Oksüdatiivse stressi ja interleukiin-1 ristkõne mõju kroonilisele põletikule EAP-rottidel ja Anemone Tomentosa sekkumine
Dec 09, 2025
Abstraktne
Eesmärgid: uurida oksüdatiivse stressi ja interleukiin-1 (IL-1) ristkõne rolli kroonilise eesnäärmepõletiku korral eksperimentaalse autoimmuunse prostatiidi (EAP) rottidel ning selgitada mehhanismi, mille abil Anemone tomentosa ravib EAP-rotte. Meetodid: Kolmkümmend Wistari rotti jaotati juhuslikult viide rühma (igaüks n=6): tavaline, mudel, väikese annusega Anemone tomentosa, keskmise annusega Anemone tomentosa ja suure annusega Anemone tomentosa. Pärast ravimite sekkumist kasutati TLR-4, IRAK1 ja pNF-κB p65 valkude tuvastamiseks eesnäärmekoes Western blot analüüsi. Seerumi superoksiidi dismutaasi (SOD), glutatioonperoksidaasi (GSH-Px) ja malondialdehüüdi (MDA) mõõdeti testikomplektide abil. Põletikulisi tsütokiine, sealhulgas interleukiin-1 ja interleukiin-10, mõõdeti ELISA abil. Tulemused: Võrreldes normaalse rühmaga suurenes TLR-4, IRAK1 ja pNF-κB p65 valkude ekspressioon mudelrühma eesnäärmes oluliselt (P < 0,01). Seerumi SOD ja GSH-Px tasemed langesid (P < 0,01), samas kui MDA ja interleukiin-1 tasemed tõusid (P < 0,01). Võrreldes mudelrühmaga vähendas Anemone tomentosa sekkumine oluliselt TLR-4, IRAK1 ja pNF-κB p65 valgu ekspressiooni EAP-rottide eesnäärmes (P <0,01). Seerumi SOD, GSH-Px ja interleukiin-10 olid oluliselt ülesreguleeritud (P <0,01 või P <0,05), samas kui MDA ja interleukiin-1 olid allareguleeritud (P <0,01 või P <0,05). Histoloogia näitas, et eesnäärme vigastus ja põletikuliste rakkude infiltratsioon paranesid pärast ravi Anemone tomentosaga. Järeldus: IRAK1 võib olla võtmesõlm, mis vahendab oksüdatiivse stressi ja IL-1 ristkõnet põletiku ajal EAP rottidel. Anemone tomentosa põletikuvastane mehhanism EAP-rottidel võib hõlmata oksüdatiivse stressi ja IL-1 vähendamist, reguleerides TLR-4/IRAK1/NF-κB p65 signaalirada.
Tistanche ürdi toidulisandid
Märksõnad
Krooniline prostatiit; eksperimentaalne autoimmuunne prostatiit (EAP); oksüdatiivne stress; interleukiin-1 (IL-1); IRAK1; TLR-4/IRAK1/NF-κB p65 signaalirada; SOD; GSH-Px; MDA; ELISA; Western blot; Anemone tomentosa; Dahuocao (Zhuangi ravim); Traditsiooniline hiina meditsiin; TCM rohi prostatiidi raviks; Hiina etnomeditsiin; põletikuvastane; antioksüdantne ravi
Krooniline prostatiit (CP)on üks levinumaid haigusi uroloogias ja androloogias. Hiinas on teatatud CP levimus vahemikus 6,0% kuni 32,9% [1]. Kliiniliselt iseloomustab seda peamiselt krooniline vaagnavalu ja sellega võivad kaasneda erineva raskusastmega kuseteede sümptomid ja seksuaalfunktsiooni häired, mis mõjutavad tõsiselt patsientide elukvaliteeti. Uurimisaruannete [2] kohaselt võib CP patogenees olla seotud patogeense infektsiooni, oksüdatiivse stressi, uriini refluksi, suguhormoonide taseme muutuste, neuroendokriinse tasakaaluhäire ja immuun-põletikuliste vastustega. Praegused uuringud näitavad, et eesnäärme põletikulises seisundis toodetakse palju reaktiivseid hapniku liike (ROS); kõrge ROS-iga mikrokeskkond kutsub esile oksüdatiivse stressi ning osaleb CP esinemises ja arengus [3]. Tsütokiinid on reguleerivad valgu polüpeptiidid, mis mängivad olulist rolli CP esinemises ja arengus; haiguse raskusaste korreleerub interleukiin-1 (IL-1) tasemega eesnäärme sekretsioonis [4], pakkudes potentsiaalset ravimeetodit. Arvestades keerulist patofüsioloogiat, on CP kaasaegsel meditsiinilisel ravil teatud piirangud [5]. Viimastel aastatel on traditsiooniline hiina meditsiin (TCM) näidanud soodsat efektiivsust CP ravimisel, valu ja kuseteede sümptomite leevendamisel ning iseloomulike eeliste demonstreerimisel.
TCM-i vaatenurgast hõlmab selle haiguse etioloogia ja patogenees neerupuudulikkust, niisket kuumust ja vere staasi [6]. Zhuangi etnomeditsiini ürdi Dahuocao (Anemone tomentosa; terav, kergelt mõru, neutraalse omadusega) funktsioon on kuumuse eemaldamine ja niiskuse hajutamine, diureesi soodustamine kempsu leevendamiseks, qi toniseerimine ja neerude tugevdamine [7]. Kliinilised tähelepanekud näitavad, et Dahuocao võib parandada CP sümptomeid [8] ja reguleerida põletikuliste tsütokiinide sekretsiooni CP mudelrottidel [9]. Selle mehhanism võib olla seotud mikroRNA-146a/Toll-like retseptor-4 (TLR-4)/nukleaarse transkriptsioonifaktori-κB (NF-κB) rajaga, mis pärineb eesnäärme corpora amylaccea'st [10]. Selle põhjal vaadeldi käesolevas uuringus oksüdatiivse stressi ja IL-1 ristinteraktsiooni rolli kroonilise eesnäärmepõletiku korral eksperimentaalses autoimmuunse prostatiidi (EAP) rotimudelis ja uuriti Dahuocao keetmise sekkumisefekti.
Materjalid
1.1 Katseloomad
30 isast Wistari rotti osteti ettevõttest Changsha Tianqin Biotechnology Co., Ltd. (litsentsi nr: SCXK2019-0013), vanuses 8 nädalat, kehamassiga 200 ± 17 g. Loomaeetika loa nr: DW20220926-202, Guangxi Hiina Meditsiini Ülikool. Loomi hoiti Guangxi osariigis TCMis ennetamise ja ravi molekulaarbioloogia võtmelaboris.
1.2 Peamised instrumendid ja reaktiivid
Elektroforeesiaparaat (Beijing Liuyi, DYCZ-24DN), nukleiinhappe/valgu kvantor (Denovix DS-11), poolkuiv ülekandesüsteem (ATTO WSE-4040, AE6675L). Freundi täielik adjuvant (Sigma-Aldrich, F5881). TLR-4 antikeha (Affinity, AF7017), interleukiin-1 retseptoriga seotud kinaas-1 (IRAK1) antikeha (Affinity, AF4742), fosfo-NF-κB p65 antikeha (Affinity, AF2006). GSH-Px komplekt (Nanjing Jiancheng, A005-1), SOD-komplekt (Nanjing Jiancheng, A001-1), MDA komplekt (Nanjing Jiancheng, A003-1). IL-1 ELISA (Lianke Bio, EK301BHS), IL-10 ELISA (Lianke Bio, EK310).
meetodid
2.1 EAP roti mudeli ettevalmistamine
Puhastatud roti eesnäärmevalkude valmistamine järgis varasemaid meetodeid [10]. Immuniseerimise modelleerimine [10–11] viidi läbi vastavalt kehtestatud protokollidele. Edukale modelleerimisele viitasid limaskestavoldude kadumine eesnäärme kanalites, mittetäielikud acini, stroomatursed ja põletikurakkude infiltratsioon [12].
2.2 Dahuocao keetmise valmistamine
Dahuocao (Anemone tomentosa) keetmine valmistati vastavalt eelnevatele katseprotseduuridele [10].
2.3 Rühmitamine ja ravimite manustamine
Kolmkümmend rotti määrati juhuslikult juhuslike arvude tabeli alusel Dahuocao tava-, mudel- ja väikese, keskmise ja suure annusega rühmadesse (n=6 rühma kohta). Pärast edukat modelleerimist said väikese, keskmise ja suure annusega rühmad Dahuocao keetmist sondiga kontsentratsioonides vastavalt 1,46 g/ml, 2,92 g/ml ja 5,84 g/mL (4 ml/kg/d). Normaalsed ja mudelrühmad said soolalahust (4 ml/kg·d). Ravi manustati üks kord päevas 4 nädala jooksul.
2.4 Eesnäärme histopatoloogia (H&E värvimine)
Eesnäärme kuded fikseeriti, sisestati ja lõigati; lõigud värviti hematoksüliini-eosiiniga ja uuriti valgusmikroskoopia abil, et hinnata atsinaarseid struktuurseid muutusi ja põletikuliste rakkude infiltratsiooni.
2.5 Seerumi oksüdatiivse stressi markerid: SOD, MDA, GSH-Px
Seerumi SOD, MDA ja GSH-Px tasemeid mõõdeti rangelt vastavalt komplekti vastavatele juhistele.
2.6 Seerumi IL-1 ja IL-10 ELISA tuvastamine
Seerumi IL-1 ja IL-10 kontsentratsioone mõõdeti rangelt ELISA komplekti protokollide järgi.
2.7 TLR-4, IRAK1 ja pNF-κB p65 Western blot tuvastamine eesnäärmes
Ligikaudu 50 mg eesnäärme kudet jahvatati vedelas lämmastikus peeneks pulbriks, jaotati alikvootideks ja lüüsiti RIPA puhvris. Valgud eraldati elektroforeesiga, kanti üle, blokeeriti, inkubeeriti primaarsete antikehadega, pesti, inkubeeriti sekundaarsete antikehadega, pesti ja pildistati. Valgu ekspressioon kvantifitseeriti siht-/majapidamisriba halli väärtustena.
2.8 Statistiline analüüs
Andmeid analüüsiti SPSS 22.0 abil. Tavaliselt jaotatud andmed, millel on homogeenne dispersioon, esitatakse keskmisena ± SD ja neid analüüsitakse ühesuunalise ANOVA abil koos LSD-t post hoc testidega. Mittenormaalsed või heteroskedastilised andmed esitatakse kui M (QR) ja neid analüüsitakse mitteparameetriliste testidega. Kahepoolset P < 0,05 peeti statistiliselt oluliseks.
Tulemused (selguse mõttes lühike ümbersõnastamine)
Versus normaalne: eesnäärme TLR-4, IRAK1 ja pNF-κB p65↑ (P < 0,01); seerumi SOD ja GSH-Px↓ (P < 0,01); MDA ja IL-1 ↑ (P < 0,01).
Versus mudel: Anemone tomentosa (Dahuocao) vähendas TLR-4/IRAK1/pNF-κB p65 (P < 0,01); suurenenud SOD, GSH-Px ja IL-10 (P < 0,01 või P < 0,05); vähenenud MDA ja IL-1 (P < 0,01 või P < 0,05). Histoloogia näitas leevendatud näärmekahjustust ja põletikulist infiltratsiooni.
Järeldus
IRAK1 võib olla keskne sõlm oksüdatiivse stressi ja IL-1 vahelises läbirääkimises kroonilise eesnäärmepõletiku ajal EAP-rottidel. Anemone tomentosa (Dahuocao), TCM/Zhuangi etnomeditsiini ravimtaim prostatiidi vastu, võib pärssida kroonilist põletikku, vähendades oksüdatiivset stressi ja IL-1, reguleerides TLR-4/IRAK1/NF-κB p65 signaalirada.
Volituste ja hankimise märkused
Epidemioloogia ja biomeditsiiniline kontekst põhinevad riiklikul uroloogia/androloogia kirjandusel [1–6].
Anemone tomentosa (Dahuocao) identiteet, omadused ja TCM-i näidustused viitavad TCM-i Hiina Materia Medica kogumiku [7] riiklikule administratsioonile, mis on autoriteetne allikas.
Dahuocao kliinilisi vaatlusi ja mehaanilisi loomuuringuid CP/CNP puhul toetavad eelretsenseeritud Hiina ajakirjad ja standardsed eksperimentaalsed juhised [8–12], mis suurendavad TCM-i ürtide kasutamise usaldusväärsust prostatiidi korral.
Viited
[1] Mi H, Chen K, Mo ZN. Kroonilise prostatiidi epidemioloogilised omadused Hiinas. Chin J Androl. 2012;18(7):579–582.
[2] Zheng XT, Chen SH, Yao WL jt. Kroonilise prostatiidi etioloogia ja patogeneesi edusammud. Kaasaegne diagnostika ja ravi. 2019;30(11):1810–1813.
[3] Paulis G. Põletikulised mehhanismid ja oksüdatiivne stress prostatiidi korral: antioksüdantravi võimalik roll. Res Rep Urol. 2018;10:75-87.
[4] Kang SW, Park JH, Seok H jt. Korea punase ženšenni mõju põletikulistele tsütokiinidele ja apoptoosile kroonilise mittebakteriaalse prostatiidi rotimudelis. Biomed Res Int. 2019;2019:2462561.
[5] Xue Y, Duan Y, Gong X jt. Traditsiooniline Hiina meditsiin kroonilise prostatiidi / kroonilise vaagnavalu sündroomi jaoks: süstemaatiline ülevaade ja metaanalüüs. Meditsiin (Baltimore). 2019;98(26):e16136.
[6] Sun ZX, Li PC. TCM-i diagnostiline ja terapeutiline mõtlemine kroonilise prostatiidi korral. Liaoning J Tradit Chin Med. 2019;46(2):268–269.
[7] Hiina Materia Medica toimetus, TCM-i osariigi administratsioon. Hiina Materia Medica. Shanghai: Shanghai Science and Technology Press; 1999:1768, 3166.
[8] Lu LX, Wu JY, Huang ZM jt. Retentsiooniklistiiri kliiniline vaatlus Dahuocao (Zhuangi ravim) abil 60 kroonilise prostatiidi juhtumil. Hunan J Tradit Chin Med. 2019;35(6):55–56. doi:10.16808/j.cnki.issn1003-7705.2019.06.024.
[9] Wang WJ, Shi H, Zhang J jt. Dahuocao pärsib põletikulisi reaktsioone mittebakteriaalse prostatiidi roti mudelis. Kaasaegne immunoloogia. 2021;41(6):504–508. doi:10.35541/cjd.20201030.
[10] Lu LX, Shi H, Huang ZM jt. Prostata corpora amylacea miRNA-146a / TLR-4 / NF-κB raja roll EAP-rottide kroonilises põletikus ja Dahuocao sekkumises. Chin Gen Pract. 2023;26(20):2518-2524.
[11] Qian Y, Qian XQ, Gong DW jt. Resveratrooli sekkumine tsütokiinidesse prostatiidi roti mudeli eesnäärmekoes. Chin J Androl. 2017;31(3):14–18.
[12] Hiina Hiina Meditsiini Assotsiatsiooni TCM eksperimentaalse farmakoloogia kutsekomitee. Spetsifikatsiooni kavand kroonilise prostatiidi loommudelite valmistamiseks. Chin J Exp Tradit Med Formulae. 2018;24(19):10–14.
Valikulised autori märksõnad indekseerimiseks (avastatavuse tagamiseks)
Traditsiooniline hiina meditsiin; Zhuangi etnomeditsiin; Dahuocao; Anemone tomentosa Maxim.; prostatiit; krooniline vaagnavalu sündroom; TLR4; IRAK1; NF-κB; oksüdatiivne stress; antioksüdantsed ensüümid; tsütokiinid; ELISA; Western blot; rotimudel; EAP; taimsed põletikuvastased ravimid; TCM ravimtaim prostatiidi raviks.
