Cistanche tubulosast ekstraheeritud atsosiidi ja ehhinakosiidi mehhanism kusihapete ja ehhinakosiidi mehhanism
Mar 03, 2025
Kokkuvõte:Eesmärk uurida kusihapete alandavaid toimeid ja acteosiidi (AS) ja ehhinakosiidi (ECH) mehhanisme, mis on ekstraheeritudCistanche tubulosa.
MeetodidHüperriitseemia (HUA) rotimudel loodi kaaliumoksonaadi abil (1,5 g · kg -1} -1), mis oli kombineeritud adeniiniga (100 mg · kg -1 {-1). HUA mudeli rotid jagati juhuslikult mudeli kontrollrühma, allopurinoolirühma (30 mg · kg {8}}}} -1), nii madal ja kõrge (50, 100 mg · kg -1 -1) dooserühmad (50 mg {-1) ja 5, kõrgel ja kõrgel. mg · kg -1 · d -1) annuse rühmad. Varem loodi normaalne kontrollrühm. Pärast neljanädalast manustamist kasutati vere biokeemia analüsaatorit Sua karbamiidi, CREA, adenosiini deaminaasi (ADA) ja kusihappe (UUA) taseme tuvastamiseks uriinis. Seerumis ksantiinoksüdaasi (XOD) taseme tuvastamiseks kasutati ensüümiga seotud immunosorbendi testi seerumis. Koguti neerukude ning kaaluti ja arvutati neerude koefitsient. Neerupatoloogiliste muutuste jälgimiseks kasutati hematoksüliini eosiini (HE) värvimist. Immunohistokeemiat (IHC) ja reaalajas PCR -i kasutati uraatide transporter 1 (URAT1), glükoosi transporter 9 (GLUT9), orgaanilise aniooni transporter 1 (OAT1) ja orgaanilise anioon transporter 3 (OAT3) valgu ja mRNA ekspressioonitasemete tuvastamiseks. Tulemused kui ja ECH võiksid parandada neerufunktsiooni HUA mudeli rottidel, vähendada kusihapete vere taset, soodustada kusihappe eritumist, alareguleerida ADA ja XOD seerumi taset ning reguleerida URAT1 ja GLUT9 valgu ja mRNA ekspressiooni ülesreguleerimist neerukoes, samal ajal kui OAT1 ja OAT3 valku ülesreguleerides ja OAT3 -ga reguleerides neeru kudedes.
Järeldused Fenüületanoidsed glükosiidid kui tsistanche tubulosa ja ECH võivad avaldada kusihapete alandavat toimet, parandades neerufunktsiooni HUA mudeli rottidel, vähendades ADA ja XOD taset ning reguleerides URAT1, GLUT9, OAT1 ja OAT3 ekspressiooni.
Märksõnad: Cistanche Tubulosa; akteosiid;; ehchinakosiid; hüpeuritseemia; kusihappe vähendamine; mehhanism
Tsistanche tubulosa ekstrakt 16% acteosiidiga
Hüpeuritseemia (HUA) on metaboolne haigus, mis on põhjustatud inimkehas korrastatud puriini metabolismist, põhjustades kõrgenenud vere kusihappe taset [1]. Tavaliselt diagnoositakse seda siis, kui vere kusihappe tase ületab 7. 0 mg · dl⁻ (416. 0 μmol·l⁻) meestel ja 6. 0 mg · dl⁻ (357. {8 {8}} μMol·). Hüpeuritseemia areng on peamiselt seotud selliste teguritega nagu kõrge panusega dieedid, krooniline alkoholitarbimine, ravimite kasutamine ja hüpotüreoidism. See mitte ainult ei suurenda südame -veresoonkonna haiguste, diabeedi ja hüpertensiooni [3-4] riski, vaid mõjutab märkimisväärselt ka patsientide tervist.
Praegu hõlmavad hüpeuritseemia kliinilised ravimeetodid peamiselt ravimeid, mis pärsivad kusihapete tootmist ja soodustavad kusihappe eritumist. Nendel ravimeetoditel on aga kahjustatud maksa- või neerufunktsiooniga patsientide jaoks teatud piirangud [5-6]. Seetõttu on madalate kõrvaltoimetega tõhusate ravimite uurimine hüperurikeemia ennetamisel ja ravis suurt tähtsust.
Cistanche Tubulosa (Schenk) R. Wight, mida tavaliselt kasutatakse traditsioonilises Hiina meditsiinis neerutootmise ravimtaimena, kasutatakse selliste haigusseisundite raviks nagu impotentsus, viljatus, olemuse ja vere puudulikkus, alaselja nõrkus ja põlved, lihasnõrkus ja soolestiku kuivusest tingitud kõhukinnisus [7]. Uuringud on näidanud, etCistanche tubulosaOmab neuroprotektiivset [8], põletikuvastast [9], luude metabolismi reguleerivat [10] ja efektiivsust parandavat toimet vähihaigete keemiaravi korral [11]. Erinevate aktiivsete komponentide hulgas on kõige rikkalikum fenüületanoidne glükosiide.
Acteosiid (AS) ja ehhinakosiid (ECH), kaks fenüületanoidse glükosiidi, millel on kõrge sisaldusCistanche tubulosa, avaldab tugevat bioloogilist aktiivsust ning omavad olulist arengut ja rakendamist. Järelikult valiti meie uurimisrühm edasiseks uurimiseks ja ECH -ks. Võrgustiku farmakoloogia prognooside ja hiirte eelperimentide kaudu avastasime, et fenüületanoidse glükosiidi ekstraktidCistanche tubulosaVõib olla teatud kusihapete alandav toime. Nende mõjude rajad ja mehhanismid jäävad siiski ebaselgeks.
Seega, kasutades uurimistöö fookusena kusihapete tootmise mehhanisme ja selle esmaseid eritusteed, uurisime fenüületanoidsete glükosiidiekstraktide kusihapete alandavat mõju kui ja ECH. Selle uuringu eesmärk on selgitada radu ja mehhanisme, mille kaudu AS ja ECH avaldavad oma kusihapet alandavat toimet.
1 materjalid
1.1 katseloomad
Seitsekümmend meessoost SPF-klassi Sprague-Dawley (SD) rotti, mis kaalusid 150–180 g, osteti Xinjiangi meditsiiniülikooli eksperimentaalloomakeskusest. Loomade tootmise litsentsi number: SCXK (XIN) 2023-0001. Selle katse kiitis heaks Xinjiangi autonoomse piirkonna Uyguri meditsiini uurimisinstituudi loomade eetikakomitee, millel on loomade eetika kinnitusnumber: IACUC- (Zhun) -2024-009.
1,2 ravimid ja reaktiivid
Fenüületanoidsed glükosiidiekstraktid (AS ja ECH)-ltCistanche tubulosa (purity >98%, kontrollitud suure jõudlusega vedelikkromatograafia abil) ekstraheeriti, puhastati ja valmistati Uyguri koostise teaduse võtmelaboris, Xinjiang autonoomse piirkonna Uyguri meditsiini uurimisinstituudi. Partiiinumbrid: 20220617 (AS) ja 20220526 (ECH).
Allopurinooli tabletid, partii number: 62208726, toodetud Jiangsu Wanbang Biokeemilise Pharmaceutical Group Co., Ltd.
Kaaliumoksonaatjaadeniin, partiiinumbrid: I2130050 ja C2202255, ostetud ettevõttelt Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.
CREA (kreatiniin), UA (kusihape), karbamiid ja ADA (adenosiin deaminaas) testide komplektid, Partiiinumbrid: 141123010, 141223004, 141323008 ja 043624005, ostetud ettevõttelt Shenzhen Mindray Bio Medical Electronics Co., Ltd.
XOD (ksantiini oksüdaas) aktiivsuse analüüsi komplekt, partii number: Y10001219, ostetud ettevõttelt Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.
Antikehad (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3), partiiinumbrid: 3i5723 0, 92F0296/4, 0F33081/2I44618, ostetud ettevõttelt Affinity Biosciences.
HRP-märgistatud kitse küülikuvastane IgG, partii number: 245440113, ostetud ettevõttelt ZSGB-BIO.
Hematoksüliini värvimislahus, partii number: 24135741h, ostetud ettevõttelt Peking Lanjieke Technology Co., Ltd.
DAB kromogeenne reagentide komplekt, partii number: 240010512, ostetud ettevõttelt ZSGB-BIO.
DEPC (dietüülpürokarbonaat), Kataloogi number: d 60029-500 ml, ostetud ettevõttelt Amresco (USA).
M5 Hiclear DL2000 DNA marker, Katalooginumber: MF025, ostetud ettevõttelt Peking Genomics Biotechnology Co., Ltd.
Trizol ™ reagent, Kataloogi number: 15596026, ostetud ettevõttelt Thermo Fisher Scientific (USA).
5x kõik-ühes RT MastermixjaEvagreen Express 2 × qPCR Mastermix-Low Rox, Katalooginumbrid: G492 ja G891, mõlemad ostetud ettevõttelt Applied Biological Materials Inc. (ABM).
2 meetodit
2.1 Mudeli loomine ja rühmitamine
Seitsekümmend isast Sprague-Dawley (SD) rotti aklimatiseeriti ja jagati kahte rühma: normaalne kontrollrühm (1 0 rotid) ja mudeli kontrollrühm (60 rotti). Normaalset kontrollrühma manustati Gavage'i kaudu 0,5% CMC-Na. Mudeli kontrollrühma manustati kaaliumoksonaat (1,5 g · kg⁻) koos adeniiniga (100 mg · kg⁻) annusega 10 ml · kg⁻, üks kord päevas 14 järjestikust päeva. Mudelit peeti edukaks, kui karbamiid, CREA ja SUA tase suurenes märkimisväärselt, mõõdetuna biokeemilise analüsaatori abil.
Hüpeuritseemia mudeli rotid jagati järgmisteks rühmadeks, mis põhinevad SUA, karbamiidi ja CREA tasemetel: mudeli kontrollrühm, allopurinooli rühm (3 0 mg · kg⁻), madala annusega rühmana (50 mg · kg⁻), suure annusega rühm (100 mg · kg⁻), madala DOSE-grupiga (KG-i grupp) (100 mg · kg⁻), madal-DOSE-grupp), madal-DOSE-grupp), madal-DOSE-grupp), madal-DOSE ig. ECH rühm (100 mg · kg⁻), igas rühmas on 10 rotti. Stabiilse hüperurikeemia säilitamiseks manustati kõigile rühmadele, välja arvatud normaalsele kontrollrühmale, kaaliumoksonaat (500 mg · kg⁻) koos adeniiniga (100 mg · kg⁻) hommikul gavage'i kaudu, millele järgnes pärastlõunal vastavate ravimite manustamine igas ravirühmas pärastlõunal. Tavaline kontrollrühm sai hommikul 0,5% CMC-N-lahust ja joogivett pärastlõunal annuses 10 ml · kg⁻, üks kord päevas 14 järjestikust päeva. Seejärel peatati modelleerimisagentide manustamine ja vastavaid ravimeid manustati pidevalt iga päev veel 14 päeva jooksul.
2.2 Proovide kogumine
Pärast viimast annust paastusid rotid üleöö (vesi ei olnud piiratud). Iga rühma uriin koguti kusihappe testimiseks. Kehakaalu mõõdeti pärast paastumist ja vereproovid koguti anesteesia all. Seerum eraldati tsentrifuugimisega ja säilitati edaspidiseks kasutamiseks. Neerukuded koguti ja kaaluti. Üks neeru fikseeriti 4% paraformaldehüüdi lahuses, teine aga külmutatud vedelas lämmastikus edasiseks analüüsiks.
2.3 kusihappe mõõtmine roti uriinis
Iga rühma uriiniproovid tsentrifuugiti (3, 000 r · min⁻⁻, 10 min, tsentrifuugiraadius 14 cm) ja supernatant koguti. Uriiniproovid lahjendati soolalahusega 1: 9 ja analüüsiti kusihappe sisaldust biokeemilise analüsaatori abil.
2.4 ADA, karbamiidi, CREA ja SUA mõõtmine roti seerumis
Iga rühma vereproovid tsentrifuugiti (3, 000 r · min⁻⁻, 10 min, tsentrifuugiraadius 14 cm) ja seerum. ADA, karbamiidi, CREA ja SUA taset seerumis mõõdeti biokeemilise analüsaatori abil.
2.5 XOD mõõtmine roti seerumis
XOD taseme muutusi roti seerumis mõõdeti ensümaatilise testi abil vastavalt tootja juhistele. Registreeriti alg neeldumine (A₁) ja lõplik neeldumine (A₂) ja ΔA (ΔA=A₂ - A₁) arvutati. ΔA asendati valemiga:
Xod (nmol⁻ · min⁻ · ml⁻)=[ΔA × reaktsioonisüsteem kogumaht ÷ (kusihappe molaarne väljasuremiskoefits,
Arvutada kusihappe kogus, mis on katalüüsitud seerumi milliliitri kohta minutis.
2.6 Neerude koefitsiendi mõõtmine
Neerukuded koguti, pesti soolalahusega ja üleliigne vesi eemaldati. Elundi kaal mõõdeti täpselt ja neerude koefitsient arvutati järgmiselt:
Neerude koefitsient=neeru kaal (mg) / kehakaal (g).
2.7 neerukude histopatoloogiline vaatlus tema värvimisega
4% paraformaldehüüdi lahuses fikseeritud neerukoed dehüdreeriti etanooli kontsentratsioonidega, puhastati ksüleeniga, manustati parafiini ja jaotati 4- μM viiludesse. Sektsioonid deparafineeriti ksüleeniga, hüdreeriti sorteeritud etanooliga, värviti hematoksüliini ja eosiiniga (HE) ning pitseeriti neutraalse kummiga. Neerukoe morfoloogilisi muutusi täheldati valguse mikroskoobi all ja pilte jäädvustati 400 -kordse suurendusega.
2.8 URAT1, GLUT9, OAT1 ja OAT3 valgu ekspressioon neerukoes IHC abil
4% paraformaldehüüdi lahuses fikseeritud neerukuded dehüdreeriti etanooli kontsentratsioonidega, puhastati ksüleeniga, manustati parafiini ja sektsiooni. Viidi läbi antigeeni väljavõtmine ja kitse seerumi blokeerimine. Primaarsed antikehad (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3) lisati lahjendusel 1: 200 ja inkubeeriti üleöö 4 kraadi juures. Järgmisel päeval pesti sektsioone PBS-ga, kuivatati õhu kuivatatud ja inkubeeriti biotiiniga kitsedevastase küülikuvastase IgG-ga 37 kraadi juures 30 minutit. Sektsioone pesti PBS -iga ja inkubeeriti 10 minutit DAB kromogeense reagendiga, millele järgnes PBS loputamine, hematoksüliini värvimine 3 minutit, diferentseerumine vesinikkloriidhappe etanoollahusega, liitiumkarbonaatsinisus, dehüdratsioon gradiendi etanooliga, ja tihendades neutraalse kummiga.
Iga roti jaoks valiti neerulõikude kaks juhuslikku 4 0 0} väljad. Analüüsiti positiivset värvimist (pruunikollast) ja iga välja integreeritud optilist tihedust (IOD) mõõdeti statistiliseks analüüsiks Image-Pro Plus 6.0 abil.
