Fenüületanoidglükosiidide terapeutiline toime tsüklofosfamiidist põhjustatud düszoospermiale hiirtel ja selle mehhanismile

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

ZHAO Dong-hail, ZHANG Lei?, ZHANG Yan², QI Ling', ZOU Xiang-ming'

Kokkuvõte: Eesmärk Uurida fenüületanoidglükosiidide terapeutilist toimet tsüklofosfamiidi (CTX) poolt indutseeritud düszoospermiale hiirtel ja selgitada protsessiga seotud mehhanisme. Meetodid Fenüületanoidglükosiid ekstraheeriti etanooliga ekstraheerimisega, nelikümmend isast BALB/C hiirt jagati juhuslikult kontrollrühma, mudelrühma, fenüületanoidglükosiidide väikese annuse rühma (50 mg · kg-I) ja fenüületanoidglükosiidide suure annuse rühma (100 mg). ·kg-). Välja arvatud kontrollrühm, loodi düszoospermia hiiremudel CTX peritoneaalse süstimisega päevases annuses 80 mg·kg-i üks kord päevas järjestikuse 5 päeva jooksul. Pärast modelleerimist manustati fenüületanoidglükosiide intragastraalselt vastavates annustes igale fenüületanoidglükosiidide rühmale. Kontrollrühma ja mudelrühma hiirtele anti võrdne kogus tavalist soolalahust gastrosoneerimise teel. Kõik ravimid viidi läbi üks kord päevas järjestikuse 30 päeva jooksul. Munandite kude saadi 24 tundi pärast viimast intragastraalset manustamist. Testosterooni tase munandikoe homogenaadis määrati ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsiga. Võrreldi spermatosoidide arvu, liikuvuse määra ja teratozoospermia määrasid erinevates rühmades. Munandikoe morfoloogilisi muutusi täheldati HE värvimise abil. Tulemused Võrreldes kontrollrühmaga vähenes mudelrühmas spermatosoidide arv ja liikuvus, suurenes teratozoospermia määr ja testosterooni tase munandikoe homogenaadis (P<0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" sperm="" counts="" and="" the="" motility="" rates="" were="" increased,="" the="" teratozoospermia="" rates="" were="" decreased,="" and="" the="" testosterone="" levels="" in="" the="" testis="" tissue="" homogenate="" were="" increased="" in="" phenylethanoid="" glycosides=""><0.05 or=""><0,01). the="" histological="" results="" showed="" atrophy="" and="" degeneration="" of="" seminiferous="" tubule,="" thicker="" seminiferous="" epithelium,="" and="" azoospermic="" lumina="" in="" the="" model="" group;="" the="" number="" of="" seminiferous="" epithelial="" layers="" was="" increased="" and="" the="" seminiferous="" cells="" orderly="" arranged,="" and="" many="" sperms="" were="" found="" in="" the="" tubules="" in="" phenylethanoid="" glycosides="" groups.="" conclusion="" phenylethanoid="" glycosides="" have="" obviously="" therapeutical="" effects="" on="" ctx-induced="" dyszoospermia="" in="" mice,="" and="" their="" mechanisms="" might="" be="" correlated="" with="" recovering="" the="" testosterone="">

Märksõnad: fenüületanoidglükosiidid; tsüklofosfamiid; spermatogeensed häired; hiired, BALB/C

Cistanche deserticolal on palju mõjusid, lisateabe saamiseks klõpsake siin

Sotsiaalse rütmi kiirenemise, halbade eluharjumuste ja keskkonnasaaste ning muude tegurite tõttu on meeste viljatuse peamiseks põhjuseks ebanormaalne sperma kvaliteet, nagu oligospermia ja astenospermia [1]. Praegu on oligospermia ja astenospermia raviks vähem ravimeid ning ravitoime pole ilmne. Traditsioonilise hiina meditsiini retseptid või toimeained parandavad hästi meeste reproduktiivfunktsiooni [2-6]. Retseptiravimite laia valiku tõttu ei ole aga selge seos ravimi farmakoloogilise toime ja efektiivsete koostisosade vahel, mis piirab spermatogeensete ravimite propageerimist ja kasutamist. Traditsioonilise hiina meditsiini tõhusate koostisosade uurimisel ja arendamisel ning selle ravitoimete uurimisel reproduktiivkahjustuste korral on hea rakendusväärtus. ThefenüületanoidglükosiididCistanche'is on Cistanche'is üks olulisemaid toimeaineid. Tavaliselt on need looduslikud glükosiidid, mis sisaldavad ester- ja oksoglükosiidsidemeid, mille tuumaks on glükoos. Neid leidub laialdaselt kaheidulehelistes taimedes 7]. Uuringud [8] on näidanud, et Cistanche fenetanoolglükosiidid võivad kaitsta roti spermat oksüdatiivsete kahjustuste eest in vitro, kuid selle spermatogeneesi kohta pole teateid. See katse uurib Cistanche terapeutilist toimetfenüületanoidglükosiididtsüklofosfamiidi poolt indutseeritud spermatogeneesiga hiirte spermatogeneesist ning annab eksperimentaalse ja teoreetilise aluse Cistanche fenetüülalkoholglükosiidide kasutamiseks spermatogeneesi häirete ravis.

1 Materjal ja meetodid

1.1 Katseloomad, peamised reaktiivid ja instrumendid

40 SPF täiskasvanud BALB/C hiirt, 6-8 nädala vanused, kaal 20-22 g, ostetud Jilini ülikooli põhimeditsiinikooli loomakatsekeskusest, loomasertifikaadi number: SCXK (Kõrgõzstan) {{3} }. Hiiri kasvatati adaptiivselt 5 päeva enne katset. Söötmistingimused: 22 kraadi -25 kraadi, ööpäevarütm (12 h/12 ​​h), tasuta joogivesi ja toit. Cistanche on ettevõtte Xinjiang Dakang Trading Company toode, tsüklofosfamiid süstimiseks osteti ettevõttelt Jiangsu Hengrui Pharmaceutical Co., Ltd. (partii number 11061921), munandikoe homogenaadi testosterooni ensüümiga seotud immuunanalüüsi komplekt osteti ettevõttelt Tianjin Jiuding, Ltd Medical Bioengineering. (partii number 20120812), muud reaktiivid on kõik kodumaised analüütilised reaktiivid. PLUS384 mikroplaadilugeja (MDC, USA), pöördmikroskoop TE2000U (Nikon, Jaapan), J-26XP tsentrifuug (Nanodrop, USA).

1.2 Tistanši valmistaminefenüületanoidglükosiidid

10 gCistanche tubulosapulbrit keedeti püstjahutiga 70% etanooliga kaks korda, iga kord 2 tundi, et saadafenüületanoidglükosiidkeskenduda. Kontsentreeritud lahusega töödeldi D101 makropoorse vaigu kolonnkromatograafiat ja elueeriti 70% etanooliga, et saadaCistanche fenüületanoidglükosiidalkohol. UV-spektrofotomeeter tuvastas ekstrakti lainepikkusel 333 nm.

1.3 Loommudeli ja manustamismeetodite valmistamine

40 isast BALB/C hiirt toideti adaptiivselt 5 päeva ja hiired jagati juhuslikult 4 rühma (igas rühmas 10 hiirt): kontrollrühm, mudelrühm, Cistanche cistanche madala fenüületanoidglükosiidide annus ja suure annusega Cistanche fenetüülalkohol. glükosiidrühm. Ülejäänud kolmele hiirte rühmale, välja arvatud kontrollrühm, manustati igale hiirele 5 järjestikuse päeva jooksul intraperitoneaalselt tsüklofosfamiidi 80 mg·kg-1, et valmistada spermatogeneesi häire loommudeleid. Pärast mudeli ettevalmistamist olid hiired väikese ja suure annusega rühmasCistanche fenüületanoidanti vastavalt 50 ja 100 mg·kg-'·d-'. , 1 kord päevas 30 järjestikuse päeva jooksul. Kõik hiired surmati 24 tundi pärast viimast manustamist ja tehti kahepoolsed testid. Parem munand fikseeriti formaldehüüdis. Munand ja munandimanus võeti vasakult küljelt. Munand homogeniseeriti ja tsentrifuugiti kiirusel 3,000 p/min 10 minutit. Supernatant võeti ja hoiti testimiseks külmikus 20 kraadi juures. Vasakut munandimanust testiti spermatosoidide tiheduse, spermatosoidide liikuvuse ja deformatsiooni määra suhtes.

1.4 Sperma tiheduse, spermatosoidide liikuvuse ja deformatsiooni määra määramine

Asetage 10 ml sperma toitelahust sisaldav katseklaas konstantse temperatuuriga veevanni, et see soojendaks temperatuurini 37 kraadi, eemaldage munandimanuse ühelt küljelt sidekude ja rasv, lõigake kude ja asetage see katseklaasi temperatuurile 37 kraadi. 10 min. Pärast sperma täielikku vabanemist tilgutage 1 tilk vererakkude loendusplaadile ja arvutage sperma tihedus vastavalt rakkude loendamise meetodile. Tulemust väljendatakse spermatosoidide arvuna milliliitri kohta; lisaks võta katseklaasist 5 μL sperma suspensiooni ja sega ühtlaselt sama koguse Eosiin-Y-ga, aseta 10 minutiks toatemperatuurile, lisa katteklaas ja jälgi valgusmikroskoobiga. Surnud spermatosoidid värvitakse roosaks ja elusad spermatosoidid ei värvu, kuid tsütoplasma on läbipaistev. Loendage 200 spermat proovi kohta, arvutage spermatosoidide elujõulisus ja tulemus väljendatakse protsentides, spermatosoidide elujõulisus=elusseemnerakkude arv / spermatosoidide koguarv × 100 protsenti . Veel 5 µl sperma suspensiooni fikseeriti 5 minutiks metanoolis, kuivatati ja värviti 1 tund 2-protsendilise eosiini vesilahusega, loputati ja föönitati. Otsige väikese võimsusega mikroskoobi all osi, kus spermatosoidid kattuvad vähem, ja kasutage sperma morfoloogia järjestikuseks kontrollimiseks suure võimsusega mikroskoopi. Iga hiir kontrollis 1000 täielikku spermat. Spermapead võeti lahti, deformatsioonidena hinnati banaanikujulisi, amorfseid, rasvapealisi, kahepealisi jne. Arvutati sperma deformatsiooni määr ja tulemused väljendati protsentides. Sperma deformatsioonimäär=deformeerunud spermatosoidide arv / spermatosoidide koguarv × 100 protsenti.

1.5 Reproduktiivhormoonide määramine

Munand kooriti ära ja asetati viaalinõusse ning eeljahutatud homogeniseerimiskeskkond (0.01 mol·L-sahharoos, 0,01 mol·L{{ 6}}Tris-HCl, 0,1 mmol· L-1EDTA-Naz lahused, pH 7,4), lõigake munandikude oftalmoloogiliste kääridega, valage see klaasist homogeniseerimiskatsuti ja homogeniseerige, tsentrifuugige temperatuuril 4 000 ×g 10 minutit madalal temperatuuril, võtke supernatant ja kasutage ensüümiga seotud immunosorbentreaktiivi Testosterooni tase munandikoe homogenaadis määrati kasti järgi ja iga proovi jaoks testiti 3 paralleelset proovi. Eksperimentaalsed etapid ja meetodid viidi lõpule vastavalt komplekti juhistele.

1.6 Munandikoe morfoloogiline vaatlus

Võtke hiire munandite parafiinilõigud, HE-värvid ja jälgige valgusmikroskoobi all spermatogoonia ja spermatogeensete rakkude jaotumist munandikoes.

1.7 Statistiline analüüs

Statistiline analüüs viidi läbi SPSS 17.{1}} statistikatarkvara abil. Iga rühma hiirte spermatosoidide tihedus, spermatosoidide liikuvuse määr, spermatosoidide deformatsiooni määr ja munandite testosterooni tase väljendati z±s-na ning rühmade võrdlus viidi läbi ühesuunalise dispersioonanalüüsi abil.

2. tulemused

2.1 Iga hiirte rühma spermatosoidide tihedus, elujõulisus ja sperma deformatsiooni määr

Võrreldes kontrollrühmaga vähenes mudelrühma spermatosoidide tihedus ja spermatosoidide liikuvus (P<0.01), and="" the="" sperm="" deformity="" rate="" increased=""><0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" sperm="" density="" and="" sperm="" motility="" rate="" of="" mice="" in="" each="" dose="" group="" of="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" increased=""><0.05 or=""><0.01), and="" the="" rate="" of="" sperm="" deformity="" decreased=""><0.05 and=""><0.01). compared="" with="" the="" low-dose="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" glycoside="" group,="" the="" high-dose="">Cistanche fenetüülalkoholi glükosiidrühmas suurenenud spermatosoidide tihedus ja spermatosoidide liikuvus (P<0.05), and="" the="" rate="" of="" sperm="" deformity="" decreased=""><>

2.2 Testosterooni tase hiirte munandite kudedes igas rühmas

Testosterooni tase kontrollrühma ja mudelrühma munandikoe homogenaatides oli vastavalt (10,26±0,57) ja (5,33±0,84) nmol·L-'. Mudelrühma testosterooni tase oli oluliselt madalam kui kontrollrühmal (P<0.01). the="" testosterone="" levels="" in="" the="" testicular="" tissue="" homogenate="" of="" the="" low-dose="">Cistanche fenüületanoidglükosiidrühm olid (7,55±1,21) ja (10,35±0,94) nmol·L-1. Madala ja suure annuse Cistanche testosterooni tasefenüületanoidglükosiidrühmad olid oluliselt kõrgemad kui mudelrühma omad (P<0.05 or=""><0.01). the="" level="" of="" testosterone="" in="" the="" testicular="" tissue="" homogenate="" of="" the="" high-dose="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" glycoside="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" the="" low-dose="" group=""><>

2.3 Hiire munandite morfoloogia igas rühmas

Vaadeldakse valgusmikroskoobiga; normaalse rühma munandis paiknevad spermatogeensed tuubulid tihedalt, sugurakkude tase ja arv on palju, seemneepiteel on korralikult paigutatud ja seemnetorukesed on kõik moodustatud spermatosoididest. Mudelrühmas olid hiirte munandites seemnetorukesed atroofeerunud ja degenereerunud, seemneepiteel oluliselt hõrenenud, epiteelikihtide arv vähenes, paigutus oli korrast ära ja spermatosoidide arv õõnsuses vähenes. Võrreldes mudelirühmaga on seemnetorukeste ja seemneepiteeli kihtide arv väikeses annusesCistanche fenüületanoidglükosiidrühm suurenes, epiteeli paigutus oli korrapärasem ja seemnetorukeste kahjustus paranes oluliselt; suur annusCistanche fenüületanoidglükosiidrühm parandas oluliselt seemnetorukeste struktuuri, Seemneepiteeli arv ja arv on oluliselt suurenenud, need on korralikult paigutatud, seemnetorukestes on küpsed spermatosoidid ja struktuur on põhimõtteliselt normaliseerunud. Vaata joonist 1 (sisend 6).