Millised on Cistanche polüsahhariidi eelised immuunfunktsioonile?

Kontakt: emily.li@wecistanche.com

Cistanche polüsahhariidi immunoloogiline aktiivsus ja mehhanism

Zeng Qunli, Zheng Yifan, Lu Zhiliang

[Abstraktne]Eesmärk: uuridaimmuunnetegevusCistanchePolüsahhariid(CDPS) ja selle mehhanismimmuunnereguleerimine in vitro. Meetodid: CDPS-i reguleeriva toime jälgimiseks kasutati tiasoolsinise kolorimeetrilist meetodit (MTT).Cistanche polüsahhariid) IQS DEX TNF-l, mis inhibeerib hiire tüümuse lümfotsüütide proliferatsiooni in vitro; CDPS (Cistanche polüsahhariid) kasutati rakutsükli ja rakutsükli analüüsi läbiviimiseks voolutsütomeetria abil. Intratsellulaarse Ca2 määramine. Tulemused: CDPS (Cistanche polüsahhariid) suudab kõrgemal kontsentratsioonil seista vastu ISQDEX-i pärssvale toimele lümfotsüütide proliferatsioonile ja kõrge kontsentratsiooniga TNF-i pärssvale toimele lümfotsüütide proliferatsioonile ning sünergiseerida madala kontsentratsiooniga TNF-i proliferatsiooni soodustavat toimet lümfotsüütidele; 100 ug/ml 200 ug/ml CDPS (Cistanche polüsahhariid) võib oluliselt suurendada rakke jagunemise faasis; kõrgem kontsentratsioon (100 ug/ml) CDPS (Cistanche polüsahhariid) võib märkimisväärselt soodustada Ca ioonide kontsentratsiooni hiire tümotsüütides. Järeldus: CDPS (Cistanche polüsahhariid) võib soodustada rakkude sisenemist jagunemisfaasi ja järeldatakse, et selle soodustav toime hiire tüümuse lümfotsüütide proliferatsioonile on seotud kaltsiumi vabanemise soodustamisega hiire tüümuse lümfotsüütides.

Cistanche(CistancheDeserticolaYC Ma) on minu kodumaal haruldane ja hinnaline Hiina ravimmaterjal. See on loetletud "Shen Nongi Materia Medica" parima klassina.Cistanchetal on vere toitmise, neerude toitmise ja yangi abistamise, soolte niisutamise ja vananemise edasilükkamise funktsioonid. Kaasaegsed farmakoloogilised uuringud näitavad sedaCistanchePolüsahhariidvõib parandada kehaimmuunnefunktsiooni, soodustab DNA sünteesi, tugevdab füüsilist jõudu, parandab intelligentsust ja sellel on ilmne vananemisvastane toime [1]. Autor uuris CDPS regulatsiooni(Cistanche polüsahhariid), polüsahhariidkomponentCistanche, pealimmuunnefunktsioonihiire lümfotsüütidest.

Cistanche polüsahhariidedendamineleviklümfotsüüdid

1 Materjal ja meetodid

1.1 Reaktiivid ja ravimid.

RPM, I 1640 sööde: GIB-CO; HEPES: FARCO; L-glutamiin: Shanghai Dongfengi reaktiivide tehas; Penitsilliin ja streptomütsiin: Põhja-Hiina farmaatsiatehas; Concanavalin (ConA), MTT: SIGM A Company; Fütohemaglutiniin (PHA): Shanghai meditsiinilabor; Isoproterenool (ISO): Shanghai Tianfengi farmaatsiatehas; Merkaptoetanool: Fluka Company; Vastsündinud vasika seerum: Sijiqing Bioengineering Company; Deksametasooni (DEX) esitles dr Ma Liang, Zhejiangi ülikooli meditsiinikooli esimene sidushaigla; Kasvaja supressorfaktori (TNF) andis Yu Yuehan, Zhejiangi ülikooli bioteaduste kooli rakkude osakonna professor; Ülejäänud reaktiivid on kõik kodumaal toodetud analüütilised reaktiivid.

1.2 Katseloomad.

ICR hiired, isased, 68 nädala vanused, kaaluga 18-20 g, 22, osteti Zhejiangi katseloomade keskusest.

1.3 Tistanche polüsahhariidi ekstraheerimine [2]:

CistanchePolüsahhariidon ekstraheeritud meie laboris! Pärast toordroogi purustamistCistanche, see kastetakse kuuma etanooli, ekstraheeritakse keeva veega ja sadestatakse etanoolis. Neutraalne ensüüm kombineerituna Sewagi meetodiga valgu eemaldamiseks, anioonide DEAE-Sephadex A- 50 vahetuskromatograafia ja Sephacry S-200 geelfiltratsioonikromatograafiaga, et saada CDPS-i üks komponent (Cistanche polüsahhariid)). Hoidke kuivas, kasutage mittetäielikku RPMI1640, et saavutada enne kasutamist teatud kontsentratsioon, ja steriliseerige ultrafiltrimisega

1.4 Põrna ja harknääre lümfotsüütide valmistamine [3]:

The mice were sacrificed by neck removal. The spleen or thymus was taken aseptically and sieved through a 200-mesh steel mesh. The Hanks solution containing porridge newborn calf serum was used to prepare a single-cell suspension. After centrifugation at 1500 r/min for 10 min, red blood cells were lysed with 0.01 mol/L Tris-NHCl hypotonic solution for 1 min, and then washed with Hanks liquid centrifugation. Finally, the cells were suspended in RPMI1640 containing 10% fresh calf serum for complete culture Solution (containing 2 mmol/LL glutamine, 100 mmol/L sodium pyruvate, 1 mmol/L mercaptoethanol, add penicillin 100 U/ml and streptomycin 100 μg/ml just before use), trypan blue count, live For cells>93, reguleerige põrnarakkude kontsentratsioon väärtusele X 10 /ml ja tümotsüütide kontsentratsioonile × 10 kraadi / ml

1.5 Lümfotsüütide proliferatsiooni reaktsioon:Vastavalt Mosmanmni meetodile [4] Parandamine: 96-kaevu rakukultuuri plaat, lisage igasse süvendisse 10/ml põrnarakkude suspensiooni või vett 10/ml tümotsüütide suspensiooni 100M1 ja erineva kontsentratsiooniga ravimeid 10041. Kasvatage CO2,37C inkubaatoris 72 tundi. 4 tundi enne kultiveerimise lõppu lisage igasse süvendisse 8 μ1 MTT-d (5 mg/ml). Kultiveerimise lõpus aspireerige igast süvendist 150"1 supernatanti ja lisage 0,5 N isopropanoolvesinikkloriidi 150 M1. Raputage õrnalt mikroloksutil, et sinised kristallid täielikult lahustuksid. Mõõtke OD570 mikroplaadi lugejal. Määrake iga katse. punkt kolme kordussüvendina.

1.6 Rakutsüklile avalduva mõju määramine [5]:

{{0}}süvendiga rakukultuuri plaat, lisage igasse süvendisse 4 10 kraadi /ml tümotsüütide suspensiooni 1 ml, lisage erinevaid reaktiive ja polüsahhariidi lahust 2 ml-le tugevas CO-s, 37 inkubaatoris Pärast 72-tunnist kultiveerimist tsentrifuugige kiirusel 1500 p/min 15 minutit, visake supernatant ära, lisage sadestunud rakkude fikseerimiseks 7 ui etanooli, säilitage ooterežiimi testimiseks temperatuuril 4 °C, peske rakke kaks korda PBS-ga, tsentrifuugige kiirusel 1500 p/min 15 minutit, visake ära supernatant ja lisage Pärast 0,5 ml0,1 RNaasA digereerimist 4 °C juures 30 minutit, värviti 50 ug/ml bromoatsetaadiga 30 minutit temperatuuril 4 °C ja rakuproovide fluorestsentsi intensiivsust mõõdeti FACScan voolutsütomeetril. Iga proovi jaoks koguti 10,000 raku testipunkti ja andmete põhjal kasutati Mul kolmerattalise mootorsõiduki tarkvara analüüsi.

1.7 Intratsellulaarse kaltsiumiioonide kontsentratsiooni määramine [6]

Võtke hiire tümotsüüdid samamoodi nagu ülal. Suspendeerige mittetäielikus söötmes RPMIl640 ja reguleerige rakkude kontsentratsioon väärtusele × 10'/ml. Lisage igasse katseklaasi 1 ml tümotsüütide suspensiooni ja 1 μM Fluo-3AM värvimislahus 5 μ1, 2 protsenti F-275 μ1, pärast inkubeerimist 37 °C juures 30 minutit, peske kaks korda mittetäieliku RPM1640, 1500 r/ min, tsentrifuugige 10 minutit, visake supernatant ära ja lisage sadestunud rakkudele erinevad kontsentratsioonid polüsahhariide ja polüsahhariide. Pärast ConA-d mõõdeti fluorestsentsi intensiivsust FACScani voolutsütomeetril. Iga proovi kohta koguti 10,{16}} raku testipunkti andmed ja neid analüüsiti tarkvara CELLQUEST abil. 1.8 Dispersioonanalüüsiks kasutati statistilisi meetodeid ning rakutsüklit ja kaltsiumioonide mõõtmist analüüsiti voolutsütomeetri tarkvaraga.

Cistanche deserticola pärit tsistanche polüsahhariid

2 tulemust

2.1 Tistanche polüsahhariid inhibeerib in vitro hiire tüümuse lümfotsüütide proliferatsiooni ISO DEX TNF abil

Adrenergilise retseptori agonist isoproterenool (ISO) ja neerupealiste koore hormooni deksametasooni (DEX) klass inhibeerivad lümfotsüütide proliferatsiooni CDPS-i.Cistanche polüsahhariid) suuremas kontsentratsioonis (75 125 ug/ml) suudab vastu seista ISO DEX-i pärssivale toimele lümfotsüütide proliferatsioonile (P<0.01) as="" shown="" in="" figure="" 1.="" tumor="" necrosis="" factor="" (tnf="" β)="" on="" lymphocytes="" at="" high="" concentration="" cdps="">Cistanche Polüsahhariid) (125 ug/ml) võib kõrgemal kontsentratsioonil vastu pidada TNF-i inhibeerivale toimele ja soodustada sünergistlikult lümfotsüütide proliferatsiooni madala TNF-i kontsentratsiooniga (joonis 2)

2.2 Tistanche Polüsahhariidid reguleerivad tüümuse lümfotsüütide tsüklit

CDPS (CistanchePolüsahhariid) 25ug/ml 100ug/ml 200#g/ml kolm kontsentratsiooni mõjusid hiire tüümuse lümfotsüütidele 72 tunni jooksul, DNA sisaldust rakkudes mõõdeti FACS abil ja arvutati proliferatsiooniindeks (PI). valemi järgi. Tulemused näitavad, et nii 100 ug/ml kui ka 200 ug/ml võivad oluliselt suurendada rakkude arvu jagunemisfaasis ning mõlema proliferatsiooniindeks (68,0 protsenti, 56,6) on oluliselt kõrgem kui kontrollrühmal (44,6) ja 200 ug/ml. rühmas on veidi madalam kui 100 ug/ml rühmas, sest kontsentratsioonil 200 ug/ml on selle mõju rakkude proliferatsioonile muutunud langustrendiks [7]. PI väärtus (47,5 protsenti) 25 ug/ml rühmas ei olnud oluliselt kõrgem kui kontrollrühmal.

2.3 Cistanche polüsahhariidi mõju kaltsiumioonide kontsentratsioonile hiire tümotsüütides

Katsetulemused näitavad, et CDPS-i kõrgem kontsentratsioon (100 ug/ml)Cistanche polüsahhariide) võib oluliselt soodustada kaltsiumiioonide kontsentratsiooni suurenemist hiire tümotsüütides Võrreldes kontrollrühmaga on oluline erinevus (P<0.01), and="" there="" is="" a="" certain="" effect="" relationship="" with="" the="" action="" time="" (figure="">

3 Arutelu

Cistanche, üldtuntud kui"kõrbe ženšenn", on kuiv, ketendav lihakas varsCistanche.Cistanchetal on neeru-yangi, toitva essentsi, vere ja soolte toitmise funktsioonid. See kuulub ajuripatsi-neerupealise koore teatud tüüpi erutusse või omab hormoonitaolist toimet, mis sarnaneb neerupealise koorega. Väärtuslik Hiina meditsiin, mis suudab reguleeridaimmuunnefunktsioonikehast. Meie varasemad uuringutulemused näitavad, et CDPS (Cistanche polüsahhariid) võib in vitro soodustada tüümuse T-lümfotsüütide proliferatsiooni, mida ConA PHA ei ole aktiveerinud ega aktiveerinud. Koos ConA PHA-ga on olemas kahte tüüpi T-rakkude stimulaatoreid, usume, et CDPS (Cistanche polüsahhariid) on T-rakkude jaoks halbjuvant ja leidsime ka, et CDPS (Cistanche polüsahhariid) võib kõrgemates kontsentratsioonides oluliselt suurendada hiire põrna lümfotsüütide sekretsiooni [8]

Mõned uuringud on leidnud, et rekombinantne TNF võib in vitro põhjustada normaalsete hiire ja inimese T-lümfotsüütide klastrite apoptoosi ning seda toimet võivad potentsiaalselt inhibeerida IIL-2 IL-1 IFN ja IIL-4 deksametasooniga (DEX) See võib pärssida lümfotsüütide proliferatsiooni, inhibeerides lümfotsüütide ekspressiooni ja IL-2 sekretsiooni ning vähendades kõrge afiinsusega IL-2R tootmist. Selles katses leiti, et CDPS-i kõrgem kontsentratsioon (CistanchePolüsahhariid) võib neutraliseerida TNF kõrge kontsentratsiooni mõju lümfotsüütide proliferatsioonile. Inhibeerimine, sünergistlik madala TNF-i kontsentratsiooniga, et soodustada lümfotsüütide proliferatsiooni, ja võib võidelda ISQ DEX-i inhibeeriva toimega lümfotsüütide proliferatsioonile. Need efektid on täpselt läbi CDPS (CistanchePolüsahhariid) soodustada T-lümfotsüütide proliferatsiooni ja on autokriinsed T-rakkude IL{0}} ja teiste tsütokiinide poolt.

Viimastel aastatel on tehtud palju uuringuid taimsete polüsahhariidide immunofarmakoloogiliste mõjude kohta, kuid vähesed uuringudimmuunnepolüsahhariidide regulatsioonimehhanism, eriti lümfotsüütidele mõjuvate polüsahhariidide signaaliülekande rada, mille teiseks sõnumitoojaks on Ca2. Aruanne puudub. See katse viis selles valdkonnas läbi eeluuringud. Intratsellulaarsed signaalmolekulid hõlmavad cAM R Ca", IP3 DG cGMP jne, mille hulgas on Ca" rakkudele äärmiselt oluline füsioloogiline toime. Intratsellulaarse Ca2 kontsentratsiooni tõus on oluline nähtus lümfotsüütide aktivatsiooni ja proliferatsiooni varases staadiumis. See protsess toimub peamiselt esimestel kümnetel sekunditel kuni minutitel, kui rakud aktiveeruvad stimulaatorite poolt. Klassikaline T-rakkude aktiveerimise viis on fosfatidüülinositool (PIB) fosfatidüüllihaste metaboliseerimiseks. Alkoholi metaboliit 1,4.5-inositooltrifosfaat (IP3) võib soodustada sisevõrku salvestatud Ca vabanemist, seondudes sisemise võrgu retseptoritega, suurendades rakusisese Ca2 taset ja rakusisese Ca kontsentratsiooni. * suureneb.Kõrge võib soodustada NF-AT (aktiveeritud T-raku nudeic factor) tootmist, viimane soodustab IIL-2 geeni ekspressiooni Katsetulemused näitavad, et suurem kontsentratsioon (100ug/ml) ) CDPS-ist (CistanchePolüsahhariid) on efektiivne 5 10 min. Ajal on märkimisväärne mõju Ca* kontsentratsiooni suurendamisele hiire tümotsüütides ja ConA-ga sünergistlik toime. Seetõttu oletame, et CDPS (Cistanche polüsahhariid) soodustab kaltsiumi vabanemist hiire tüümuse lümfotsüütides, et suurendada rakusisese kaltsiumiioonide kontsentratsiooni. Suurenemine soodustab IL-2 geeni ekspressiooni ja viib T-rakkude proliferatsioonini, mis on üks teoreetilisi aluseid.CistanchePolüsahhariididregulatiivne mõju kehale

Cistanche polüsahhariid

Viited

1. IN XiuHin, SU Yuke (farmakoloogiauuringute üldine olukordCistancheSka 【J】. Hiina traditsioonilised ravimid ja ravimtaimed ((Hiina taimne ravim). 1993.24(10. 550-552(hiina keeles))

2. ZHANG Weijiee (ühendpolüsahhariidi [M] biokeemiline tehnoloogia. Hangzhou Zhejiang University Press (Zhejiang University Press), 1994.16-17 (hiina keeles)

3. MA Bo- (Ma Baoli).Immunoloogia tehnika【M1. Shanghai Medical University Press (Shanghai Medical University Press), 1984 188-190. (n hiinlased))

4. Mosmann T. Rapiloloimeerne test proliferatsiooni ja tsütotoksilisuse vähendamiseks kasvu ja ellujäämise hõlbustamiseks [JJ Immun Meth.1983, 6 55- 58.

5. WU is-hi, WU shailing, Acai-n jt (Wu Jiahui, Wu Shuibing. Li Carian jne), Tsiini mõju tsükliliste rakkude proliferatsioonileimmuunneelundite analüüs voolutsütomeetria abil [J]. Hiina immunoloogia (Chinese Journal of Immunology), 1994, 10x5: 278-281. (Hiinas)

6. TAO aksiin. JIYong-yong, GAO Qi-rong jt (Tao Jiaxian, Ji Yongpu Gao Qirong jne). Intratsellulaarse C2 muutuste FACS-analüüs elaktivatsiooni ajal[J] Hiina immunoloogiaajakiri (China Journal of Immunology), 1993, 9 (2): 97-10L. (hiina keeles)

7. ZENGQu-li.MAO Jum-hao, LU Suchiang; Puhastamine d polüsakdariidCistancheDeserticolaYC Mfa ja selle immunomoduleeriv toime Tellfunction[J]. Burnal of Zhejiang Medical University (Journal of Zhejiang Medical University), 1998.27 (3: 108-111. (hiina keeles)

8. Sarin A, Michelle C C. Perre AH TNF-i ja lümfotoksiini tsütotoksiline Efed on T Lymphoblak. J Immunol, 1995, 1553716-3721.