttes näitavad need tulemused, et kahevalentne vaktsiin pakkus märkimisväärset kaitset väljakutsetüvede vastu, vähendades kopsukahjustusi ja viiruse replikatsiooni, mis on seotud nende kahe swIAV isolaadiga nakatumisega kopsudes ja ninakäikudes.

3.2. Kahevalentne vaktsiin kutsub esile immuunvastuse väljakutsetüvede vastu

Mõõtsime mõlema nakatava tüve antikehavastust seerumis ja kopsuspetsiifiliselt pärast esmavaktsineerimist kahevalentse vaktsiiniga. Sigadelt koguti seerum pärast esimest vaktsiini (2. päev0) ja pärast teist vaktsiini (30. päev). Viirusspetsiifilise IgG antikeha vastuse mõõtmiseks seerumis kasutati püüdmisantigeenidena väljakutseviiruseid SD435 (H3N2) ja SD467 (H1N2). SD435 puhul ei ilmnenud pärast esimest vaktsineerimist (20. päev) olulist erinevust antikehade tiitrite vahel MEM-i ja kahevalentse vaktsineeritud rühmas. SD467 vastaste antikehade tiitrid olid aga 20. päeval vaktsineeritud rühmas oluliselt kõrgemad (p=0.0321). Pärast teist vaktsiini (31. päev) olid antikehade tiitrid nii SD435 kui ka SD467 vastu vaktsineeritud rühmas oluliselt kõrgemad kui MEM-i näidisvaktsiini rühmades (p < 0,0001) (joonis 4A, B). Täpsemalt, püüdmisantigeeni SD435 vastu olid seerumi IgG tiitrid MEM-i näidisvaktsineeritud rühmas päevadel 20 ja 30 keskmiselt 52, samas kui kahevalentse vaktsiini rühmas olid need 311 (20. päev) ja 4852 (30. päev) (joonis 3A). SD467 vastu olid seerumi IgG tiitrid valevaktsineeritud MEM-rühmas 39 (20. päev) ja 38 (30. päev), samas kui kahevalentse vaktsiini rühmas olid need 219 (20. päev) ja 3509 (30. päev) (joonis 3B).

Sarnaseid suundumusi täheldati ka neutraliseerivate antikehade tiitrite mõõtmisel seerumis kahe provotseeriva tüve suhtes. Jällegi ei ilmnenud olulist erinevust neutraliseerivate antikehade tiitrite vahel MEM-i ja kahevalentse SD435 vastu vaktsineeritud rühmas pärast ühte vaktsiiniannust (2. päev 0) ​​(joonis 5A, B). SD467 vastane antikehade tase oli 2. päeval 0 pärast ühte vaktsiini oluliselt kõrgem (p=0.0069). Mõlema viiruse vastane antikehade tiiter tõusis kahevalentse vaktsiini rühmas pärast teist annustamispäeva 30) (p < 0,0001). MEM-i näidisvaktsineeritud rühma tiitrid nakatati SD435-ga keskmiselt 1 (päev 20) ja 3 (päev 30), samas kui kahevalentse rühma tiitrid olid keskmiselt 10 (da20) ja 77 (päev 30) (joonis 5A). SD467-ga nakatatud MEM-vaktsineeritud rühma tiitrid olid keskmiselt 0 (päev 20) ja 2 (päev 30), samas kui kahevalentse vaktsiini rühma tiitrid olid keskmiselt 10 (päev 20) ja 54 (päev 30) (joonis 5B).

Pärast lahkamist (36. päev) koguti igalt sealt BALF, et saaks mõõta antikehade taset kopsudes. Viirusspetsiifilise IgA ja IgG vastuse mõõtmiseks kasutati püüdmisantigeenidena väljakutseviirusi SD435 ja SD467. SD435 vastu oli IgA tase MEM-i näidisvaktsiini rühmades keskmiselt 17, samas kui kahevalentse vaktsiini rühmas olid tiitrid oluliselt kõrgemad, keskmiselt 95 (p=0.0014) (Joonis 6A). SD467 puhul oli IgA tase näidisvaktsiini rühmas keskmiselt 18 ja kahevalentse vaktsiini rühmas 158 (p=0.0185) oluliselt kõrgem (joonis 6B). IgG osas olid SD435 vastased tiitrid MEM-i näidisvaktsiini rühmas keskmiselt 3, samas kui kahevalentses rühmas olid need oluliselt kõrgemad, keskmiselt 138 (p < 0,0001) (joonis 6C). SD467 vastaste IgG antikehade arv oli MEM-i näidisvaktsiini rühmades keskmiselt 16, samas kui kahevalentse vaktsiini rühmas olid need oluliselt kõrgemad, keskmiselt 259 (p < 0,0001) (joonis 6D).

Seoses neutraliseerivate antikehadega BALF-is olid suundumused sarnased IgA ja IgG ELISA-ga. SD435 vastu olid neutraliseerivate antikehade tiitrid MEM-i näidisvaktsiini rühmades tuvastamatud ja kahevalentse vaktsiini rühmas olid need keskmiselt 13,2 juures oluliselt kõrgemad (p < 0.0001) (joonis 7A). Sarnaselt olid SD467 suhtes spetsiifiliste antikehade tiitrid MEM-i näidisvaktsiini rühmades keskmiselt 0,7 ja kahevalentse vaktsiini rühmas keskmise tiitriga 10,9 (p=0,0002) (joonis 7B) oluliselt kõrgemad. Kokkuvõttes näitavad need andmed, et kahevalentse vaktsiini kaks annust kutsuvad esile tugeva süsteemse humoraalse vastuse, samuti lokaalse immuunvastuse kopsudes nende kahe mittehomoloogse kliinilise isolaadi vastu.

4. Arutelu

Varem näitasime, et elastaasist sõltuvad viirused SD191-R342V ja SD69.K345V olid sigadel täielikult nõrgestatud ja mittevirulentsed ning kaks vaktsineerimist selle kahevalentse LAlV-ga kutsusid esile tugeva immuunvastuse ja pakkusid kaitset homoloogse SD191-ga nakatumise eest ( H1N2) ja SD69 (H3N2) tüved [14). Selles praeguses uuringus tahtsime testida, kas kahevalentne vaktsiin peab in vivo vastu uuemate kliiniliste isolaatide vastu, mis on läbinud antigeense triivi. SD467, nagu SD191, kuulub Kanadas tekkinud antigeensesse rühma Ho{15}}, kuid see on omandanud peamistes antigeensetes kohtades arvukalt mutatsioone (12, 15). Samamoodi esindab SD435 H3N2 IV-E klastrit. mis esineb Lääne-Kanadas ja omab peamistes H3 antigeensetes saitides mitut aminohappe asendust võrreldes SD69-ga (17).

Kahevalentne LAlV vähendas märkimisväärselt kahjustusi vaktsineeritud sigadel, kui neid nakatati kas SD435 (H3N2) või SD467 (H1N2), ja hoidis ära temperatuuri tõusu, mida täheldati MEM (pilt) vaktsineeritud rühmades üks päev pärast nakatamist. See viis ka mõlema tüve viiruse replikatsiooni vähenemiseni kopsudes ja SD467 (H1N2) vähenemiseni ninatampooniproovides. Huvitaval kombel olid SD435 (H3N2) nasaalsed tiitrid madalad nii vaktsineeritud kui ka vaktsineerimata rühmades, hoolimata identsetest proovivõtumeetoditest, mis viitab sellele, et sellel tüvel ei pruugi olla ninakäikude jaoks nii palju tropismi. Rühma kõrvalekalduva sea puhul, kelle kopsukahjustuse skoor oli 31, ei näidanud temperatuuri mõõtmised nakatamise ajal hüppeid ja viiruse tiitrid kopsus olid alla 10 PFU/g/ml. Antikehade tase seerumis ja lokaalne kopsureaktsioon olid samuti samad, mis kõigil teistel vaktsineeritud sigadel. See paneb meid oletama, et kahjustused ei olnud gripiga seotud. Seroanalüüs näitas, et pärast kahte vaktsiiniannust tekkis mõlema tüve vastu tugev immuunvastus ja sama osutus paika lokaalse kopsuanalüüsi puhul. Antikehadele suunatud pinnaglükoproteiinid on IAV-nakkuse eest kaitsmisel ülimalt olulised, seega toetab vaktsineeritud sigadel leitud neutraliseerivate antikehade, samuti lgG ja lgA kõrge tase in vivo nähtud kaitset [20].

Inaktiveeritud täisviiruse (WIV) vaktsiinid on sigade jaoks traditsiooniliselt koos adjuvandiga kõige sagedamini saadaval olevad vaktsiinid. Neid peetakse ohutuks lähenemisviisiks, kuna puudub oht, et ringlevad tüved võivad sigalatesse ümber paigutada. Siiski on neil piiratud efektiivsus sobimatute tüvede vastu ja on näidatud, et need põhjustavad vaktsiiniga seotud tõhustatud hingamishäireid (VAERD), kui neid kasutatakse mittevastavate tüvede vastu. Nende efektiivsus väheneb ka emalt pärinevate antikehade (MDA) juuresolekul [4]. Põhja-Ameerikas kaubanduslikult saadaolevate ravimite hulka kuulub FluSure XP®, mis on USA-s saadaval neljavalentse preparaadina koos H1N1, H1N2 ja H3N2 klastritega IV-A ja IV-B [21]. Kanadas on saadaval Flusure XP® vanem koostis kahe H1N1 ja ühe H1N2 tüvega, mis eraldati aastatel 2000–2005 [22]. Mõlemas Põhja-Ameerika riigis on saadaval FluSure® Pandemic, monovalentne vaktsiin, mis koosneb H1N1pdm09 tüvest, samuti Pneumostar SIV Complete (Elanco, Greensboro, North Carolina, US Inc.), mis sisaldab H1N1, H1N2 ja H3N2 ning Pneumostar SIV koos H1N1 ja H3N2 alatüüptüvedega (GOC, USDA) [23,24]. Need kaubanduslikult saadavad vaktsiinid moodustavad umbes 50 protsenti sigade gripi vaktsiinidest Põhja-Ameerikas ja ülejäänud 50 protsenti vaktsineerimistest on autogeensed vaktsiinid [4].

Alternatiivsete vaktsiiniplatvormide osas litsentsiti USA-s rekombinantne alfaviirusest tuletatud replikoniosakeste vaktsiin [4]. See vaktsiiniplatvorm kasutab muudetud genoomiga alfaviirust, kus viiruse struktuurigeenid asendatakse valitud geeniga, mis muudab alfaviiruse replikatsiooni defektseks. See RNA on isepaljunev, nii et vaktsiiniplatvorm viib huvipakkuva geeni kõrge ekspressioonini ning gripi puhul on antigeenidena testitud nii HA-d kui ka nukleoproteiine (NP) [25]. Uuringud on näidanud, et selle platvormi kasutamine kaitseb antigeenselt HA-ga sobitatud ja mittevastavate väljakutsete, samuti NP-ga mittevastavate tüvede eest, kuigi platvorm ei suutnud kaitsta MDA-de esinemise eest.

USA Põllumajandusministeerium (USDA) kiitis esimese sigade gripi LAIV-i heaks 2017. aastal. Ingelvac Provenza™ on kahevalentne H3N2 ja H1N1 vaktsiin, mille HA ja NA on kahest USA-s isoleeritud tüvest, mida väljendatakse TX98 selgrool, nõrgestatud mittestruktuurse valgu (NS1) kärpimise tõttu [14,26]. LAIV-id jäljendavad looduslikku infektsiooni ja suurendavad nina kaudu manustatuna ülemiste hingamisteede limaskesta immuunsust. Kui inaktiveeritud vaktsiinid põhjustavad peamiselt süsteemsete IgG antikehade tootmist, võivad nõrgestatud elusvaktsiinid indutseerida limaskesta IgA hingamisteedes ning suurendada raku poolt vahendatud vastust, kuna immuunsüsteem puutub kokku sisemiste gripivalkudega, mis sisaldavad rohkem T-d. raku epitoobid [27]. See tagab parema kaitse sobimatute tüvede eest.

Need on näidanud osalist kaitset MDA-de juuresolekul. Terved IgG antikehad on enam levinud alumistes hingamisteedes ja polümeersed IgA antikehad sigade ülemistes hingamisteedes, enamasti dimeeridena [28]. Neid antikehi toodetakse lokaalselt ja transporditakse läbi epiteeliraku kihi, kus nad jäävad limaskestale, ja seda aitab sekretoorne komponent, mis takistab proteaaside lagunemist [28, 29]. IgA antikehad on adaptiivse immuunsüsteemi esimene kaitseliin sissetulevate patogeenide vastu, blokeerides viiruse seondumist siaalhappe retseptoritega [30]. Polümeersed IgA antikehad on laiemalt ristreaktiivsed kui monomeersed IgG antikehad, mis võib olla tingitud multivalentsest seondumisest [31]. Uuringud on samuti näidanud, et need antikehad võivad takistada äsja moodustunud IAV vabanemist nakatunud rakkudest palju tõhusamalt kui IgG või monomeerne IgA, mida võib leida sea seerumis, mis viitab sellele, et IgA polümeerne struktuur on kasulik viiruse järglaste ristsidumiseks. nakatunud rakupinnal ekspresseeritud HA-le [31–33]. Lokaalne IgA antikehavastus on seetõttu IAV-ga nakatumise vastase kaitse lahutamatu osa ja on oletatud, et see korreleerub inimeste kaitsega [34].

LAIV-ga seotud risk on aga tsirkuleerivate tüvede ümberpaigutamise võimalus. USA-s läbiviidud fülogeneetilises uuringus leiti ringluses uusi tüvesid, mis olid segunenud Ingelvac Provenza™-s sisalduvate vaktsiinitüvedega [26]. Elastaasist sõltuv LAIV platvorm vähendab seda riski, kuna elastaasi valku on sigade hingamisteedes väga vähe, mistõttu on vaktsiiniviiruste replikatsioon väga piiratud, nagu ka ümbersorteerimise toimumise ajaraam. Tulevased uuringud hõlmavad selle kahevalentse vaktsiini ümbersorteerimise riski hindamist, samuti seda, kuidas see vaktsiin MDA-de juuresolekul vastu peab. Samuti oleks huvitav testida selle vaktsiini rakuvahendatud vastust, kuna see on LAIV üks peamisi eeliseid. Kokkuvõtteks võib öelda, et kahevalentne elastaasist sõltuv LAIV laiendas kaitset Lääne-Kanadas leitud uutele kliinilistele isolaatidele ja täidaks mõned lüngad seagripi vaktsiinide turul.

Autori kaastööd:

kontseptualiseerimine, YZ; metoodika, YZ ja LA; formaalne analüüs, LA; uurimine, LA ja UB-C.; ressursid, SD; kirjutamine – algse eelnõu ettevalmistamine, LA; kirjutamine – ülevaatamine ja toimetamine, YZ, UB-C ja SD; järelevalve, YZ; rahastamise omandamine, YZ Kõik autorid on käsikirja avaldatud versiooni läbi lugenud ja sellega nõustunud.

Rahastamine:

Seda uuringut rahastas Saskatchewani põllumajandusministeeriumi Põllumajanduse Arengufond (ADF). LA-d toetab osaliselt Saskatchewani ülikooli rahvatervise kooli vaktsiinoloogia ja immunoteraapia (V&I) stipendium. VIDO saab tegevustoetust Saskatchewani valitsuselt Innovation Saskatchewani ja Põllumajandusministeeriumi kaudu ning Kanada Innovatsioonifondilt peamiste teadusalgatuste kaudu oma CL3 rajatise (InterVac) jaoks.

Institutsioonilise ülevaatenõukogu avaldus:

Ei kohaldata.

Andmete kättesaadavuse avaldus:

Kõik selle uuringu andmed ja analüüsid on esitatud selles artiklis.

Tänuavaldused:

Täname VIDO veterinaararste ja loomatehnikuid kogu meie loomkatsete jaoks tehtud loomtööde eest. See teos avaldatakse VIDO direktori loal käsikirjade sarjana #1005.

Huvide konfliktid:

Autorid ei kinnita huvide konflikti.

Viited

Webster, RG Gripiviirus: liikidevaheline ülekandumine ja olulisus järgmise inimpandeemia tekkeks. Arch. Virol. Suppl. 1997, 13, 105–113. [PubMed]

2. Li, Y.; Robertson, I. Sigade gripi epidemioloogia. Anim. Dis. 2021, 1, 21. [CrossRef] [PubMed]

3. Donovan, T. Gripi roll kasvavate sigade jõudluses; Minnesota Ülikool: Minneapolis, MN, USA, 2005.

4. Gracia, JCM; Pearce, DS; Masic, A.; Balasch, M. Sigade gripiviirus: epidemioloogia, väljakutsed ja vaktsineerimisstrateegiad. Esiosa. Vet.-Sci. 2020, 7, 647. [CrossRef] [PubMed]

5. Ma, W. Sigade gripiviirus: hetkeseis ja väljakutse. Virus Res. 2020, 288, 198118. [CrossRef]

6. Suzuki, Y.; Ito, T.; Suzuki, T.; Holland, RE; Chambers, TM; Kiso, M.; Ishida, H.; Kawaoka, Y. Siaalhappe liigid kui A-gripiviiruste peremeesorganismi määraja. J. Virol. 2000, 74, 11825–11831. [CrossRef]

7. Sun, H.; Xiao, Y.; Liu, J.; Wang, D.; Li, F.; Wang, C.; Li, C.; Zhu, J.; Song, J.; Sun, H.; et al. Levinud Euraasia linnusarnane sigade gripiviirus H1N1, mille 2009. aasta pandeemilised viirusgeenid soodustavad inimeste nakatumist. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2020, 117, 17204–17210. [CrossRef]

8. Henritzi, D.; Petric, PP; Lewis, NS; Graaf, A.; Pessia, A.; Starick, E.; Breithaupt, A.; Strebelow, G.; Luttermann, C.; Parker, LMK; et al. Euroopa kodusigade populatsioonide seire tuvastab potentsiaalselt zoonootilise sigade gripi A viiruste reservuaari. Rakuperemees mikroob 2020, 28, 614–627.e6. [CrossRef]

9. Vincent, AL; Ma, W.; Lager, KM; Janke, BH; Richt, JA Sigade gripiviirused: Põhja-Ameerika perspektiiv. Adv. Virus Res. 2008, 72, 127–154.

10. Rajao, DS; Anderson, TK; Kitikoon, P.; Stratton, J.; Lewis, NS; Vincent, AL Kaasaegsete sigade H1 gripiviiruste antigeenne ja geneetiline areng Ameerika Ühendriikides. Viroloogia 2018, 518, 45–54. [CrossRef]

11. Mena, I.; I Nelson, M.; Quezada-Monroy, F.; Dutta, J.; Cortes-Fernández, R.; Lara-Puente, JH; Castro-Peralta, F.; Cunha, LF; Trovão, NS; Lozano-Dubernard, B.; et al. 2009. aasta sigade H1N1 gripipandeemia päritolu Mehhikos. Elife 2016, 5, e16777. [CrossRef]

12. Nelson, MI; Culhane, MR; Trovão, NS; Patnayak, DP; Halpin, RA; Lin, X.; Shilts, MH; Das, SR; Detmer, SE Gripi A (H1) viiruste teke ja areng sigadel Kanadas ja Ameerika Ühendriikides. J. Kindral Virol. 2017, 98, 2663–2675. [CrossRef] [PubMed]

13. Chauhan, RP; Gordon, ML Süstemaatiline ülevaade, mis analüüsib gripiviiruste levimust ja levikut sigade populatsioonis kogu maailmas. Pathogens 2020, 9, 355. [CrossRef]

14. Landreth, S.; Detmer, S.; Gerdts, V.; Zhou, Y. Kahevalentne elus nõrgestatud gripiviiruse vaktsiin kaitseb sigade H1N2 ja H3N2 viirusnakkuse eest. Vet. Microbiol. 2020, 253, 108968. [CrossRef] [PubMed]

15. McCormick, K.; Jiang, Z.; Zhu, L.; Lawson, SR; Langenhorst, R.; Ransburgh, R.; Brunick, C.; Tracy, MC; Hurtig, HR; Mabee, LM; et al. Geneetiliselt lahknevatest gripi A H1N1 alatüübi viirustest tuletatud kimäärseid hemaglutiniini geene sisaldavate rekombinantsete A-gripiviiruste ehitus ja immunogeensuse hindamine. PLoS ONE 2015, 10, e0127649. [CrossRef] [PubMed]

For more information:1950477648nn@gmail.com