1. tüüpi dendriitrakud (DC-d) neeruhaiguste korral

lisateabe saamiseks:ali.ma@wecistanche.com

Tavalised 1. tüüpi dendriitrakud (cDC1) inimese neeruhaiguste korral: kliinilised-patoloogilised seosed

Titi Chen, Qi Cao jt.

ABSTRAKTNE

Taust: 1. tüüpi dendriitrakud(cDC1) on tavapäraste DC-de alamhulk, mille kõige tuntum funktsioon on ristesitlus CD8 pluss T-rakkudele. Tegime selle uuringu, et uurida nende arvu ja asukohta1. tüüpi dendriitrakud(cDC1) erinevatel inimestelneeruhaigusedsamuti nende korrelatsioon kliiniliste patoloogiliste tunnuste ja CD8 T-rakkudega.

Meetodid: analüüsisime 135neerudbiopsia proovid.Neeruhaigusedsealhulgas: äge tubulaarnekroos (ATN), äge interstitsiaalne nefriit (AIN), proliferatiivne glomerulonefriit (GN) (IgA nefropaatia, luupusnefriit, pauciimmuunne GN, anti-GBM haigus), mitteproliferatiivne GN (minimaalse muutuse haigus, membraanne nefropaatia ) ja diabeetiline nefropaatia. cDC1-de kvantifitseerimiseks kasutati kaudset immunofluorestsentsvärvimist (1. tüüpi dendriitrakud), CD1ct DC-d ja CD8 pluss T-rakud.

Tulemused:1. tüüpi dendriitrakud(cDC1-d) esines normaalsetes tingimustes harvaneerud. Nende arv suurenes märkimisväärselt ATN-is ja proliferatiivses GN-is, proportsionaalselt palju rohkem kui CD1ct DC-des. cDC1-d (1. tüüpi dendriitrakud)leiti peamiselt interstitsiumis, välja arvatud luupusnefriit, pauci-immuunne GN ja anti-GBM haigus, kus need olid silmatorkavad glomerulites ja periglomerulaarsetes piirkondades. cDC1-de arv (1. tüüpi dendriitrakud)korreleerusid haiguse tõsidusega ATN-is, poolkuude arvuga pauci-immuunse GN-is, interstitsiaalse fibroosiga lgA-nefropaatia ja luupus-nefriidi korral, samuti IgA-nefropaatia prognoosiga. Nendes tingimustes ja cDC1-s suurenes oluliselt ka CD8 pluss T-rakkude arv (1. tüüpi dendriitrakud)arv korreleerus CD8 pluss T-rakkude arvuga luupusnefriidi ja pauci-immuunse GN-i korral, kusjuures paljud neist paiknesid tihedalt koos. Järeldused: cDC1 (1. tüüpi dendriitrakud)arv korreleerus erinevate kliiniliste patoloogiliste tunnuste ja prognoosiga, mis peegeldab võimalikku rolli nendes tingimustes. Nende seos CD8 pluss T-rakkudega viitab kombineeritud mehhanismile, mis on kooskõlas loommudelite tulemustega.

SISSEJUHATUS

Dendriitrakud(DC-d) on tõhusa immuunsuse kesksed orkestreerijad. Need rakud on heterogeensed ja neid saab fenotüübi ja funktsiooni alusel jagada erinevateks alamhulkadeks. Dendriitrakud võib laias laastus liigitada plasmatsütoidseteks DC-deks (Dendriitrakud)(pDC) ja tavapärased DC-d (Dendriitrakud)(cDC).cDC koosneb kahest peamisest alamhulgast: cDC1 (1. tüüpi dendriitrakud)(CD141* DC-d (Dendriitrakud) inimestel ja CD103t või CD8ot DC-d närilistel) ja cDC2 (CD1c DC-d inimestel ja CD1 lbt DC-d närilistel) (1).cDC1 (1. tüüpi dendriitrakud)avastati esmalt hiirtel ja seejärel inimestel ning neid iseloomustab nende parem võime fagotsütoosida nekrootilisi rakke kahjustusega seotud molekulaarmustri (DAMP) retseptori Clec9A kaudu ja ristesitleda CD8 pluss T-rakkudele. Seevastu cDC2-d on tõhusad CD4* T-rakkude aktivaatorid, kuid CD8t T-rakkude aktiveerimisel halvemad (2).

DC-d (Dendriitrakud)on uuritud inimestelneeruhaigusja leiti, et nende arv on suurenenud glomerulonefriidi (GN) korral (3, 4). Pärast cDCl avastamist on kogunevad loomkatsed näidanud, et neil on keskne rollneeruhaigused, nagu adriamütsiini nefropaatia ja poolkuu GN, interaktsiooni kaudu T-rakkudega (5-8). Sellised uuringud inimeste puhul aga puuduvadneeruhaigus, kus ainult üks uuring näitas suurenenud cDC-de arvu (TavapäraneDendriitrakud)GN-is (9). Viisime selle uuringu läbi, et analüüsida peamisi cDC alamhulka cDC1 (1. tüüpi dendriitrakud)ja cDC2, paljudel inimestelneeruhaigusedsealhulgas mitteglomerulaarsed haigused [äge tubulaarnekroos (ATN), äge interstitsiaalne nefriit (AIN)], proliferatiivne GN (IgA nefropaatia, luupusnefriit, pauciimmuunne GN, anti-GBM haigus), mitteproliferatiivne GN (minimaalsete muutuste haigus MCD), membraanne nefropaatia) ja diabeetiline nefropaatia. Leidsime, et cDC on oluliselt korrelatsioonis patoloogiliste tunnustega, sealhulgas ATN-i raskusastmega, poolkuu moodustumisega pauci-immuunses GN-is ja interstitsiaalse fibroosiga immuunvahendatud GN-is. Lisaks on see kooskõlas nende spetsiifilise võimega aktiveerida loomadel CD8 pluss T-rakke. mudelite puhul näitasime nendes proovides ka nende korrelatsiooni CD8t T-rakkudega. Need leiud annavad tõuke uute terapeutiliste sihtmärkide uurimiseks, mis manipuleerivad neid rakke nende raviksneerudhaigused.

Klõpsake neeruhaiguse jaoks Cistanche varrele

MATERJALID JA MEETODID

Patsiendid ja koeproovid

Uuring viidi läbi vastavalt Helsingi deklaratsiooni põhimõtetele ja selle kiitis heaks Lääne-Sydney kohaliku tervisepiirkonna inimuuringute eetikakomitee. Patsiendi teadlik nõusolek saadi. Analüüsisime 176 külmutatud diagnostikatneerudbiopsy samples taken from non-pregnant adult patients(>18-aastane) ajavahemikus 18. juuni 2016 kuni 30. juuni 2017 Westmeadi haiglas, Sydneys, Austraalias.Neerkuded kiirkülmutati OCTcompoundis (Tissue-Tek Sakura, USA) ja säilitati -80 kraadi juures. Nelikümmend ühel (41) proovil oli halb koe kvaliteet ja need jäeti uuringust välja. Patsientide algandmed, sealhulgas vanus, sugu, hinnanguline glomerulaarfiltratsiooni kiirus (eGFR) ja proteinuuria aste koguti ravi ajal.neerudbiopsia.eGFR arvutati CKD-EPI valemi abil. Diagnoosi tegi neerupatoloog valguse, immunofluorestsentsi (IF) ja elektronmikroskoopia ning kliinilise ajaloo põhjal.

Analüüsiti mitmesuguseid haigusi, sealhulgas mitteglomerulaarsed haigused (ATN, AIN), proliferatiivne GN (IgA nefropaatia, luupusnefriit, pauci-immuunne GN, anti-GBM haigus), mitteproliferatiivne GN (MCD, membraanne nefropaatia) ja diabeetiline haigus. nefropaatia. ATN-i puhul hõlmasime ainult mitteseptilisi juhtumeid, kuna septilisel ATN-il on erinev patofüsioloogia. ATN liigitati veel kerge kuni mõõduka haiguse alla (määratletud kui<50%cortical tubules="" showing="" injury)and="" severe="" disease="" (="">=50 protsenti kortikaalsetest tuubulitest, millel on vigastus). IgA nefropaatia klassifitseeriti Oxfordi MEST skoori järgi (M mesangiaalne hüpertsellulaarsus, E endokapillaarne hüpertsellulaarsus, S segmentaalne glomeruloskleroos, T tubulaarne atroofia / interstitsiaalne fibroos). Samuti analüüsisime cDC1 vahelist korrelatsiooni (1. tüüpi dendriitrakud) number and prognosis (defined a priori as >20% reduction in eGFR on or before 31t December 2019)in IgA nephropathy by dividing patients into 2 groups according to cDC number with a cut-off point at the upper quartile(>=15). Luupusnefriit jaotati interstitsiaalse fibroosi taseme järgi veel kahte rühma.<25%,>=25 protsenti kortikaalset interstitsiaalset seotust). Pauci-immuunne GN klassifitseeriti 2 rühma poolkuudega glomerulite protsendi järgi (<40%,>=40 protsenti).

Nagu tavaliseltneerudkontrollides kasutasime 5 normaalset neerukoort nefrektoomia proovidest ja 2 doonoritneerudei sobi siirdamiseks. Kasvaja nefrektoomia jaoks võeti proovid kasvaja vastas olevast poolusest ja vähemalt 5 cm kaugusel kasvaja servast. Nendel kudedel oli normaalne makroskoopiline välimus. Mikroskoopiliselt mitte ükski neistneerudproovides ilmnes märkimisväärne glomerulaarne või tubulointerstitsiaalne põletik või vigastus. Antikehade testimiseks kasutasime positiivse kontrollina normaalset täiskasvanud doonori põrnakude.

Immunofluorestsentsvärvimine

Seeria krüostaadi sektsioonid lõigati 5 μm ja asetati Superfrost Ultra Plus klaasalustele (Thermo Scientific, USA). Slaidid salvestati -80 kraadi juures. Koelõigud fikseeriti 100% metanooliga temperatuuril -20 10 minutit ja seejärel kuivatati õhu käes. Kaudne immunofluorestsentsvärvimine viidi läbi järgmisel meetodil: koelõike pesti DPBS-s (Lonza, USA) ja blokeeriti 2% veise seerumi albumiiniga (Sigma-Aldrich, USA) 15 minutit; seejärel värviti neid primaarsete antikehadega temperatuuril 4 kraadi üleöö ja seejärel sekundaarsete antikehadega 40 minutit toatemperatuuril. Tabelis 1 on loetletud kasutatud primaarsed ja sekundaarsed antikehad ning nende lahjendused. Tuumad värviti DAPI-ga (1:250, 000, ThermoFisher, USA), enne kui proovid paigaldati fluorestsentspaigalduskeskkonnaga katteklaasidele (Dako, USA). Kontrolliti ja välistati mittespetsiifilist värvimist ja ristreaktiivsust erinevate primaarsete ja sekundaarsete antikehade vahel.

TABEL 1|Uuringus kasutatud primaarsed ja sekundaarsed antikehad

cDCl-d tuvastati markeri Clec9A värvimisega. Inimestel on Clec9A ekspressioon väga piiratud cDCl-dega veres ja kudedes (10, 11). Selle kinnitamiseks jaotisesneerud, viisime valitud normaalsetes ja haiguslikes tingimustes läbi Clec9A ja HLA-DRB1, samuti Clec9A ja CD1lc topeltvärvimise. Enamik, kui mitte kõik Clec9A kattus HLA-DRB1 (täiendav joonis 1) ja CD1lc (täiendav joonis 2).

JOONIS 1|Normaalne neeru cDC1 (1. tüüpi dendriitrakud), cDC2 ja CD8 pluss T-rakud.

DC-d (Dendriitrakud)normaalses seisundis esinesid harvaneerudja cDC2 arv oli ligikaudu 7 korda suurem kui cDC1 arv (1. tüüpi dendriitrakud). (Tung=100 mm).

TULEMUSED

Patsiendi algtaseme omadused.Kontroll- ja haigusrühmade patsientide algnäitajad on kokku võetud tabelis 2. Uuringusse kaasati kokku 135 patsienti.neerudhaigusedanalüüsiti, sealhulgas mitteglomerulaarsed haigused [ATN (22), AIN (10)], proliferatiivne GN[gA nefropaatia (44), luupusnefriit (12), pauciimmuunne GN (12), anti-GBM haigus (4)] , mitteproliferatiivne GN [MCD (5), membraanne nefropaatia (5)] ja diabeetiline nefropaatia (21). Luupusnefriidi rühmas oli rohkem naisi ja nende vanus oli teistega võrreldes nooremneerudhaigused, mis on kooskõlas kirjandusega(12). Pauci-immuunse GN-i ja anti-GBM-i haigusega patsientidel oli madalaim eGFR. Proteinuuria tase oli kõrgeim MCD ja membraanse nefropaatia korral.

TABEL 2|Algtaseme omadused.

DC-de arv ja asukoht (Dendriitrakud)kontrolli ja haiguste osas.cDCl-sid esinesid normaalsetes tingimustes harvaneerud(joonis 1) ja cDC2 arvud olid ligikaudu 7 korda suuremad kui cDC1 arv (1. tüüpi dendriitrakud).CDC1 arv (1. tüüpi dendriitrakud)suurenes märkimisväärselt ATN-i ja proliferatiivse GN-i korral (joonis 2A), samas kui nende arv jäi AIN-i, membraanse nefropaatia, MCD ja diabeetilise nefropaatia kontrolliga võrreldes muutumatuks (täiendav joonis 3). cDC2 arv suurenes oluliselt ka ATN-is ja proliferatiivses GN-is (joonis 2B). cDC2 vähenes (2. tüüpi dendriitrakud)/cDC1 (1. tüüpi dendriitrakud)suhe, mis näitab cDCl (1. tüüpi dendriitrakud)suurenes proportsionaalselt rohkem kui cDC2 (joonis 2C).

JOONIS 2|cDC1 arv (1. tüüpi dendriitrakud)ja cDC2, cDC2/cDC1 suhe ja CD8 pluss T-rakk kontroll- ja valitud haiguste korral.

P-väärtus arvutatakse iga haiguse jaoks võrreldes kontrolliga. Mõlemad cDC1 (1. tüüpi dendriitrakud)ja cDC2 suurenesid märkimisväärselt ATN, IgA, luupusnefriidi, pauci-immuunse GN ja anti-GBM haiguse (A, B) korral

koos cDC1-ga (1. tüüpi dendriitrakud)suurenes proportsionaalselt rohkem kui cDC2 ATN, luupusnefriidi, pauci-immuunse GN ja anti-GBM haiguse (C) korral.

CD8 pluss T-rakud suurenesid märkimisväärselt ATN, IgA, luupusnefriidi, pauci-immuunse GN ja anti-GBM haiguse (D) korral.

Enamik cDCl-sid paiknes interstitsiumis, välja arvatud luupusnefriidi, pauci-immuunse GN-i ja anti-GBM-haiguse korral, kus neid leiti ka periglomerulaarsetes ja intraglomerulaarsetes piirkondades (joonis 3A). Lisaks leidsime ka olulise CD8t T-rakkude arv periglomerulaarsetes ja intraglomerulaarsetes piirkondades (joonis 3A) ja paljud neist paiknesid koos cDCl-dega (joonis 3B). Teisest küljest leiti cDC2-sid glomerulaarsetes piirkondades harva ja esines minimaalne kaaslokaliseerimine CD8 pluss T-rakkudega.

JOONIS 3|(A) cDC1 (1. tüüpi dendriitrakud)ja CD8 pluss T-rakud intraglomerulaarsetes piirkondades. (B) cDC1 lokaliseerimine CD8 pluss T-rakkudega. (Tung=100 mm). * P < 0.05,="" **="" p=""><>

Seos cDC1 vahel (1. tüüpi dendriitrakud)Kliinilis-patoloogiliste tunnuste ja CD8 pluss T-rakkudega Analüüsime cDCl-i vahelist korrelatsiooni (1. tüüpi dendriitrakud)ja kliinilised patoloogilised tunnused, samuti CD8 pluss T-rakud. ATN-i (kerge moodi haigus n=12, raske haigus n=10) esines 22 korral. Raskemat haigust seostati suurema arvu cDC1-ga (1. tüüpi dendriitrakud)(p=0.032), kuid mitte cDC2(joonis 4A).cDC1 (1. tüüpi dendriitrakud)suurenes proportsionaalselt rohkem kui cDC2 (cDC2/cDC1 suhe 2,5, p{5}},019). CD8 pluss T-rakkude arv suurenes oluliselt ka ATN puhul (p=0.005) (tabel 3, joonis 2D). cDC1 arv (1. tüüpi dendriitrakud)ei korreleerunud CD8* T-rakkude arvuga ATN-is.

TABEL 3|CD8 pluss T-rakkude arv ja korrelatsioonikoefitsient cDC1 vahel (1. tüüpi dendriitrakud)ja CD8 pluss T-rakkude arv kontroll- ja haige neerudes.

Analüüsiti 44 IgA nefropaatia juhtumit. Kasutades Oxfordi klassifikatsiooni MEST skoori (M mesangiaalne hüpertsellulaarsus, E endokapillaarne hüpertsellulaarsus, S segmentaalne glomeruloskleroos, T tubulaarne atroofia/interstitsiaalne fibroos), on suurem cDC1 arv (1. tüüpi dendriitrakud)seostati kõrgema T-skooriga (p{0}}.008), kuid mitte MES-skooridega (joonis 4B). Poolkuudega esines 7 juhtu ja cCD1 arv ei olnud seotud poolkuude arvuga. ArvneerudCD8* T-rakud olid IgA nefropaatia korral oluliselt kõrgemad kui kontrollrühmas (lk<0.001) (table="" 3,="" figure="" 2d).="" there="" was="" no="" correlation="" between=""> (1. tüüpi dendriitrakud) and CD8+ T cell numbers. Thirty-five(35)patients had follow-up data on or before 31sf December 2019, of whom9experienced>eGFR vähenemine 20 protsenti. Patsientide jagamine 2 rühma cDCl järgi (1. tüüpi dendriitrakud) number with a cut-off point at the upper quartile(>=15), seda kõrgem cDC1 (1. tüüpi dendriitrakud)numbrirühma seostati halvemate tulemustega (joonis 4E).

JOONIS 4|Korrelatsioon cDC1 vahel (1. tüüpi dendriitrakud), cDC2 ja CD8 pluss T-rakkude arv ja haiguse raskusaste (A–D).

IgA nefropaatia ellujäämise Kaplan Meieri kõver (E). T-skoor 0 viitab piirkonna protsendile, kus on tubulaarne atroofia/interstitsiaalne fibroos <=25>

T-skoor 1 viitab tubulaarse atroofia/interstitsiaalse fibroosi piirkonna protsendile 26 - 50 protsenti, T-skoor 2 viitab piirkonna protsendile, kus tubulaarne atroofia/interstitsiaalne fibroos on > 50 protsenti.

Elulemus määratleti kui eGFR vähenemine > 20 protsenti 31. detsembril 2019 või enne seda. NS, ei ole oluline.

Luupusnefriidi juhtumeid oli 12. Nagu IgA nefropaatia puhul, seostati suuremat cDCl arvu raskema fibroosiga (p=0.020) (joonis 4C). Lisaks suurenes oluliselt ka CD8 pluss T-rakkude arv (P).<0.001) (table="" 3,="" figure="" 2d)="" and="" this="" correlated="" with="" the="" number="" of="" cdcl="" cells="" (r="0.614," p="0.034)" (table="" 3).a="" significant="" number="" of=""> (1. tüüpi dendriitrakud)ja CD8t T-rakke leiti peri-glomerulaarsetest ja intraglomerulaarsetest, mis näitab, et neil võib olla selles seisundis oma osa. Teiseks, interstitsiaalse fibroosiga seotud immuunvahendatud haiguse (IgA nefropaatia ja luupusnefriit) korral avastasime, et cDC1 (1. tüüpi dendriitrakud)arv korreleerus fibroosi raskusastmega, samuti IgA nefropaatia prognoosiga, samas kui mitteimmuunvahendatud fibrootilise haiguse (diabeetiline nefropaatia) puhul sellist korrelatsiooni ei leitud. Kolmandaks oli cDCl arvu ja poolkuu moodustumise vahel tugev korrelatsioon pauci-immuunses GN-is ning cDCl esines suurel hulgal periglomerulaarsetes ja intraglomerulaarsetes piirkondades, mis näitab nende võimalikku rolli poolkuu moodustumisel. Neljandaks korreleerus cDC1 arv CD8 pluss T-rakkude arvuga luupusnefriidi ja pauci-immuunse GN-i korral, kusjuures arvukad cDCl-d paiknesid koos CD8 pluss T-rakkudega, mis viitab nende võimalikule interaktsioonile. See on kooskõlas meie leidudega loommudelite kohtaneerudhaigusmis näitavad cDC1 hiire homolooge (1. tüüpi dendriitrakud)rakud aktiveerivad eelistatavalt CD8t T-rakke. Kokkuvõttes näitavad need leiud, et cDCl mängib olulist rolli paljudes valdkondadesneerudhaigusedsealhulgas ATN, interstitsiaalne fibroos immuunvahendatud haiguse korral ja poolkuu moodustumine ning et need võivad potentsiaalselt toimida CD8t T-rakkude aktiveerimise kaudu.

cDC1 (1. tüüpi dendriitrakud)Arv korrelatsioonis haiguse tõsidusega ATN-is. Mitteseptilises ATN-is näitasime esimest korda oluliselt suurenenud DC-de arvu (Dendriitrakud), eriti cDCl-sid võrreldes cDC2-dega. Oluline on see, et cDC1 (1. tüüpi dendriitrakud)arv korreleerus haiguse tõsidusega. Lisaks suurenes ka CD8 pluss T-rakkude arv. ATN on tavaliselt põhjustatud isheemia-reperfusioonikahjustusest (IRI), nefrotoksiinidest või sepsisest. Traditsiooniliselt põhjustavad IRI ja toksiinid steriilset põletikku ning kaasasündinud immuunsust, kus DC-d ja T-rakud on vähem olulised, peeti domineerivaks. Loomkatsetest saadud tõendid on aga näidanud, et nii cDCl kui ka CD8 pluss T-rakud on olulised osalejad. Varasemad loomade IRI ja tsisplatiini nefrotoksilisuse uuringud näitasid, et DC- ja T-rakkude koguarv on suurenenud (13-17). Meie varasemad uuringud näitasid, et adriamütsiini nefropaatia korral suurenes cDCl arv märkimisväärselt (5). IRI puhul näitab aktiveeritud dendriitrakkude alamhulk suurenenud võimet ristesitleda antigeeni CD8t T-rakkudele (18). Adriamütsiini nefropaatia korral leidsime ka, et cDCl-d kutsusid esile CD8 pluss T-raku vastuse, mis viis vigastuseni (5). cDC1 vahelise korrelatsiooni puudumine (1. tüüpi dendriitrakud)ja CD8* T-rakud inimese ATN-is, erinevalt loommudelite leidudest, võivad peegeldada erinevaid mitteimmunoloogilisi vigastuste radu inimese ATN-is võrreldes IRI-ga hiiremudelites, kus cDCl-d mängivad olulist rolli CD8* T-rakkude kaudu. Lisaks on närilistel näidatud, et cDCl värvatakse kudedesse looduslike tapjarakkude poolt toodetud kemoatraktandi XCLl abil (19). Seetõttu võib olla kasulik seda asja lähemalt uuridaneerudhaigus.

cDC1 (1. tüüpi dendriitrakud)Arv korrelatsioonis immuunvahendatud interstitsiaalse fibroosiga. Teine oluline järeldus selles uuringus on see, et cDCl arv korreleerus immuunvahendatud haigusega (IgA nefropaatia ja luupusnefriit) seotud interstitsiaalse fibroosi raskusastmega, kuid mitte immuunvahendatud fibrootilise haiguse (diabeetiline nefropaatia) korral, näitas eelmine uuring. suurenenud cDCl-de ja cDC2-de arv interstitsiaalse fibroosi korral (9). Näitasime esimest korda, et see kehtib ainult immuunvahendatud haiguse ja cDC1 puhul (1. tüüpi dendriitrakud)arv suurenes proportsionaalselt rohkem kui cDC2. Lisaks demonstreerisime ka cDC1 (1. tüüpi dendriitrakud)arv korreleerus prognoosiga ja CD8* T-rakkude arv suurenes oluliselt ka IgA nefropaatia korral. Seda toetavad loomuuringud, mis näitavad DC-sid (Dendriitrakud)aitavad otseselt kaasa fibroosi tekkele. Näiteks soodustas DC-st saadud amfireguliin fibroosi (20). Samuti on võimalik, et cDCl-d soodustasid fibroosi CD8 pluss T-rakkude kaudu, mis teadaolevalt soodustavad fibroosi teket teistes organites (21-23). Kuna interstitsiaalne fibroos on seotud kroonilise progresseerumiseganeerudhaigus, pole üllatav, et leidsime cDC1 (1. tüüpi dendriitrakud)number on hea prognostiline marker IgA nefropaatia korral. Teised uuringud on näidanud, et CD8t T-rakud korreleeruvad IgA nefropaatia prognoosiga (24), mis võib olla cDCl-de ristesitluse tulemus. Luupusnefriidi korral näitasime korrelatsiooni cDC1 vahel (1. tüüpi dendriitrakud)arvu ja interstitsiaalse fibroosi, samuti CD8t T-rakkude arvu. Varasemad uuringud on samuti näidanud suurenenudneerudcDC1 (1. tüüpi dendriitrakud)arv luupusnefriidi (25), eriti III ja VI klassi luupusnefriidi korral, kusjuures nende arv väheneb vereringes (26). Laiendasime neid leide, näidates, et need korreleerusid ka krooniliste muutustega. On hästi teada, et interstitsiaalne põletik, mis koosneb T-rakkudest, B-rakkudest, dendriitrakkudest ja makrofaagidest, omab luupusnefriidi progresseerumisel domineerivat rolli (27). cDCl-d võivad kaasa aidata luupusefriidi progresseerumisele mitmesugustel juhtudel. viisidest. Esiteks mängib interferooni aktiveerimine võtmerolli luupusnefriidi (28-30) patogeneesis ja cDCl-d on IFN-入 silmapaistev tootja. (31) Teiseks, cDC1 (1. tüüpi dendriitrakud)võib kaasa aidata luupuse nefriidi progresseerumisele CD8t T-rakkude kaudu (32-37) ja meie avastus cDCl-de ja CD8 pluss T vahelise seose kohta toetab veelgi nende võimalikku koostoimet. CD8 pluss T-rakkude rolli luupusnefriidi korral on varem näidatud. CD8 pluss T-rakud kontrollivad autoreaktiivset immuunsust tsütotoksiliste molekulide vabastamise kaudu. Leiti, et luupusnefriidi CD8 pluss T-rakkudel on tsütotoksiline funktsioon nõrgenenud, mis võib vallandada autoimmuunsuse (38). Lisaks võivad need rakud tekitada ka luupuse autoantigeene (39). On olnud palju tõendeid selle kohta, et mõlemas CD8* T-rakudneerud(32,33) ja uriin (34-36) korreleeruvad luupusnefriidi korral haiguse aktiivsuse ja histoloogilise kahjustusega. Lisaks näidati, et CD8* T-rakkude kurnatus ennustab soodsat prognoosi (37).

cDC1 (1. tüüpi dendriitrakud)Arv korrelatsioonis poolkuude arvuga Pauci-Immune GN-is. Pauci-immuunses GN-is leidsime periglomerulaarsetes ja intraglomerulaarsetes piirkondades agregeeritud cDCl-sid ning nende arv korreleerus poolkuude ja CD8 pluss T-rakkude arvuga. Varasemad uuringud näitasid, et DC-d (Dendriitrakud)on glomeruli sees harva (3, 4, 9) või väga väikeses koguses (40). Teisest küljest olid T-rakud silmatorkavad interstitsiumis, periglomerulaarsetes ja intraglomerulaarsetes piirkondades ({{6} }). Leidsime, et nii cDCl-d kui ka CD8 * T-rakud on periglomerulaarsetes ja intraglomerulaarsetes piirkondades silmapaistvad, kusjuures paljud neist paiknevad koos. Lisaks cDC1 (1. tüüpi dendriitrakud)arv korreleerus poolkuu ja CD8 pluss T-rakkude arvuga. Kõik need leiud viitavad cDCl rollile poolkuu moodustumisel interaktsiooni kaudu CD8 * T-rakkudega. CD8t T-rakkude patogeenset rolli nõrga immuunsüsteemi GN ja poolkuu moodustumisel on juba näidatud loommudelites (45, 46). Kooskõlas meie leidudega inimestel, loomade poolkuu GN-is, cDC1 (1. tüüpi dendriitrakud)ja CD8* T-rakke leiti eriti periglomerulaarses piirkonnas (47, 48). On näidatud, et Bowmani kapsel pakub kaitstud immunoloogilist niši, takistades DC-de ja tsütotoksiliste CD8 pluss T-rakkude juurdepääsu Bowmani ruumi ja seeläbi podotsüütidele (45, 47). Kui aga Bowmani kapsel purunes, pääsesid need põletikulised rakud ligi ja hävitasid podotsüüdid, mille tulemuseks oli kiiresti progresseeruv GN (47).

Üks selle uuringu piirang on see, et IF-värvimistehnika võimaldab kasutada ainult piiratud arvu markereid. Oleks kasulik laiendada meie tulemusi, kasutades sellist tehnoloogiat nagu voolutsütomeetria, mis võib kombineerida mitut markerit, et analüüsida nende DC-de fenotüüpi. (Dendriitrakud)ning nende asjakohased tsütokiini- ja kemokiiniprofiilid. Asukohateave läheb aga kaotsi. Nende rakkude edasiseks uurimiseks võib tulevastes uuringutes kaaluda ka muid meetodeid, nagu multipleksne immunohistokeemia ja nanostring.neerudhaigus. Lisaks võib cDC2-de värvimisel CD1c, HLA-DRB1 ja CD1lc abil esineda väike protsent B-rakke, mis ekspresseerivad ka neid markereid, mida pole välistatud.

JÄRELDUSED

Kuigi cDC1 (1. tüüpi dendriitrakud)sisaldab DC-de väikest alamhulka (Dendriitrakud)homöostaatilistes tingimustes näitab see uuring olulist korrelatsiooni selle rakupopulatsiooni ja inimese kliiniliste patoloogiliste tunnuste vahelneerudhaigus. See peegeldab nende tõenäolist tähtsust sellistes haigusprotsessides nagu ATN, poolkuu moodustumine proliferatiivses GN-is ja interstitsiaalne fibroos immuunvahendatud GN-is. Lisaks võib nende kaaslokaliseerimine ja korrelatsioon CD8t T-rakkudega anda selgituse nende toimemehhanismile, kinnitades loommudelite andmeid. Need leiud annavad tõuke uute terapeutiliste sihtmärkide uurimiseks, mis manipuleerivad neid rakke nende raviksneerudhaigused, nagu oleme teinud loomkatsetes (6), ja uurida nende kasutamist prognostilise markerina. cDC1-de rolli uurimiseks on vaja täiendavaid uuringuid nii inimestel kui ka loomadel (1. tüüpi dendriitrakud), nende toimemehhanism ja kuidas neid kõige paremini ravida sihtida.

VIITED

1. Pakalniskyte D, Schraml BU. Tavapäraste dendriitrakkude koespetsiifiline mitmekesisus ja funktsioonid. Adv Immunol(2017)134:89-135.doi:10.1016/bs.ai.2017.01.003

2. Merad M, Sathe P, Helft J, Miller J, Mortha A. Dendriitrakkude liin: dendriitrakkude ja nende alamhulkade ontogenees ja funktsioon püsiseisundis ja põletikulises keskkonnas. Annu Rev Immunol (2013)31:563-604.doi:10.1146/aastane immunol-020711-074950

3. Segerer S, Heller F, Lindenmeyer MT, Schmid H, Cohen CD, Draganovici D jt. Dendriitrakkude markerite kompartmendi spetsiifiline ekspressioon inimese glomerulonefriidi korral.NeerInt (2008)74(1):37-46.doi:10.1038/ki.2008.99

4. Woltman AM, de Fiter JW, Zuidwijk K, Vlug AG, Bajema IM, van der Kooij SW jt. Dendriitrakkude alamhulkade kvantifitseerimine inimese neerukoes normaalsetes ja patoloogilistes tingimustes.NeerInt (2007) 71(10):1001-8. doi: 10.1038/sj.ki.5002187

5. Cao Q, Lu J, LiQ, Wang C Wang XM, Lee VW jt. Cd103 pluss dendriitrakud kutsuvad esile Cd8 pluss T-rakkude reaktsioonid kiirendamiseksNeerVigastusadriamütsiini nefropaatia korral. J Am Soc Nephrol (2016) 27(5):1344-60.doi: 10.1681/ASN.2015030229

6. Wang R, Chen T, Wang C, Zhang Z, Wang XM, Li Q jt. Flt3 inhibeerimine leevendabKroonilineNeerHaiguspärssides CD103 pluss dendriitrakkude poolt vahendatud T-rakkude aktivatsiooni. Nephrol Dial Transplant(2019)34(11):1853-63. DOI: 10.1093/gfy385

7. Evers BD, Engel DR, Bohner AM, Tittel AP, Krause TA, Heuser C jt Cd103 plusNeerDendriitrakud kaitsevad poolkuu GN-i eest, säilitades Il{0}}regulatiivseid T-rakke. J Am Soc Nephrol (2016) 27(11):3368-82. DOI: 10.1681/ASN.2015080873

8. Kitching AR, Ooi JD. Neeru dendriitrakud: pikk ja käänuline tee. J Am Soc Nephrol (2018) 29(1):4-7.doi: 10.1681/ASN.2017101145

9. Kassianos AJ, Wang X, Sampangi S, Muczynski K, Healy H, Wilkinson R. Inimese CD141(hi)CLEC9A(pluss)ja CD1c(pluss)müeloidsete dendriitrakkude alamhulkade suurenenud tubulointerstitsiaalne värbamine neerufibroosi ja B korralNeerB. Am J Physiol Renal Physiol (2013) 305(10): F1391-401. doi:10.1152/adrenal.00318.2013

10. Guilliams M, Dutertre CA, Scott CL, McGovern N, Sichien D, Chakaro S jt. Järelevalveta kõrgmõõtmeline analüüs joondab dendriitrakud üle kudede ja liikide. Immunity (2016) 45(3):669-84.doi: 10.1016/j.immuni.2016.08.015

11. Villani AC, Satija R, Reynolds G, Sarkizova S, Shekhar K, Fletcher J jt. Üherakuline RNA-seq paljastab uut tüüpi inimese vere dendriitrakke, monotsüüte ja eellasrakke. Teadus(2017)356(6335):4-6. DOI: 10.1126/science.aah4573

12. Almaani S, Meara A, Rovin BH. Lupus nefriidi värskendus. Clin I Am Soc Nephrol (2017)12(5):825-35.doi: 10.2215/CJIN.05780616

Märge:ülaltoodud ei ole täielik viidete loend