Xinjiang Cistanche polüsahhariidid: võimelised puhastama reaktiivseid hapnikuliike ja vabu radikaale

abstraktne

Uuriti Cistanche deserticola polüsahhariidi antioksüdantset toimet in vitro. Võttes kontrolliks askorbiinhappe, Fentoni-sarnase reaktsiooni võtmine hüdroksüülradikaalide tekitamiseks, dopamiini autooksüdatsioonireaktsiooni, et tekitada superoksiidi aniooni radikaale, naatriumhüpokloriti reaktsiooni vesinikperoksiidiga, et saada singlett hapnikku, difenüül-mõru hüdrasiini radikaale eksperimentaalseks mudeliks, Tsistanche'i hüdroksüülradikaalide mõju superoksiidradikaalidele. radikaalid DPPH · vaba radikaal (difenüül-mõru hüdrasiini radikaal), üksiku hapniku eemaldav toime. Tulemused näitasid, et Cistanche deserticola polüsahhariididel oli ülalnimetatud vabade radikaalide suhtes ilmselge eemaldav toime ja eemaldav toime oli positiivses korrelatsioonis polüsahhariidide kontsentratsiooniga.

Märksõnad :Cistanche deserticola; polüsahhariid; Vaba radikaal

1 . Sissejuhatus

Organism toodab elutegevuse oksüdatiivse metabolismi käigus pidevalt erinevaid reaktiivseid hapnikuvabu radikaale (ROS), mis on aeroobse ainevahetuse oksüdatsiooni-redutseerimisreaktsiooni vaheproduktid.Uuringud on leidnud, et liigsed vabad radikaalid ründavad elutähtsaid makromolekule ja erinevaid organelle, põhjustades erinevaid kahjustusi molekulaarsel, rakutasandil, kudedel ja elunditel, kiirendades organismi vananemisprotsessi ja kutsudes esile selliseid haigusi nagu tromboos, diabeet, ateroskleroos, kasvajad jne.. [1]. Keemiliselt sünteesitud antioksüdantide toksilisuse tõttu inimkehale on viimastel aastatel meditsiini, toidu, keemiatehnika ja muudes valdkondades kuumaks uurimisteemaks muutunud kõrge efektiivsusega ja madala toksilisusega looduslike antioksüdantide otsimine, mis suudavad eemaldada hapnikuvabu radikaale.

Cistanche deserticola (Y.C...)on haruldane Hiina traditsiooniline meditsiin ja on tuntud kui "kõrbe ženšenn" [2]. Cistanche deserticola mapolüsahhariid on Cistanche deserticola üks peamisi bioaktiivseid komponente, kuid puudub aruanne selle kohta, kas Cistanche deserticola polüsahhariidil on vabu radikaale eemaldav toime. Selles artiklis määrati spektraalanalüüsiga Cistanche deserticola polüsahhariidi eemaldav toime superoksiidi anioonradikaalile, hüdroksüülradikaalile, DPPH · vabale radikaalile ja singletthapnikule, et hinnata selle antioksüdantset aktiivsust ja luua teaduslik alus selle loodusvara täielikuks arendamiseks ja kasutamiseks.

Hiina ürdi tsitanche

2. Eksperimentaalne osa

2.1 Instrumendid ja reaktiivid

UV-2401 UV-nähtav spektrofotomeeter (Shimadzu, Jaapan); LumatLB9507 ülitundlik toruluminomeeter (Saksamaa

BertholdTechnologies); RE-52CS pöördaurusti (Shanghai Yarongi biokeemiliste instrumentide tehas); HW-SY elektrooniline termostaadiga veevann (Jintan Xinhangi instrumentide tehas); PHS-3C pH-meeter (Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd.); DZF-6020 vaakumkuivatusahi (Shanghai Yiheng Technology Co., Ltd.). Cistanche deserticola: ostetud ettevõttest Kuitun Pharmaceutical Corporation. Luminol (Sigma, USA), dopamiin (China Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products), FeSO4, EDTA, C-vitamiin, H2O2, NaClO, Na2CO3, NaHCO3 jne on kõik kodumaised analüütilised reaktiivid. Katsevesi on ioonivahetusega destilleeritud vesi.

2.2 Eksperimentaalne meetod

2.2.1 Cistanche deserticola polüsahhariidi ekstraheerimismeetod

Võtke 30 g Cistanche deserticola pulbrit ja pange see 500 ml koonilisse kolbi. Kastke see petrooleetri (60–90 kraadi), eetri ja 80% etanooli kuuma lahusesse (30 kraadi) vastavalt 6 tunniks ning jääk aurustatakse lahusti kuivatamiseks. Leotage filtrijääke 24 tundi vees vahekorras 1:10, soojendage seda 30 kraadini ja ekstraheerige 100 minutit. Pärast ekstraheerimist tsentrifuugige supernatandi saamiseks. Pärast supernatanti kontsentreerimist alandatud rõhul sadestatakse see 3-kordse mahuga 95% etanooliga. Lastakse seista 24 tundi 4 kraadi juures. Pärast tsentrifuugimist kogutakse see kokku ja sadestatakse. Pärast vaakumkuivatamist võib saada Cistanche deserticola toorpolüsahhariidi. Kaaluge 1,00 g toorpolüsahhariidi, lahustage see vees ja pange ooterežiimiks 50 ml mõõtekolbi.

Kõrbe ženšenn-Antioksüdant

Cistanche pulbritoodete vaatamiseks klõpsake siin

【Küsi lisa】 E-post:cindy.xue@wecistanche.com / WhatsApp: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2.2.2 Cistanche deserticola polüsahhariidi O2 · vabade radikaalide eemaldamisvõime test

Cistanche deserticola polüsahhariidi eemaldamisvõimet O-2 · testiti superoksiidi vabade radikaalide (O-2 ·) tootmisega dopamiini autooksüdatsioonist [3]. Kuivatavasse katseklaasi koos katlakiviga lisage kordamööda 3,0 ml 0,1 mmol/LpH=10.12 karbonaadi puhverlahust, 3,0 ml vett ja 0,5 ml erineva kontsentratsiooniga polüsahhariidi proovilahust. Pärast 5-minutilist eelkuumutamist 30-kraadises veevannis lisage 1,0 ml 30-kraadises veevannis eelkuumutatud 2,0 mmol/L dopamiini, segage kohe ja ajage, hoidke reaktsioonisegu 30 kraadi juures 5 minutit ja peatage reaktsioon kohe 2 tilga 10 mol/l HCl-ga. Kasutage võrdluslahusena puhverlahust, mõõtke neelduvus (proov A) 221 nm juures, asendage proov (pimekatse A) 0,5 ml veega pimekatserühmas ja asendage proov 0,5 ml askorbiinhappega kontrollrühmas, mõõtke iga proovi kolm korda paralleelselt ja võtke keskmine väärtus. O-2 · kliirensi määr (%)=(Tühi proov – proov)/Tühi proov × 100%

2.2.3 Cistanche deserticola polüsahhariidi eemaldamisvõime test · OH vabade radikaalide suhtes

DEsert elav cistanche-Antioksüdant

EDTA-Fe (Ⅱ) - metüleensinise - H2O2 süsteemi kasutati Cistanche deserticola polüsahhariidi hüdroksüülradikaali eemaldamisvõime testimiseks. Põhimõte seisneb selles, et EDTA-Fe (Ⅱ) reageerib vesinikperoksiidiga, tekitades · OH vabu radikaale, mis vähendab metüleensinise lahuse iseloomulikku absorptsioonipiiki lainepikkusel 660 nm.

Lisage 1,0 ml 5 mmol/L LFeSO4 lahust, 1,2 ml 5 mmol/L LEDTA lahust, 2,0 ml 0,03 mol/l NaH2PO4-Na2HPO4 (pH=7.4) puhverlahust ja 1,3 ml 20 mmol/l oksiidi lahust 0 korgiga 1 ml vesinikku katseklaasi. loksutage korralikult, lisage 0,7 ml 0,2 mmol/L metüleensinise lahust ja seejärel lisage 1,0 ml testitavat lahust ja erineva kontsentratsiooniga vitamiini C1.0, lahjendage veega 10,00 ml-ni, segage hästi, hoidke 37 kraadi juures 30 minutit ja mõõtke iga lahuse neeldumisväärtus, 660 lahuse asemel asendati proov veega. Iga proovi mõõdetakse kolm korda paralleelselt ja võetakse keskmine väärtus. · Proovi OH-radikaali eemaldamise määr (%)=[(A2-A1)/(A0-A1) × 100% valemis: A0 -- kahjustamata toru neeldumisväärtus; Kahjustatud toru A1 - neeldumisväärtus; A2 -- Fotomeetriline väärtus pärast näidise lisamist.

2.2.4 DPPH test · Cistanche deserticola polüsahhariidi eemaldamisvõime

Võtke 0,1 ml Cistanche deserticola polüsahhariidi lahust ja lisage see 5,0 ml DPPH · lahusele, segage kiiresti ja laske 10 minutit toatemperatuuril seista.

Määrake selle neeldumise muutus lainepikkusel 517 nm [4]. Iga proovi mõõdetakse kolm korda paralleelselt ja võetakse keskmine väärtus. DPPH proovi eemaldamise määr · (%)=1 - [(AB)/A0] × Valemis 100%: A0 -- DPPH · (1,9mLDPPH ·+0.1mL50% etanooli) neeldumisväärtus ilma proovita; A - proovi neeldumisväärtus pärast reaktsiooni DPPH-ga ·; B – tühiproovi neeldumisväärtus (proov 0,1mL+1.9mL 50% etanool).

2.2.5 Cistanche deserticola polüsahhariidide eemaldamise singletthapniku 1O2 test

Üheliiniline hapnik (1O2) tekib NaClO ja H2O2 keemilisel reaktsioonil 37 kraadi juures [5]. 1O2 määramiseks kasutatakse 100 μL2,8 mmol/L NaClO lahust, 400 μL 5 mmol/NaOH lahust, 300 μL 10 mmol/H2O2 lahust ja 50 μL 1 mmol/L/Luminooli lahust. Reaktsiooni käigus lisatakse reaktsioonilahus proovilahusele ja kemoluminestsentsinstrument salvestab automaatselt reaktsiooniprotsessi samal ajal. Pimekontrolliks võtke NaClO-H2O2-NaOH-Luminol. Käivitage reaktsioon ja lisage reaktsioonilahus kemoluminestsentsinstrumendi säilituspudelist proovituubi vastavalt protseduuriga määratud kogusele. Seejärel registreeritakse iga 5 sekundi järel salvestuspaberile reaktsioonisegu kemoluminestsentsi intensiivsus, iga proovi mõõdetakse kolm korda paralleelselt ja võetakse keskmine väärtus.

Kliirensi määr arvutatakse järgmise valemi järgi: kliirensi määr (%)=(kontrollvalguse intensiivsus – näidisvalguse intensiivsus) / kontrollvalgustugevus × 100%

3 Tulemused ja arutelu

3.1 Cistanche deserticola polüsahhariidi eemaldav toime O-2

Cistanche tubulosa-Antio eelisedxidant

O-2 · keemiline omadus on aktiivne, mistõttu võivad biokilel olevad rasvhapped toota peroksiidi ja seejärel rakud hävitada [6]. Selles artiklis kasutati dopamiini meetodit O2 · eemaldamisvõime määramiseks. Cistanche deserticola O2 · eemaldamisvõime on näidatud joonisel 1. Tulemused näitasid, et Cistanche deserticola polüsahhariid võib inhibeerida dopamiini autooksüdatsioonil tekkivat O2 · ja suurenes kontsentratsiooni suurenemisega mõõdetud kontsentratsioonivahemikus (0–8 mg/mL), kuid korbiinhappe eemaldamisvõime oli madalam.

3.2 Cistanche deserticola polüsahhariidi puhastav toime · OH

·OH on aktiivsete hapnikuliikide üks aktiivsemaid hapnikuvabu radikaale. See võib reageerida peaaegu kõigi elusrakkudes leiduvate bioloogiliste makromolekulidega ja viia kehakoes selliste biokeemiliste protsessideni nagu lipiidide peroksüdatsioon, valkude polümerisatsioon, depolümerisatsioon, nukleiinhapete purunemine jne, põhjustades kudede ja rakuhaigusi, põhjustades erinevate haiguste esinemist ja kiirendades organismi vananemist [7]. Cistanche deserticola polüsahhariidi eemaldamisvõime · OH suhtes on näidatud joonisel 2. Tulemused näitasid, et Cistanche deserticola polüsahhariidil oli · OH-le hea puhastav toime ja see suurenes kontsentratsiooni suurenedes.

3.3 Cistanche deserticola polüsahhariidi eemaldamisvõime DPPH suhtes

DPPH · (difenüül bitter hüdrasiini radikaal) on stabiilne vaba radikaal, mis on orgaanilistes lahustites lilla ja millel on tugev neeldumine lainepikkusel 517 nm. Pärast antioksüdantide lisamist eemaldatakse mõned vabad radikaalid, mis nõrgendavad imendumist, mille abil saab hinnata selle aine antioksüdantset aktiivsust [8]. Vaata jooniselt 3 Cistanche deserticola polüsahhariidi DPPH · eemaldamisvõimet. Katsetulemused näitasid, et Cistanche deserticola polüsahhariidi eemaldamisvõime DPPH · suhtes oli positiivses korrelatsioonis selle kontsentratsiooniga ja eemaldamisvõime oli suurem kui askorbiinhappel.

3.4 Cistanche deserticola polüsahhariidi eemaldamisvõime 1O2-ks

Üherealine hapnik on aktiivsete keemiliste omadustega ergastatud molekulaarne hapnik. Kuna paarimata elektronid kipuvad paaristuma, on vabadel radikaalidel aktiivsemad keemilised omadused [9]. Cistanche deserticola polüsahhariidi eemaldamisvõime 1O2 suhtes on näidatud joonisel 4. Katsetulemused näitasid, et Cistanche deserticola polüsahhariidi eemaldamisvõime oli madalam kui askorbiinhappel vahemikus 0–4,0 mg/ml ja kui kõrbemaitselise polüsahhariidi eemaldamisvõime oli kõrgem kui kõrbesahhariidhappe polüsahhariidil. kontsentratsioon oli suurem kui 4,0 mg/ml.

 

4. Järeldus

Cistanche deserticola polüsahhariidide antioksüdantset aktiivsust in vitro uuriti üksikasjalikult erinevate reaktiivsete hapnikuvabade radikaalide süsteemide kaudu.Katsetulemustest on näha, et katselise kontsentratsioonivahemiku piires on Cistanche deserticola polüsahhariidekstraktil O2 ·, · OH, DPPH · ja 1O2 puhastav toime ning eemaldav toime on erinevate süsteemide puhul erinev.Tulemused näitasid sedaCistanche deserticola polüsahhariid on tõhus eksogeenne looduslik antioksüdant, mis väärib edasist uurimist, arendust ja igakülgset kasutamist.

Cistanche 200 mg-Antioxidant

viide

[1] Ling Guanting. Antioksüdantne toit ja tervis [M]. Peking: Chemical Industry Press, 2004.1-58.

[2] Gao Ming, Tian Ziyu, Cai Hongmei jt. Cistanche deserticola [J] polüsahhariidide leelise ekstraheerimine ja keemiline analüüs. Põllumajandus- ja toiduaineteteadus ja -tehnoloogia, 2008,2 (3): 32-34.

[3] Shi Shuangqun, Song Xinfang. Dopamiini autooksüdatsioon [J]. Journal of Hebei Normal University, 1997, 21 (4): 387-389.

[4] Zhang Zeqing, Tian Yingjuan, Zhang Jing. Uuring Fangfengi polüsahhariidi antioksüdantse toime kohta [J]. Hiina meditsiin, 2008, 31 (2): 268–271.

[5] Li Haiping, Zhang Shuhai, Zhang Kunsheng. Uuring lentinaani antioksüdantse toime kohta [J]. Food Research and Development, 2008, 29 (4): 56-60.

[6] Mo Jian. Sissejuhatus meditsiinilise vabade radikaalide bioloogiasse [M]. Peking: People's Health Publishing House, 1989.21-25.

[7]FrederickVL.FreeRadicals[J].ClinicalChemistry, 1993, 65(12):374-377.

[8]MatsudaM, NagahamaY, SatoTetal.DMYisaSpecificDMDomainGeneRequiredfor MedakaFish [J].Nature,2002,30:559-563.

[9] Kanofsky JR. Singlet OxygenProduction by Lactoperoxidase [J]. JournalofBiologicalChemistry, 1983, 258 (10): 5991-5993.