Trombomoduliin on preeklampsiaga naiste neerudes ülereguleeritud
Mar 22, 2022
Endoteeli glükoproteiini trombomoduliin reguleerib koagulatsiooni, veresoonte põletikku ja apoptoosi. Aastalneerud, kaitseb trombomoduliin glomerulaarfiltratsiooni barjääri, kutsudes esile glomerulaarse endoteeli ja podotsüütide vahelise läbirääkimise. Mitmeid glomerulaarseid patoloogiaid iseloomustab glomerulaarse trombomoduliini kadu. Preeklampsiaga naistel on lahustuva trombomoduliini sisaldus seerumis suurenenud, mis võib peegeldada glomerulaarse endoteeli kadu. Otsustasime uurida, kas trombomoduliini ekspressioon on vähenenud preeklampsiaga naiste ja angiogeneesi inhibiitoriga kokku puutunud rottide neerudes. Trombomoduliini ekspressiooni uuriti immunohistokeemia ja qPCR abilneeru-lahkamise kuded, mis koguti 11 preeklampsia naiselt, 22 rasedalt kontrollilt ja 11 hüpertensiivselt mitterasedalt naiselt. Edasi,neerudrottidel, keda raviti sunitiniibi või sunitiniibi suurenevate annustega kombinatsioonis endoteliini retseptori antagonistidega. Glomerulaarse trombomoduliini valgu tase tõusisneerudpreeklampsiaga naistel. Paralleelselt sunitiniibiga kokku puutunud rottidel oli glomerulaarne trombomoduliin annusest sõltuval viisil ülesreguleeritud ja glomerulaarse trombomoduliini ülesreguleerimine eelnes histopatoloogiliste muutuste ilmnemisele. Selektiivne ETAR-i blokaad, kuid mitte kahekordne ETA/BR-blokaad, normaliseeris sunitiniibi poolt indutseeritud trombomoduliini ekspressiooni ja albuminuuria suurenemise. Teeme ettepaneku, et glomerulaarse trombomoduliini ekspressioon suureneb varajases staadiumisneerukahjustusantiangiogeensete seisundite poolt esile kutsutud. Selle nefroprotektiivse valgu ülesreguleerimine glomerulaarsetes endoteelirakkudes võib olla mehhanism glomerulaarfiltratsiooni barjääri kaitsmiseks preeklampsia korral.
Märksõnad;neerupuudulikkus; neerud; neerukahjustus; Neerufunktsiooni häired; neerukuded; neeru-
CISTANCHE PARANDAB neeru-/NEerupuudulikkust
Preeklampsia mõjutab 3–5 protsenti rasedatest ja on oluline emade ja vastsündinute haigestumuse ja suremuse põhjus1. Preeklampsiat iseloomustab platsenta düsfunktsioon ja mitmete antiangiogeensete ja põletikku soodustavate tegurite (nt lahustuv Flt-1, lahustuv endogliin ja TNF-alfa) tootmine platsentas, mis soodustavad süsteemset endoteeli düsfunktsiooni ja veresoonte resistentsuse suurenemist. ja tüsistused mitmes elundis2. Theneerudesineb sageli preeklampsiaga naistel, mille sümptomid ulatuvad kergest proteinuuriast kuni nefrootilise ulatusega proteinuuriani janeerupuudulikkushaiguse hilisemates staadiumides 3. Te patoloogilised muutusedneerudpreeklampsiaga naiste puhul on iseloomulikud endoteliinid, podotsüütide jala protsessi kadumine ja podotsüütide kadu4,5. Mis neid patoloogilisi muutusi põhjustab, pole täielikult teada.Neerufunktsiooni häiredpreeklampsia korral on tõenäoliselt põhjustatud glomerulaarfiltratsiooni barjääri säilitamisega seotud signaaliradade katkemisest6. Näiteks põhjustab antiangiogeense faktori lahustuva Flt-1 suurenenud tase VEGF-i signaalide häireid glomerulites, mille tulemuseks on glomerulaarfiltratsiooni barjääri katkemine, proteinuuria ja glomerulaarne endotelioos7,8. Vastavalt sellele on angiogeenset signaalimist inhibeerivad ravimid, nagu sunitiniib, seotud kõrvaltoimetega, mis jäljendavad preeklampsiat.neerudfenotüüp 9. Teine oluline hüpertensiooni vahendaja janeerukahjustuspreeklampsia korral on VEGF-i inhibeerimine endoteliini süsteem10. Endoteliin on tugev vasokonstriktor, mida toodavad endoteelirakud, mis annavad signaali endoteliini tüüpi kaudu
Retseptor (ETAR) veresoonte silelihasrakkudel, mille tulemuseks on vasokonstriktsioon11. Seevastu endoteliini signaaliülekanne B-tüüpi endoteliini retseptori (ETBR) kaudu põhjustab lämmastikoksiidi ja prostatsükliini tootmist, mis soodustavad vasodilatatsiooni 11, 12. ETR-i blokaad ja eriti selektiivne ETAR-i antagonism vähendab tõhusalt vererõhku ja proteinuuriat preeklampsia ja VEGF-i inhibeerimise näriliste mudelites13. Samamoodi näitasime hiljuti, et selektiivne ETAR-i blokaad päästabneeru-VEGF-i inhibeerimisega kokku puutunud rottide fenotüüp14. Trombomoduliin on transmembraanne glükoproteiin, mida ekspresseerivad peamiselt endoteelirakud ja mis on endoteeli pinna glükokalüksi komponent15. Trombomoduliin säilitab veresoonte homöostaasi, reguleerides koagulatsiooni, põletikku ja apoptoosi 15, 16. Preeklampsiaga naistel on teatatud lahustuva trombomoduliini taseme tõusust seerumis17, mis tõenäoliselt viitab trombomoduliini ektodomeeni suurenenud lõhustumisele endoteelist18. Trombomoduliin mängib keskset rolli diabeetiliste hiirte glomerulaarse fltratsioonibarjääri säilitamisel: häiritud trombomoduliini signaaliülekanne põhjustab glomerulaarsete endoteelirakkude ja podotsüütide suurenenud apoptoosi ning glomerulaarse komplemendi aktivatsiooni suurenemist, mille tulemuseks on proteinuuria ja glomeruloskleroosi süvenemine. Trombomoduliinil on oluline tsütoprotektiivne toime glomerulaarsele fltratsioonibarjäärile ja trombomoduliini signaaliülekande häire võib olla seotudneeruhaiguspreeklampsia korral. Selles uuringus uurisime, kas trombomoduliini ekspressioon on vähenenudneerudpreeklampsiaga naistel ja VEGF-i inhibeerimise rotimudelil. Lisaks uurisime endoteliini süsteemi rolli neeru trombomoduliini ekspressioonil selles rotimudelis, kasutades selektiivset ETAR antagonisti ja kahekordset ETA / BR antagonisti.
meetodid
Patsiendi materjal. Selles uuringus kasutatud neerude lahkamise kohordi on varem kirjeldatud (vt:21). Lühidalt öeldes viidi kogumiseks läbi üleriigiline Hollandi patoloogiaregistri (PALGA) otsingneerukudedpatsientidest, kes olid rasedad ja kellel oli kinnitatud preeklampsia juhtum. Lisaks kaasati kaks kontrollrühma: (1) rasedad naised, kellel ei olnud enne rasedust või raseduse ajal hüpertensiivseid häireid, ja (2) noored mitterasedad naised, kellel on anamneesis krooniline hüpertensioon. Patoloogiaandmed olid seotud Hollandi Sünnitusabi Seltsi riikliku emade suremuse komitee dokumentidega. Preeklampsia määratleti Rahvusvahelise Raseduse Hüpertensiooni Uuringute Ühingu (ISSHP) diagnostiliste kriteeriumide alusel22. Parafiiniga kaetudneerudSelle uuringu jaoks olid saadaval proovid 11 preeklampsiaga naiselt, 22 normotensiivselt rasedalt kontrollilt ja 11 mitterasedalt hüpertensiivselt kontrollilt. Kõik lahkamise proovid kodeeriti ning seejärel töödeldi ja analüüsiti anonüümselt vastavalt Hollandi riiklikele eetikajuhistele (Code for Proper Secondary Use of Human Tissue, Hollandi Meditsiiniteaduslike Seltside Föderatsioon). Selle uuringu kiitis heaks Leideni ülikooli meditsiinikeskuse meditsiinieetika komitee (litsentsi number P12.107).
CISTANCHE PARANDAB NEERU/NEERU FUNKTSIOONI
Rotid. Katsed viidi läbi vastavalt Euroopa Parlamendi direktiivi 2010/63/EL ja Hollandi loomkatsete seaduse juhistele pärast Eras mus Medical Centeri loomaeetikakomiteelt (litsentsi number 118-16-01) heakskiidu saamist. Isased Wistar Kyoto rotid (WKY, 280–300 g) saadi 10 nädala vanuselt. Loomi hoiti katseruumis, kus temperatuur hoiti 21–22 kraadi ja 12-h valguse/pimeduse tsükkel. Loomadel oli ad libitum juurdepääs standardsele laboratoorsele roti toidule ja veele. Selles uuringus kasutati kahte erinevat katset üksikasjalike meetodite ja nende loomade fenotüübiga, mis avaldati varem 14, 23. Lühidalt, rotte raviti 8 päeva jooksul erinevate sunitiniibi annustega koos ETR antagonistidega või ilma. Aordi vererõhku mõõdeti raadiotelemeetria abil. Enne ja pärast ravi(de) manustamist hoiti rotte 48 tundi metaboolsetes puurides. Esimest päeva kasutati aklimatiseerumiseks ja teist päeva 24-h uriiniproovide kogumiseks. Esimeses uuringus määrati rotid juhuslikult saama väikeses, keskmises või suures annuses sunitiniibi (vastavalt 7, 14 või 26,7 mg/kg/päevas sunitiniib-L-malaadiga (Sutent, Pfizer)) või kandjat 8 päeva jooksul. . Katse lõpus surmati rotid 60 mg/kg pentobarbitaaliga intraperitoneaalselt ja veretustatakse kõhuveeni punktsiooniga23. Teises uuringus manustati rottidele vehiikulit või vahepealset sunitiniibi annust (14 mg/kg/päevas poos) või kombinatsioonis matsitentaaniga (kahekordne ETA/BR antagonist, 100 mg/kg/päevas poos) või sitaksentaaniga (selektiivne ETAR). antagonist, 30 või 100 mg/kg/päevas po). Katse lõpus surmati rotid Forane (isofluraan) anesteesia üledoosi ja veretustamise teel kõhuveeni punktsiooniga14. Mõlemas uuringus, pärast eutanaasiat,neerudlõigati kiiresti välja järgnevateks analüüsideks.
Neerude histoloogia.Patoloog hindas pimesi neerulõike endoteelirakkude turse, epiteelirakkude turse, isheemia ja epiteelisisese valgu olemasolu või puudumise suhtes. Elektronmikroskoopia jaoks uuriti kahte glomeruli, uuriti glomerulaarsete endoteliinide olemasolu ja podotsüütide morfoloogiat. Erinevate sunitiniibi kontsentratsioonidega kokku puutunud inimeste ja loomade histopatoloogilised leiud on avaldatud varem 21, 23.
Immunohistokeemia.Neerulõigud deparafineeriti. Kuumuse poolt indutseeritud antigeeni otsimine viidi läbi tsitraadi (inimese trombomoduliinivastane antikeha) või Tris/EDTA (roti trombomoduliini ja ETAR-i vastaste antikehade) puhvrite abil. Peroksidaas blokeeriti vesinikperoksiidi lahuses 20 minutit.Neerproove inkubeeriti hiire monoklonaalse anti-inimese trombomoduliiniga (1:200, Leica Biosystems, Danvers), küüliku monoklonaalse hiire/roti vastase trombomoduliiniga (1:2000, Abcam) või küüliku polüklonaalse anti-ETAR-iga (1:700, Invitrogen, Carlsbad) antikeha ühe tunni jooksul toatemperatuuril. Primaarse antikeha seondumine visualiseeriti peroksidaasiga märgistatud hiirevastase või märgistatud küülikuvastase polümeeriga (Dako, Taani) ja kromogeenina diaminobensidiiniga.
Värvimise analüüs.Trombomoduliini ja ETAR-i värvimist hindasid kaks sõltumatut vaatlejat, kes olid kliinilise diagnoosi ja ravi osas pimestatud (CCLA ja MB). Kakskümmend viis juhuslikult valitud glomeruli proovi kohta hinnati poolkvantitatiivse skaala abil järgmiselt: 0, puudub; 1,<10% glomerular="" staining;="" 2,="" 10–49%="" glomerular="" staining;="" 3,="" 50–90%="" of="" glomerular="" staining;="" and="" 4,="">90 protsenti glomerulaarsetest värvimistest. Erinevate skooride tüüpilised näited on näidatud lisajoonistel S1, S2, S3. Interobserver kokkulepe oli kõigis punktikatsetes minimaalselt piisav (κ suurem kui 0,5 või sellega võrdne). Kui vaatlejad hindasid glomeruleid erinevalt, saavutati konsensus.
qPCR.Trombomoduliini ja ET AR mRNA ekspressiooni kvantitatiivseks määramiseks viidi läbi kvantitatiivne PCR. RNA eraldati TRIzol reagendiga (Life Technologies, San Francisco, CA, USA). cDNA süntees viidi läbi AMV pöördtranskriptaasiga (Roche, Basel, Šveits) ja SYBR Greeni kvantitatiivne PCR viidi läbi vastavalt tootja protokollile (Bio-Rad Laboratories Inc, Hercules, CA, USA). Praimeri järjestusi on kirjeldatud täiendavas tabelis S1. Ekspressiooni mõõdeti võrdleva lävitsükli meetodil ja normaliseeriti hüpoksantiini fosforibosüültransferaasi ekspressioonile. Rakenduse spetsiifilisuse kontrollimiseks viidi läbi sulamiskõvera analüüs.
CISTANCHE PARANDAB neeru-/NEEREDIALÜÜSI
Statistiline analüüs.Interobserver variatsioon määrati kappa statistika abil. Tavaliselt jaotatud pidevandmeid analüüsiti, kasutades ühesuunalist ANOVA-d, millele järgnes väikseima erinevuse post-hoc test kavandatud paaride kaupa võrdlemiseks. Glomerulaarse trombomoduliini ekspressiooniskooride erinevuste analüüsimiseks lahkamiskohordi rühmade vahel kasutati üldistatud hinnanguvõrranditega (GEE) koondatud andmete ordinaalset logistilist regressiooni. Trombomoduliini ekspressiooni ja histopatoloogiliste või kliiniliste leidude vaheliste oletatavate korrelatsioonide analüüsimiseks kasutati Pearsoni korrelatsiooni. Trombomoduliini ja ET AR vastuse kõverate kuju sunitiniibi annusevahemikus uuriti regressioonijoonte abil. lk<0.05 was="" considered="" statistically="" signifcant.="" unless="" stated="" otherwise,="" summary="" data="" in="" the="" figures="" are="" reported="" as="" the="">
Tulemused Preeklampsiaga naiste neerudes suureneb glomerulaarne trombomoduliin. Trombomoduliini värvimist analüüsiti 11 preeklampsiaga naise neeruproovides,22 normotensiivset rasedat ja 11 mitterasedat hüpertensiivset kontrolli. Hüpertensiivsed kontrollrühmad olid vanemad kui kahe teise uuringurühma naised; võrreldes rasedate kontrollidega oli preeklampsia naistel pikem rasedusaeg ja kõrgem vererõhk (täiendav tabel S2). Hoolimata trombomoduliini olemasolust glomerulites, esines trombomoduliin kõigis uuritud proovides peritubulaarsetes kapillaarides (täiendav joonis S1). Glomerulites näis trombomoduliini ekspressioon pärinevat vaskulaarsest poolusest (joonis 1A). Keskmiselt oli glomerulaarse trombomoduliini ekspressioon kõrgem preeklampsiaga patsientidel võrreldes rasedate ja hüpertensiivsete kontrollrühmadega (joonis 1); Võrreldes preeklampsiaga, oli kontrollrühmadel madalam glomerulaarse trombomoduliini ekspressiooniskoor (rasedate kontrollide OR: 3.0; 95 protsenti -CI: (1,1, 7,8), p<0.05; and="" hypertensive="" controls,="" or:="" 6.1;="" 95%-ci:="" (1.6,="" 23.3),=""><0.01). in="" pre-eclampsia="" cases,="" glomerular="" thrombomodulin="" protein="" levels="" were="" inversely="" associated="" with="" the="" presence="" of="" glomerular="" endothelins="" (r:="" −0.71;=""><0.05). furthermore,="" in="" hypertensive="" controls,="" thrombomodulin="" levels="" were="" inversely="" associated="" with="" the="" glomerular="" tuf="" size="" (r:−0.79,=""><>
Glomerulaarne trombomoduliini ekspressioon sunitiniibiga kokku puutunud rottidel.Et paremini mõista meie tulemusi preeklamptiasneerud,glomerulaarset trombomoduliini värvimist uuriti rottidel, kellele manustati VEGF-i retseptori inhibiitori sunitiniibi suurenevaid annuseid. Sunitiniibi manustamine põhjustas annusest sõltuval viisil vererõhu tõusu ja proteinuuria23. Sunitiniibi väikese annusega kokku puutunud rottidel ei esinenud histopatoloogilisi kõrvalekaldeid; endoteliine täheldatineerudsunitiniibi keskmiste ja suurte annustega kokku puutunud rottidel; fibriini ladestumist täheldati ainult sunitiniibi23 suure annusega kokku puutunud loomade glomerulaarkapillaarides. Ükski hinnatud glomeruli rottidel ei olnud trombomoduliini suhtes negatiivne. Glomerulaarse trombomoduliini valgu sisaldus suurenes nende rottide neerudes, kes said sunitiniibi väikese ja keskmise annusega (p < 0.05,="" joonis="" 2a),="" kuid="" mitte="" rottidel,="" kellele="" manustati="" suurimat="" annust="" sunitiniib.="" nende="" leidude="" toetuseks="" näitas="" regressioonimudel,="" et="" glomerulaarse="" trombomoduliini="" valgu="" tase="" oli="" sunitiniibi="" annusega="" mittelineaarselt="" seotud="" statistiliselt="" olulise="" ruutsuhtena="" (joonis="" 2b,="" y="2.829" pluss="" 0).="" 056x−0,002x2,=""><0.01). to="" study="" the="" factors="" that="" may="" induce="" upregulation="" of="" glomerular="" thrombomodulin,="" we="" next="" stained="" for="" the="" etar,="" which="" mediates="">neerukahjustusindutseeritud VEGF-i inhibeerimisega. Rottidel, keda raviti sunitiniibi väikeste ja keskmiste annustega, kuid mitte suure sunitiniibi annusega ravitud rottidel, suurenes glomerulaarne ETAR-i värvumine võrreldes kontrollrottidega (p < {0}}.0="" 1,="" joonis="" 2c).="" paralleelselt="" trombomoduliini="" tasemega="" seostati="" glomerulaarset="" etar-i="" taset="" sunitiniibi="" annusega="" (y="0,642" pluss="" 0,087x-0,003x2,=""><0.001). without="" taking="" into="" account="" the="" different="" treatment="" groups,="" glomerular="" etar="" protein="" levels="" were="" directly="" correlated="" with="" glomerular="" thrombomodulin="" protein="" levels="" (r:="" 0.460,=""><>
Ravi ETAR-i blokaatoriga sitaksentaan normaliseerib trombomoduliini ekspressiooni.Et uurida, kas trombomoduliini ekspressiooni reguleerib endoteliini signaalimine, raviti sunitiniibi keskmise annusega rotte ETR-i blokeerivate ainetega. Ravi selektiivse ETAR-i antagonistiga (sitaksentaan) normaliseeris vererõhku ja albuminuuriat sunitiniibiga ravitud rottidel14 (täiendav joonis S4). Vastupidi, ravi kahe ETA / BR antagonistiga (macitentan) põhjustas vererõhu normaliseerumise, kuid mitte sunitiniibi poolt indutseeritud albuminuuria normaliseerumist (täiendav joonis S4).
Trombomoduliini mRNA ekspressioon suurenes sunitiniibiga kokku puutunud rottide neerudes võrreldes kontrollidega (joonis 3A, p).<0.01). administration="" of="" sitaxentan,="" at="" both="" concentrations,="" on="" top="" of="" sunitinib="" normalized="" thrombomodulin="" mrna="" expression="" to="" control="" levels=""><0.01). however,="" the="" administration="" of="" macitentan="" did="" not="" affect="" thrombomodulin="" mrna="" levels.="" relative="" thrombomodulin="" mrna="" expression="" was="" directly="" associated="" with="" relative="" etar="" mrna="" expression="" in="" the="" control="" group="" (r:="" 0.936,=""><0.01). in="" animals="" exposed="" to="" sunitinib="" only,="" thrombomodulin="" mrna="" expression="" was="" directly="" associated="" with="" the="" amount="" of="" albuminuria="" (r:="" 0.876,=""><0.01). at="" the="" protein="" level,="" sunitinib="" exposure="" resulted="" in="" higher="" glomerular="" thrombomodulin="" expression="" as="" compared="" to="" controls="" (fig. 3b,=""><0.05). neither="" co-administration="" of="" sunitinib="" with="" sitaxentan="" or="" macitentan="" resulted="" in="" the="" normalization="" of="" the="" sunitinib-induced="" increase="" in="" glomerular="" thrombomodulin="" protein="">
Arutelu
Siin näitame, et nefroprotektiivse valgu trombomoduliini tase on suurenenudneerudpreeklampsiaga naiste glomerulid. Lisaks näitame, et angiogeneesi inhibiitori sunitiniibiga kokku puutunud rottidel reguleeritakse glomerulaarset trombomoduliini annusest sõltuval viisil ja glomerulaarse trombomoduliini suurenemine eelneb histopatoloogiliste ilmingute ilmnemisele. Lõpuks näitame, et ETAR-i blokeerimine normaliseerib sunitiniibi poolt indutseeritud glomerulaarse trombomoduliini ülesreguleerimist. Meie leiud viitavad sellele, et glomerulaarse endoteeli trombomoduliini ülesreguleerimine toimub preeklampsia varases staadiumisneerukahjustusja toimib mehhanismina glomerulaarse fltratsioonibarjääri kaitsmiseks. Meie uuring on esimene, mis teatas suurenenud glomerulaarsest trombomoduliini ekspressioonist preeklampsia korral. Kuna varem avastasime, et preeklampsiaga naiste platsentas on trombomoduliin alareguleeritud24,
lahustuva trombomoduliini ektodomeeni suurenenud seerumitasemed preeklampsiaga patsientidel17 võivad tuleneda glomerulaarsest endoteelist. Lisaks leidsime pöördvõrdelise seose glomerulaarse trombomoduliini ekspressiooni ja glomerulaarsete endoteliinide olemasolu vahel, mis viitab sellele, et trombomoduliini ülesreguleerimine toimib glomerulaarse kaitsemehhanismina. Seda arusaama toetavad prekliinilised tõendid diabeetiliste hiirte kohta, kus trombomoduliin säilitab kriitiliselt glomerulaarrakkude ellujäämise ja pärsib glomerulaarkomplemendi aktivatsiooni 19, 20. Vastupidiselt meie järeldusele, et antiangiogeenne seisund suurendab glomerulaarse trombomoduliini taset, leiti eelmises uuringus, et sFlt-1-ravi vähendas glomerulaarse trombomoduliini ekspressiooni poolkuulise glomerulonefriidiga rottidel25. Hara jt 25 ei uurinud sFlt-1 mõju glomerulaarsele trombomoduliinile tervetel rottidel. Seetõttu, kuigi preeklampsia korral leitakse ka põletikuliste tegurite suurenenud taset, võib glomerulaarse trombomoduliini alaregulatsiooni selles uuringus seletada glomerulonefriidi korral esineva kõrge astme glomerulaarse põletikuga (põletikueelsed tsütokiinid, komplemendi aktivatsioon), mis pärsivad tugevalt trombomoduliini ekspressiooni26. .
Et selgitada, kas preeklampsia korral on glomerulaarne trombomoduliin süsteemse VEGF-retseptori inhibeerimise tulemusena ülesreguleeritud, uurisime trombomoduliini ekspressiooni sunitiniibiga kokku puutunud rottidel. Sunitiniib suurendas annusest sõltuvalt glomerulaarset trombomoduliini madalate ja keskmiste annuste korral, kuid mitte suurimate annuste korral. Kuna väikeses annuses sunitiniibiga23 kokku puutunud rottide neerudes histoloogilisi muutusi ei täheldatud, eelnes glomerulaarse trombomoduliini ekspressiooni suurenemine sunitiniibi poolt põhjustatud glomerulaarse histopatoloogilise kahjustuse tekkele. Rottidel, kellele manustati sunitiniibi vahepealset annust, täheldati glomerulaarse trombomoduliini kõrgeimat ekspressioonitaset ja see oli otseselt seotud albuminuuria hulgaga. Meie inimese preeklampsia juhtude neeru histopatoloogiline fenotüüp oli võrreldav sunitiniibi vahepealse annusega ravitud rottide neerukahjustusega: endoteliine täheldati 6-l 11-st preeklampsiast
juhtudel ja mikrotrombid täheldati ühel 11-st preeklampsia juhtumist21, samas kui rottide mudelis olid keskmise annusega ravitud rottidel endoteliinid ja suurima annusega ravitud rottidel olid endoteliinid kombineeritud fibriini ladestustega23. Teeme ettepaneku, et glomerulaarse trombomoduliini ekspressioon suureneks preeklampsia ja angiogeense inhibeerimise varases staadiumis kaitsemehhanismina, et kompenseerida antiangiogeenset stressi glomerulaarse fltratsioonibarjääri suhtes. Seevastu suurima annusega ravitud rottidel vähenes trombomoduliini ekspressioon kontrolltasemele. Hiljutine uuring näitas, et raske varajase preeklampsiaga naistel on endoteeli glükokalüksi kihi mõõtmed vähenenud27. Seetõttu teeme ka ettepaneku, et suure annusega sunitiniibiga ravitud rottidel mõjutataks endoteeli glükokalüksi, mis kutsub esile interaktsiooni trombomoduliini ja ensüümide vahel, aidates sellega kaasa proteolüütilisele lõhustumisele ja glomerulaarse trombomoduliini valgu kadumisele. Meie preeklampsia juhtudel seostati glomerulaarsete trombomoduliinide taseme tõusuga vähem glomerulaarseid endoteliinisid, mis on otseselt põhjustatud häiritud glomerulaarsest VEGF-i signaalimisest. In vitro uuringud on tuvastanud VEGF-i kui tugevat trombomoduliini ekspressiooni indutseerivat tegurit endoteelirakkudes28. Seetõttu võib neerutrombomoduliini ülesreguleerimine antiangiogeensetes tingimustes, nagu preeklampsia ja angiogeenne pärssimine, tunduda vastuoluline. Huvitaval kombel näitas üks uuring, et VEGF on suurenenud preeklampsiaga naiste glomerulites29, mis peegeldab tõenäoliselt glomerulaarset kompensatsioonimehhanismi, püüdes kompenseerida VEGF-i vähenenud biosaadavust. Seega võib trombomoduliini ülesreguleerimine olla põhjustatud glomerulaarse VEGF-i kompenseerivast suurenemisest süsteemsete antiangiogeensete tingimustes. Lisaks võib endoteliini signaalimine olla seotud glomerulaarse trombomoduliini reguleerimisega. Plasma endoteliini tase on suurenenud preeklampsiaga naistel30 ja on seotud süsteemse sFlt{20}} tasemega31,32. Meie rotimudelis normaliseerisid nii sitaksentaani (ETAR-i antagonist) kui ka matsitentaaniga (kahekordne ETA/BR-antagonist) sunitiniibist põhjustatud hüpertensioon meie rottidel14. Kuid ainult ravi sitaksentaaniga (ETAR antagonist) normaliseeris sunitiniibi poolt indutseeritud neerutrombomoduliini ülesreguleerimise ja vähendas albuminuuriat. See viitab sellele, et neeru trombomoduliini ekspressiooni reguleerimine ei sõltu hüpertensioonist tingitud endoteeli kahjustusest, mida toetas ka suurenenud trombomoduliini ekspressiooni puudumine meie hüpertensiivsetel kontrollpatsientidel. Jääb veel uurida, kas ETAR indutseerib trombomoduliini ekspressiooni süsteemsete mõjude või spetsiifiliselt glomerulaarsete endoteelirakkude signaaliülekande kaudu. Huvitav on see, et trombomoduliini ekspressioon normaliseerus sunitiniibiga ravitud rottidel ainult mRNA tasemel pärast ETAR-i blokeerimist, kuid mitte valgu tasemel. Seda lahknevust võib seletada translatsioonijärgsete mõjudega, valgu poolestusajaga ja teguritega, mis mõjutavad trombomoduliini lõhustumist endoteelist.
Trombomoduliinil on olulised põletikuvastased omadused, sealhulgas leukotsüütide infiltratsiooni pärssimine põletikueelsete molekulide, nagu Lewis y antigeeni ja HMGB -133,34 eraldamise teel, NF-κB aktiivsuse vähendamine35 ja komplemendi aktivatsiooni pärssimine20. Varem teatasime, et meie preeklampsia juhtudel suurenes glomerulaarkomplemendi aktivatsioon võrreldes rasedate ja hüpertensiivsete kontrollidega36. Tis viitab sellele, et glomerulaarse endoteeli trombomoduliini ülesreguleerimine preeklampsias toimib põletikuvastase ja komplemendivastase mehhanismina. Lisaks hästi tuntud põletikuvastasele toimele leiti hiljutises uuringus, et trombomoduliinil on põletikuvastased omadused; trombomoduliin seob leukotsüütide integriine LFA-1 ja Mac1, soodustades seeläbi leukotsüütide adhesiooni endoteeliga in vitro37. Glomerulaarse trombomoduliini sisalduse suurenemine võib seega samuti otseselt kaasa aidata glomerulaarsete põletike ja kahjustuste tekkele. Peame tunnistama oma uuringu piiranguid. Esiteks surid kõik preeklampsiaga naised, kellel uurisime glomerulaarse trombomoduliini ekspressiooni, preeklampsia tagajärgede tõttu. See muudab need naised preeklampsiaga patsientide spetsiifiliseks alarühmaks ja seetõttu ei pruugi selle uuringu tulemused kehtida kõigi naiste puhul, kellel tekib preeklampsia. Teiseks kasutati sunitiniibiga ravitud isasrotte mudelina trombomoduliini regulatsiooni uurimiseks antiangiogeensetes tingimustes. Lisaks põhjustab sunitiniib erinevate retseptor-türosiinkinaaside pärssimist ega ole spetsiifiline VEGF-i inhibiitor. On selge, et see mudel ei jäljenda täielikult preeklampsiat, kuid ravi sunitiniibiga põhjustab hüpertensiooni ja proteinuuriat23. Seetõttu saime seda mudelit kasutada trombomoduliini regulatsiooni uurimiseks antiangiogeensetes tingimustes. Vaatamata meie uuringu piirangutele, pakub see huvitavaid teadmisi preeklampsia neerukahjustuse mehhanismidest. Kokkuvõtteks võib öelda, et neeru trombomoduliini ekspressioon suureneb preeklampsia ja sunitiniibi poolt indutseeritud angiogeense inhibeerimise mudeli korral. Me oletame, et glomerulaarse trombomoduliini taseme tõus peegeldab reno-kaitsemehhanismi vastuseks antiangiogeensele stressile glomerulaarse fltratsioonibarjääri suhtes. Lisaks normaliseeris ravi ETAR-i antagonistiga neeru trombomoduliini mRNA ekspressiooni samaaegselt proteinuuria vähendamisega sunitiniibiga ravitud rottidel. Trombomoduliini rolli kohta glomerulaarses fltratsioonibarjääris on vaja rohkem uurida.
