Farmakoloogilised uuringud akteosiidi inhibeeritud toime kohta algavad rottidel eesnäärme hüperplaasiaga

Akteosiidi inhibeeritud toime farmakoloogilised uuringud algavad rottidel eesnäärme hüperplaasiaga

Lisateabe saamiseks:ali.ma@wecistanche.com

ABSTRAKTNE:Loodi eesnäärme hüperplaasia (BPH) roti mudel ja kolm annustamisrühmaakteosiidmanustati suukaudselt 4 nädala jooksul, et uurida Cistanche tubulosast destilleeritud akteosiidi mõju apoptoosile ja eesnäärme ultramikrostruktuurile BPH-ga rottidel. Eesnäärme ultrastruktuurset muutust täheldati transmissioonielektronmikroskoopia abil. Tulemused näitasid sedaApoptoosnormaalse roti eesnäärme määr ei olnud ilmne, prostaat oli madalapoptoosmudelrühmas, suure annuse akteosiidiga ravis, roti pro-stateapoptoosoli oluliselt kõrgem kui mudelrühmal.Akteosiidvõib soodustada roti eesnäärme proptoosi ja mängida rolli eesnäärme healoomulise hüperplaasia pärssimisel

MÄRKSÕNAD:akteosiid, Cistanche, algab eesnäärme hüperplaasia

Klõpsake, et näha cistanche tubulosa annust ja Cistanche tooteid

Apoptoos eesnäärme hüperplaasia (BPH) ajal on praegu üks olulisemaid mehhanisme, mis on geneetiliselt kodeeritud ja võimaldab rakkudel kontrollida rakusurma, reageerides spetsiifilistele signaalidele. Pärast seda, kui eesnääre areneb täiskasvanu suuruseks, püsib eesnäärme rakkude proliferatsioonimäär 1% - 2% apoptoosi keskmise kiiruse tasakaalustatud toime tõttu ja kui see tasakaal on rikutud, peetakse seda eelsoodumuseks. BPH-st. Normaalsetes tingimustes on naiste ja androgeenide tase eesnäärmes ja selle normaalne vereringe proliferatsiooni ja apoptoosi vahel eksisteeriva homöostaasi seisund. Kui proliferatsioon on apoptoosiga tasakaalust väljas, viib see näärme edasisele kasvule ja laienemisele, võimaldades peamiselt epiteeli rakkudevahelise sektsiooni laienemist. Selles testis vaatlesime ja analüüsisime ühe keemilise komponendi mõjuCistanche, akteosiid(nagu fülood), apoptoosi ja ultrastruktuursete muutuste kohta roti eesnäärmes, luues eesnäärme hüperplaasia roti mudeli, et hinnata akteosiidi kasulikkust eesnäärme hüperplaasia inhibeerimisel ja luua teaduslik alus ravimi uue kasutusviisi väljatöötamiseks.Cistanche, Hiina ravim.

1 materjal ja meetodid

1. 1 katseloom

Viiskümmend isast SD-rotti vanuses 6-7 nädalat, puhta klassi ja kaaluga 80-100 g, saadi Yangzhou ülikooli võrdleva meditsiini keskusest.

1. 2 reaktiivi ja ravimeid

Testosterooni propionaadi süstimist valmistas Shanghai General Pharmaceutical Co., Ltd., spetsifikatsioon 25 mg · ML - 1, partii 060708. PI-värvi lahuse tarnis Yangzhou ülikooli testimiskeskus. akteosiidi sisaldus 945 g · kg - 1, valmistatud Hiina Farmaatsiaülikooli traditsioonilise hiina meditsiini analüüsi osakonnas.

1. 3 katseaparaati

Philips TECNAI 12 ülekandeelektronmikroskoop Hollandi Philips; Facsaria voolutsütomeeter, mis on toodetud Becton Dickinsonile.

1. 4 rühmitamist ja modelleerimine

Eesnäärme hüperplaasia mudel määrati kindlaks testosterooni propionaadi subkutaanse süstimisega rottide selga 4 nädala jooksul vastavalt kirjanduse meetodile. Mudelrotid jagati juhuslikult nelja rühma: mudelrühm, akteosiidi suure annuse mudelrühm, akteosiidi keskmise annuse mudelrühm, akteosiidi väikese annuse mudelrühm, igas rühmas 10 rotti; Kontrollrühmaks võeti veel 10 normaalset rotti.

1. 5 manustamisviisi

Nädal pärast modelleerimist said suure, keskmise ja väikese annusega rühmade rotid sondiga vastavalt 60, 30 ja 15 mg · (kg · d) - 1. Mudel- ja kontrollrühmadele manustati intragastraalselt võrdse mahuga tavalist soolalahust üks kord päevas 4 nädala jooksul ja kehakaalu kaaluti kord nädalas, et kohandada annust vastavalt kehakaalule.

1. 6 proovi kogumine ja töötlemine

1) Proovid ja ettevalmistamine: 24 tundi pärast viimast söötmist kaaluti tühja kõhuga rottide kehamass ja rotid surmati emakakaela nihestusega ning alakõhuosa avati kohe ja ümbritsev eesnäärmekude eemaldati ning vaba eesnääre. eemaldati ja osa eesnäärmeid homogeniseeriti kudede homogenisaatoris jäävannis, et valmistada eesnäärme üherakulisi suspensioone, mis värviti propiidiumjodiidiga üheetapilise protseduuriga; Teine osa eesnäärme koest fikseeriti 25 g · L - 1 glutaaraldehüüdis ja valmistati üliõhukesed lõigud.

2) Üherakuliste suspensioonide valmistamine: intaktne roti eesnääre eemaldati steriilsetes tingimustes anumasse, eesnäärmekoe pinnal olevat verd ja trombi loputati PBS-ga, et eemaldada ümbritsev kollateraalne rasv ning liigsed kiud- ja tsütoplasmaatilised membraanid, ja samast roti eesnäärmest koguti umbes 0,5 cm3 suurune värske eesnäärmekude, hakiti ja valmistati eesnäärmerakkude suspensioon.

Eesnäärmekoe plokk pandi Petri tassile ja lisati väike kogus PBS-i; Kude lõigati oftalmiliste kääridega jäävannis, homogenisaator jahvatati suspensiooni, lisati 10 ml PBS-i, koehomogenaat aspireeriti pipetiga, filtriti katseklaasidesse 0,074 mm pooridega. suurusega nailonvõrk, tsentrifuugiti kiirusel 1500 R · min - 1 3 minutit ja pelletit pesti veel kolm korda PBS-ga, iga kord 500 R · min - 1 lühiajalise madala kiirusega tsentrifuugimisega eemaldage rakujäägid ja 0,037 mm pooride suurusega nailonvõrk filtreeriti rakukogumite eemaldamiseks. Rakud loendati ja reguleeriti rakkude kontsentratsioonini 2 × 109 · L - 1. Värvige pimedas 1 ml PI-värvi lahusega 10 minutit temperatuuril 4 °C.

3) Ultraõhukese lõigu ettevalmistamine: üliõhukese koelõike ettevalmistamine.

2 tulemust ja analüüs

Tulemustest on teada, et akteosiidil on proapoptootiline toime. Rakkude apoptoosi tulemuste statistiline analüüs näitas, et apoptootiline määr rottidel, keda raviti vastavalt kõrge, keskmise ja väikese akteosiidiannusega, suurenes oluliselt ning erinevus normaalse rühma, mudelrühma ja positiivse rühmaga võrreldes oli äärmiselt ilmne. . See näitas, et akteosiid võib indutseerida raku apoptoosi ja mõju oli oluliselt tugevam kui positiivse kontrollravimi alprostadiili oma.

Akteosiidi mõju eesnäärme hüperplaasia rakkude ultrastruktuurile näidati elektronmikroskoopia abil: normaalses roti eesnäärmes on nähtavad tuumad terved, nukleoolid on silmnähtavad ja tuumakromatiini jaotus on ühtlane; Kareda endoplasmaatilise retikulumi suurus oli ühtlane, paigutatud korrapäraselt, vakuoliseerumisnähtust ei esinenud, epiteeli pinnal puudusid sõrmetaolised mikrovilli eendid, mitokondriaalset turset ei täheldatud ja luminaalset sekretsiooni oli vähe. Mudelrühmas olid eesnäärme rakkude tuumad ilmselgelt deformeerunud ja kahanenud ning tsütoplasma oli rikkalik; Kare endoplasmaatiline retikulum oli tugevalt laienenud ja märgatavalt vakuoleerunud ning vesiikulid olid täidetud suure tihedusega valgugraanulitega; Mitokondrid olid kergelt paistes, valendikus oli mõõdukalt tihe sekretsioon ja mõnes rakus oli näha sekretoorseid graanuleid. Akteosiidiga ravitud rottidel olid tuumad terved võrreldes mudelrühma omadega, veidi kondenseerunud tuumad, suurenenud tuuma tihedus, heterokromatiini akumulatsioon, mõned vakuoolid tsütoplasmas ja vähem vakuoole krobelises endoplasmaatilises retikulumis; Väikese annuse akteosiidi rühmas oli tuum kergelt kahanenud, ebaregulaarne ja tsütoplasma rikkalikum ning kare endoplasmaatiline retikulum vähenes.

3 Arutelu

Apoptootiliste rakkude kvantitatiivne tuvastamine FCM-i abil on lihtne, kiire ja objektiivne ning seda saab läbi viia mitmeparameetriliste testidega, pakkudes sügavamat arusaamist apoptoosi muutustest ja selle võimalikest regulatsioonimehhanismidest.

Apoptoos on programmeeritud rakusurma protsess mitmerakulistes organismides organismi arengu reguleerimiseks ja geenikoodidega määratud homöostaasi säilitamiseks. Apoptootilistel rakkudel on oma unikaalsed morfoloogilised ja bioloogilised omadused: kromatiini püknoos tuumas, ulatuslik DNA katkestuste lagunemine, raku terviklik kokkutõmbumine, rakumembraani kokkutõmbumine väliste protsessidega, mis ümbritsevad organelle, ja tuuma fragmendid, mis moodustavad iseloomulikke apoptootilisi kehasid, nii et apoptootilised rakud ei säilita mitte ainult puutumatut rakumembraani struktuuri ja funktsiooni, vaid ka organellide struktuuri terviklikkust, mis erineb raku nekroosist. Apoptoosi molekulaarne mehhanism ei ole siiani täielikult välja selgitatud ja uuringud on näidanud, et apoptoosiga seotud geenide regulatsioonis osalevad mitmesugused geenid.

Apoptoos pakub praegu suuremat huvi BPH protsessi vastu, mis on geneetiliselt kodeeritud ja võimaldab rakul kontrollida rakusurma, reageerides spetsiifilistele signaalidele. Pärast eesnäärme arenemist täiskasvanu suuruseks püsib eesnäärme rakkude proliferatsioonimäär 1% - 2% apoptoosi kiiruse tasakaalustatud toime tõttu ja selle tasakaalu rikkumist on pikka aega peetud BPH põhjuseks. . Normaalsetes tingimustes on östrogeeni ja androgeeni tase eesnäärmes ja normaalne tsükkel homöostaasi seisund, mis eksisteerib proliferatiivsete ja apoptootiliste protsesside vahel. Kui proliferatsioon on apoptoosiga tasakaalust väljas, põhjustab see näärme edasist kasvu ja suurenemist, peamiselt epiteelirakkude vaheseinte vahelise laienemise kaudu. Selle tasakaalu rikkumine võib tuleneda androgeeni taseme või funktsiooni muutustest; Mõlemad vastused võivad tuleneda ka DHT stimuleerimisest AR poolt või DHT poolt vahendatud kasvufaktori taseme muutustest. Selles uuringus viidi läbi FCM raku apoptoosi tuvastamiseks ja leiti, et apoptoosi kiirus rottide eesnäärmes, kellele manustati akteosiidi suurt annust, oli mudelrühmaga võrreldes märkimisväärselt suurenenud. Elektronmikroskoopia näitas, et mudelrühma eesnäärme rakkude tuum oli deformeerunud, krobeline endoplasmaatiline retikulum oli vesiikulites tugevalt laienenud, vesiikulid olid täidetud suure tihedusega valguosakestega ja vakuolisatsioon oli ilmne; Mitokondrid olid kergelt paistes, mis on kooskõlas seotud uuringute aruannetega

Rottidel vähenes eesnäärme hüperplaasia määr pärast akteosiidi sekkumist oluliselt. Suure annusega rühmal tekkisid ka varajased apoptoosi tunnused: eesnäärme rakkude tuumad jäid suures osas puutumata ja endoplasmaatilise retikulumi vakuoolid vähenesid oluliselt. Tuumad kondenseeriti suurenenud tuuma kompaktsuse ja heterokromatiini akumulatsiooniga, sarnaselt rottide kastreerimisjärgse eesnäärmekoe rakkude iseloomustamisega. Näidati, et akteosiid võib indutseerida apoptoosi eesnäärme hüperplaasiaga rottidel, reguleerida ja taastada tasakaalu apoptoosi ja eesnäärmerakkude proliferatsiooni vahel ning avaldada pärssivat toimet eesnäärme rakkude proliferatsioonile. Käesoleva uuringu ja varasemate uuringute tulemused viitavad sellele, et eesnäärme hüperplaasia pärssimine Cistanche keemilise komponendi akteosiidi poolt võib olla seotud raku apoptoosi soodustamise ning AR ja tgf-ur1 üleekspressiooni nõrgenemisega ning üksikasjalikku mehhanismi tuleb veel täielikult uurida.