Mis vahe on metsikult kasvatatud tsistanche ja kunstlikult kasvatatud tsistanche vahel immuunsust suurendava aktiivsuse osas

Kontakt: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com

Zhao Bing; Yang Xiumei; Wu Daocheng; Ba Xueli; Li Quanxiao; Tan Yachao; Zhang Ailian

Abstraktne:

Eesmärk:Võrrelda metsikult kasvavate tsistanche ja kunstlikult kultiveeritud cistanche polüsahhariidide (edaspidi vastavalt WCDPS ja CCDPS) immuunsüsteemi tugevdavat toimet.

Meetodid:WCDPS ja CCDPS ja ovalbumiini (OVA) erinevad annused (madalad, keskmised ja suured) immuniseeriti subkutaanselt ICR hiirtega, OVA-spetsiifiline antikeha IgG ning antikeha alatüübid IgGl ja IgG2a tuvastati ELISA ja MTT meetodil. OVA-spetsiifiline lümfotsüütide proliferatsiooni aktiivsus, voolutsütomeetria CD4 pluss T-rakkude ja CD8 pluss T-rakkude ekspressioonitaseme tuvastamiseks.

Tulemused:Nii WCDPS kui ka CCDPS võivad märkimisväärselt tõsta OVA-spetsiifilise antikeha IgG ja IgG1 ja IgG2a tüpiseerivate antikehade ekspressioonitaset (P<0.05), and="" there="" is="" no="" statistically="" significant="" difference="" between="" the="" same="" doses="" of="" wcdps="" and="" ccdps="" (f="">0. 05); WCDPS and CCDPS can significantly promote OVA-specific lymphocyte proliferation, and the difference between the same dose is not statistically significant (P>0.05); WCDPS ja CCDPS võivad samuti oluliselt suurendada CD4 pluss T ja CD8 pluss T-rakkude alamsisalduse protsenti (P<0.05), and="" the="" difference="" between="" the="" same="" dose="" was="" not="" statistically="" significant="" (p="">0.05), WCDPS ja CCDPS ei mõjutanud immuniseeritud hiirte kaalu.

Järeldus:Nii WCDSP kui ka CCDPS võivad märkimisväärselt suurendada OVA-spetsiifilisi humoraalseid ja rakulisi immuunvastuseid ning nende kahe vahel pole statistiliselt olulist erinevust ning neil on hea ohutus.

Märksõnad: cistanche; polüsahhariidid cistanche'ist; ovalbumiin; adjuvant

Cistanche (C. deserticola. YC Ma),tuntud ka kui Cunyun ja Dayun, on aastaid Lydanaceae parasiitne rohttaim. See on haruldane ja hinnaline Hiina ravimmaterjal. Selle peamiste koostisosade hulka kuuluvad tsistanche polüsahhariidid, Cistanche fenüületanoidglükosiidide ühendid, orgaanilised happed, alkaloidid jne.⑷, millel on mitu funktsiooni, nagu essentsi ja vere toitmine, yangi abistamine ja neerude toniseerimine ning vananemise leevendamine⑸. Tistanche ülikõrge raviväärtuse tõttu on looduslike liikide üleekspluateerimine väljasuremise äärel ning kunstlikult kasvatatud tsitanche on olnud edukas. Kodu- ja välismaised teadlased on teinud palju uuringuid metsikult kasvava tsistanši ja kunstlikult kasvatatud tsistanši keemiliste komponentide ja toimeainete kohta, kuid vähe on teateid looduslike ja kultiveeritud tsistanši polüsahhariidide võrdlemise kohta tsistanši (WCDPS/CCDPS) adjuvandi aktiivsusest. . Suur hulk uuringuid on näidanud, et tsistanche taimsed polüsahhariidid adjuvandina võivad reguleerida organismi immuunvastust. Paljud teadlased on kasutanud Hiina taimseid ravimeid vaktsiini abiainena ja on teinud häid edusamme.

See uuring põhineb varasematel uuringutel (6), et võrreldaimmuunsüsteemi tugevdavXinjiangi WCDPS-i ja CCDPS-i tegevused. Peamiselt hiirte immuniseerimiskatsete kaudu immuniseeriti ICR-hiirtel subkutaanselt OVA-ga erinevad annused WCDPS-i ja CCDPS-i ning nende mõju humoraalsele tasemele.puutumatustestiti pärast immuniseerimist OVA poolt indutseeritud rakulist immuunsust. Võrdlemametsikult kasvama cistanchejakunstlikult kasvatatud cistanchepolüsahhariidid Tsitrusviljade polüsahhariidide immuunsüsteemi tugevdav toime võib olla viiteallikaks kunstlikult kasvatatud tsistanši paremaks arendamiseks ja kasutamiseks Xinjiangis.

Materjalid ja meetod

Katsematerjalid:

Metsikult kasvav tsitanche ja kultiveeritud tsitanche (müügil). RPMI 1640 sööde osteti ettevõttelt GIBCO; Veise loote seerum osteti firmalt Israel Bioind; Voolutsütomeetria antikehad: PE rott-anti-hiire CD3, APC-rott-anti-hiire CD4, FITC-rott-anti-hiire CD8a osteti Ameerika BD ettevõttelt, munavalgevalgu (ovalbumiin, OVA) Sigma toode, mädarõika peroksiidiga märgistatud kitse anti-hiire IgG, IgGl ja IgG2a osteti ettevõttelt Southbiotech, USA. Teised eksperimentaalsed keemilised reaktiivid on kõik kodumaised analüütilised reaktiivid.

Katseloomad:

Puhta kvaliteediga emased ICR-hiired (6-8 nädalat, 18-22 g) osteti Xinjiangi meditsiiniülikooli katseloomade keskusest. Loomi peeti meie labori loomaruumis ja katset alustati 7 päeva pärast loomade aklimatiseerumist.

WCDPS-i ja CCDPS-i ettevalmistamine:

Viites [17] kasutatakse vee ekstraheerimise ja alkoholisadestamise meetodit. Lühikesed sammud on järgmised: Võtke kuiv Xinjiangi kultiveeritud ja loodusliku tsistanši pulber, lisage 10-kordne maht vaseliini ja absoluutse etanooli ultrahelisse 1 tunniks; pärast imemisega filtreerimist säilitada ravimi jääk ja kuivatada, lisada 10 korda rohkem destilleeritud vett 37T Ultraheli kaks korda, tsentrifuugimine 4 000 p/min 10 minutit, supernatandid kombineerida, rootoraurustada ja kontsentreerida ning sadestada üleöö alkohol; pärast vaakumfiltreerimist ja kuivatamist saadakse toorekstrakti pulber; Metsik meetod ⑻ eemaldab valgu WCDPS-ist ja CCDPS-ist. Sibula-väävelhappe meetodil määratud WCDPS-i ja CCDPS-i tsistanši polüsahhariidide sisaldus oli vastavalt 76,82% ja 59,58%.

Hiire immuniseerimine ja seerumi kogumine:

Katseloomade mudelitena kasutati {{0}} nädala vanuseid ICR emaseid hiiri. Katse jagati 9 rühma, igas rühmas 5: 0,9 protsenti NaCl, OVA 10 jig, OVA-Alum 200 |jLg, OVA-WCDPS 10 |xg, OVA -WCDPS 50 |xg, OVA- WCDPS 100 võrk, OVA-CCDPS 10 |jLg, OVA-CCDPS 50 |xg, OVA-CCDPS 100 võrk. Enne immuniseerimist lahustage 0,9% NaCl-ga ja immuniseerige hiiri subkutaanselt kaks korda 2-nädalase intervalliga. Enne immuniseerimist kogutakse veri ning seerum -80Y valmistatakse ja säilitatakse hilisemaks kasutamiseks.

WCDPS-i ja CCDPS-i mõju hiirte kasvule:

WCDPS-i ja CCDPS-i mõjude jälgimiseks hiirte kasvule kaaluti iga rühma hiirte kaalu 0 päeva jooksul enne esialgset immuniseerimist, 14 päeva ja 21 päeva pärast immuniseerimist.

Hiire seerumi antikeha IgG tuvastamine ja tüpiseerimine pärast WCDPS ja CCDPS immuniseerimist:

Seerumi antikehade määramiseks kasutati kaudset ELISA meetodit. ELISA plaat kaeti öö läbi 2,5 jig/ml OVA-ga, 4Y; pesti 3 korda PBST-ga ja seejärel lisati 1 tunniks blokeerimiseks 5 protsenti rasvavaba piimapulbrit 37L; pesti 3 korda PBST-ga ja lisati hiirtele primaarne antikeha pärast immuniseerimist igas rühmas Seerum, primaarse antikeha lahjendussuhe on 1:100, 100 pilli süvendi kohta, 37 Tl h; pärast 3-kordset pesemist PBST-ga lisage sekundaarsed antikehad: kitse hiirevastased IgG, IgGl, IgG2a (l: 5 000) märgistatud HRP 37-ga Inkubeerige draakonit 1 tund; pärast 4-kordset pesemist PBST-ga lisage tetrametüülbensidiini (TMB) substraadi lahus, et vältida valgust 15 minuti jooksul. Lisage igasse süvendisse 50 ui, et peatada reaktsioon 2 mol/L H2SO4-ga ja mõõta A45O/655 väärtus. Võrrelge antikehade taset igas rühmas.

Hiire põrna lümfotsüütide proliferatsiooni tuvastamine pärast WCDPS ja CCDPS immuniseerimist:

MTT meetodit kasutati lümfotsüütide proliferatsiooni tuvastamiseks CCDPS ja WCDPS-ga immuniseeritud hiirte põrnas. Hiirte põrn isoleeriti aseptilistes tingimustes 21 päeva pärast esialgset immuniseerimist ja põrnarakud lahjendati 10% FBS-i sisaldava RPMI 1640 söötmega, et moodustada üksikud rakud. Suspensioon, loendamine ja rakkude reguleerimine (r rakud/ml jaotati 96-süvendiga rakukultuuri plaadile, lisage vastavalt 20 OVA-d (lõppkontsentratsioon 10 |xg/ml) ja ConA-d (lõppkontsentratsioon 5 siga/ml), stimuleerige, määrake tühi rakukontroll ja tühi seerum kontroll, asetage see 48 tunniks 37Y rakuinkubaatorisse, lisage igasse süvendisse 20 MTT, 37^ ja jätkake inkubeerimist 4 tundi, lisage igasse süvendisse lahustamiseks 100|±1 DMSO-d ja testige südant 0 /63. Väärtus, arvutage iga hiirte rühma stimulatsiooniindeks (SI).

CD4 ja CD8 ekspressioon CD3 pluss T-rakkudel pärast WCDPS ja CCDPS immuniseerimist:

Voolutsütomeetriat kasutati CD4 pluss T ja CD8*T rakkude ekspressiooni tuvastamiseks CD3 pluss T-rakkude pinnal. Hiire põrn eraldati aseptilistes tingimustes 21 päeva pärast esmast immuniseerimist ja põrna töödeldi RPMI 1640 söötmega, mis sisaldas 10% FBS-i. Valmistage üherakuline suspensioon, loendage ja reguleerige rakkude arv 1x106 rakku proovi kohta, värvige CD3 pluss T-rakkude pinnal CD4 ja CD8, kaitske toatemperatuuril valguse eest 25 minutit ja kasutage 10 ml fosfaatpuhverdatud lahus, mis sisaldab 0,5 protsenti FBS-i (fosfaatpuhverdatud lahus). soolalahus, PBS) 1 200 p/min 7 min üks kord pesemine, lisage 250 |jil PBS-i, läbige 200 mešši vaskvõrk, voolutsütomeetria, et tuvastada CD4 ja CD8 ekspressioon CD3*T-rakkude pinnal.

Statistilised meetodid:

Flowjo 7.6 tarkvara töötleb voolutsütomeetria testi tulemusi; GraphPad Prism 5.0 kasutatakse andmete analüüsimiseks ja kõik andmed põhinevad keskmisel ± standardhälbel. Katserühmade andmete võrdlemiseks kasutage Studenti ja testi. P<0.05 means="" that="" there="" is="" a="" difference.="" statistical="">

Tulemus

1. The effect of WCDPS and CCDPS on the growth of mice: After co-immunization with WCDPS and CCDPS and OVA, weigh the weight of the mice (Table 1). There was no statistically significant difference in the bodyweight of mice in each group during the same growth period ( P>0.05).

2. WCDPS-i ja CCDPS-i toime OVA-spetsiifilise antikeha IgG-le: WCDPS-i ja CCDPS-i immuniseeriti subkutaanselt OVA-ga, et tuvastada OVA-spetsiifilise antikeha IgG ekspressioon seerumis pärast 14-päevast ja 21-päevast immuniseerimist. Tulemused on näidatud joonisel 1, WCDPS ja CCDPS soodustasid antikeha IgG ekspressiooni seerumis annusest sõltuval viisil; OVA pluss WCDPS 50 p,g võrreldes OVA pluss CCDPS 50 |xg võib oluliselt soodustada OVA-spetsiifilisi antikehi võrreldes OVA pluss CCDPS 50 |xg-ga. IgG ekspressioon (F<0.05), but="" the="" difference="" was="" not="" statistically="" significant="" compared="" with="" the="" aluminum="" adjuvant="" group="" (p="">0.05); the difference between WCDPS and CCDPS at the same dose was not statistically significant (P>0.05).

3. WCDPS ja CCDPS mõju OVA-spetsiifilise antikeha tüpiseerimisele: 21 päeva pärast immuniseerimist tuvastati IgG1 ja IgG2a tüpiseeriva OVA-spetsiifilise antikeha ekspressioon seerumis. Tulemused on näidatud joonisel 2. OVA-WCDPS 50 jig ja OVA-WCDPS 100 |xg Mumu soodustasid oluliselt antikeha IgG2a ekspressiooni seerumis kui OVA rühm üksi (P<0.05); both="" ova-wcdps="" 50="" and="" ova-ccdps="" 50="" pigs="" could="" significantly="" promote="" the="" expression="" of="" ova-specific="" antibody="" iggl=""><0. 001);="" compared="" with="" ova-wcdps="" 50="" p,g,="" and="" ova-wcdps="" 100="" jig,="" the="" aluminum="" adjuvant="" group="" can="" significantly="" promote="" the="" expression="" of="" antibody="" igg2a=""><0.05); the="" expression="" of="" antibody="" typing="" is="" different="" between="" wcdps="" and="" ccdps="" at="" the="" same="" dose="" no="" statistical="" significance="" (p="">0.05).

4. WCDPS-i ja CCDPS-i mõju hiire OVA-spetsiifiliste lümfotsüütide proliferatsioonile: WCDPS-i ja CCDPS-i mõju kindlakstegemiseks põrna lümfotsüütidele immuniseeriti tsistanši polüsahhariide subkutaanselt OVA-ga ja põrnarakud eraldati 21 päeva pärast immuniseerimist. , ja nende tuvastamiseks kasutati MTT meetodit Edendada OVA-spetsiifilist lümfotsüütide proliferatsiooni. Tulemused on näidatud joonisel 3. WCDPS ja CCDPS suurendasid OVA-spetsiifilist lümfotsüütide proliferatsiooni annusest sõltuval viisil. WCDPS-i ja CCDPS-i kombinatsioon OVA-rühmaga võib märkimisväärselt soodustada OVA-spetsiifilist lümfotsüütide proliferatsiooni, võrreldes ainult OVA-rühmaga. Lümfotsüütide proliferatsioon (P<0.05); ova-wcdps="" 50="" jig="" and="" ova-ccdps="" 50="" |xg="" compared="" with="" an="" aluminum="" adjuvant="" group="" can="" significantly="" promote="" ova-specific="" lymphocyte="" proliferation=""><0.05); the="" same="" dose="" of="" wcdps="" there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" between="" ccdps="" and="" ccdps="" (p="">0.05).

5. WCDPS ja CCDPS mõju CD3 pluss CD4 pluss T ja CD3 pluss CD8 pluss T-rakkudele: 21 päeva pärast WCDPS ja CCDPS subkutaanset immuniseerimist OVA-ga tuvastati voolutsütomeetria abil CD4 ja CD8 ekspressioon CD3 pluss T-rakkudes. , nagu on näidatud joonisel 4A. On näidatud, et OVA-WCDPS 50, OVA-CCDPS 50 rakis ja OVA-WCDPS 100 võivad oluliselt soodustada CD3 pluss CD4 pluss T-rakkude proliferatsiooni (P<0.05); as="" shown="" in="" figure="" 4b,="" ova-wcdps="" 10="" a,="" ova-wcdps="" 50="" zhao="" significantly="" promotes="" the="" proliferation="" of="" cd3+cd8+="" t="" cells=""><0.05), ova-wcdps="" 100="" |xg,="" ova-ccdps="" 100="" significantly="" promotes="" the="" proliferation="" of="" cd3+cd8+="" t="" cells=""><0.01); but="" the="" same="" dose="" there="" was="" no="" significant="" difference="" between="" wcdps="" and="" ccdps="" (p="">0.05); there was no significant difference between WCDPS and CCDPS and OVA compared with an aluminum adjuvant group (P>0.05).

Arutelu

Arvukad uuringud on näidanud, et Hiina taimsel ravimil on immunomoduleeriv funktsioon "Da], samuti on palju teateid, mis tõestavad, et hiina taimsete ravimite polüsahhariide, mis pärinevad cistanche'ist, saab kasutada adjuvandina vaktsiinide immuunmõju tugevdamiseks"3] ja selles uuringus valitud Congrongi Xinjiangi kõrbe liha on Xinjiangis ainulaadne ravimmaterjal ja looduslikud liigid on väljasuremise äärel, koos nende kõrgema raviväärtusega, kultiveeritud liikide kasvatamine on ravimtaimeressursside arendamiseks ja kasutamiseks eriti oluline. . Praegusel turul olevatel uutel vaktsiinidel on hea antigeenispetsiifilisus, kuid nõrk immunogeensus. Tistanche'i taimsed polüsahhariidid võivad selle puuduse korvata. minu riigil on Hiina taimsete ravimite uurimisel suur eelis. Sõelume Hiina looduslikest taimsetest ravimitest pärit vaktsiiniadjuvante. Kõrge teostatavus. Uuringud on näidanud, et hiina taimsed polüsahhariidid, mis pärinevad cistanche'ist, reguleerivad erineval määral spetsiifilist immuunsust ja mittespetsiifilist immuunsust, nagu näiteks Ganoderma polüsahhariidid cistanche'ist, Radixisatidis'e polüsahhariidid cistanche'ist, Poria cocos'i polüsahhariidid cistanche koji'st, inuliini polüsahhariidid tsistanche'st27 jne. Võib tugevdada vaktsiini immuunmõju.

Tsistanche nõudluse kiire kasvu tõttu on selle looduslikud liigid kaevandatud väljasurnud ja on nüüd minu kodumaal ohustatud ja kaitsealuste taimede nimekirjas. Tuginedes Caulis Carlsbadi kõrbe kunstliku istutamise edule, eeldatakse, et kultiveeritud liigid asendavad looduslikke liike. Selles katses kasutati hiirte in vivo immuniseerimiskatsete läbiviimiseks OVA adjuvantidena metsikult kasvatatud tsistanši ja kultiveeritud kunstlikult kultiveeritud tsistanši polüsahhariide. Erinevate näitajate testimisega hinnati algselt metsiku ja kultiveeritud tsistanši immuunmõju, mis andis võrdlusaluse kultiveeritud tsitanši tõhusaks kasutamiseks Xinjiangis.

Selleks, et mõista metsikult kasvavate ja kunstlikult kasvatatavate tsistanšide ohutustcistanche sahhariididCistanche'ist on in vivo loomade immuniseerimiskatsetes täheldatud hiirte välimuse omadusi ja leitud, et hiirtel ei esine pärast immuniseerimist kõhulahtisust, püstiseid karvu ega pisaraid ning nende tegevus ja hingamine on normaalsed ning lihastõmblusi ei esine. Häire nähtuse tõttu ei olnud hiirte kehakaalus igas rühmas olulist erinevust, mis näitab, et WCDPS-i ja CCDPS-i immuniseerimine ei mõjutanud hiirte kasvu ja neil on teatav ohutus. Antikeha IgG ja tüpiseerimise testi tulemused näitavad: WCDPS ja CCDPS võivad oluliselt suurendada OVA-spetsiifilise antikeha IgG ekspressiooni pärast kaasimmuniseerimist OVA-ga ning toime on samaväärne alumiiniumi adjuvandiga; see võib oluliselt suurendada OVA-spetsiifiliste antikehatüüpide IgG2a ja IgGl ekspressiooni. See näitab, et cistanche polüsahhariidid suurendavad Th1 ja Th2 immuunvastust samal ajal ning WCDPS-i ja CCDPS-i vahel ei ole olulist erinevust. Antikehade tüpiseerimise IgG2a tulemused näitasid, et WCDPS ja CCDPS ning OVA kaasimmuniseerimisrühm võivad oluliselt suurendada IgG2a ekspressiooni võrreldes alumiiniumi adjuvantide rühmaga, alumiiniumadjuvant on nõrgem T-rakkude ekspressiooni soodustamisel, mis tõestab, et kasutatakse WCDPS-i ja CCDPS-i. adjuvantidena Rakulist immuunsust soodustav võime on oluliselt kõrgem kui alumiiniumist abiainetel.

Lümfotsüütide proliferatsiooni tuvastamise tulemused MTT meetodil näitasid, et iga rühma hiirte põrnarakke stimuleeris OVA. Lümfotsüütide proliferatsiooni stimulatsiooniindeks (SI) WCDPS-is ja CCDPS-is koos OVA-ga oli oluliselt kõrgem kui ainult OVA-ga immuniseerimise rühmas. OVA- WCDPS 50 Ah ja OVA-CCDPS 50 rakise rühma stimulatsiooniindeks oli oluliselt kõrgem kui alumiiniumi adjuvandi rühmal; see näitab, et WCDPS ja CCDPS kombineerituna OVA rühmaga võivad oluliselt suurendada OVA-spetsiifiliste lümfotsüütide proliferatsiooni võrreldes OVA rühma ja alumiiniumi adjuvandi rühmaga.

T-lümfotsüütidel on erinevad alarühmad. CD3 on kõigi T-lümfotsüütide pinnamolekul. Erinevate fenotüüpide järgi võib need jagada CD8 pluss T-rakkudeks ja CD4 T-rakkudeks. CD4 pluss-molekulid võivad tekkida MHC fl-molekulide toimel, mida kasutatakse pärast aktiveerimist peamiselt abistajarakkudena (Th). CD8 pluss molekulid tuleb moodustada MHC I molekulide toimel. Pärast aktiveerimist muutuvad nad tapjarakkudeks (TC või CTL), mis mängivad olulist rolli viirusnakkuste ja kasvaja immuunsuse vastu. 3". Voolutsütomeetria tuvastab CD3PD4 pluss T ja CD3 pluss CD8 pluss T-rakkude ekspressiooni, tulemused näitavad, et WCDPS ja CCDPS võivad märkimisväärselt soodustada CD4 pluss T ja CD8 pluss T-rakkude proliferatsiooni teatud doosivahemikus ning olulist ei ole. erinevus WCDPS-i ja CCDPS-i vahel sama annuse manustamisel. CCDPS-i ja OVA kombinatsioon võib stimuleerida CD3 pluss CD4 pluss T ja CD3 pluss CD8 pluss T-rakkude ekspressiooni ning need kaks mõju on samaväärsed.

Kokkuvõttes on WCDPS ja CCDPS abiainetena ohutud. Pärast OVA-ga immuniseerimist võivad nad samaaegselt tugevdada spetsiifilist humoraalset immuunsust ja rakulist immuunsust. Võrreldes alumiiniumi adjuvantidega on WCDPS-il ja CCDPS-l parem mõju rakulise immuunsuse tugevdamisele ning kahe tsistanši polüsahhariidi võimendusefektid ei erine. Need uurimistulemused pakuvad materiaalseid viiteid Xinjiangi kunstlikult kasvatatud tsistanche polüsahhariidide kohta adjuvantidena ning pakuvad ka materiaalset alust ohutute ja tõhusate immuunadjuvantide skriinimiseks Xinjiangi kõrbest.cistanche.

Viited

[1] Zhao X, Sun W, Zhang S jt. Atractylodis macrocephalus Koidzi polüsahhariidide immuunadjuvantvastus Newcastle'i haiguse (ND) vastu vaktsineeritud kanadel [J]. Carbohydr Polym, 2016, 190-196. DOI: 10. 1016/j. carb pop. 2016. 01.033.

[2]Li J, Wang X, Wang W jt. Pleurotus ferulate veeekstrakt suurendab hiire luuüdist pärinevate dendriitrakkude küpsemist ja funktsiooni TLR4 signaaliraja kaudu [J]. Vaktsiin, 2015, 33(16): 1923-1933. DOI: 10,1016/j. vaktsiin.2015.02. 063.

[3] Zhao H, Luo Y, Lu C jt. Enteraalne limaskesta immuunvastus võib hiirtel käivitada Ganoderma polüsahhariidi immunomoduleeriva toime [J]. Planta Med, 2010, 76(3): 223-227. DOI: 10. 1055/S-0029-1186055.