Cistanche Deserticola soolestiku funktsiooni soodustav mehhanism

Yuan Gao, Chuanjie Zong, Fen Liu, Lei Fang, Runlan Cai, Yue Shi, Xi Chen, Yun Qi

Abstraktne

Fenüületanoidglükosiidid(PhG-d), polüfenoolsete ühendite klassi, peetakse üheks peamiseks bioaktiivseks koostisosaks.CistanchedeserticolaYC Ma (CD), mille ekstrakti kasutatakse suu kaudu traditsioonilises hiina meditsiinis. Kuigi varasemad farmakoloogilised uuringud on teatanud, et PhG-d avaldavad palju tegevusi, ei ole nende sooletranspordi profiile selgitatud. Selles uuringus uurisime PhG-rikka ekstrakti (PRE) soole läbilaskvust.CistancheDeserticolaintegreeritud süsteemina Caco{0}} raku monokihi mudelis, kasutades biotesti süsteemi. Tulemused näitasid, et PRE transporditakse peamiselt halvasti neelduva passiivse difusiooni kaudu kontsentratsioonigradienti alla ilma väljavooluta, mis annab farmakokineetilise aluse PhG-de kliiniliseks kasutamiseksCistanche Deserticola. Samuti määrasime kolme peamise soole läbilaskvusePhGs[akteosiid (AC), isoakteosiid (IS) ja ehhinakosiid (EC)]HLPC poolt. Lisaks töötasime välja uudse HPLC-fluorestsentsi tuvastamise meetodi, et täpselt määrata AC ja IS vooluhulk. Ootuspäraselt transpordiomadused kolmPhGson kooskõlas PRE omadega, mis näitab, et käesolev biotesti süsteem on sobiv ja usaldusväärne PRE-s sisalduvate toimeainerühmade (AIG) transpordiomaduste hindamiseks. Lisaks võib see süsteem sobida ka muude taimeekstraktide jaoks, kui neil on sobiv bioaktiivsus.

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Cistanche deserticolal on palju mõjusid, lisateabe saamiseks klõpsake siin

Sissejuhatus

Inimese käärsoole adenokartsinoomidest tuletatud Caco{0}} rakuliinil on enterotsüütidega sarnased omadused. Normaalsetes tingimustes eristuvad Caco-2 rakud spontaanselt küpsetest rakkudest ja moodustavad terved monokihid [1]. Kõrvuti asetsevad rakud kleepuvad tihedate ühenduste kaudu, mis on moodustunud monokihi apikaalsel küljel, mis suudab eristada passiivselt ja aktiivselt üle epiteelikihi transporditavaid ravimeid [2]. Morfoloogilise ja biokeemilise sarnasuse tõttu normaalsete enterotsüütidega on Caco-2 rakkude monokihid hästi aktsepteeritud in vitro mudel ravimite soolest imendumise potentsiaali ja transpordiomaduste uurimiseks [3, 4].

Erinevalt kemikaalidest on taimeekstraktid (PE) segud, mille bioloogilist aktiivsust ja aktiivseid koostisosi ei ole sageli hästi tuvastatud [5]. Lisaks on PE soolestiku transpordiomadused, erinevalt selle koostisosade omadustest, tihedalt seotud kliinilise kasutamisega. Caco{1}} raku monokihi uuritava proovi voo mõõtmine hõlmab tavaliselt keemilisi meetodeid, nagu HPLC, LC/MS jne. Kuigi need meetodid on võimsad tööriistad, on need keerulised, aeganõudvad, kallid ja aeg-ajalt nõuavad keerukaid seadmeid. Veelgi olulisem on see, et ei üksik ega vähemuskomponent ei suuda kajastada PE kui tervikut. Seega tuleb PE transpordiomaduste tuvastamiseks ja hindamiseks luua uudne lähenemisviis, mis ei sõltu koostisosade määramisest.

CistanchedeserticolaYC Ma (CD), holoparasiitne taim, on levinud traditsiooniline hiina meditsiin, mida kasutatakse peamiselt neerupuudulikkuse, keha nõrkuse ja kõhukinnisuse raviks ning need kasutusviisid on ametlikult registreeritud Hiina farmakopöas [6]. Fenüületanoidglükosiidid (PhG-d), sealhulgas ehhinakosiid (EC), akteosiid (AC), isoakteosiid (IS) jne, on polüfenoolsete ühendite klass [7]. Neid peetakse üheks peamiseks bioaktiivseks koostisosaksCistancheliigid [8]. Farmakoloogilised uuringud on näidanud, et bioaktiivsusPhGson mitmekesine ja sisaldab antioksüdatiivset [9], väsimusevastast [10], hepatoprotektiivset [11], immunomoduleerivat [12], põletikuvastast [7, 13] ja neuroprotektiivset toimet [14]. Kuid soolestiku transpordi omadusedPhGsei ole uuritud. Selles uuringus uurisime CD-st pärineva PhG-rikka ekstrakti (PRE) soole läbilaskvust integreeritud süsteemina ja kolme peamise PhG (AC, IS ja EC) läbilaskvust diferentseeritud Caco-2 rakkudes. Meie tulemused näitasid, et PRE transporditakse peamiselt halvasti neelduva passiivse difusiooni kaudu kontsentratsioonigradienti alla ilma väljavooluta, mis annab farmakokineetilise aluse PhG-de kliiniliseks kasutamiseks CD-s.

Materjalid ja meetodid

Materjalid

The human intestinal Caco-2 cell line was obtained from the American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA). AC, IS and EC (>98 protsenti ) osteti ettevõttelt Must Biotechnology Co. (Chengdu, Hiina). Dulbecco modifitseeritud Eagle'i sööde (DMEM), veise loote seerum (FBS) ja asendamatud aminohapped (NEAA) on toodetud firmas Gibco BRL (Grand Island, NY, USA). 6-Süvend TranswellTM plaadid (sisemembraani kasvupindala 4,67 cm2) saadi firmalt Corning (Costar) Inc. (Tewksbury, MA, USA). Roti-saba kollageen saadi firmast Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Kõik HPLC analüüsi reaktiivid ja kemikaalid olid analüütilise puhtusega.

PRE valmistamine Cistanche deserticolast

Õhukuivatatud CD-materjal pulbristati ja ekstraheeriti perkolatsiooniga 70% etanooliga. PhG-rikas fraktsioon valmistati vastavalt eelnevalt kirjeldatule [10] ja ekstraheeriti veega küllastunud n-butüülalkoholiga. Ekstrakti lahus kontsentreeriti ja kuivatati alandatud rõhul. Makropoorse vaigu-UV spektrofotomeetria [15] määras PhG sisalduseks 78,4 protsenti. Lõppproov esindas 1,75 protsenti toormaterjali saagist kuivmassist. Saadud proovi hoiti kuni edasise kasutamiseni -20 kraadi juures.

AC, IS ja EC määramine HPLC abil

AC, IS ja EC sisalduse määramiseks PRE-s kasutati Shimadzu HPLC süsteemi, mis oli varustatud LC-lahuse tarkvaraga. Kasutati pöördfaasi Intersil C18 kolonni (4,6 mm × 25{6}} mm, 5 μm) ja seda hoiti toatemperatuuril. Liikuvad faasid olid atsetonitriil ja vesi, mis sisaldas 0,1 protsenti fosforhapet (maht/maht) gradientelueerimisega (tabel 1) voolukiirusel 1,0 ml/min. UV-spektrofotomeetri detektor määrati 334 nm peale. Vahelduvvoolu ja IS voo täpseks määramiseks töötasime välja uudse HPLC-fluorestsentsi tuvastamise (HPLC-FLD) meetodi. Pärast struktuurianalüüsi ja fluorestsentsi lainepikkuse skaneerimist (andmeid pole näidatud) saime optimaalsed fluorestsentsi tuvastamise tingimused vahelduvvoolu (näit. 338 nm, Em: 448 nm) ja IS (nt 320 nm, Em: 434 nm) jaoks.

HPLC analüüsimeetodi valideerimiseks kasutati järgmisi jõudlusnäitajaid: stabiilsus, lineaarsus, tundlikkus, täpsus (päevasisene ja päevadevaheline varieeruvus) ja täpsus. Transpordipuhvris olevaid analüüte hoiti 24 tundi 25 kraadi juures pimedas ja mõõdeti nende stabiilsus. Analüüdid olid C-vitamiini juuresolekul väga stabiilsed (0,4 protsenti), kuna suhtelise standardhälbe (RSD) väärtused piigi piirkondades olid < 3,5="" protsenti.="" ac,="" is="" ja="" ec="" lineaarse="" regressiooni="" võrrand,="" korrelatsioonikordaja,="" lineaarsuse="" vahemik,="" lod="" ja="" loq="" on="" näidatud="" tabelis="" 2.="" lod="" (18–30="" nm)="" ja="" loq="" (60–100="" nm)="" väärtused="" näitavad,="" et="" hplc-fld="" ja="" hplc-uv="" meetodid="" on="" väga="" tundlikud.="" rsd="" väärtused,="" mis="" väljendavad="" meetodi="" täpsust,="" olid="" kõik="">< 2="" protsenti="" päevasisese="" ja="" päevadevahelise="" varieeruvuse="" korral,="" mis="" näitab="" head="" täpsust.="" taastumise="" hindamiseks="" lisati="" transpordipuhvrile="" ac,="" is="" ja="" ec,="" et="" saada="" kolm="" (kõrge,="" keskmine="" ja="" madal)="" kontsentratsiooni="" taset.="" analüütide="" meetodi="" saagise="" väärtused="" on="" kokku="" võetud="" tabelis="" 3.="" keskmine="" saagis="" oli="" vahemikus="" 90,0="" protsenti="" kuni="" 96,4="" protsenti,="" mis="" näitab="" head="" täpsust.="" kokkuvõtteks="" võib="" öelda,="" et="" kehtestatud="" hplc="" meetodid="" on="" rahuldavad="" lineaarsuse,="" tundlikkuse,="" täpsuse="" ja="" täpsuse="" osas="" ac,="" is="" ja="" ec="" kvantifitseerimiseks="">

PRE määramine biotesti süsteemiga

Biotest (üldine antioksüdatiivne võime) põhines FRAP (raud(III) redutseeriv / antioksüdantne jõud) testil, mida me varem kirjeldasime [16] ja mida valideerisime lineaarsuse ja täpsuse (päevasisene ja päevadevaheline varieeruvus) osas. Biotesti meetodi lineaarsus määrati kalibreerimiskõverate põhjal. Lineaarsuse kontsentratsioonivahemik oli 0.0625 − 40 ug/ml (y=0,0258x pluss 0,0968, R2=0,996). Kehtestatud biotesti meetodi täpsus määrati PRE analüüsi (10,0 ug/ml) päevasisese ja päevadevahelise varieeruvuse alusel. Meetodi päevane korratavus määrati viie järjestikuse määramise põhjal samal päeval. Päevadevahelist korratavust mõõdeti viie järjestikuse määramise põhjal kolmel erineval päeval. Meetodi täpsuse RSD väärtused olid vastavalt 1,014 protsenti ja 4,72 protsenti päevasisese ja päevadevahelise varieeruvuse korral, mis näitab head täpsust. Seega on kehtestatud biotesti meetod PRE kvantifitseerimiseks transpordipuhvris rahuldav lineaarsuse, täpsuse ja täpsuse osas.

Rakukultuur

Caco{{0}} rakke kultiveeriti 37 kraadi ja 95% suhtelise õhuniiskuse juures atmosfääris, mis sisaldas 5% CO2 ja söödet, mis koosnes DMEM-ist, 10% FBS-ist, 1% NEAA-st, 1% L-glutamiinist, penitsilliinist ( 100 U/ml) ja streptomütsiini (100 ug/ml). Rakkude kasvu ja diferentseerumise ajal vahetati söödet igal teisel päeval. Rakke kasvatati 75-cm2 plastpudelites ja koguti iga 3–5 päeva järel 0,05-protsendilise EDTA-trüpsiiniga. Transpordikatsete jaoks külvati rakud tihedusega 1 × 105 rakku/cm2 Transwelli sisestustele, mis olid kaetud kollageeniga. Ligikaudu 21 päeva pärast külvamist kasutati monokihte transpordikatsetes. Nende terviklikkus määrati trans-epiteliaalse elektritakistuse (TEER) mõõtmisega monokihtide lõikes EVOM-iga, mis oli varustatud ENDOHM-SNAP-iga (World Precision Instruments, Inc., USA). Caco-2 raku monokihi TEER väärtused pidid ületama 500 O∙cm2.

Transpordikatsed

Monokihti pesti transpordipuhvriga (P-puhver, mis sisaldas 10 mM HEPES-i, 1 mM naatriumpüruvaati, 10 mM glükoosi, 3 mM CaCl2 ja 145 mM NaCl, pH 7,4) ja seejärel eelinkubeeriti 20 minutit temperatuuril 37 kraadi. Pärast transpordipuhvri eemaldamist lisati AP-s asuvasse apikaalsesse (AP) kambrisse (1,5 ml) basolateraalsete (BL) suunauuringute jaoks värsket katseproove sisaldavat transpordipuhvrit või BL-i suunauuringuteks BL-kambrisse (2,5 ml). HPLC-ga AC, IS ja EC analüüside jaoks eemaldati igast vastuvõtukambrist erinevate ajavahemike järel (30, 60, 90 ja 120 min) alikvoot (300 ul). Vastuvõtja kambrit täiendati pärast iga proovivõttu sama koguse värske eelsoojendatud (37 kraadi) transpordipuhvriga. Kogutud proove hoiti edasiseks kasutamiseks temperatuuril -20 kraadi. Biotesti abil PRE määramiseks võeti ainult proovid 120 minuti pärast. PRE, AC, IS ja EC ebastabiilsuse tõttu lisati proovide stabiliseerimiseks 0,4% (mass/maht) C-vitamiini, et määrata AC, IS ja EC sisaldus HPLC abil ning proovid PRE jaoks. biotesti analüüsiti kohe pärast proovide võtmist. Arvutati iga proovi näiva läbilaskvuse koefitsiendi (Papp või 'Papp) väärtus.

Andmete analüüs

Papp väärtused AC, IS ja EC AP BL või BLAP suundades arvutati järgmise võrrandi alusel: Papp {{0}} (4Q/4t)/(AC0), kus Papp on HPLC abil määratud näiv läbilaskvuse koefitsient (cm/s). (4Q/4t) on testitava ühendi (AC, IS või EC) ilmumiskiirus vastuvõtja poolel (μmol/s); A on sisetüki pindala (cm2); C0 on uuritava ühendi esialgne kontsentratsioon doonori poolel (μmol/ml). Täpsemalt, Pappi väärtuste arvutamisel kasutati massiühikut "ug" "μmol" asemel. Andmed on väljendatud keskmistena ± SD.

Tulemused

Akteosiidi, isoakteosiidi ja ehhinakosiidi koostis Cistanche Deserticola PRE-s

Kuna AC, IS ja EC peetakse Cistanche liikide peamisteks bioaktiivseteks PhG-deks [8], analüüsisime nende sisaldust PRE-s HPLC-UV abil. Tüüpiline kromatogramm on näidatud joonisel 1. Nende koostisosade identifitseerimine põhines retentsiooniaegade ja UV-spektri võrdlemisel autentsete standardite omadega lainepikkusel 334 nm. AC, IS ja EC sisaldus PRE-s oli vastavalt 26,60 protsenti, 1,84 protsenti ja 32,83 protsenti. Seega moodustavad need kolm ühendit 61,27 protsenti PRE-st; Lisaks näitavad ülaltoodud tulemused, et PhG sisaldus PRE-s on 78,4 protsenti. Seetõttu moodustavad AC, IS ja EC ligikaudu 80 protsenti PRE-s esinevatest PhG-dest.

PRE, AC, IS ja EC kogu antioksüdatiivne võime

On teatatud CD-st pärinevate PhG-de antioksüdatiivse toime uuringutest [9] ning AC, IS ja EC moodustavad ligikaudu 80 protsenti PRE-s esinevatest PhG-dest. Seega analüüsiti PRE, AC, IS ja EC kogu antioksüdatiivset võimekust ja neid väljendatakse FRAP väärtuste abil (× 10–6 mmol). Nagu on näidatud joonisel 2, kui FRAP väärtus oli 8 × 10–6 mmol, olid PRE, AC, IS ja EC lõppkontsentratsioonid 6,20 ug/ml, 3,14 ug/ml, 22,92 ug/ml ja 4,89 ug/ml. ml, mis näitab, et nende nelja proovi kogu antioksüdatiivne võime oli järgmine: AC > EC > PRE > IS. PRE bioaktiivsus on omistatud selle toimeainerühmadele (AIG). Umbes 60 protsendil PRE-st näitasid AC ja EC tugevamat kogu antioksüdatiivset toimet kui PRE ja IS. Kuna IS (1,84 protsenti) moodustab PRE-st väga väikese osa, on PRE-s selgelt aktiivsed ka teised komponendid, nagu nõrgalt antioksüdatiivne IS. Üllataval kombel erines kogu antioksüdatiivne aktiivsus AC ja selle isomeeri IS vahel peaaegu 7- korda, mis näitab, et mitte ainult fenoolsete hüdroksüülrühmade [9] arv, vaid ka fenoolsete hüdroksüülrühmade positsioon molekulis ei mõjutanud antioksüdanti. -oksüdatiivne toime.

Caco-2 monokihtide valideerimine

Caco-2 rakkude ühekihilise süsteemi valideerimiseks kasutatakse propranolooli (hästi transporditav marker) ja Luciferi kollase (halvasti transporditav marker) Papp väärtused AP-st BL-i läbi Caco-2 monokihtide. määrati vastavalt 1, 51 × 10–5 cm / s ja 2, 8 × 10–7 cm / s ning need väärtused langesid kokku eelmistes aruannetes avaldatud väärtustega [17, 18]. Aluselise fosfataasi aktiivsuse test kinnitas samuti, et Caco{13}}-rakkude monokihid olid kvalitatiivselt võrreldavad peensoole epiteeliga [19]

Akteosiidi, isoakteosiidi ja ehhinakosiidi läbilaskvus

In general, the Papp values of well-absorbed drugs were high (>1.0 × 10–5 cm/s), samas kui halvasti imenduvate ravimite omad olid madalad (< 1.0="" ×="" 10–6="" cm/s)="" [3].="" as="" shown="" in="" table="" 4,="" the="" papp="" values="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" was="" nearly="" on="" the="" order="" of="" 10–7="" cm/s,="" indicating="" that="" these="" compounds="" were="" poorly="" permeable.="" furthermore,="" efflux="" or="" active="" transport="" were="" not="" observed="" because="" the="" ratios="" of="" papp="" bl="" to="" ap="" papp="" ap="" to="" bl="" for="" ac,="" is="" and="" ec="" was="" between="" 0.90="" ~="" 1.55,="" and="" the="" criterion="" of="" net="" efflux="" proposed="" by="" the="" fda="" guidance="" is="" a="" ratio="" less="" than="" 2="" [20].="" based="" on="" the="" kinetic="" curves="" presented="" in="" fig.="" 3,="" the="" bidirectional="" transport="" percentages="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" at="" 200="" μm="" increased="" linearly="" with="" time.="" the="" transport="" rate="" (tr)="" values="" of="" the="" three="" compounds="" increased="" linearly="" in="" both="" directions="" between="" approximately="" 100="" and="" 300="" μm="" (fig.="" 4).="" these="" results="" indicate="" that="" the="" main="" transport="" mechanism="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" is="" also="" passive="">

PRE läbilaskvus

Ülaltoodud tulemused näitavad, et PRE kogu antioksüdatiivne võime tuleneb vähemalt 61,27 protsendist PRE-st pärit AIG-st. Seega hindasime PRE TR-i kogu antioksüdatiivse võime kontsentratsiooni-efekti kõvera põhjal ja arvutasime PRE transpordiomaduste kajastamiseks Papp väärtused. AP!BL ja BL!AP PRE PAPP väärtused olid (2,16 ± 0,26) × 10–7 cm/s ja (3,13 ± 0,29) × 10–7 cm/ s, mis näitab, et see ühend oli halvasti läbilaskev. Lisaks ei olnud väljavool ega aktiivne transport ilmne, kuna PRE puhul oli 'Papp BL ja AP / 'Papp AP ja BL suhe 1, 45 [20]. Lisaks suurenes PRE kahesuunaline TR lineaarselt vahemikus ligikaudu 300 kuni 900 ug/ml (joonis 5). Tulemuste suunaeelistuse puudumine viitab sellele, et passiivne difusioon on PRE peamine transpordimehhanism.

Arutelu

Võrreldes kõrgelt puhastatud ravimitega on PE üldiselt segu, mis koosneb sadadest väga erinevate füüsikalis-keemiliste omadustega koostisosadest. Seetõttu avaldab PE tänu oma keerulisele AIG-le [21] süstemaatilist, mitme sihtmärgi ja mitme kanaliga sünergistlikku toimet, mis takistab PE transpordiomaduste analüüsi. PE transpordiomaduste teaduslikumaks hindamiseks on mõned teadlased tuvastanud PE-s mitu komponenti, mitte ühe komponendi [22–24]. Sellegipoolest ei saa piiratud arv koostisosi kajastada PE-d tervikuna. Kõigi komponentide määramine PE-s on aga võimatu. Veelgi enam, kui PE erinevatel komponentidel on täiesti erinevad transpordiomadused, on PE terviklikke transpordiomadusi raske tuvastada.

1990. aastatel kasutati antimikroobsete ainete TR-i hindamiseks biotestisüsteeme [25]. 2005. aastaks olid Eguchi ja tema kolleegid [26] hinnanud porgandiekstrakti antioksüdatiivset toimet, kasutades diferentseerunud Caco-2 rakkude BL söödet; see lähenemine on sobivam in vivo olukordade kajastamiseks.

Tuginedes eelmisele PhG-de aktiivsuse aruandele [9] ja meie tulemustele (joonis 2), saab AIG TR-i PRE-s hinnata, määrates söötme kogu antioksüdatiivse võime vastuvõtja kambris. Pärast transpordikatseid leidsime, et PRE TR oli mõlemas suunas sarnane ning see transport oli küllastumata ja halvasti neelduv ('Papp < ​​1.0="" ×="" 10–6="" cm/s)="" [3]="" ja="" see="" ei="" näidanud="" väljavoolu,="" mis="" viitab="" sellele,="" et="" passiivne="" difusioon="" kontsentratsioonigradienti="" alla="" on="" pre="" peamine="" transpordimehhanism="" (joonis="" 5).="" lisaks="" on="" pre="" transpordiomadused="" kooskõlas="" ac,="" is="" ja="" ec="" omadega,="" tõhusate="" komponentidega,="" millel="" on="" pre="" antioksüdatiivne="" toime="" (joonis="" 4="" ja="" tabel="" 4).="" see="" tulemus="" oli="" ootuspärane="" ja="" näitas,="" et="" käesolev="" biotesti="" süsteem="" on="" sobiv="" ja="" usaldusväärne="" aig="" transpordiomaduste="" hindamiseks="" pre-s="" diferentseerunud="" caco{11}}="">

Erinevalt kanoonilisest Papp väärtusest, mida tavaliselt kasutatakse ühe ühendi transpordi kajastamiseks, ei pruugi kontsentratsiooni-efekti kõveral põhinev TR-st saadud Papp väärtus kajastada mitte ainult komponente, mis tungivad läbi terve struktuuriga monokihti. hõlmavad ka muid sihtaktiivsusega seotud tegureid, nagu komponentide metaboliidid, keemiliselt lagunenud tooted ja isegi mõned tsütokiinid, mis sekreteeritakse Caco{1}} rakkudest vastusena stimulatsioonile, mis võib mõjutada sihtmärgi bioaktiivsust. Seega määrab „Papp väärtuse“ ülalmainitud multifaktor, mitte ainult transporditud terved komponendid. Seetõttu võib Papp Vivo olukordades tugevamini korreleerida kui kanooniline Pappi väärtus [26]. Selles uuringus selgitasime PRE passiivselt hajutatud ja halvasti imenduvat olemust selle Pappi väärtuse põhjal ning see olemus võib olla seotud CD suurte annuste ja pika kliinilise raviperioodiga [27]. Sellegipoolest pakuvad need leiud kliinikutele süstemaatilisemaid juhiseid CD rakendamisel, kui on tuvastatud ainult enamiku CD-s leiduvate AIG-de transpordiomadused, mitte ainult PhG-d.

Valitud bioaktiivsuse üksus peab siiski olema piisavalt tundlik, et seda vastuvõtjakambri keskkonnas tuvastada, mis kujutab endast väljakutset PE transpordiomaduste hindamiseks vajaliku biotestisüsteemi loomisele. Lisaks peaks bioaktiivsus sõltuma ka võimalikult paljudest komponentidest. Meie uuringus oli kogu antioksüdatiivse võime test sobivam kui mitmed teised meetodid (S1 joonis). Kuid isegi nii saab meie analüüs tuvastada PRE TR-i ainult 120 minuti pärast.

Käesolevas uuringus loodi kollektiivselt uudne biotesti süsteem, et hinnata PRE soolestiku läbilaskvust diferentseerunud Caco{0}} rakkudes. Saadud tulemused näitasid, et halvasti neelduv passiivne difusioon alla kontsentratsioonigradienti ilma väljavooluta on PRE peamine transpordimehhanism (joonis 5), mis annab farmakokineetilise aluse PhG-de kliiniliseks kasutamiseks CD-s. Uudse biotestisüsteemi kasutamine TR-i hindamiseks ja seeläbi Papp-väärtuste arvutamiseks AIG-i sooletranspordiomaduste hindamiseks PE-des on selgelt teostatav. See lähenemine võib sobida ka muude PE jaoks, kui on asjakohane bioaktiivsus

Toetav teave

S1 Joonis. PRE mõju (A) superoksiidi anioonile, (B) hüdroksüülradikaalile, (C) lipiidide peroksüdatsiooniproduktile ja (D) DPPH radikaalile. Analüüsiprotseduurid viidi läbi vastavalt varasematele aruannetele [1, 2] ilma transpordipuhvrit kasutamata. IC50 (50-protsendiline inhibeerimiskontsentratsioon) ja SC50 (50-protsendiline puhastuskontsentratsioon) väärtused arvutati standardsete kontsentratsiooni-vastuse kõverate põhjal. (DOCX)

Autori kaastööd

Katsete väljamõtlemine ja kavandamine: YG XC YQ. Sooritas katsed: YG CZ FL LF RC YS. Analüüsitud andmeid: CZ YG YQ. Kaasatud reaktiivid/materjalid/analüüsivahendid: RC. Kirjutas referaadi: YG YQ

Farmakoloogia ja toksikoloogia uurimiskeskuse osakond, ravimtaimede arendamise instituut, Hiina meditsiiniteaduste akadeemia ja Peking Unioni meditsiinikolledž, Peking, PR Hiina,

Heilongjiangi Hiina Meditsiini Ülikool, Harbin, Heilongjiang, PR Hiina